prelevements microbiologiques

PRELEVEMENTS MICROBIOLOGIQUES
1. Préparation du prélèvement
Le préleveur muni des documents nécessaires au prélèvement appelle le patient et vérifie les
renseignements administratifs obligatoires : Nom, Prénom, date de naissance..
Il rassure et informe le patient sur le déroulement et les conditions du prélèvement.
Le préleveur doit obligatoirement s'identifier, et noter la date et l'heure du prélèvement.
Il s'assure de la conformité des conditions de prélèvement en application des recommandations
du présent Manuel de Prélèvement :
- Respect des préconisations : Liste des préconisations selon le type de prélèvement
- Respect des conditions particulières : Liste des analyses nécessitant des conditions
particulières
Il s'enquiert de l'existence d'une éventuelle thérapeutique et sollicite, si nécessaire, des informations
cliniques complémentaires : Liste des analyses nécessitant des renseignements particuliers
Il note ces informations sur la fiche de transmission qui accompagne les échantillons prélevés.
2. Hygiène et sécurité
Tout prélèvement doit être considéré comme potentiellement à risque infectieux.
Le port de gants à usage unique est obligatoire pour effectuer le prélèvement.
Avant chaque prélèvement, le préleveur se lave les mains à l'eau et au savon ou les passe à la
solution hydroalcoolique.
Les règles d'élimination des déchets et la conduite à tenir en cas d'incident de prélèvement doivent
être connues.
3. Déroulement du prélèvement
Le préleveur installe le patient et s'assure de la présence et de la conformité du matériel utilisé.
Le laboratoire peut fournir tout type de matériel nécessaire et indispensable au recueil d'un
échantillon de qualité, conformément aux recommandations, en fonction des analyses à réaliser et
du type de prélèvement à effectuer.
4. PRELEVEMENTS URINAIRES : Voir les préconisations pour les différents
types de recueil
5. PRELEVEMENTS GENITAUX :
5.1 : Prélèvement vaginal ou cervico-vaginal
Analyse myco-bactériologique et parasitologique
La patiente devra éviter toute toilette intime, tout traitement local (crème, gels, savons…)
ainsi que tout rapport sexuel dans les 24 heures précédant l’examen.
Il est conseillé d'éviter le prélèvement pendant la période menstruelle car la flore est
modifiée (sauf avis contraire du prescripteur).
Le prélèvement doit être réalisé avant ou à distance de tout traitement antibiotique
(> 15 jours pour les chlamydia, > 5 jours pour les germes banaux ).
Le préleveur doit s’assurer des conditions physiologiques du sujet.
Après avoir installer la patiente en position gynécologique, mise en place d’un spéculum à
usage unique, prélever à l'aide d'écouvillons stériles, en fonction du tableau suivant :
•
Bactériologie
« classique »
Lames
(examen
direct et
colorations)
Mycoplasme
Chlamydia
Site de
prélèvement
Culs de sac et
col
Culs de sac
Endocol
Endocol
Nombre
d’écouvillons
1 avec milieu
de transport
1
1 avec milieu
de transport
1*
*Ecouvillon spécifique selon la technique d’analyse (PCR) avec milieu de transport spécial.
En présence d'une vulvite chez la fillette, rechercher le présence d'Oxyures par un scotchtest : Cliquer pour voir les préconisations
5.2 : Frottis cervical pour examen anatomo-pathologique
- Après l'installation de la patiente en position gynécologique et l'interrogatoire à la recherche
de renseignements cliniques,
- Mettre en place le spéculum pour dégager le col utérin.
Si besoin, enlever l'excédent de mucosités au niveau cervical.
- Prélever avec la brosse « Servex-brush » par 4 à 5 mouvements de rotation au niveau du canal
endo-cervical.
- Etalement par badigeonnage de chaque face de la brosse sur une lame d'examen puis fixation
immédiate par le fixateur cytologique.
- Placer les lames dans un porte lames pour transmettre le prélèvement au Service d'AnatomoPathologie.
5.3 : Prélèvement pour recherche d'HPV oncogènes
- Mettre en place le spéculum pour dégager le col utérin.
Si besoin, enlever l'excédent de mucosités au niveau cervical.
- Prélever avec la brosse par 4 à 5 mouvements de rotation au niveau du canal endo-cervical.
- Décharger la brosse par 3 mouvements de rotation de la brosse contre les parois du milieu de
transport ( Abbott cervicollect, M4RT ou STM Qiagen)ou dans un milieu de conservation pour
cytologie en milieu liquide.
NB : Recherche possible sur les milieux de conservation pour la cytologie suivants : ThinPrep (
Hologic), Surepath (Tripath), Cytoscreen (SeroA), EasyFix ( Labonord) et CMDH 5generic
Vision).
