Test HPV en pratique

Test HPV en pratique
C. PASQUIER
Laboratoire de Virologie, IFB
CHU de Toulouse
Oncomip 29/09/11
Plan
  Physiopathologie
de l’infection
  Les Tests HPV : principes et intérets
  La situation actuelle : nomenclature et
indications
  Mise en oeuvre d’un test HPV
Plan
  Physiopathologie
de l’infection
  Les Tests HPV : principes et intérets
  La situation actuelle : nomenclature et
indications
  Mise en oeuvre d’un test HPV
Structure des HPV
  Petit
virus nu (55 nm),
  Capside icosédrique
  ≥ 200 types
  Virus
ubiquiste (commensal)
De multiples types d’HPV
Cutanéo-muqueux
Cutané
Cutané
Cutané
Le génome viral
ADN db circulaire, 8 kb
L1-L2
Capside
VLP (virus-like particles)
oncogénèse
E1-E4 réplication
Les 2 formes du génome viral
Episome vs linéaire intégré
L1-L2
Capside
VLP (virus-like particles)
oncogénèse
E1-E4 réplication
Réplication des HPV
Frazer, Nature Rev Immunol 2004
Différenciation cellulaire
Infection par HPV
. Infection des cellules
basales
. Zones de jonctions
épithéliales
. Microlésions?
Infection récente
virions
Asymptomatique ++
Condylomes acuminés
Koïlocytose
.Transmission ++ IST
.Délai d’apparition cours
.Récidives fréquentes
.HPV-6, 11 (BR>>HR)
Episomes
Infection productive
. Evolution vers guérison
. Evolution vers infection
persistante
Différenciation cellulaire
Evolution vers la guérison
. Latence dans les cellules
basales
. Contrôle immunitaire
. Immunité spécifique de type
. Tests HPV négatif
Evolution vers infection
persistante
Dysplasie CIN I
E6/E7
.Transmission faible
. Délai d’apparition long
. Récidives rares
. Régression très fréquente
. HPV-16, 18 (HR)
Infection persistante
Dysplasie CIN II
E6/E7
.Transmission faible
. Délai d’apparition long
. Récidives rares
. Régression possible
. HPV-16, 18 (HR)
Infection persistante
Dysplasie CIN III
E6/E7
.Transmission faible
. Délai d’apparition long
. Récidives rares
. Régression rare
. HPV-16, 18 (HR)
Infection persistante
Cancer in situ / invasif
E6/E7
.Transmission faible
. Délai d’apparition long
. Récidives rares
. HPV-16, 18 dans plus de
70% des cas (HR)
Carcinogénèse du col utérin
Infection transitoire
Infection persistante
HPV-HR + Cofacteurs:
tabac, grossesses multiples,
immunodépression, …
Progression
Col
sain
infection
Contrôle
imunologique
Clairance
Invasion
Lésions
précancéreuses
Régression
10-15 ans
cancer
Plan
  Physiopathologie
de l’infection
  Les Tests HPV : principes et intérets
  La situation actuelle : nomenclature et
indications
  Mise en oeuvre d’un test HPV
Objectifs des tests HPV
  Détection
  Prédiction
de l’infection à HPV
du risque de dysplasies et
Cancers ??!
  Corrélation avec histologie
Les tests disponibles
  Détection
par PCR consensus ADN HPV ±
typage
  Détection
ARNm E6-E7 HPV-HR
  Détection
ADN HPV-HR
PCR concensus
  Amplification
région L1 (HPV-HR/BR)
  Typage des amplicons :
séquençage +
phylogénie
Hybridation sur
bandelette
Hybridation sur puce
Fragment long
Sensibilité ++
Fragment court
Sensibilité +++
Fragment court
Sensibilité +++
Typage exhaustif
25 à 37 types
Lecture ± automatisée
24 à 35 types
Lecture automatisée
Non commercialisé
Inno-Lipa HPV genotyping
(Innogenetics)
Linear Array HPV
Genotyping (Roche
Diagnostics)
CLART (Genomica)
PapilloCheck (Greiner)
Détection ARNm E6-E7
  Amplification ARNm
E6 et E7
  Détection automatisée
Nuclisens EasyQ HPV
(BioMérieux - Proofer)
APTIMA HPV Assay
(Gen-Probe)
Discrimination des types : 16, 18,
31, 33, 45
Détection des 14 HPV-HR
  Spécificité
accrue, conservation des ARN
  Hors nomenclature
Détection ADN HPV-HR
  Amplification
/ Hydridation
  Détection automatisée
Hybrid Capture II
(Digene - Qiagen)
Real-Time HR HPV
(Abbott)
Cobas 4800 HPV (Roche)
Hybridation ADN/ARN
Pas de discrimination des
types 13 HR
(possible 5 BR)
PCR-temps réel
Discrimination : 16, 18,
autres 12 HR
PCR-temps réel
Discrimination : 16, 18,
autres 12 HR
Automatisation ++
Automatisation +++
Automatisation +++
Pot natif
Sensibilité ++
Long++
Sensibilité +++
Sensibilité +++
Autres tests
  Quantification
: 16 et 18 (protocole ANRS),
non commercialisé
  Détection ADN HPV intégré : non
commercialisé
Plan
  Physiopathologie
de l’infection
  Les Tests HPV : principes et intérets
  La situation actuelle : nomenclature et
indications
  Mise en oeuvre d’un test HPV
Situation actuelle
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CODE : ZZQP173 - 4127
LIBELLE : papillomavirus humains (HPV) oncogènes :
détection du génome viral (ADN)
Code regroupement : ATM - Acte technique médical
Prix de l'acte : 37,8 euros (B140, P139)
Notes : Indication : selon les recommandations de bonnes
pratiques Anaes 2002 (frottis ASC-US)
Formation : spécifique : formation à la biologie moléculaire
Environnement : spécifique : à réaliser dans les mêmes
conditions que celles des laboratoires d'analyse de biologie
médicale
Nomenclature ABM 2004
  Identification
des ASC-US à risque (Atypical
Squamous Cells of Undetermined Significance)
ASC-US
Colposcopie
+ biopsie
HPV HR
FCV (6 mois)
FCV (1 an)
FCV (routine)
Autres indications
  Suivi
 
