DEMANDE D`HABILITATION A DIRIGER LES RECHERCHES

Transcription

DEMANDE D’HABILITATION A DIRIGER LES RECHERCHES
Giuseppina Caligiuri, MD, PhD
Chargée de Recherche (CR)1 INSERM
EMI 00-16
Faculté de Médecine Paris V
(site de Necker-Enfants Malades)
Paris
1.
CURRICULUM VITAE................................................................................................................ 2
2.
PUBLICATIONS........................................................................................................................... 3
3.
PRESENTATION DES TRAVAUX ET PROJETS................................................................... 20
4.
TRAVAUX ANTÉRIEURS......................................................................................................... 22
5.
PRÉSENTATION DE LA CAPACITÉ À CONCEVOIR, DIRIGER, ANIMER ET
COORDONNER DES ACTIVITÉS DE RECHERCHE ........................................................... 34
6.
PROJETS..................................................................................................................................... 36
7.
REFERENCES ............................................................................................................................ 42
1
G. Caligiuri - DEMANDE D’HABILITATION A DIRIGER LES RECHERCHES
1. CURRICULUM VITAE
Née à Ciro’ Marina (Italie) le 3 Janvier 1969, Résidente à Montrouge, 51, rue Fénelon,
92120, Mariée, deux enfants, Langues parlées : Italien, Français, Anglais, Suédois
DIPLOMES ET TITRES
2002 CR1 INSERM Immunité et remodelage artériel (INSERM E0016, Paris, France).
2001 Chercheur Cadre, Infarctus du myocarde et (re)sténose vasculaire chez la souris
(Sanofi-Synthelabo Recherche, Chilly Mazarin, France)
2000 Post-doctorat, autoimmunité chez les patients athéroscléreux et instabilité de
plaque chez la souris immunodéficiente (INSERM U460, Paris, France)
1999 Doctorat d’Université “La réponse immune dans l’athérosclérose et dans les
syndromes coronaires aigus” en cotutelle : Karolinska Institute Stockholm, Suède
et Université Paris VII Denis-Diderot, Paris, France
1997 Diplôme de Spécialisation en Cardiologie Université Catholique, Rome, Italie
1993 Diplôme d’Université en Médecine et Chirurgie Université Catholique, Rome,
Italie
PRIX SCIENTIFIQUES ET FINANCEMENTS
2002 Dotation de l’Institut de France (~30 k€)
2000 Finaliste du prix “Young investigator in acute coronary syndromes” (Société
Européenne de Cardiologie, Lisbonne, Portugal)
1999 Bourse Communauté Européenne BIOMED II pour travailler 2 ans dans l’unité
INSERM U460, Paris
1999 Prix pour « excellence du travail scientifique » congrès annuell de l’ESC
1998 Bourse de la « Fondation Cœur et Poumons » suédoise pour travailler 1 an au
Karolinska Institut de Stockholm, Suède
1997 Bourse de la société européenne de Cardiologie pour travailler 1 an au Karolinska
Institut de Stockholm, Suède
LABORATOIRES FREQUENTÉS EN FRANCE ET A L’ÉTRANGER
Institut de Cardiologie de
l’Université Catholique -Rome
(Italie)
Prof. A. Maseri
INSERM U541, Hôp.
Lariboisière - Paris
« Biologie et Physiologie
Moléculaire de la Paroi Vasculaire »
Prof. B.I. Levy
Centre de Médecine
Moléculaire
CMM, Karolinska Institut
Stockholm (Suède)
Prof. G.K. Hansson
INSERM U430, Hôp.
Broussais - Paris
INSERM U460, UFR X.
Bichat - Paris
« Immunopathologie Humaine »
Département Cardiovasculaire
Prof. M. Kazatchkine
Prof. JM Herbert
« Remodelage
Cardiovasculaire »
Prof. JB Michel
Sanofi-Synthélabo
Recherche - IDF
2
2. PUBLICATIONS
1. G. Caligiuri., P. Rossignol, P. Julia, E. Groyer, D. Mouradian, D. Urbain, N.
Misra, V. Ollivier, P. Boutouyrie, S. V. Kaveri, A. Nicoletti, and A. Lafont.
Reduced Immunoregulatory CD31+ T Cells in Patients With Atherosclerotic
Abdominal Aortic Aneurysm. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2005 Dec 15;
[Epub ahead of print].
2. J. Khallou-Laschet*., G. Caligiuri*, E. Groyer, E. Tupin, A. T. Gaston, B.
Poirier, M. Kronenberg, J. L. Cohen, D. Klatzmann, S. V. Kaveri, and A.
Nicoletti. The Proatherogenic Role of T Cells Requires Cell Division and Is
Dependent on the Stage of the Disease. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2005 Dec
1; [Epub ahead of print] * Equally contributed
3. J. Sainz, A. Al Haj Zen, G. Caligiuri, C. Demerens, D. Urbain, M. Lemitre, and
A. Lafont. Isolation of "Side Population" Progenitor Cells From Healthy Arteries
of Adult Mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2005 Nov 23; [Epub ahead of
print]
4. O. Thaunat, G. Caligiuri, A. Nicoletti, and J. B. Michel. Complexity of antigenic
determinants and humoral responses in vascular injury. Cardiovasc Res 2005; 68:
183-5.
3
5. A. Al Haj Zen., G. Caligiuri, J. Sainz, M. Lemitre, C. Demerens, and A. Lafont.
Decorin overexpression reduces atherosclerosis development in apolipoprotein Edeficient mice. Atherosclerosis 2005 Sep 21; [Epub ahead of print].
6. J. Khallou-Laschet, E. Tupin, G. Caligiuri, B. Poirier, N. Thieblemont, A. T.
Gaston, M. Vandaele, J. Bleton, A. Tchapla, S. V. Kaveri, M. Rudling, and A.
Nicoletti. Atheroprotective effect of adjuvants in apolipoprotein E knockout
mice. Atherosclerosis. 2005 Jul 25; [Epub ahead of print]
7. G. Caligiuri, E. Groyer, J. Khallou-Laschet, A. A. Zen, J. Sainz, D. Urbain, A.
T. Gaston, M. Lemitre, A. Nicoletti, and A. Lafont. 2005. Reduced
immunoregulatory CD31+ T cells in the blood of atherosclerotic mice with
plaque thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol 25:1659.
8 . J. Khallou-Laschet*, G. Caligiuri *, E. Tupin, A.T. Gaston, B. Poirier, E.
Groyer, D. Urbain, S. Maisnier-Patin, R. Sarkar, S.V. Kaveri, S. LacroixDesmazes, A. Nicoletti. Role of the intrinsic coagulation pathway in
atherogenesis assessed in hemophilic apolipoprotein E knockout mice.
Arterioscler Thromb Vasc Biol 2005; 25:e123-6. * Equally contributed
9. E. Durand, A. Al Haj Zen, F. Addad, C. Brasselet, G. Caligiuri, F. Vinchon, P.
Lemarchand, M. Desnos, P. Bruneval, A. Lafont. Adenovirus-mediated gene
transfer of superoxide dismutase and catalase decreases restenosis after balloon
angioplasty. J Vasc Res 2005;42:255-65.
10. A.L. Hemdal, G. Caligiuri, P. Thorèn, G.K. Hansson. Electrocardiographic
characterization of stress-induced myocardial infarction in atherosclerotic mice.
Acta Physiol Scand 2005 ; 184 : 87-94.
4
11. J. Khallou-Laschet, E. Tupin, G. Caligiuri, B. Poirier, N. Thieblemont, A.-T.
Gaston, M. Vandaele, J. Bleton, A. Tchapla, S.V. Kaveri, M. Rudling, A.
Nicoletti. Atheroprotective effect of adjuvants in apolipoprotein E knockout
mice. Atherosclerosis 2005 (in press)
12. G. Caligiuri, S. Kaveri, A. Nicoletti. When IL-18 conducts, the Preludio sounds
the same no matter who plays. Artererioscl Thromb Vasc Biol 2005 ; 25 :655657.
13. G. Caligiuri. Role of the Immune response in atherosclerosis and acute coronary
syndromes. Médecine Sciences 2004; 20: 175-182 (Review, Cover of the issue).
14. G. Caligiuri, D. Stahl, S. Kaveri, T. Irinopoulous, F. Savoie, C. Mandet, M.
Vandaele, M.D. Kazatchkine, J.B. Michel, A. Nicoletti. The autoreactive
antibody repertoire is perturbed in atherosclerotic patients. Lab Invest
2003,83:939-947.
15. G. Caligiuri, M. Rudling, V. Ollivier, M.P. Jacob, J.B. Michel, G.K. Hansson, A.
Nicoletti. Interleukin-10 deficiency increases atherosclerosis, thrombosis, and
low-density lipoproteins in apolipoprotein E knockout mice. Mol Med 2003, 9
:10-17.
16. E. Tupin, B. Poirier, M.F. Bureau, J. Khallou-Laschet, R. Vranckx, G. Caligiuri,
Anh-Thu Gaston, J.P. Duong Van Huyen, D. Scherman, J. Bariéty, J.B. Michel,
A. Nicoletti. Non-viral gene transfer of murine spleen cells achieved by in vivo
electroporation. Gene Ther 2003, 10:569-579.
5
17. G. Caligiuri, A. Nicoletti, B. Poirier, G.K. Hansson: Protective immunity against
atherosclerosis carried by B cells of hypercholesterolemic mice. J Clin Invest.
2002, 109:745-753.
18. G. Caligiuri, M. Rottenberg, A. Nicoletti, H. Wigzell, GK Hansson. Chlamydia
pneumoniae infection does not induce or modify atherosclerosis in mice.
Circulation 2001, 103: 2834-2838.
1 9 .X. Zhou, G. Caligiuri, A. Hamsten, G. K. Hansson. Protection against
Atherosclerosis by LDL Immunization is Associated with T cell Dependent IgG
Antibodies in ApoE-deficient Mice. Arterioscl Thromb Vasc Biol, 2001; 21: 108114.
20. E. Laurat, B. Poirier, E. Tupin, G. Caligiuri, G.K. Hansson, J. Bariéty, A.
Nicoletti, In vivo inhibition of Th1 differentiation blocks the development of
atherosclerosis in apoE knockout mice. Circulation 2001, 104; 2: 197-202.