- Pour que la recherche d' HPV oncogènes soit remboursée il faut que la prescription possède
l'indication ASC–US, toutes autres indications ne seront pas remboursées.
5.4 : Prélèvement pour test de Hühner (sur RDV au laboratoire)
– Le prélèvement est effectué entre J-4 et J-1, avant le pic ovulatoire, et entre 9 et 18 à 24
heures après le rapport sexuel (abstinence de 3 à 5 jours).
- Après l'installation de la patiente dans la salle de prélèvements et l'interrogatoire à la
recherche de renseignements cliniques, mettre en place le spéculum pour dégager le col utérin.
- Introduire l'extrémité de l'aspiglaire dans le col utérin et tirer le mandrin à soi afin d'aspirer la
glaire endocervicale (prélever toute la glaire: si besoin utiliser un deuxième aspiglaire).
- De même prélever un aspiglaire dans un cul de sac (vérification qu'un rapport a bien eu lieu).
- Remplir les données cliniques et renseignements nécessaires sur la feuille de transmission.
- Faire acheminer l’échantillon le plus rapidement possible au service de spermiologie.
5.5 : Prélèvement urétral
- Le ou la patient(e) ne doit pas uriner dans les deux heures précédant le prélèvement, de
préférence le matin
- Introduire de quelques mm, pour chaque recherche, un écouvillon fin dans l’urètre (en
écartant les grandes lèvres chez la femme) et effectuer 3 ou 4 rotations pour recueillir le
maximum de cellules et les sécrétions.
- Si il existe un écoulement, récupérer la sérosité sur un écouvillon identifié.
- Prélever 2 écouvillons au niveau du méat (un pour état frais et coloration, un pour la mise en
culture) pour une bactériologie « classique ».
- Pour la recherche de chlamydia : 1 écouvillon spécifique PCR avec milieu de transport
spécial.
- Pour la recherche de mycoplasmes : 1 écouvillon supplémentaire avec milieu de transport.
6. AUTRES PRELEVEMENTS
Nature du prélèvement
Selles
Mode de prélèvement
Coproculture
Parasitologie
Voir préconisations patients
Sperme
Spermoculture
(sur RDV)
et/ou
Voir préconisations patients
spermogramme
Scotch-Test
Oeufs
d’Oxyures
Voir préconisations patients
Ongles, cheveux,
squames
Recherche de
dermatophytes
Recherche de
germes
pathogènes
Sécretions bronchopulmonaires et crachats
et/ou de BK
Recherche
particulière sur
prescription
explicite
Échantillon de selles recueilli dans le
flacon stérile fourni par le laboratoire.
Pour les bébés et nouveau-nés, apporter
la couche bien fermée au laboratoire
dans un sac plastique.
-Après 3 jours d’abstinence
-Se laver les mains
-Uriner
-Par masturbation, après une
désinfection locale.(dans le service de
spermiologie au Val, à domicile pour St
Sulpice)
-Recueil de la totalité de l’éjaculat.
-Au lever, avant toute toilette locale et
avant l'émission des premières selles
-Appliquer le scotch sur les plis de la
marge anale en appuyant quelques
secondes.
-Retirer l’adhésif et l’étaler sur les
lames support
Matériels
-Pot à coproculture stérile, remis le
plus vite possible après l’émission,
à température ambiante (dans
l'heure en cas de selles diarrhéiques
ou de recherche anguillules)
-Prélèvement effectué sur place au
Val.
- Prélèvement apporté dans le
service de spermiologie
immédiatement (en moins de 30
min à St Sulpice), à 37°c.
-Étui de 2 lames + scotch (non
opaque) apporté au laboratoire, à
température ambiante.
- Prélever de préférence à la périphérie
des lésions des squames à l’aide d’un
vaccinostyle ou d’une curette
- En cas de teigne,arracher les cheveux
susceptibles d’être atteints
- Pour les ongles, couper avec la pince à
ongles ou aux ciseaux toute la partie de
l’ongle atteinte (morceaux très fins),
gratter à la limite de la zone saine avec
un vaccinostyle ou une curette
- En cas de lésion suintante,
écouvillonner le pus et gratter le
plancher de la lésion
- Boites de Pétri stériles
- Vaccinostyle ou curette de Brocq
- Ecouvillons
- Coupe-ongles ou ciseaux.
