44.45 Ko PDF - GLOBE Network

Fiches techniques et procédures de laboratoire BIOLTROP
Hématimètre de Malassez et cellule de Nageotte
Yves GILLE, Antoine Pierson (BiolTrop)
Préalable
Il existe différents types d'hématimètres. Ici, on ne parlera que de ceux de type Malassez et
Nageotte. Ces hématimètres diffèrent par leur quadrillage, mais tous deux permettent de
numérer, dans un volume précis et connu, tous les éléments visibles à l'objectif 40.
Il existe maintenant des cellules de comptage à usage unique, en plastic. Elles seront
traitées dans : cellules de comptage à usage unique.
Pour obtenir une numération proche de la réalité, il est important de :

Ne pas rayer le quadrillage lors du nettoyage de l'hématimètre ;

Bien monter la lamelle sur l'hématimètre ;

Déposer la goutte de l’échantillon à numérer correctement, comme décrit ci-dessous ;

Bien laisser sédimenter les particules à numérer avant le comptage.
Matériel
1.
On dépose, entre hématimètre et lamelle, une goutte de l'échantillon, dilué ou
non ;
2.
On compte dans le quadrillage (volume précis) les éléments voulus ;
3.
On ramène le résultat obtenu en éléments par litre de sang (ou autres).
6 décembre 2010
1/1
Description
Cellule de Malassez
Volume du quadrillage total : 1 µl
Dimensions d'une bande : L : 2,5 mm, l : 2 mm, H (ou profondeur) : 0,20 mm
Constitué de : 100 rectangles d'égales surfaces
6 décembre 2010
2/1
Cellule de Nageotte
Le quadrillage total constitué de : 40 bandes (Chaque bande a un volume de 1,25
microlitre)
Dimensions d'une bande : L : 10 mm,l : 0,25 mm, H (ou profondeur) : 0,50 mm
Comment choisir entre l'hématimètre de Malassez et la cellule de Nageotte ?

En général pour LCR et urine : Cellule de Nageotte ;

En fait ce choix n'a pas une importance réelle : Il dépend surtout de l'habitude de
l'opérateur.
Manipulations préalables
Si le liquide à analyser est hémorragique

Avant de compter les leucocytes il est préférable de lyser les hématies en diluant au
1/2 le liquide hémorragique à l'aide d'une solution à 0,5% d’acide acétique dans
l'eau.

Ne pas oublier de multiplier par 2 (facteur de dilution dû à la solution d'acide
acétique) le résultat du comptage des leucocytes.
6 décembre 2010
3/1
Si on prévoit un nombre élevé de leucocytes ou d'hématies

Diluer le liquide à analyser1nbsp ; : 1/2, 1/5, 1/10 ou plus, dans du sérum
physiologique.

Ne pas oublier de multiplier le résultat du comptage par la dilution.
Avant de charger la cellule
1.
Placer une lamelle sur la cellule :

Cellule de Malassez : lamelle plane

Cellule de Nageotte : lamelle ordinaire (plus fine qu'une lamelle plane)
2.
Poser la cellule sur une surface bien horizontale.
3.
« Coller » la lamelle sur l'hématimètre, en humectant les deux bords de celui-ci avec
un petit chiffon humide propre et essoré.
4.
Faire glisser la lamelle sur la largeur de l'hématimètre et vérifier la bonne adhésion
« hématimètre - lamelle ».
Introduire le liquide à analyser dans la cellule
1.
Homogénéiser le liquide à analyser (ou sa dilution).
2.
Entre hématimètre et lamelle, laisser rentrer, par capillarité, une goutte de
l'échantillon à numérer grâce à une pipette Pasteur. (La goutte ne doit pas
déborder dans les rigoles de l'hématimètre et la goutte doit recouvrir complètement
et d'un seul coup toute la surface quadrillée de l'hématimètre.)
Attendre au moins 5-10 minutes, la cellule bien à l'horizontal, en chambre humide, avant
d'entreprendre le comptage (les éléments cellulaires doivent sédimenter).
Compter les éléments cellulaires
Pour les éléments chevauchent les lignes, comptez tous ceux qui chevauchent les lignes à
gauches et en haut. Ne comptez aucun élément qui chevauchent les lignes à droite et en
bas.

Hématimètre de Malassez : la totalité du quadrillage (1 µl)

Cellule de Nageotte : compter 4 bandes (5 µl)
Calculer le nombre d'éléments cellulaires par microlitre
Soit n le nombre d'éléments comptés (hématies ou leucocytes)
N le nombre d'éléments par microlitre (µl)
V le volume de comptage

Malassez : V = 1 µl (totalité du quadrillage)

Nageotte : V = 5 µl (4 bandes de 1,25 µl)
N=n/V
6 décembre 2010
4/1

Cellule de Malassez : N = n / 1 ou N = n

Cellule de Nageotte : N = n / 5
Si comptage effectué sur du liquide dilué : ne pas oublier de multiplier le nombre
d'éléments comptés doit être multiplié par le taux de dilution.
6 décembre 2010
5/1