21. G. Caligiuri, G Paulsson, A Nicoletti, A Maseri, G.K. Hansson. Evidence for
antigen-driven T-cell response in unstable angina. Circulation, 2000; 102: 11141119.
22. G. Caligiuri, A. Nicoletti. [Origines infectieuses de l’athérosclérose] Médecine
Thérapeutique, 2000; 6: 593-597.
23. A. Nicoletti, G. Paulsson, G. Caligiuri, X. Zhou, G. K. Hansson. Induction of
neonatal tolerance to oxidized lipoprotein reduces atherosclerosis in apoE
knockout mice. Molecular Medicine, 2000; 6:283-290.
6
24. A. Nicoletti, G. Caligiuri, G.K. Hansson: Immunomodulation of atherosclerosis:
myth and reality. J Intern Med, 2000;247:397-405
25. A. Nicoletti, G. Caligiuri, G. Paulsson G, G.K. Hansson. Functionality of
specific immunity in atherosclerosis. Am Heart J. 1999 Nov;138(5 Pt 2):438-443.
26. G. Caligiuri, B. Levy, J. Pernow, P. Thorén, G.K. Hansson. Myocardial
infarction mediated by endothelin receptor signaling in hypercholesterolemic
mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999; 96: 6920-6924.
27. G. Caligiuri, A. Nicoletti, X. Zhou, I. Törnberg, G. K. Hansson. Effects of sex
and age on atherosclerosis and autoimmunity in apoE-deficient mice.
Atherosclerosis 1999, 145:301-308.
28. Nicoletti, G. Caligiuri, I. Thörnberg, T. Kodama, S. Stemme, G. K. Hansson.
The macrophage scavenger receptor type A directs modified proteins to antigen
presentation. Eur J Immunol 1999; 29:512-521.
2 9 .J. Jiang, P. Thorén, G. Caligiuri, G.K. Hansson, J. Pernow. Enhanced
phenylephrine-induced rhythmic activity in the atherosclerotic mouse aorta via an
increase in opening of KCa channels: relation to Kv channels and nitric oxide. Br
J Pharmacol. 1999 Oct;128(3):637-646.
30. L.M. Biasucci, G. Liuzzo, R.L. Grillo, G. Caligiuri, A.G. Rebuzzi, A. Buffon, F.
Summaria, F. Ginnetti, G. Fadda, A. Maseri. Elevated levels of C-reactive
protein at discharge in patients with unstable angina predict recurrent instability.
Circulation 1999; 99:855-860
7
31. L.M. Biasucci, G. Liuzzo, G. Fantuzzi, G. Caligiuri, A.G. Rebuzzi, F. Ginnetti,
C.A. Dinarello, A. Maseri. Increasing levels of interleukin (IL)-1Ra and IL-6
during the first 2 days of hospitalization in unstable angina are associated with
increased risk of In-hospital coronary events. Circulation 1999; 99:2079-2084.
32. G. Liuzzo, L.M. Biasucci, J.R. Gallimore, G. Caligiuri, A. Buffon, A.G.
Rebuzzi, M.B. Pepys, A. Maseri. Enhanced inflammatory response in patients
with preinfarction unstable angina. J Am Coll Cardiol 1999 Nov 15;34(6):16961703.
33. G. Caligiuri, G. Liuzzo, L.M. Biasucci, A. Maseri. Immune system activation
follows inflammation in unstable angina: pathogenetic implications. J Am Coll
Cardiol 1998; 32:1295-1304
34. G. Caligiuri. Leukocytes, inflammation and atherosclerosis. Haematologica,
1998; suppl 9 ; 83:28-29.
35. G. Liuzzo, A. Buffon, L.M. Biasucci, J.R. Gallimore, G. Caligiuri, A. Vitelli, S.
Altamura, G. Ciliberto, A.G. Rebuzzi, F. Crea, M.B. Pepys, A. Maseri. Enhanced
inflammatory response to coronary angioplasty in patients with unstable angina.
Circulation 1998; 98:2370-2376
36. A. Nicoletti, S. Kaveri, G. Caligiuri, J. Bariety, G.K. Hansson. Immunoglobulin
treatment reduces atherosclerosis in apo E knockout mice. J Clin Invest 1998;
102:910-918.
37. A.G. Rebuzzi, G. Quaranta, G. Liuzzo, G. Caligiuri, G.A. Lanza, J.R. Gallimore,
R.L. Grillo, D. Cianflone, L.M. Biasucci, A. Maseri. Incremental prognostic
8
value of serum levels of troponin T and C-reactive protein on admission in
patients with unstable angina pectoris. Am J Cardiol 1998; 82:715-719.
38. F. Crea, L.M. Biasucci, A. Buffon, G. Liuzzo, C. Monaco, G. Caligiuri, A. Kol,
G. Sperti, D. Cianflone, A. Maseri. Role of inflammation in the pathogenesis of
unstable coronary artery disease. Am J Cardiol 1997; 80:10E-16E.
39. L. M. Biasucci, G. Liuzzo, G. Caligiuri, G. Quaranta, F. Andreotti, G. Sperti, W.
van De Greef, A. G. Rebuzzi, C. Kluft, A. Maseri. Temporal Relation Between
Ischemic Episodes and Activation of the Coagulation System in Unstable
Angina. Circulation, 1996; 93: 2121-2127.
40. L. M. Biasucci, G. Liuzzo, G. Caligiuri, W. van de Greef, G. Quaranta, C.
Monaco, A. G Rebuzzi, C. Kluft, A. Maseri. Activation of the coagulation system
doesn't elicit a detectable acute phase reaction in unstable angina. Am J Cardiol,
1996; 77: 82-85.
41. L. M. Biasucci, G. D'Onofrio, G. Liuzzo, G. Zini, C. Monaco, G. Caligiuri, M.
Tommasi, A. G Rebuzzi, A. Maseri. Intracellular neutrophil myeloperoxidase is
reduced in unstable angina and acute myocardial infarction, but its reduction is
not related to ischemia. J Am Coll Cardiol, March 1996; 27: 611-616.
42. G. Liuzzo, L.M. Biasucci, A.G. Rebuzzi, J.R.Gallimore, G. Caligiuri, G.A.
Lanza, G. Quaranta, C. Monaco, M.B. Pepys, A. Maseri. The plasma protein
acute phase response in unstable angina is not induced by ischemic injury.
Circulation 1996, 94: 874-877.
9
43. L. M Biasucci, A. Vitelli, G. Liuzzo, S. Altamura, G. Caligiuri, C. Monaco, A.
G Rebuzzi, G. Ciliberto, A. Maseri. Elevated Levels of IL-6 in Unstable Angina.
Circulation, 1996; 94: 874-77.
44. L. M. Biasucci, G. Liuzzo, C. Monaco, G. Quaranta, G. Caligiuri, A. G.
Rebuzzi, W. van de Greef, A. Maseri, C. Kluft. Plasmin-Antiplasim complex in
prognostic eveluation of patients with unstable angina. Fibrinolysis 1994; 8
(Suppl 2): 126-127.
45. L. M. Biasucci, G. Liuzzo, G. Caligiuri, C. Monaco, G. Quaranta, G. Sperti, W.
van de Greef, A. Maseri, C. Kluft. Frequent sampling by clear venipuncture in
unstable angina is a reliable method to assess haemostatic system activity.
Fibrinolysis 1994; 8 (Suppl 2): 142-144.
46. F. Crea, L.M. Biasucci, G. Liuzzo, G. Caligiuri, G. Sperti, A. Kol, A. G.
Rebuzzi, F. Andreotti, D. Cianflone, A. Maseri. [Interazione fra aterosclerosi e
stimoli ischemici nella patogenesi delle sindromi coronariche acute]. Cardiologia
1994;39: 173-178.
PUBLICATIONS DIDACTIQUES
1 . G. Caligiuri, A. Nicoletti. Les lymphocytes et l’immunité spécifique dans
l’athérosclérose. Chapitre 5, page 112-123. « Athérosclérose: Physiopathologie,
Diagnostics et Thérapeutiques » Editons Masson, Paris, 2003.
10
PUBLICATIONS DE REVUE HORS REVUES A COMITE DE LECTURE
1. G. Caligiuri, A. Nicoletti. [Origines infectieuses de l’athérosclérose] Médecine
Thérapeutique, 2000; 6: 593-597. (Français)
2 . G. Caligiuri. Leukocytes, inflammation and atherosclerosis. Haematologica,
1998; suppl 9 ; 83:28-29. (Anglais)
3. G. Caligiuri, G.K. Hansson. [Più del grasso poté l’antigene?]. Ricerca Roche
1997; 16:48-50. (Italien)
PUBLICATIONS EFFECTUEES DANS LE CADRE DE CONGRES
NATIONAUX (*) ET INTERNATIONAUX
1. (*) G. Caligiuri, A. Nicoletti, J. Sainz, A. Al Haj Zen, M. Lemitre, D. Urbain, A.
Lafont. Adoptive transfer of protective immunity in inward carotid remodeling of
FVB/N mice. Arch Mal Coeur Vaiss, 2004; (GRRC, La Baule 22-23 Avril).
2. (*) G. Caligiuri, P. Rossignol, M. Desnos, D. Urbain, D. Mouradian, P. Bruneval,
A. Lafont. Reduced circulating CD31+ T cells in patients with abdominal aortic
aneurysm: pathogenetic implications. Arch Mal Coeur Vaiss, 2004; (GRRC, La
Baule 22-23 Avril).
3. (*) G. Caligiuri, P. Julia, J.N. Fabiani, M. Lemitre, D. Urbain, A. Al Haj Zen, J.
Sainz, E. Colomb, M. Desnos, A. Lafont. Le type de lymphocytes recrutés dans la
paroi artérielle athéroscléreuse est en relation avec l’orientation du remodelage
artériel chez l’Homme. Arch Mal Coeur Vaiss, 2003; 96: 1-11 P376.
11
4. G. Caligiuri, D. Stahl, S. Kaveri, T. Irinopoulous, J.B. Michel, A. Nicoletti.
Perturbed autoreactive antibody repertoire with a bias toward arterial proteins in
symptomatic atherosclerotic patients. Eur Heart J, 2001; P1163.