- Pinces
- recueil de crachats dans un flacon
stérile type ECBU ou selles
- Flacon stérile transmis
rapidement au laboratoire
- le matin, au réveil, après brossage
des dents et rinçage de la bouche,
après un effort de toux
- Recours à la kinésithérapie si
nécessaire (jeunes enfants ou
personnes âgées)
- Eviter au maximum de recueillir de - Lavage broncho-alvéolaire ou
la salive
aspiration bronchique en milieu
spécialisé
- Prélèvements 3 jours consécutifs si BK
Nature du prélèvement
Lésions cutanées, plaie,
escarre, pus profond etc
Gorge
Amygdales
Pharynx
Mode de prélèvement
Recherche de
germes
pathogènes
Recherche de
germes
pathogènes
et germes
spécifiques sur
prescription
explicite
- Prendre les précautions d’asepsie
pour éviter de contaminer le
prélèvement par les bactéries se
trouvant normalement sur la peau.
- Passer les écouvillons sur toute leur
surface au niveau de la zone à
prélever (zone inflammatoire
profonde) ; si elle est sèche, tremper
préalablement l'écouvillon dans du
sérum physiologique stérile.
- Placer un écouvillon dans le milieu
de transport
- Ecouvillonnage fin des sécrétions
au niveau des 2 narines
Oreilles
- Ecouvillonner le conduit auditif
externe, sous éclairage direct, après
avoir nettoyé le conduit avec un
écouvillon imbibé d'eau stérile sauf
si l'écoulement purulent est abondant
Matériel divers :
cathéter, redons,
mèches, stérilets,
drains, lames ...
Si abcès fermé : prélèvement à
la seringue stérile ou bien
rompre la barrière cutanée et
écouvillonner le pus
Si lésions ou abcès ouvert : 2 à 3
écouvillons
- Prélever au niveau des zones
inflammatoires ou nécrotiques, à la
périphérie des fausses membranes,
sur les amygdales
- Éviter de toucher la langue, la
luette
- Si recherche de Coqueluche (PCR),
faire un écouvillonage nasopharyngé des 2 narines avec un
écouvillon fin supplémentaire, dans 1 écouvillon pour lames et un
écouvillon en milieu de transport
un milieu de transport spécifique
pour la culture bactériologique
(fourni par le laboratoire)
Nez
Œil
Matériels
Recherche de
germes
pathogènes
- Avant toute toilette faciale, sans
maquillage
- Écouvillonnage fin, doux, sous
palpébral, ainsi que des culs de sac
conjonctivaux (de l'angle externe de
l'œil jusqu'à l'angle interne)
- Liquide de lentilles dans un flacon
stérile type ECBU
1 écouvillon pour lames et un
écouvillon en milieu de transport
pour la culture bactériologique.
Si demande explicite, prélever un
écouvillon spécial pour Chlamydia
(milieu de transport des
prélèvements génitaux)
Recherche de
germes
pathogènes
- Transmettre le matériel suspect
dans un flacon stérile type ECBU
- si l'ablation n'est pas possible,
prélever autour des point d'insertion
Flacon stérile et/ou 1écouvillon
avec milieu de transport pour la
culture et 1 écouvillon pour lames
Nature du prélèvement
Liquides de
Ponctions : Ascite,
Articulaire, LCR...
Génital, ORL, cutané ...
Mode de prélèvement
Recherche de
germes
pathogènes
Germes
spécifiques sur
prescription
explicite
Recherche
d'Herpes
- Ponctions réalisées par le médecin
- Désinfection cutanée
- Prélèvements à la seringue
- Transmission rapide de
l'échantillon au laboratoire (flacon
stérile ou seringue sans aiguille)
- Flacon stérile type ECBU
- Flacon d'hémocultures
- Tube hépariné (bouchon vert)
- Prélèvement au niveau de la lésion
bulleuse si possible pour récupérer
les sérosités.
- Si non, au niveau de l'ulcération.
- Décharger l'écouvillon dans les
puits d'une lame
d'immunofluorescence
(éventuellement humidifiés avec du
sérum physiologique)
- Si la prescription précise une
recherche par PCR ou Culture,
décharger l'écouvillon dans le milieu
de transport spécifique.
Transmission des lames d'IF au
laboratoire spécialisé.
Transmission du milieu de
transport au laboratoire
spécialisé pour une recherche
par PCR ou Culture
Grattage des lésions
Recherche de Ouvrir les sillons cutanés
Gale (sarcoptes interdigitaux avec un vaccinostyle et
gratter le fond pour récupérer les
scabéi)
sarcoptes
Peau
Cils / Sourcils
Recherche de
Demodex
Matériels
Arracher cils et sourcils à la pince à
épiler ou prélèvement complet d'un
comédon
Observation entre lame et
lamelle dans une goutte de
potasse ou de noir chlorazole
ou de sérum physiologique.
Observation entre lame et
lamelle dans une goutte de
potasse ou de noir chlorazole ou
de sérum phy.
7. HEMOCULTURES : Voir le protocole spécifique (prélèvement sanguin)