p14-15 V° Barrier-Battut - Dose en sperme frais

gestes et techniques
insémination en frais
comment préparer
des doses de semence
Isabelle Barrier-Battut
Institut Français
du Cheval et de l’Equitation
La Jumenterie du Pin
61310 EXMES
Objectif pédagogique
— Savoir préparer des doses
de semence destinées
à être mises en place
sur le lieu de collecte,
et dans l’heure qui suit.
P
Essentiel
— Le sperme pur (non dilué)
n’est utilisable
que si l’insémination
est réalisée immédiatement
à la suite de la récolte.
— Lorsqu’on fabrique
des doses le matin
et l’après-midi, le lait
qui est resté au bain-marie
en fin de matinée
doit être jeté.
— Utiliser des seringues
“deux pièces”,
c’est-à-dire sans caoutchouc
sur le piston.
— La technique
des “doses réfrigérées”
peut également être utilisée
pour de l’insémination
artificielle de semence fraîche.
CHEVAL
— Crédit Formation Continue :
0,05 CFC par article
LE NOUVEAU PRATICIEN VÉTÉRINAIRE
équine
vol 6 / n°22
78 - JUIN 2010
L’insémination artificielle
de semence fraîche (I.A.F.)
utilise la semence sur le lieu
de collecte, et dans l’heure qui suit.
Des règles et des recommandations
pratiques sont à suivre pour préparer
le laboratoire et les doses.
our une insémination artificielle de
semence fraîche, chaque dose doit
contenir au minimum 200 millions de
spermatozoïdes, le sperme doit être dilué au
minimum au tiers (le volume du sperme pur
ne doit pas représenter plus d’un tiers du
volume de la dose totale).
Le sperme doit être dilué le plus vite possible. Il est donc nécessaire de préparer tout
le matériel à l’avance (encadré matériel).
Les spermatozoïdes ne doivent subir
aucun choc thermique. Aussi le matériel qui
entre en contact avec la semence doit être
à 36°C (dilueur, récipients, etc.).
Les règles d’hygiène habituelles sont à
respecter, pour ne pas contaminer la semence.
1. PRÉPARER LE LABORATOIRE
Une demi-heure à l’avance, allumer le
bain-marie, et y mettre du dilueur à chauffer.
Le dilueur classiquement utilisé est du lait
demi-écrémé UHT. En insémination artificielle de semence fraîche (I.A.F.), il convient
pour la plupart des étalons, et l’addition
d’antibiotiques n’est pas obligatoire.
Une fois la brique de lait ouverte, le reste
peut être conservé au réfrigérateur, pour
fabriquer d’autres doses pendant la journée.
Le lendemain, ouvrir impérativement une
nouvelle brique.
Préparer ensuite un biberon gradué, et un
entonnoir contenant deux compresses pour
filtrer le sperme, à conserver dans l’incubateur jusqu’à la récolte (photo 1).
Pour préparer le photomètre, allumer la
lampe, placer une cuve contenant une solution de NaCl à 9 p. mille (volume variable
selon les photomètres : 1,9 mL ou 3,9 mL).
Faire le zéro.
Mettre à réchauffer à 36°C :
- des lames de microscope et des lamelles ;
- des cônes embouts de micropipettes ;
- autant de seringues de 20 mL que de doses
de semence à préparer ;
- des manchons de seringue (préparés à l’aide
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Filtration du sperme (photo Jumenterie du Pin).
matériel
Le matériel indispensable comprend :
- un bain-marie réglé sur 36°C ;
- un photomètre ou un colorimètre,
étalonné pour mesurer la concentration
du sperme pur ;
- un microscope équipé
d’une platine chauffante (36°C) ;
- un incubateur (36°C) ;
- des micropipettes : de 5 mL, de 100 µL,
et de 10 µL.
de mousse isotherme servant à isoler les canalisations). Prévoir des bouchons de seringue.
Les sondes d’insémination doivent aussi
être réchauffées dans un incubateur à 36°C.
Vérifier que tout le matériel est à la bonne
température avant d’aller récolter l’étalon.
2. PRÉPARER LES DOSES
La technique des 2/3-1/3
La technique des 2/3-1/3 est la plus simple, elle évite la perte de semence. Mais, la
concentration en spermatozoïdes dans les
doses est la plupart du temps trop élevée
pour que la semence puisse être conservée.
Toutes les doses doivent donc réellement
être mises en place dans l’heure.
Les différentes phases avant d’inséminer
Dès la récolte terminée, il convient de filtrer le sperme et de placer le biberon au
bain-marie. Noter le volume de sperme pur.
Observer une goutte de sperme pur au
microscope entre lame et lamelle, pour évaluer la mobilité, et vérifier l’absence de cellules pathologiques.
Mesurer la concentration au photomètre* :
ajouter 100 μL de sperme pur dans la cuve
NOTE
* Il existe aussi des photomètres
qui permettraient de mesurer directement
la concentration du sperme pur (ex : Spermacue®).