5. A. Nicoletti, E. Tupin, B. Poirier, G. Caligiuri, M. Bureau, J.B. Michel. In vivo
transfer of genes coding for Th1 and Th2 cytokines in T cells modulates
atherogenesis in the E° mouse. Eur Heart J, 2001; P2288.
6 . G. Caligiuri, V. Ollivier, G.K. Hansson, J.B. Michel. Role of IL-10 in
atherosclerotic plaque stability. Eur Heart J, 2000 ; P999.
7. G. Caligiuri, G.K.Hansson, V. Ollivier, M.P. Jacob, D. de Prost, J.B. Michel, A.
Nicoletti. Th1/Th2 cytokine imbalance promotes plaque rupture and thrombosis in
atherosclerotic mice. Circulation, 2000; 102 : 731.
8 . G. Caligiuri, D. Stahl, S. Kaveri, F. Savoie, J.B. Michel, A. Nicoletti.
Symptomatic coronary atherosclerosis is associated with abnormal autoreactive
IgG antibody repertoire. Circulation, 2000; 102: 3657.
9. Nicoletti, B. Poirier, E. Laurat, G. Caligiuri, J. Bariety. In vivo modulation of the
Th1/Th2 balance modifies atherogenesis in apoE knockout mice. Circulation,
2000; 102 :547.
10. G. Caligiuri, A. Maseri, L. Rydén, G. K. Hansson. Putative Antigens for T Cell
Response in Unstable Angina. J Am Coll Cardiol, Suppl. March 1999
1 1 .G. Caligiuri, A. Nicoletti, G. K. Hansson. Effects of Sex and Age on
Atherosclerosis and Autoimmunity in ApoE-Deficient Mice. J Am Coll Cardiol,
Suppl. March 1999
12
12. G. Caligiuri, B. Levy, P. Thorén, G.K. Hansson. Myocardial infarction mediated
by endothelin receptor signaling in hypercholesterolemic mice. Eur Heart J,
Suppl. August 1999
13. G. Caligiuri, A. Nicoletti, G. K. Hansson. Reduction of atherosclerosis by
adoptive transfer of protective immunity in apoE knockout mice. Eur Heart J,
Suppl. August 1999
14. G.K Hansson., S. Stemme, G. Paulsson, X. Zhou, M. Bruzelius, G. Caligiuri, A.
Nicoletti, A. Sirsjö, D. Wuttge, Z. Yan. Atherosclerosis XI (eds. Jacotot, B.,
Mathe, D. & Fruchart, J.C.) 979-983 (1998).
15. G. Caligiuri, W. Van de Greef, F. Summaria, G. Liuzzo, C. Monaco, R.L. Grillo,
A.G. Rebuzzi, F. Crea, L.M. Biasucci, A. Maseri. Antigenic stimuli may be
responsible for instability of angina. Eur Heart J, 1997: P480
16. G. Liuzzo, G. Caligiuri, R.L. Grillo, A. Buffon, C. Monaco, V. Pasceri, D.J.
Angiolillo, F. Crea, L.M. Biasucci, A. Maseri. Helicobacter Pylori and
Cytomegalovirus Infections are Strongly Associated with Atherosclerosis, but are
not Responsible for the Instability of Angina. J Am Coll Cardiol, 1997: 760-3.
17. Buffon, S. Santini, G. Liuzzo, A. Mordente, F. Summaria, G. Caligiuri, L.M.
Biasucci, F. Crea, B. Giardina, A. Maseri. Increased Lipoperoxidative Stress May
Cause Endothelial Dysfunction in Syndrome X. J Am Coll Cardiol, 1997: 986-76
18. L.M. Biasucci, D. Schiavino, G. Liuzzo, A. Cuculo, A. Meo, G. Caligiuri, F.
Summaria, A.G. Rebuzzi, G. Patriarca, A. Maseri. Elevated Tryptase Levels
During Spontaneous Ischemic Episodes in Unstable Angina: a Specific Marker of
13
Mast-Cell Involvement in Acute Coronary Syndromes. J Am Coll Cardiol, 1997:
990-33
19. G. Quaranta, L.M. Biasucci, A. Meo, G. Liuzzo, G. Caligiuri, A.G. Rebuzzi, W.
van de Greef, C. Monaco, C. Kluft, A. Maseri. Increased Thrombin Formation in
de Novo but not in Destabilizing Unstable Angina During Spontaneous Ischemic
Episodes: Different Triggers of Ischemia? J Am Coll Cardiol, 1997: 1033-41
20. Buffon, G. Liuzzo, G. Caligiuri, R.L. Grillo, F. Summaria, C. Monaco, D.J.
Angiolillo, L.M. Biasucci, F. Crea, A. Maseri. Association between prior
Helicobacter pylori infection and the risk of restenosis after coronary angioplasty.
Eur Heart J, 1997: 1366
21. F. Summaria, G Liuzzo, E. Petrone, G. Caligiuri, A.G. Rebuzzi, C. Monaco, A.
Meo, A. Buffon, V. Rizzello, L.M. Biasucci, A. Maseri. Increased levels of Creactive protein and serum amiloid A protein are related to a raised risk of new
coronary events within one year in patients with unatble angina. Circulation,
Suppl. Oct. 1997
22. Buffon, G Liuzzo, G. Caligiuri, R.L. Grillo, D.J. Angiolillo, F. Summaria, S.
Rigattieri, L.M. Biasucci, F. Crea, A. Maseri. Association between prior
helicobacter pylori infection and the risk of restenosis after coronary angioplasty.
Circulation, Suppl. Oct. 1997
23. G. Caligiuri, F. Summaria, G. Liuzzo, G. Quaranta, C.Monaco, C. Rumi, R.L.
Grillo, F. Crea, L.M. Biasucci, Attilio Maseri. Waning of symptoms and of the
inflammatory response in unstable angina are associated with proportional
activation of the immune system. Eur Heart J, 1996; Suppl September: 1919.
14
24. G. Caligiuri, F. Summaria, G. Liuzzo, C. Rumi, R. L. Grillo, F. Crea, A. G.
Rebuzzi, L. M. Biasucci, A. Maseri. Time course of T-lymphocytes activation and
of C-reactive protein in unstable angina: relation to prognosis. Circulation, 1996;
94: 3339.
25. L. M Biasucci, G. Liuzzo, G. Quaranta, L. Massa, G. Caligiuri, C. Monaco, F.
Summaria, W. van de Greef, A. G. Rebuzzi, C. Kluft, A. Maseri. Plasminogen
activation in unstable angina is associated with an acute phase response but not
with activation of the hemostastic system. J Am Coll Cardiol, 1996; 27 (sA),
307A.
26. Buffon, G. Liuzzo, L. M. Biasucci, G. Quaranta, G. Caligiuri, F. Summaria, R. L.
Grillo, A. G. Rebuzzi, F. Crea, A. Maseri. Serum levels of c-reactive protein
predict acute complications and restenosis after ptca in unstable angina. J Am Coll
Cardiol, 1996; 27 (sA), 363A.
27. Monaco, G. D'Onofrio, G. Liuzzo, G. Caligiuri, G. Zini, G. Quaranta, A. Meo, L.
Massa, A. G. Rebuzzi, D. Milazzo, L. M. Biasucci, A. Maseri. Activation Of The
Hemostatic System Does Not Cause Neutrophil Degranulation In Unstable
Angina. XIII International Congress on Fibrinolysis. Barcelona June 24-27 1996.
28. L.M. Biasucci, G.Quaranta, G.Liuzzo, W. van de Greef, L.Massa, A. Meo, D.
Milazzo, A. G. Rebuzzi, G. Caligiuri, C. Monaco, C. Kluft, A. Maseri.
Thrombotic-fibrinolytic system balance and prognosis in unstable angina. XIII
International Congress on Fibrinolysis. Barcelona June 24-27 1996.
29. G. Quaranta, L. M. Biasucci., G. Liuzzo, G. Caligiuri, C. Monaco, F. Summaria,
A. Meo, L. Massa, W. van de Greef, A. G. Rebuzzi, C. Kluft, A. Maseri.
15
Plasminogen activation in unstable angina is associated with an acute phase
reaction, but does not correlate with other indexes of thrombotic or fibrinolytic
activity. XIII International Congress on Fibrinolysis. Barcelona June 24-27 1996.
30. Buffon, G. Liuzzo, L.M. Biasucci, G. D' Onofrio, G. Caligiuri, C. Monaco, F.
Summaria, A.G. Rebuzzi, F. Crea, A. Maseri. Neutrophil activation in the
coronary tree of unstable angina patients is not related to site of coronary stenosis
or to ischemia-reperfusion injury. Eur Heart J, 1996; Suppl September: 2336.
31. G. Liuzzo, A. Buffon, A. Vitelli, G. Ciliberto, G. Caligiuri, G. Quaranta C.
Monaco, F. Crea, L. M. Biasucci, A. Maseri. Production of interleukin-6 triggers
an enhanced acute phase response after percutaneous coronary angioplasty in
patients with unstable angina. Eur Heart J, 1996; Suppl September: 1453.
32. Monaco, G. D'Onofrio, G. Liuzzo, G. Caligiuri, G. Zini, G. Quaranta, A. Meo, L.
Massa, A. G. Rebuzzi, D. Milazzo, L. M. Biasucci, A. Maseri. Activation of the
hemostatic system does not cause neutrophil degranulation in unstable angina.
Eur Heart J, 1996; Suppl September: 2334.
33. G. Liuzzo, G. Quaranta, G. Caligiuri, W. van de Greef, A. Meo, A. G. Rebuzzi,
C. Kluft, L. M. Biasucci, A. Maseri. Evidence of different pathogenetic
mechanisms in unstable angina according to the clinical presentation. Circulation,
1996; 94: 3013.
34. Buffon, G. Liuzzo, G. D'Onofrio, G. Zini, C. Monaco, G. Caligiuri, F. Summaria,
V. Ramazzotti, A. G. Rebuzzi, F. Crea, L. M. Biasucci, A. Maseri. Intracardiac
activation of neutrophils in unstable angina patients is unrelated to culprit
coronary lesion. Circulation, 1996; 94: 3014.
