1. Objet et domaine d`application 2. Références 3

1. Objet et domaine d’application
Ce mode opératoire décrit comment sont effectués les prélèvements bactériologiques au sein du
laboratoire. Il s’applique à l’ensemble des prélèvements bactériologiques (autres que les
prélèvements urinaires traités dans un mode opératoire spécifique) réalisés par le laboratoire.
2. Références
Guide fournisseur "CML" sur les conditions de transports des échantillons.
Rémic : référentiel en microbiologie médicale (bactériologie et mycologie) édition 2007
3. Terminologie
4. Responsabilités
Les prélèvements sont réalisés sous la responsabilité du biologiste et sont pratiqués par le
personnel autorisé (Cf : « Prélèvements »).
Lorsque le prélèvement est effectué par le patient, la personne présente à l’accueil a la
responsabilité de donner les préconisations aux patients (cf. fiche d'instruction) et d’identifier
les échantillons.
5. Méthodologie
5.1. Le matériel utilisé
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Boîte de pétri stérile.
Spéculum stérile en plastique à usage unique.
Spéculum stérile en métal décontaminé suivant procédure .
Ecouvillons stériles (conservation des bactéries 2 heures).
Ecouvillons stériles avec milieu de transport (conservation des bactéries 24 heures).
Ecouvillons fins stériles (conservation des bactéries 2 heures).
Ecouvillon spécifique du kit Servibio pour la recherche de streptocoque A.
Ecouvillon fourni par Cerba pour recherche de Chlamydia trachomatis.
Solution « Chlamydiae médium transport kit »(fournie par le laboratoire LCL avec les
écouvillons).
Milieu « thin prep Pap test (20 ml) » utilisé pour les frottis couche mince cervico-vaginaux.
Bactopick (labo-moderne) pour recherche du mycoplasme.
Curette de Brocq.
Pinces.
Pince à épiler.
Brosse cervex fournie par le laboratoire LCL (frottis couche mince).
Scalpel à usage unique.
Pots stériles.
Flacon pour spermogramme stérile.
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5.2. Déroulement du prélèvement
Prélèvement vaginal ou cervico-vaginal
• La patiente devra éviter toute toilette intime, tout traitement local (crème, gels,
savons…) ainsi que tout rapport sexuel dans les 24 heures précédant l’examen.
• Il est conseillé d'éviter le prélèvement pendant la période menstruelle car la flore est
modifiée (sauf avis contraire du prescripteur).
• Le prélèvement doit être réalisé avant ou à distance de tout traitement antibiotique (>
15 jours pour les chlamydiae, > 5 jours pour les germes banals).
En préambule au prélèvement, le biologiste préleveur doit s’assurer des conditions
physiologiques du sujet.
Les prélèvements cervicaux vaginaux se font sous spéculum à usage unique avec un éclairage
adapté. Prendre soin de « nettoyer » (au mieux compresse) le col pour les prélèvements
endocervicaux
Prélèvement cervicaux vaginaux à visée bactériologique
•
Bactériologie classique : Prélever 1 à 2 écouvillons stériles à acheminer dans les 2 heures
en technique à température ambiante et un écouvillon sur milieu de transport à acheminer
dans les 24 heures à température ambiante.
•
Recherche de chlamydiae par PCR : prélever avec un écouvillon fourni par le laboratoire
Cerba au niveau de l’endocol par un frottement léger. Décharger ensuite immédiatement cet
écouvillon dans la solution « Chlamydiae medium transport kit »(fournie par le laboratoire
Cerba avec les écouvillons).
•
Recherche d’herpes : prélever au niveau d’une ulcération ou mieux une vésicule avec un
écouvillon fourni par le laboratoire Cerba par un frottement léger. Décharger ensuite
immédiatement cet écouvillon dans la solution « Chlamydiae medium transport kit »(fournie par
le laboratoire Cerba avec les écouvillons).