post-conisation
Quel test ?
  Dépistage
primaire d’infections HPV
persistantes
Tests ADN HPV positifs (intervalle > 1 an)
  Très bonne valeur prédictive négative cancer du col
  Spécifique de l’infection HPV pas du cancer du col!
  Algorithme de dépistage (FCV)
 
  Expertise
médicale
Typage nécessaire
  Comparaison de séquences
 
Plan
  Physiopathologie
de l’infection
  Les Tests HPV : principes et intérets
  La situation actuelle : nomenclature et
indications
  Mise en oeuvre d’un test HPV
Mise en œuvre
  Laboratoire
de biologie moléculaire
Gestion du risque infection
  Gestion du risque de contamination BM
  Validation de la méthode
  Gestion de la qualité des échantillons
  Gestion de la traçabilité
 
Référentiels
  GBEA
  COFRAC ISO 15189
Gestion du risque infectieux
  Faible
avec HPV
  Possible
autres pathogènes associés : HSV,
Chlamydiae, Gonocoques, Mycoplasma, HIV, …
  Milieux fixateurs
  PSM
pour manipulations préanalytiques
  Procédure de décontamination
  Surface
de manipulation
  Laboratoire
  Exposition du personnel
Gestion du risque de
contamination en BM
  Lié
à la diffusion des amplicons
  Adaptation des locaux
Classiques 3 pièces ou moins si automatisé
  Laboratoire(s) avec accès contrôlé (Sas)
 
  Conditions
de manipulation
tenue, hotte PCR,…
  Procédure et mode opératoire, formation, …
 
  Décontamination
  KOH,
NaOCL, HCL
  Aliquotage
et conservation des réactifs
Gestion de la qualité des
échantillons
  Standardisation
des échantillons
  Cellularité des échantillons
  Contrôle d’un gène de ménage
  Absence d’inhibiteur de PCR (QC)
Validation de la méthode
  Contrôles
des performances sur sites
  Comparatif
avec données du fabricant
  Comparatif avec la méthode précédente
  Spécificité
  Répétabilité/reproductibilité
  Sensibilité
diagnostique
  Contamination
Gestion de la traçabilité
  Chaîne
d’information validée
  Lien
patient – échantillon
  Lien entre les différentes de l’analyse
  Lien bidirectionnel avec l’informatique de labo
  Conservation
de l’échantillon (≥ 1 an) et du
résultat (indéfinie)
Contrôles
  Contrôles
  Témoin
du fabriquant
négatif / positif
  Contrôles
(CQII)
de qualité interne indépendant
  Validation
indépendante de la totalité process
  Validation des lots de réactifs
  Contrôles
de qualité externe (CQE)
Conclusions
  Physiopathologie
complexe
  Des
tests et des indications en évolution
  Une
nomenclature en retard
  Un
test de biologie moléculaire automatisé
avec une praticabilité en hausse