16
35. G. Liuzzo, A. Buffon, A. Vitelli, S. Altamura, G. Caligiuri, G. Quaranta, C.
Monaco, G. Ciliberto, L. M Biasucci. Plasma levels of interleukin-6 predict
restenosis following coronary angioplasty in patints with unstable angina.
Circulation, 1996; 94: 1921.
36. Liuzzo, L. M. Biasucci, A. Buffon, G. Quaranta, G. Caligiuri, C. Monaco, R. L.
Grillo, A. G. Rebuzzi, A. Maseri. Elevated C-Reactive Protein After Waning of
Symptoms in Unstable Angina is Associated With Recurrence of Instability
During 12 Month Follow-up. J Am Coll Cardiol, 1995; February, Special Issue:
250A.
37. Liuzzo, A. Buffon, L. M. Biasucci, F. De Felice, G. Caligiuri, R. L. Grillo, G.
Quaranta, C. Monaco, F. Crea, A. Maseri. Enhanced Inflammatory Acute Phase
Response After Percutaneous Coronary Angioplasty in Patients With Unstable
Angina. J Am Coll Cardiol, 1995; February, Special Issue: 426A.
38. G. Liuzzo, G. D' Onofrio, C. Monaco, G. Caligiuri, G. Quaranta, G. Zini, M.
Tommasi, A. G. Rebuzzi, A. Maseri, L. M. Biasucci. Systemic neutrophil
activation in unstable angina is not necessarely due to ischemia-reperfusion. Eur
Heart J, 1995; 16, Supp: 137.
39. L. M. Biasucci, G. Ciliberto, G. Liuzzo, S. Altamura, C. Monaco, G. Quaranta, G.
Caligiuri, A. Vitelli, A. G. Rebuzzi, A. Maseri. Serum concentration of
interleukin-6 as marker of prognosis in patients with unstable angina. Eur Heart J,
1995; 16, S: 179.
40. M. Biasucci, G. Caligiuri, G. Liuzzo, F. Andreotti, G. Quaranta, W. van de
Greef, C. Monaco, A. G. Rebuzzi, C. Kluft, A. Maseri. Not all spontaneous
17
ischemic episodes in unstable angina are associated with detectable activation of
the clotting system. Eur Heart J, 1995; 16, Supp: 472.
41. Buffon, G. Liuzzo, L. M. Biasucci, G. Quaranta, G. Caligiuri, C. Monaco, R. L.
Grillo, A. G. Rebuzzi, F. Crea, A. Maseri. Elevated levels of C-reactive protein
are related to the early outcome after PTCA in unstable angina. Eur Heart J,
1995; 16, Supp: 382.
42. G. Quaranta, L. M. Biasucci, G. Liuzzo, G. Caligiuri, W. van de Greef, L. Massa,
C. Monaco, A. G. Rebuzzi, C. Kluft, A. Maseri. Elevated levels of plasminalfa2anti-plasmin are associated with a worse outcome in unstable angina.
Circulation, 1995; 92 (8): 0950.
43. L. M. Biasucci, G. Ciliberto, G. Liuzzo, S. Altamura, C. Monaco, G. Quaranta, G.
Caligiuri, A. Vitelli, A. Maseri. Elevated serum concentrations of interleukin-6 in
unstable angina. Circulation, 1995; 92 (8): 3186.
44. G. Liuzzo, L. M. Biasucci, G. Caligiuri, G. Quaranta, C. Monaco, F. Summaria,
A. G. Rebuzzi, A. Maseri. Preinfarction unstable angina is associated with an
enhanced acute phase response to myocardial cell necrosis. Circulation, 1995; 92
(8): 3734.
45. G. Caligiuri, G. Liuzzo, G. Quaranta, C. Monaco, W. van de Greef, C. Kluft, A.
Maseri, L. M. Biasucci. Evidence of dissociation between thrombin generation
and ischemic episodes in unstable angina. Annals of Hematology, 1994 SII, 69,
s81.
18
46. G. Caligiuri, F. Crea, C. Monaco, G. Liuzzo, C. Rumi, A. Maseri. T-Lymphocyte
Subpopulations Are Different in Stable and Unstable Angina: Pathogenetic
Implications. Circulation, 1994; 90: I-444.
47. L. M Biasucci, G. D'Onofrio, G. Liuzzo, G. Zini, G. Caligiuri, A. G Rebuzzi, B.
Bizzi, A. Maseri. Acquired Neutrophil Myeloperoxydase Deficiency in Unstable
Angina and Myocardial Infarction: a Possible Marker of Inflammation. J Am Coll
Cardiol, 1994; February, Special Issue: 452A.
48. G. Liuzzo, L. M. Biasucci, G. A. Lanza, G. Caligiuri, C. Monaco, P. Pedrotti, R.
L. Grillo, A. G. Rebuzzi, A. Maseri. C-Reactive Protein is Increased in Unstable
Angina but not in Active Variant Angina: is Inflammation in Acute Coronary
Syndromes Related to Ischemia? Circulation 1994; 90: I-664.
49. L. M Biasucci, G. Liuzzo, G. Sperti, R. JT van Leuwen, G. Caligiuri, C. Kluft, A.
Maseri. Episodic activation of thrombin activation in unstable angina detected by
Thrombin-antithrombin III complexes. Eur Heart J, 1993; 14, Supp: 49.
50. L. M Biasucci, G. Liuzzo, W. van de Greef, G. Sperti, G. Caligiuri, C. Kluft, A.
Maseri. Episodic thrombin activation carries a severe prognosis in unstable
angina. Circulation, 1993; 88, 4, part 2: I-516.
19
3. PRESENTATION DES TRAVAUX ET PROJETS
Introduction Générale
Les maladies cardiovasculaires seront une des causes les plus importantes de mortalité
dans le monde en 2020, provoquant 36 % de tous les décès 1. La cause sous-jacente de
cette mortalité élevée est le processus athéroscléreux et la survenue de la thrombose. La
formation et le développement des plaques d'athérosclérose font partie d’un processus
pathologique résultant d'une interaction dynamique entre la paroi des vaisseaux et le sang
circulant. Dans les régions sujettes aux lésions, en relation avec des facteurs
hémodynamiques locaux, la perméabilité endothéliale augmentée conduit à une
infiltration de macromolécules (incluant les lipides circulants) dans l'intima. S’amorce
alors un processus de remodelage pathologique chronique conduisant à la déformation
des artères athéromateuses et conduisant soit la sténose du vaisseau (dans la plus part de
cas) soit à la dilatation et donc à la formation d’un anévrysme. 2.
La proportion de macrophages et de lymphocytes T est augmentée dans les plaques
athéromateuses
3-5
, et ce encore plus lors des sténoses compliquées par la rupture de
plaque spontanée (angor instable) 6, ou provoquée par ballonnet (resténose) 7. La présence
de macrophages et de lymphocytes T dans toutes les formes de sténose suggère que la
réponse immune est impliquée dans l’athérogènese depuis son origine jusqu’aux
complications cliniques aigues. Ces complications peuvent être dues à la formation
improviste d’un thrombus, dans les artère de taille moyenne (carotids, coronaries,
fémorales), ou bien à un remodelage dilatant pathologique (artère de grosse taille comme
l’aorte). Un abondant infiltrat inflammatoire comprenant lymphocytes T et macrophages
20
est aussi présent dans les anévrysmes. Dans ce cas, comme dans les sténoses, il a été
invoqué un rôle délétère pour les lymphocytes et les macrophages puisqu’ils sécrètent des
cytokines (IFNg, TNFa, et IL-6) qui favorisent la mort cellulaire et la digestion de la
matrice extracellulaire 8.
Mon travail de recherche se developpe autours de l’intéraction entre les lymphocytes
circulants et la pathologie artérielle d’origine athéroscléreuse. En particulier, le but de
mon travail est d’établir la fonction (délétère ou protectrice?) de la réponse immune
detectable au cours des l’athérosclérose et de ses manifestations cliniques ainsi que
d’établir si l’amplitude de telle réponse immune est liée à un manque de
contrôle/regulation de l’interface sang/vaisseaux.
21
4. TRAVAUX ANTERIEURS « Rôle de l’immunité dans l’athérosclérose et l’angor instable »
La réponse immunitaire dans l’angor instable (investigation clinique)
Je me suis tout d’abord intéressée au rôle de l’immunité dans les cardiopathies
ischémiques lors de ma formation clinique de médecin spécialiste en cardiologie. Le
groupe du Pr. Maseri à Rome est spécialisé dans l’investigation clinique des
cardiopathies ischémiques et en particulier sur la réaction inflammatoire associée aux
syndromes coronaires aigus (angor instable et infarctus du myocarde). Les patients en
angor instable sont caractérisés par une élévation des marqueurs inflammatoires et
immunitaires9,10. Il a été suggéré qu’une réponse aiguë inflammatoire précipite et/ou
aggrave la thrombose au niveau de la plaque compliquée11. Une concentration
plasmatique élevée de protéine C réactive (CRP) est caractéristique de l’angor instable9,12.
Cette inflammation pourrait être secondaire à l’ischémie du myocarde ou primitive et
spécifique de l’instabilité de la plaque. Nous avons montré que les niveaux de CRP
n’étaient pas une conséquence de l’ischémie13 du thrombus14 ou de la rupture de plaque15.
Nous avons donc formulé l’hypothèse que l’inflammation dans l’angor instable est
primitive traduisant la réaction du système immunitaire.
Relation entre immunité, inflammation et pronostic
(Caligiuri G. et al. J Am Coll Cardiol 1998)
22
Outre l’élévation de la CRP, la proportion de lymphocytes T activés est particulièrement
élevée dans les plaques6et dans le sang périphérique10 de patients souffrant d’angor
instable. Afin de déterminer si la CRP et les lymphocytes activés reflètent le même
processus, nous avons mesuré les concentrations plasmatiques de CRP et des marqueurs
d’immunité humorale et cellulaire chez les patients angoreux. Les sous-populations
lymphocytaires ont été estimées par cytométrie de flux et les marqueurs sériques par
ELISA.