•
Recherche de papillomavirus : prélever avec un écouvillon fourni par le laboratoire LCL au
niveau de l’endocol par un frottement léger. Décharger ensuite immédiatement cet écouvillon
dans la solution « Chlamydiae medium transport kit »(fournie par le laboratoire LCL avec les
écouvillons) ou mieux dans le milieu « thin prep Pap test (20 ml) » utilisé pour les frottis couche
mince cervico-vaginaux.
•
Recherche de mycoplasmes : prélever avec un bactopick au niveau de l’endocol par un
frottement léger, casser le tête du bactopick dans la solution (flacon mycoplasme) pour la
recherche de mycoplasme.
Prélèvements cervicaux à visée anatomopathologique (« frottis cervicaux »)
Utilisation de la technique dite en couche mince.
Obtenir un spécimen adéquat du col de l’utérus avec une brosse cervex fournie par le
laboratoire Cerba.. Tourner la brosse 5 fois dans le sens des aiguilles d’une montre.
Bien rincer ensuite la brosse dans le flacon de solution de conservation en pressant les poils de
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la brosse contre le fond du flacon puis jeter la brosse et bien refermer le flacon.
Prélèvement urétral
• Le patient ne doit pas uriner dans les deux heures précédant le prélèvement.
• Prélever avec 2 écouvillons fins préalablement humidifiés dans un flacon de 5 ml
d’eau stérile (Biomérieux) au niveau du méat (un pour la mise en culture, un pour
l’étalement de lames).
• S’il n’y a pas ou peu d’écoulement, recueillir le 1er jet d’urines.
• Pour la recherche de chlamydiae: introduire un écouvillon fin dans l’urètre de 2 à 3
mm en effectuant 3 ou 4 rotations pour recueillir le maximum de cellules. Et le
décharger dans un flacon pour recherche de Chlamydiae par PCR (Cerba).
• Pour la recherche de Mycoplasme, introduire un Bactopick dans l’urètre de 2 à 5 mm
délicatement.
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Autres prélèvements bactériologiques
Nature du
prélèvement
Selles et
parasitologie des
selles
Sperme
(spermoculture)
Mode de prélèvement
Pot à coproculture stérile,
Échantillon de selles recueilli dans le flacon
remis le plus vite possible
stérile fourni par le laboratoire.
après l’émission
Recueil au laboratoire dans
• Après 2 à 5 jours d’abstinence
un flacon stérile suivant fiche
• Se laver les mains
d’instruction
• Uriner
ou
• Par masturbation, après une désinfection Flacon stérile apporté dans du
locale.
coton au laboratoire dans un
• Recueil de la totalité de l’éjaculât
délai d’une demi-heure
•
•
Sperme
•
(spermocytogramme) •
•
Recherche de
dermatophytes :
Ongles, cheveux,
squames
Matériels
Après 2 à 5 jours d'abstinence
Recueil au laboratoire dans
un flacon stérile suivant fiche
Se laver les mains
d’instruction
Uriner
ou
Par masturbation, après une désinfection Flacon stérile apporté dans du
locale.
coton au laboratoire dans un
délai d’une demi-heure
Recueil de la totalité de l’éjaculât
• Peau :
Prélever de préférence à la périphérie des
lésions des squames à l’aide d’une curette de
Brocq.
Réaliser un prélèvement à la cellophane
adhésive transparente pour le mise en évidence
rapide de Pityriasis versicolor.
Boîte de pétri stérile fermée
• Lésions des plis :
après prélèvement (scotch).
Selon l’aspect, grattage à la périphérie à l’aide
d’une curette de Brocq ou un écouvillon
Matériel stérile (écouvillon,
préalablement imbibé d’eau physiologique
pince,
curette,
etc
...)
stérile.
permettant de prélever par
• Lésions unguéales :
apposition ou par grattage
Pour les ongles, couper avec la pince à ongle présent dans la salle 7.
toute la partie de l’ongle atteinte, prélever des
poussières d’ongles en raclant la tablette interne Ecouvillon sans milieu de
de l’ongle ou les îlots blanchâtres de la surface transport.
de l’ongle à l’aide d’une curette.
Eau physiologique stérile.
• Lésions du cuir chevelu et des zones
pileuses
Arracher avec une pince à épiler les cheveux
cassés à proximité du bulbe. Prélever les
squames et les croûtes éventuelles en raclant à
l’aide d’une curette.
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Bien remplir le questionnaire en déposer les
squames dans une boîte de pétri stérile fermée
avec sparadrap.
•
Plaie, escarre,
larmes, pus profond •
etc
•
•
•
Prendre les précautions d’asepsie pour
éviter de contaminer le prélèvement par les •
bactéries se trouvant normalement sur la
peau.
Mettre des gants à usage unique
Passer un écouvillon sur milieu de transport
(anaérobie) et un sec (étalement sur lame)
Noter la prise éventuelle d’antibiotiques.
ORL :
Prélever avant antibiothérapie :
•
Gorge :
amygdales
•
•
Oreille : conduit •
auditif externe
•
Nez
•
Pharynx
•
•
Si abcès ouvert : 2
écouvillons stériles à
acheminer dans les 2
heures au laboratoire à
température ambiante ou
un écouvillon sur milieu
de transport à acheminer
dans les 24 heures à
température ambiante.
2 à 3 écouvillons stériles à
au niveau des zones inflammatoires ou acheminer dans les 2
heures au laboratoire à
nécrotiques
température ambiante ou
à la périphérie des fausses membranes, sur les un écouvillon sur milieu de
amygdales
transport à acheminer dans
Éviter de toucher la langue, la luette et la paroi les 24 heures à température
ambiante.
postérieure du pharynx
Prélever avant antibiothérapie :
Recherche de
streptocoque A
Si abcès fermé :
prélèvement à la seringue
Dans la gorge au niveau des zones
inflammatoires
Un écouvillon spécifique
du kit (recherche rapide sur
savonnette) + un
écouvillon ordinaire
(culture)
Flacon stérile, acheminé le
Crachat, tubage et/ou Faire le prélèvement avant le lever pour le crachat
plus rapidement au
aspiration bronchique et dans l’heure qui suit le lever pour le tubage
laboratoire
Sur flacon « Signal »
Hémocultures
OXOID® (2 ou 3 flacons
Faire 1 seule ponction de 2 ou 3 flacons (20 à 30 par examen) acheminé le
ml) lors d'un pic de fièvre.
plus rapidement au
Après antisepsie soigneuse de la peau avec un laboratoire.
antiseptique alcoolique ; le prélèvement s’effectue Adaptateur spécifique
soit directement dans le flacon à l’aide d’un fourni par le laboratoire
adaptateur spécifique et d’une aiguille type
Ne pas prélever à partie de
épicrânienne (remplissage du vide jusqu’à la flèche).
cathéter ou de chambre
implantable.
La ponction lombaire est réalisée avec une Sur 3 flacons ECBU (1 ml
Ponction de LCR
asepsie rigoureuse. La quantité moyenne de LCR par flacon) sans borate.
suffisante pour la majorité des examens est de 3
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ml recueillie dans 3 flacons E.C.B.U. stériles
numérotés 1, 2, 3 (afin de distinguer une piqûre
vasculaire d’une hémorragie méningée) servant
respectivement
à l’examen biochimique,
microbiologique et cytologique.
Attention : proscrire tout
flacon non stérile ou
contenant des additifs (en
gel, en poudre ou liquide)
L’acheminement du LCR vers le laboratoire
doit se faire sans délai et à l’abri du froid en
raison de la fragilité de certaines bactéries.
Un minimum de renseignements cliniques (âge,
présomption diagnostique, traitement antibiotique)
doit être transmis au laboratoire
Fin du document.
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