Nous avons montré que les patients en angor instable présentaient des concentrations
élevées de CRP dès le déclenchement des symptômes, prédictives d’une issue clinique
défavorable. Le pourcentage de cellules T activées était également plus élevé chez ces
patients. Inversement, les patients présentant un angor instable et une issue clinique
favorable avaient des concentrations de CRP plus basses dans la phase aiguë d’instabilité
clinique et montraient une réponse systémique des cellules T plus lente et inversement
proportionnelle aux concentrations de CRP initiales. Ces données suggèrent que l’issue
clinique de l’angor instable dépend d’une réponse immunitaire différenciée. Dans le cas
d’une évolution favorable, non seulement le compartiment cellulaire mais aussi les
marqueurs immunitaires humoraux dévoilent une activation transitoire disparaissant dès
la fin de la période d'instabilité. Nos données suggèrent qu’une réponse immunitaire de
type inflammatoire est associée à l’angor instable réfractaire au traitement et à un risque
élevé pour de futurs épisodes coronaires. À l’opposé, une réponse immunitaire moins
inflammatoire (CRP basse), pourrait favoriser la stabilisation de la plaque et la disparition
de l’instabilité clinique. Dans les études que j’ai entreprises par la suite, j’ai évalué la
23
spécificité de la réponse immune en analysant le répertoire des lymphocytes T activés et
des autoanticorps dirigés contre la plaque athéromateuse.
Répertoire et spécificité des lymphocytes T et des autoanticorps
(Caligiuri G. et al. Circulation 2000; Caligiuri G. et al. Lab Invest 2003)
Le récepteur aux antigènes des lymphocytes T (TCR) est composé de deux chaînes, α et
β comprenant une région constante C et une région variable (V). L’analyse du répertoire
des TCR nous renseigne sur la clonalité des lymphocytes. Pour évaluer les proportions
des différents TCRs exprimés par les cellules T activées (HLA-DR+), nous avons utilisé
la cytométrie en flux en couvrant >80% du répertoire de lymphocytes T en marquant les
cellules avec des anticorps spécifiques des différentes chaînes Vß du TCR. Afin de
vérifier si la population de cellules T activées avait répondu à un ou à plusieurs antigènes,
il était nécessaire d'évaluer si ces populations étaient oligo- ou monoclonales. Nous avons
donc analysé l'ARNm des gènes spécifiques de chaque TCR sur les lymphocytes activés.
Dans les chaînes TCR-Vß, la région hypervariable est le CDR3 (Complementary
Determining Region 3), laquelle est responsable de la reconnaissance des antigènes.
L'analyse de la longueur du fragment CDR3 est utilisée pour estimer le degré de diversité
au sein d'une population cellulaire T.
Dans l'angor instable, le pourcentage de cellules activées T est restreint (2-20%) comparé
à l'ensemble des cellules T circulantes
10,16
. Afin de restreindre l'analyse aux cellules T
activées, nous avons sélectionné les cellules DR+ en utilisant des billes magnétiques
recouvertes d'anticorps monoclonaux. Nous avons ensuite extrait les ARNm de ces
24
cellules DR+ et effectué une RT-PCR incluant une amorce fluorescente à l’extrémité du
gène C et une amorce non marquée du côté du gène spécifique Vß. Les produits de PCR
représentaient les différentes régions CDR3 pour chaque famille Vß. Les produits ont été
alors séparés sur des gels de séquençage. Des distributions Gaussiennes de produits
différents sont couramment visualisées dans des populations normales de cellules T
tandis que les pics dominants reflètent la restriction des CDR3 et traduisent donc des
populations T mono- ou oligoclonales (immunoscope) 17.
Nous avons trouvé que les patients en angor instable présentaient des cellules T activées
ayant un répertoire restreint, contrairement aux patients en angor stable qui présentaient
un répertoire normal. Ces résultats suggèrent que la réponse T est spécifique seulement
en présence d’instabilité clinique alors que la simple présence d’athérome coronaire
(angor stable) n’entraîne pas une réponse T spécifique. Ceci indique que la réponse
immune associée à l’angor instable était dirigée vers des antigènes cibles ; mais lesquels ?
Les antigènes candidats pourraient êtres localisés dans les plaques instables et pourraient
être des protéines modifiées, ou bien des agents microbiens. À partir de fragments
d’athérectomie coronaire, nous avons recherché la présence de cibles antigéniques
candidates parmi les protéines des lésions « coupables ». Les lipoprotéines de basse
densité oxydées (oxLDL) présentes dans les plaques d'athérosclérose18 peuvent jouer un
rôle important, car i) elles sont reconnues par les lymphocytes T infiltrant les plaques19 et
ii) des concentrations élevées d’immunoglobulines circulantes spécifiques des oxLDL
sont caractéristiques des patients porteurs d’une athérosclérose sévère20,21. Parmi les
antigènes microbiens, une forme viable de la Chlamydia pneumoniae a été isolée dans
des plaques coronaires actives22, et des cellules circulantes spécifiques pour ce microbe
25
ont été trouvées chez des patients atteints d'athérosclérose coronaire grave23. Pour vérifier
l'hypothèse que les cibles antigéniques candidates contenues dans les lésions coupables
pourraient inclure oxLDL et/ou Chlamydia pneumoniae, ces deux antigènes ont été testés
dans le même lot d'expériences par un essai de présentation de l'antigéne aux
lymphocytes T in vitro.
La prolifération lymphocytaire en réponse aux extraits protéiques des lésions avait
tendance à être plus élevée chez les patients en angor instable que chez les patients
stables. Bien que la différence ne soit pas statistiquement significative dans ce petit
échantillon de patients, ce résultat est compatible avec la notion que la plaque instable
peut représenter une cible de la réponse immunitaire. La réponse des lymphocytes T aux
oxLDL était plus importante chez des patients en angor instable réfractaire suggérant
qu'une réponse immunitaire inflammatoire contre cette cible antigénique était associée à
la persistance de l'instabilité. Par contre, la réponse aux antigènes membranaires de
Chlamydia pneumoniae n’était pas augmentée en relation avec l’instabilité clinique de
l’athérosclérose coronaire.
Durant mon stage post-doctoral, j’ai approfondi l’hypothèse que la réponse immune
associée à la cardiopathie ischémique est dirigée contre la plaque et, en général, contre
des antigènes de la paroi vasculaire. Nous avons utilisé des échantillons humains
d’athérectomie et d’artères normales témoins provenant de recoupes d’artères
mammaires. L’équipe du Pr. Kazatchkine a mis au point la technique du miniblot pour
évaluer l’ensemble des autoréactivités IgG et IgM plasmatiques pour des préparations
antigéniques d’organes normaux. Nous avons utilisé cette technique pour tester la
réactivité des IgG et IgM, chez 20 patients en angor instable ou stable, dirigées contre des
26
préparations protéiques de rein, d’estomac et de foie (organes non-cibles) ainsi que
d’artères saines et d’échantillons d’athérectomie (organes cibles). L’analyse des
autoréactivités pour les organes non-cibles a montré que le répertoire des anticorps
autoréactifs des patients est perturbé comme dans les maladies auto-immunes. Les
résultats les plus intéressants proviennent de l’analyse des réactivités contre les organes
cibles : les autoanticorps des patients reconnaissent de façon spécifique certaines bandes
protéiques des plaques d’athérome que les témoins ne reconnaissent pas. Sur les
préparations d’artères normales, il existe une bande protéique d’environ 55KDa qui n’est
pas reconnue par 90% des patients alors qu’elle est reconnue par la totalité des témoins.
En utilisant des IgG purifiées, il est possible de démasquer cette réactivité également chez
les patients. Ces résultats indiquent que la liaison d’autoanticorps naturels vers des
antigènes contenus dans les artères normales est inhibée par des molécules présentes dans
le sérum des patients. Il pourrait éventuellement s’agir d’anticorps anti-idiotypiques ;
nous travaillons à présent sur cette hypothèse.
Pour localiser les antigènes cibles dans les plaques, nous avons conjugué les
autoanticorps purifiés des patients et des témoins à des fluorochromes différents et nous
les avons utilisés en immunohistochimie en double marquage sur des coupes de plaques
ou d’artères normales. L’analyse de ces marquages en microscopie confocale a montré
que les antigènes reconnus par les autoanticorps naturels des patients et des témoins sont
les mêmes, mais l’affinité des autoanticorps des patients est plus élevée. Ces résultats
sont en faveur d’un rôle pour l’immunité humorale dans l’athérosclérose. Les
autoanticorps protecteurs spécifiques des antigènes artériels pourraient être réprimés chez
les patients.
27
Ischémie, athérosclérose et immunité chez la souris (investigation expérimentale)
Les études cliniques ont montré qu’une réponse immunitaire « chronique » survient chez
tous les patients avec athérosclérose. Je me suis donc intéressée au rôle de l’immunité
dans l’athérosclérose durant ma thèse de science au Karolinska Institut de Stockholm
dans le groupe du Pr. Hansson, pionnier dans l’étude des mécanismes immunitaires dans
l’athérosclérose.
Un modèle d’infarctus aigu lié à l’athérosclérose chez la souris
(Caligiuri G. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999)
Afin d’approfondir nos hypothèses, il fallait modéliser l’ischémie aiguë du myocarde
chez la souris. Des modèles expérimentaux d’infarctus du myocarde chez les souris
utilisent la ligature coronaire24,25 ou la thermocoagulation26. Ces modèles sont de puissants
outils pour étudier les conséquences de l’ischémie-reperfusion dans les cœurs normaux,
mais ils ne conviennent pas à l’étude de l’étiologie et de la physiopathologie des
événements coronariens aigus relatifs à l’athérosclérose. Nous avons donc créé les
conditions expérimentales provoquant l’ischémie du myocarde et développé les méthodes
pour la détecter in vivo chez la souris athéroscléreuse. Nous avons d’abord mis au point
une technique d’angiographie adaptée à la petite taille des cœurs de souris et montré des
sténoses sévères dans les trois principales branches artérielles coronaires chez les souris
apoE/LDLR KO âgées de ≥7 mois. L’analyse histologique des coupes transversales des
cœurs a confirmé que les sténoses étaient dues à la présence de plaques d’athérosclérose
avancée. Des cicatrices fibreuses témoignant d’infarctus du myocarde spontanés ont été
détectées , mais il s’agissait d’évènements rares et imprévisibles. Pour pouvoir
standardiser l’ischémie du myocarde, nous avons provoqué un déséquilibre entre
28
demande et apport d’oxygène, en présence de sténoses coronaires « spontanées », et
détecté l’ischémie à l’aide de la télémétrie chez la souris apoE/LDLR KO. Deux types de
provocation ont été utilisés : la propulsion de jets d’air dans la cage causant un stress
mental associé à une augmentation de la fréquence cardiaque (donc de la demande
d’oxygène), et l’hypoxie aiguë par réduction de l’apport d’oxygène ventilatoire. Nous
avons aussi écrit un programme de lecture semi-automatique des ECG pour détecter les
épisodes d’ischémie. De tels signes électrocardiographiques ont été trouvés seulement
chez les souris présentant des sténoses coronaires. La persistance des signes ECG était
associée à des niveaux sériques de troponine T élevés traduisant la survenue d’un
infarctus aigu du myocarde. L’ensemble de ces résultats montre pour la première fois
qu’il est possible de provoquer, de façon reproductible, un infarctus aigu du myocarde
chez la souris athéroscléreuse.
Variabilité de l’immunité en fonction du sexe et de l’âge chez la souris apoE KO
(Caligiuri G. et al. Atherosclerosis 1999)
Pour pouvoir analyser le rôle de l’immunité spécifique dans l’athérosclérose, il nous
fallait tout d’abord évaluer les réponses immunes spontanées dans le modèle de la souris
apoE KO en fonction du sexe et de l’âge. Nous avons mis au point une méthode27 de
mesure précise des lésions dans des sections complètes et consécutives de la racine
aortique par morphométrie et analyse informatisée semi-automatique. Nous avons trouvé
que le développement des lésions athéroscléreuses varie entre les mâles et les femelles
selon l’âge. À 16 semaines, les souris femelles avaient déjà des plaques fibreuses et de
taille bien plus grande que les lésions des mâles d'âge égal qui n’étaient composées que
de stries lipidiques. La composition et la taille des lésions chez les femelles n'ont pas
29
changé avec l'âge. À l’opposé, à 48 semaines d'âge, les lésions étaient plus étendues chez
les mâles que chez les femelles, comme décrit précedemment28. La variabilité de la
réponse immunitaire associée à l'athérosclérose en fonction du sexe et de l’âge a été
évaluée in vitro par un test de prolifération des cellules spléniques, stimulées par les
oxLDL, en présence ou non d’œstrogènes. Nous avons trouvé une activité immunitaire
anti-oxLDL augmentée chez les femelles âgées. Cette étude montre des différences
importantes entre mâles et femelles au niveau de la taille des lésions et de la réponse des
cellules T aux épitopes exposés sur les oxLDL. Les résultats de cette étude nous ont
conduits à utiliser des souris apoE KO mâles et âgées de plus de 16 semaines pour
l’évaluation du rôle de l’immunité dans l’athérosclérose.
Modulation de la réponse immune humorale et cellulaire chez la souris
athéroscléreuse
(Zhou X. Caligiuri G. et al. Arterioscl Thromb Vasc Biol, 2001 ;Caligiuri G. et al. Circulation 2001 ;
Nicoletti A., Paulsson G. Caligiuri G. et al. Molecular Medicine, 2000 ;Caligiuri G. et al. J Clin Invest,
2002)
Ayant établi qu’une réponse immunitaire liée à l’athérosclérose se développe chez la
souris apoE KO comme chez l’Homme, nous avons voulu comprendre le rôle (bénéfique
ou délétère) de cette réponse en modulant la réponse immune in vivo. Les antigènes
candidats choisis sur la base des données épidémiologiques chez l’Homme, étaient les
oxLDLs et Chlamydia pneumoniae.
Nous avons montré que l’immunisation avec les oxLDL est associée à une réduction de la
taille des lésions chez la souris apoE KO et à une augmentation de la concentration
d’anticorps spécifiques pour les oxLDL (Arterioscl Thromb Vasc Biol, 2001). Ce résultat
suggère que l’activation de la réponse immune humorale dirigée contre les lipoprotéines
modifiées est bénéfique dans l’athérosclérose expérimentale. Malgré les résultats des
30
études précédentes
29,30
, nous avons trouvé que l’infection à Chlamydia pneumoniae
n’altère pas le développement des lésions d’athérosclérose chez la souris (Circulation
2001). Nos données suggèrent donc que les infections à Chlamydia pneumoniae
n’augmentent pas le risque athéroscléreux chez la souris.
Ces deux expériences étaient basées sur l’intervention d’un modulateur « externe » de
l’immunité. Or, la question initiale était le rôle de la réponse immune « naturelle » se
développant de façon spontanée chez la souris athéroscléreuse. Nous avons purifié les
lymphocytes T ou B de souris apoE KO âgées et nous les avons transférés in vivo chez
des souris apoE KO jeunes à un stade précoce de la maladie. Cette expérience a montré
que les lymphocytes B des souris âgées transférées chez des souris jeunes sont en mesure
de réduire de façon significative la taille des lésions d’athérosclérose (J Clin Invest 2002).
Une fois de plus, nos données suggèrent le rôle bénéfique de l’immunité humorale dans
l’athérosclérose.
Une autre manière d’évaluer le rôle du système immun est de déprimer sa fonction. Il a
été montré récemment que l’absence génétique de lymphocytes T et B est associée à une
réduction de la taille des lésions chez la souris apoE KO31 Cependant, il s’agissait d’une
suppression totale des réponses immunes et l’interprétation des résultats demeure difficile
dans ces cas extrêmes. Nous avons utilisé la splénectomie comme moyen de moduler la
réponse immunitaire spécifique sans pour autant l’éliminer complètement. La rate est
l’organe lymphoïde principal, surtout pour les antigènes circulants comme les LDL32. La
splénectomie a été réalisée chez les souris apoE KO à un stade précoce et son effet a été
analysé sur la taille des lésions ainsi que sur la réponse immune spécifique aux oxLDL ( J
Clin Invest 2002). La splénectomie induit une augmentation jusqu’à trois fois de la taille
31
des lésions et une baisse de la concentrations des anticorps anti-oxLDL. La reconstitution
des souris splénectomisées avec des cellules spléniques rétablit la taille des lésions et la
concentration d’anticorps anti-oxLDL. Cette expérience montre que la réponse immune
portée par la rate limite la progression de la maladie athéroscléreuse. En particulier, la
réponse humorale spécifique pour les oxLDL semble être bénéfique. Au contraire, une
expérience de tolérisation T néonatale aux oxLDL réduit la taille des lésions chez la
souris adulte suggérant que la réponse cellulaire spécifique aux oxLDL est délétère
(Molecular Medicine 2000).
En fait, une activation lymphocytaire est nécessaire dans la réponse cellulaire comme
dans la réponse humorale, la différence est le type d’activation qui à son tour est
déterminé par le profil des cytokines sécrétées au site inflammatoire. Ainsi l’IL-12 et
l’IFNγ sont caractéristiques d’une activation des lymphocytes de type inflammatoire ou
Th1 et donnent lieu à des réponses à prévalence cellulaire. Au contraire, l’IL-10 et l’IL-4
sont produites par le type de lymphocytes Th2 qui est plutôt associé à la réponse
humorale33. Plusieurs études indiquent que la voie de différenciation qu’empruntent les
lymphocytes infiltrant les lésions d’athérosclérose est la voie Th1. Il est donc attendu
qu’une augmentation des réponses Th1 et/ou une diminution des réponses Th2 soient
associées à une athérogenèse accélérée.
Au cours de mon stage post-doctoral au sein de l’U460, nous avons croisé les souris apoE
KO avec les souris IL-10 KO pour évaluer l’effet de la déficience en IL-10 (cytokine
Th2) sur les lésions avancées. Nous montrons que les souris double KO jeunes ont plus
de lésions que les souris apoE KO de même âge. Par contre à 48 semaines, les lésions
sont de taille similaire dans les deux groupes, mais chez les souris double KO les lésions
32
contiennent plus de facteur tissulaire et d’activité métallo-protéasique suggérant une
susceptibilité accrue à la thrombose et à la rupture de plaque. Les résultats que nous
avons obtenu à un stade précoce de la maladie ont été confirmés chez la souris C57Bl6
invalidées pour l’IL-10 placée sous régime gras34. Nos données montrent donc qu’un
déficit en IL-10 accélère les stades précoces de la maladie et confère un caractère
« instable » aux lésions avancées (Molecular Medicine 2003). Ces travaux m’ont permis
de comprendre que le type d’activation lymphocytaire inflammatoire (Th1) ou noninflammatoire (Th2) peut influencer de façon déterminante la biologie du vaisseau.
33
5. P RESENTATION
DE LA CAPACITE A CONCEVOIR, DIRIGER , ANIMER ET
COORDONNER DES ACTIVITES DE RECHERCHE
Depuis mes premiers travaux de recherche clinique, durant mon internat en cardiologie,
j’ai pu bénéficier d’un degré considérable d’autonomie dans la conception et la
réalisation de mes activités de recherche. En particulier, j’ai conçu les travaux m’ont
permis de soutenir une thèse de science. J’ai encadré plusieurs techniciens de laboratoire
et j’ai coordonné les activités des unités de recherche collaborant à mes projets.
Mes capacités à diriger et à coordonner les activités de recherche ont été reconnues
pendant la période que j’ai passée chez Sanofi-Aventis puisque on m’a donné la
responsabilité d’animer une petite équipe comprenant un technicien de recherche, un
ingénieur de recherche et un stagiaire. Ainsi j’ai assuré l’encadrement de deux étudiants
de BTS pendant leur stage dans l’entreprise (mémoire et exposé oral à la fin du stage). A
mon arrivée au sein de l’EMI0016 j’ai formé les techniciennes aux techniques de
microscopie, ELISA et cytométrie de flux (histopathologie et immunomarquage). De
plus, j’ai contribué à l’encadrement des étudiants en thèse (Julie Sainz et Ayman Al Haj
Zen) comme le témoigne le fait que j’ai co-signé leurs travaux de thèse. Pendant cette
période j’ai aussi mis au point un modèle animale permettant l’étude des cellules souches
pro-angiogèniques dans le cadre d’un réseau INSERM (M. Aiach) et formé une
technicienne (Isabelle Beurdy) à ce modèle.
Récemment, j’ai entrepris de nouveaux projets, toujours inscrits dans ma thématique, en
collaboration avec l’U681 où j’espère pouvoir poursuivre mes travaux dans le futur.
D’ores et déjà, je suis responsable de l’encadrement d’une étudiante en première année de
34
thèse (Emilie Groyer) et je participe activement à l’animation et à la coordination des
travaux de l’équipe « athérosclérose et immunité » de cette unité.
35
6. PROJETS
“Régulation par le CD31 de l’interface sang-vaisseaux dans l’athéro-thrombose”
Contexte scientifique actuel
La formation d’un thrombus sur une plaque athéromateuse (athéro-thrombose) est la
complication la plus dangereuse de l’athérosclérose et constitue la principale cause de
mortalité dans le monde puisqu’elle est à la base des syndromes coronaires aigus
(angor instable, infarctus du myocarde) et des attaques ischémiques cérébrales 35.
Malgré les progrès réalisés dans le traitement des syndromes coronaires aigus, les
mécanismes responsables de l’athéro-thrombose aiguë restent largement inconnus.
La formation d’un thrombus résulte d’une altération de la paroi vasculaire et évite le
saignement. Un système de régulation, peu connu, assure qu’aucun thrombus ne se
forme en absence de dommages de la paroi vasculaire. Cette régulation requiert un
dialogue entre les acteurs de la thrombose (plaquettes, facteurs de la coagulation)
contenus dans le sang et les cellules de la paroi vasculaire avec lesquelles ils sont en
contact permanent : c’est ce que nous nommons « interface sang-vaisseaux ». Une
altération de l’intégrité de la paroi vasculaire telle que la fissure d’une plaque
d’athérome ou la perte de cellules endothéliales à sa surface (érosion de plaque) est
communément observée dans les sites d’athéro-thrombose et marque la différence
avec les plaques « stables » qui ne donnent pas lieu à des syndromes coronaires aigus.
Cependant, les causes primitives de cette perte d’intégrité de la paroi vasculaire
(rupture ou érosion de plaque) demeurent inconnues.
36
Au cours des 10 dernières années, un nouveau paradigme a émergé : en plus de
l’accumulation de cholestérol, les manifestations cliniques de l’athérosclérose, en
particuliers les syndromes coronaires aigus, sont caractérisées par l’élévation
systématique des marqueurs d’inflammation, tels que la protéine C réactive, dans le
sang 9,12. Plus récemment, une activation des lymphocytes a été associée à la réaction
inflammatoire et les syndromes coronaires aigus
10,16
. Nous avons montré que les
lymphocytes (T et B) de ces patients coronariens sont activés de façon importante et
transitoire et que leur action biologique semble être dirigée contre des protéines
présentes dans la plaque athéromateuse compliquée par la thrombose
36,37
. Dès lors,
l’athéro-thrombose pourrait dépendre d’une réponse immuno-inflammatoire dirigée
contre la paroi vasculaire qui culmine en la perte de l’intégrité de la paroi résultant en
la formation d’un thrombus. En d’autres termes, l’athéro-thrombose serait le résultat
d’une défaillance des mécanismes de régulation de l’interface sang-vaisseaux. La clef
d’un telle régulation est la communication intercellulaire.
Nous formulons l’hypothèse que le CD31, une protéine qui se lie à elle-même, est une
clef de cette régulation.
Le CD31 est une protéine transmembranaire présente sur les cellules endothéliales,
plaquettes, granulocytes, monocytes et lymphocytes et permet donc la communication
Figure 1
de tous les acteurs de l’interface sang-vaisseaux. A la
avec l’âge, les lymphocytes T et surtout les lymphocytes T
+
auxiliaires (CD4 ) perdent cette protéine
38
. Nous avons
récemment constaté que le nombre de lymphocytes
CD4+/CD31+ circulants est significativement réduit chez les
patients présentant un anévrysme de l’aorte abdominale
CD4+/CD31+ (% Globules Blancs)
18
naissance, tous les globules blancs expriment le CD31 mais
16
14
12
10
p<0.01
8
6
4
2
0
No
Thrombus
Thrombus
37
compliqué
par
un
thrombus
(Figure
1,
manuscrit
soumis
CIRCRESAHA/2005/108191). Ceci suggère que cette population cellulaire jouerait
un rôle important dans la régulation de l’interface sang-vaisseaux.
Objectifs du projet
1 . Evaluer le rapport entre nombre de lymphocytes CD4+/CD31+
circulants et manifestations cliniques d’athéro-thrombose coronaire
(syndromes coronaires aigus)
2 . Etablir le lien de cause à effet entre la baisse de lymphocytes
CD4+/CD31+ circulants et l’athéro-thrombose
3 . Etudier la fonction des lymphocytes CD4+ dans le maintien de
l’intégrité de la paroi vasculaire selon leur expression de CD31
4. Identifier le domaine extracellulaire de la protéine CD31 impliqué
dans la régulation de l’interface sang-vaisseaux afin de pouvoir
dessiner de nouveaux outils thérapeutiques spécifiques
Méthodes employées
objectif 1.
Evaluer le rapport entre nombre de lymphocytes CD4+/CD31+ circulants et
manifestations cliniques d’athéro-thrombose coronaire : Cet objectif fera l’objet d’une
collaboration avec les cliniciens de l’Hôpital Bichat (A. Vahanian, PG Steg, N.
Ajzenberg) qui ont mis en place une étude clinique pour évaluer l’état d’activation
des plaquettes chez les patients avec syndromes coronaires aigus. La sélection des
patients est parfaitement adaptée à notre projet : 50 patients présentant des syndromes
coronaires aigus et 50 patients présentant des syndromes coronaire stables (témoins).
Nous effectuerons nos expériences sur les échantillons biologiques non utilisés de
cette étude et souhaitons donc nous greffer sur son CCPPRB. L’étude de Bichat
38
prévoit l’utilisation de plasmas riches en plaquettes à partir de sang veineux
périphérique. Nous allons analyser en cytométrie en flux les leucocytes du culot
résiduel. Les culots seront fixés (PBS/ParaFormAldéhyde 1%) avant lyse des globules
rouges par solution hypotonique (NH4Cl-Tris, pH 7,2). Les cellules seront ensuite
incubées avec une combinaison d’anticorps monoclonaux de souris (CD3-CD4-CD8CD31) et analysées en cytométrie en flux 4 couleurs.
objectif 2.
Etablir le lien de cause à effet entre la baisse de lymphocytes CD4+/CD31+
circulants et l’athéro-thrombose : Nous avons récemment constaté que le nombre de
lymphocytes CD4+/CD31+ circulants est réduit non seulement chez les patients avec
anévrysme de l’aorte abdominale compliqué par un thrombus (Figure 1) mais aussi
chez la souris athéroscléreuse (apoE KO, >40 semaines d’âge) présentant des
thrombus sur plaque au niveau des lésions athéromateuses de la racine de l’aorte
(article en révision ATVB/2005/091165/R1). C’est donc dans ce modèle que nous
allons évaluer si la baisse de lymphocytes CD4+/CD31+ circulants est antérieure à la
rupture de plaque/thrombose et donc, possiblement, causale. Pour ce faire, nous
compterons les lymphocytes CD4+/CD31+ dans le sang périphérique (ponction rétroorbitale sous anesthésie) avant, pendant ou après un traitement antiagrégant
plaquettaire (abciximab, REOPRO®) et également, avant et après rupture mécanique
de plaques (passages répétés d’un guide métallique, Ø ~0.6 mm, dans le tronc
brachiocéphalique). La présence de plaques rompues et d’athéro-thrombose sera
documentée par histomorphométrie et immunohistochimie.
objectif 3.
Etudier la fonction des lymphocytes CD4+ dans le maintien de l’intégrité de la
paroi vasculaire selon leur expression de CD31 : Cette partie sera réalisée à partir du
sang de volontaires sains. Nous avons mis au point un modèle de cytolyse des cellules
de la paroi artérielle (cibles) par les lymphocytes CD8+ (effecteurs) allogéniques. Le
39
pourcentage de cellules cibles endommagées sera évalué par un système de marquage
fluorescent. Les cellules cibles seront marquées par un traceur lipophile (fluorescence
verte). Après incubation (4-24h) avec des concentrations croissantes de cellules
effectrices et lavage des cellules non adhérentes (lymphocytes), les noyaux seront
marqués au DAPI (bleu) et les noyaux des cellules cibles abîmées seront mis en
évidence par marquage au iodure de propidium (rouge). Les lymphocytes CD4+
totaux ou CD4+/CD31- seront co-incubées avec les CD8+. Le marquage sera visualisé
en microscopie en fluorescence
pour vérifier la qualité de la
préparation (cellules abîmées =
noyaux violets, Figure 2) et la
quantification sera réalisée par
cytométrie en flux.
objectif
4. Identifier
le
domaine
extracellulaire de la protéine
CD31 impliqué dans la régulation de l’interface sang-vaisseaux : Cette étape sera
abordée par la technique de transfert de gène in vivo chez des souris athéroscléreu
ses (ApoE KO, âgées > 40 semaines) rendues déficientes en leucocytes CD31+ par
transplantation, après irradiation, de moelle de souris CD31 KO (collaboration avec
Sussan Nourgshargh, Londres). Les plasmides codant des molécules CD31 solubles
déficientes en l’un ou l’autre des six domaines extracellulaires nous sont fournis par
Hannes Stockhinger (Vienne). Les plasmides seront transférés par électroporation
intramusculaire. A l’aide d’une seringue Hamilton, l’ADN plasmidique sera injecté
dans le muscle quadriceps des souris anesthésiées. Immédiatement après injection de
l’ADN, des impulsions électriques transcutanées seront appliquées à l’aide
40
d’électrodes placées de part et d’autre du muscle selon les modalités déjà décrites par
mon laboratoire d’accueil 39. Un mois après transfert de gène, l’étendu de l’athérothrombose sera comparée entre les souris ayant reçu les différents plasmides. La
présence de thrombose dans un groupe désignera le domaine extracellulaire du CD31
impliqué dans la régulation, par les leucocytes, de l’interface sang-vaisseaux.
41
7. REFERENCES
1.
Braunwald E. Shattuck lecture - Cardiovascular medicine at the turn of the
millenium: triumphs, concerns, and opportunities. N Eng J Med.
1997;337:1360-1369.
2.
Reed D, Reed C, Stemmermann G, Hayashi T. Are aortic aneurysms caused
by atherosclerosis? 1992;85:205-211.
3.
Jonasson L, Holm J, Skalli O, Bondjers G, Hansson GK. Regional
accumulations of T cells, macrophages, and smooth muscle cells in the human
atherosclerotic plaque. Arteriosclerosis. 1986;6:131-8.
4.
Munro JM, van der Walt JD, Munro CS, Chalmers JA, Cox EL. An
immunohistochemical analysis of human aortic fatty streaks. Hum Pathol.
1987;18:375-80.
5.
Hansson GK, Jonasson L, Lojsthed B, Stemme S, Kocher O, Gabbiani G.
Localization of T lymphocytes and macrophages in fibrous and complicated
human atherosclerotic plaques. Atherosclerosis. 1988;72:135-41.
6.
van der Wal AC, Becker AE, van der Loos CM, Das PK. Site of intimal
rupture or erosion of thrombosed coronary atherosclerotic plaques is
characterized by an inflammatory process irrespective of the dominant plaque
morphology. Circulation. 1994;89:36-44.
7.
Arbustini E, De Servi S, Bramucci E, Porcu E, Costante AM, Grasso M,
Diegoli M, Fasani R, Morbini P, Angoli L, et al. Comparison of coronary
lesions obtained by directional coronary atherectomy in unstable angina,
42
stable angina, and restenosis after either atherectomy or angioplasty. Am J
Cardiol. 1995;75:675-82.
8.
Szekanecz Z, Shah MR, Pearce WH, Koch AE. Human atherosclerotic
abdominal aortic aneurysms produce interleukin (IL)-6 and interferon-gamma
but not IL-2 and IL-4: the possible role for IL-6 and interferon-gamma in
vascular inflammation. Agents Action. 1994;42:159-62.
9.
Liuzzo G, Biasucci LM, Gallimore JR, Grillo RL, Rebuzzi AG, Pepys MB,
Maseri A. The prognostic value of C-reactive protein and serum amyloid a
protein in severe unstable angina. N Engl J Med. 1994;331:417-24.
10.
Neri Serneri GG, Prisco D, Martini F, Gori AM, Brunelli T, Poggesi L,
Rostagno C, Gensini GF, Abbate R. Acute T-cell activation is detectable in
unstable angina. Circulation. 1997;95:1806-12.
11.
Buja LM, Willerson JT. Role of inflammation in coronary plaque disruption.
Circulation. 1994;89:503-5.
12.
Berk BC, Weintraub WS, Alexander RW. Elevation of C-reactive protein in
"active" coronary artery disease. Am J Cardiol. 1990;65:168-72.
13.
Liuzzo G, Biasucci LM, Rebuzzi AG, Gallimore JR, Caligiuri G, Lanza GA,
Quaranta G, Monaco C, Pepys MB, Maseri A. Plasma protein acute-phase
response in unstable angina is not induced by ischemic injury. Circulation.
1996;94:2373-80.
14.
Biasucci LM, Liuzzo G, Caligiuri G, van de Greef W, Quaranta G, Monaco C,
Rebuzzi AG, Kluft C, Maseri A. Episodic activation of the coagulation system
in unstable angina does not elicit an acute phase reaction. Am J Cardiol.
1996;77:85-7.
43
15.
Liuzzo G, Buffon A, Biasucci LM, Gallimore JR, Caligiuri G, Vitelli A,
Altamura S, Ciliberto G, Rebuzzi AG, Crea F, Pepys MB, Maseri A.
Enhanced inflammatory response to coronary angioplasty in patients with
severe unstable angina. Circulation. 1998;98:2370-6.
16.
Caligiuri G, Liuzzo G, Biasucci LM, Maseri A. Immune system activation
follows inflammation in unstable angina: pathogenetic implications. J Am Coll
Cardiol. 1998;32:1295-304.
17.
Pannetier C, Even J, Kourilsky P. T-cell repertoire diversity and clonal
expansions in normal and clinical samples. Immunol Today. 1995;16:176-81.
18.
Itabe H, Takeshima E, Iwasaki H, Kimura J, Yoshida Y, Imanaka T, Takano
T. A monoclonal antibody against oxidized lipoprotein recognizes foam cells
in atherosclerotic lesions. Complex formation of oxidized
phosphatidylcholines and polypeptides. J Biol Chem. 1994;269:15274-9.
19.
Stemme S, Faber B, Holm J, Wiklund O, Witztum JL, Hansson GK. T
lymphocytes from human atherosclerotic plaques recognize oxidized low
density lipoprotein. Proc Natl Acad Sci U S A. 1995;92:3893-7.
20.
Salonen JT, Yla-Herttuala S, Yamamoto R, Butler S, Korpela H, Salonen R,
Nyyssonen K, Palinski W, Witztum JL. Autoantibody against oxidised LDL
and progression of carotid atherosclerosis. Lancet. 1992;339:883-7.
21.
Maggi E, Perani G, Falaschi F, Frattoni A, Martignoni A, Finardi G, Stefano
PL, Simeone F, Paolini G, DeVecchi E, et al. Autoantibodies against oxidised
low density lipoproteins in patients with coronary disease. Presse Med.
1994;23:1158-62.
44
22.
Maass M, Bartels C, Engel PM, Mamat U, Sievers HH. Endovascular
presence of viable Chlamydia pneumoniae is a common phenomenon in
coronary artery disease. J Am Coll Cardiol. 1998;31:827-32.
23.
Halme S, Syrjala H, Bloigu A, Saikku P, Leinonen M, Airaksinen J, Surcel
HM. Lymphocyte responses to Chlamydia antigens in patients with coronary
heart disease. Eur Heart J. 1997;18:1095-101.
24.
Zolotareva AG, Kogan ME. Production of experimental occlusive myocardial
infarction in mice. Cor Vasa. 1978;20:308-14.
25.
Michael LH, Entman ML, Hartley CJ, Youker KA, Zhu J, Hall SR, Hawkins
HK, Berens K, Ballantyne CM. Myocardial ischemia and reperfusion: a
murine model. Am J Physiol. 1995;269:H2147-54.
26.
Kumashiro H, Kusachi S, Moritani H, Ohnishi H, Nakahama M, Uesugi T,
Ayada Y, Nunoyama H, Tsuji T. Establishment of a long-surviving murine
model of myocardial infarction: qualitative and quantitative conventional
microscopic findings during pathological evolution. Basic Res Cardiol.
1999;94:78-84.
27.
Nicoletti A, Kaveri S, Caligiuri G, Bariety J, Hansson GK. Immunoglobulin
treatment reduces atherosclerosis in apo E knockout mice. J Clin Invest.
1998;102:910-8.
28.
Tangirala RK, Rubin EM, Palinski W. Quantitation of atherosclerosis in
murine models: correlation between lesions in the aortic origin and in the
entire aorta, and differences in the extent of lesions between sexes in LDL
receptor-deficient and apolipoprotein E-deficient mice. J Lipid Res.
1995;36:2320-8.
45
29.
Moazed TC, Campbell LA, Rosenfeld ME, Grayston JT, Kuo C. Chlamydia
pneumoniae infection accelerates the progression of atherosclerosis in
apolipoprotein E-deficient mice. J Infect Dis. 1999;180:238-41.
30.
Hu H, Pierce GN, Zhong G. The atherogenic effects of chlamydia are
dependent on serum cholesterol and specific to Chlamydia pneumoniae. J Clin
Invest. 1999;103:747-53.
31.
Dansky HM, Charlton SA, Harper MM, Smith JD. T and B lymphocytes play
a minor role in atherosclerotic plaque formation in the apolipoprotein Edeficient mouse. Proc Natl Acad Sci U S A. 1997;94:4642-6.
32.
Stark JM, Matthews N, Locke J. Immunogenicity of lipid-conjugated antigens.
II. Anti-complementary activity and antigen trapping in the spleen.
Immunology. 1980;39:353-60.
33.
Mosmann TR, Coffman RL. TH1 and TH2 cells: different patterns of
lymphokine secretion lead to different functional properties. Annu Rev
Immunol. 1989;7:145-73.
34.
Mallat Z, Besnard S, Duriez M, Deleuze V, Emmanuel F, Bureau MF,
Soubrier F, Esposito B, Duez H, Fievet C, Staels B, Duverger N, Scherman D,
Tedgui A. Protective role of interleukin-10 in atherosclerosis. Circ Res.
1999;85:e17-24.
35.
Libby P. Current concepts of the pathogenesis of the acute coronary
syndromes. Circulation. 2001;104:365-72.
36.
Caligiuri G, Paulsson G, Nicoletti A, Maseri A, Hansson GK. Evidence for
antigen-driven T-cell response in unstable angina. Circulation.
2000;102:1114-9.
46
37.
Caligiuri G, Stahl D, Kaveri S, Irinopoulous T, Savoie F, Mandet C, Vandaele
M, Kazatchkine MD, Michel JB, Nicoletti A. Autoreactive antibody repertoire
is perturbed in atherosclerotic patients. Lab Invest. 2003;83:939-47.
38.
Stockinger H, Schreiber W, Majdic O, Holter W, Maurer D, Knapp W.
Phenotype of human T cells expressing CD31, a molecule of the
immunoglobulin supergene family. Immunology. 1992;75:53-8.
39.
Tupin E, Poirier B, Bureau MF, Khallou-Laschet J, Vranckx R, Caligiuri G,
Gaston AT, Duong Van Huyen JP, Scherman D, Bariety J, Michel JB,
Nicoletti A. Non-viral gene transfer of murine spleen cells achieved by in vivo
electroporation. Gene Ther. 2003;10:569-79.
47

DEMANDE D`HABILITATION A DIRIGER LES RECHERCHES

Transcription

Documents pareils

Vente Maison - Talange - Tout l`immobilier à Talange avec Agence

Vente Appartement

Vente Appartement - Talange - Tout l`immobilier à Talange avec

ArticleLesEchosConci..

BR - Greta Bourgogne

Préparation à l`habilitation électrique

PROGRAMME HABILITATION ELECTRIQUE BS

Recyclage Habilitation Risques Chimiques

H0/B0(contenu détaillé de la formation)