Le logiciel Analyst® 1.6 avec composantes pour instruments

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Le logiciel Analyst® 1.6 avec composantes pour
instruments des séries 6500
Guide d'utilisation de la technologie SelexION™
Date de diffusion : Juillet 2012
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Table des Matières
Chapitre 1 Présentation de la technologie DMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
À propos de la technologie DMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5
Avantages de la technologie DMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6
Rôle des modificateurs dans la technologie DMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6
Réglage de l'instrument . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7
Mode de fonctionnement avec la DMS Off . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7
Chapitre 2 Utilisation de l'appareil SelexION™. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
Installer le dispositif SelexION™ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .11
Enlever le dispositif SelexION™ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14
Nettoyer et aligner les électrodes de la cellule de mobilité des ions . . . . . . . . . .16
Nettoyer les surfaces de la technologie SelexION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18
Chapitre 3 Optimisation des paramètres de la séparation par mobilité
différentielle (DMS ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
Objectifs : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19
L'optimisation des paramètres de la DMS en mode réglage manuel. . . . . . . . . .19
Objectifs de la section . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19
La création d'une méthode d'acquisition et l'optimisation des paramètres
de la DMS sans un modificateur . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20
Créer une méthode d'acquisition avec un modificateur et optimisation
des paramètres de la DMS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24
Contrôle des paramètres du modificateur en temps réel . . . . . . . . . . . . . . . . .28
Purge du modificateur. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28
Statut Modifier Purge . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .32
Optimisation des paramètres de la DMS en utilisant Compound Optimization . .32
Objectifs de la section . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .33
Optimisation des paramètres de la DMS uniquement avec le type
d'optimisation de la perfusion en T. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .33
Pour optimiser les paramètres du composé et de la DMS avec le type
d'optimisation de la perfusion en T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
Optimisation de la COV par l'intermédiaire de Flow Injection (FIA) . . . . . . . . .40
Optimisation de l'instrument . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41
Chapitre 4 Création de méthodes d'acquisition avec les paramètres
de la DMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
Objectifs : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43
Créer une méthode d'acquisition avec des paramètres de DMS fixes
en mode acquérir. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43
Séparer les composés isobares à l'aide de la technologie SelexION™ . . . . . . .45
Différencier les composés isobares dans MRM et l'algorithme
des méthodes d'acquisition Scheduled MRM™. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46
Utiliser les paramètres DMS dans une méthode d'acquisition
de l'algorithme Scheduled MRM™ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46
Le logiciel Analyst® 1.6 avec composantes pour instruments des séries 6500
3 di 76
Table des Matières
Création d'une méthode d'acquisition des données pour Ramp COV in
the Batch Acquisition Mode . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48
Création et soumission de lots pour l'acquisition de données . . . . . . . . . . . . . .50
Calcul de la consommation du modificateur . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50
Chapitre 5 L'analyse et le traitement de données quantitatives . . . . . . . . . . . . 53
Objectifs : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .53
Analyse des données quantitatives . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .53
Visualiser les paramètres de la DMS dans File Information en visualisant
les fichiers de données. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .53
Création de méthodes de quantification et la génération de tableaux
de résultats . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .54
Quantifier des composés isobares. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .54
Transmettre les données. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .54
Analyse des données quantitatives . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .55
Réviser un fichier de données acquis avec un paramètre de COV
incrémentée . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .55
Afficher un graphique de contour pour les données acquises avec
le paramètre de COV incrémentée. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .56
Visualiser les paramètres de la DMS incrémentée dans File Information
en visualisant les fichiers de données. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .58
Chapitre 6 Utilisation des paramètres de la DMS dans IDA. . . . . . . . . . . . . . . . 61
Objectifs : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .61
Création d'une méthode d'acquisition des données pour Ramp COV
During Batch Acquisition (incrémenter la COV lors de l'acquisition par lot) . . . .61
Création et soumission de lots pour l'acquisition de données . . . . . . . . . . . . . .64
Visualiser les données IDA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .64
Appendice A Informations supplémentaires . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .67
Descriptions des paramètres de la DMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .67
Mode State of DMS Parameters in the DMS Off . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .69
Valeurs des paramètres de DMS et de la source utilisées lors de la purge
du modificateur . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .70
Valeurs des paramètres de la DMS et de la source après la fin ou
l'abandon de la purge du modificateur. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .70
Perfusion- en T de l'échantillon dans le courant du LC . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .71
Remplir la bouteille du modificateur . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .71
Appendice B Dépannage . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Problème #1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Problème #2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Problème #3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Indice. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 75
4 di 76
1
Présentation de la technologie DMS
Cette section décrit la technologie de spectrométrie de mobilité différentielle (DMS), ses
avantages et le rôle des modificateurs. Le fonctionnement en mode d'arrêt de la DMS est abordé
aussi.
À propos de la technologie DMS
La DMS est une méthode de séparation des ions basée sur la différence entre la mobilité des
ions en phase gazeuse dans des champs électriques de haute et de faible intensité à ou près de
la pression atmosphérique. DMS est une variante de l'IMS (spectrométrie de la mobilité des ions)
Dans la technologie de la DMS, les tensions de séparation (SV) sont appliquées à travers le
canal de transport des ions perpendiculairement à la direction du transport du courant de gaz tel
que présenté dans Figura 1-1. À cause de la différence entre les coefficients de mobilité des ions
dans les champs électriques de haute et de faible intensité, les ions migrent vers les parois et
quitte leur trajectoire. Leur trajectoire est corrigé par une tension CD de contrebalancement
appelée tension de compensation (COV).
Figure 1-1
La technologie DMS
Au lieu d'enregistrer le temps de vol d'un ion à travers le canal de transport, la COV requise pour
corriger la trajectoire d'un ion en particulier est enregistrée pour une gamme d'amplitudes de SV.
La COV peut être balayée pour passer les ions en série selon leur mobilité différentielle ou la
régler à une valeur fixe pour passer seulement les espèces d'ions avec une mobilité différentielle
particulière.
Certaines combinaisons de champs de SV et COV permettent aux ions cibles de passer à
travers la région analytique du dispositif SelexION™ sans collision avec les électrodes. Par
5 di 76
conséquent, en balayant ou en fixant les SV et COV, le dispositif SelexION peut fonctionner dans
les modes suivants:
•
Une combinaison particulière des SV et COV peut être sélectionnée, ce qui mène à
la filtration en continu d'espèces particulières d'ions.
•
Lorsque la SV est fixe rt que la COV est balayée, un spectre linéaire de la DMS peut
être enregistré.
Avantages de la technologie DMS
•
Elle améliore la qualité de l'analyse de masse et la précision quantitative en
réduisant le bruit chimique et en pré-séparant les ions de masses identiques.
•
Elle fournit de temps de transit rapides des ions et offre un mode de fonctionnement
transparent (pareil à lorsque le dispositif SelexION™ n'est pas installé sur le
système) qui permet à tous les ions d'être transmis sans discrimination lorsque les
SV et COV sont réglés à zéro.
•
Elle supporte la transmission simultanée des ions des deux polarités et les soumet à
la séparation selon les constantes de la mobilité différentielle.
Rôle des modificateurs dans la technologie DMS
Les modificateurs peuvent être ajoutés au gaz qui transporte les ions à travers le dispositif
SelexION™ pour augmenter la capacité du pic et le pouvoir de séparation de cet appareil. La
présence de ces modificateurs, qui sont typiquement des solvants usuels de chromatographie
(par exemple, 2-propanol, acétonitrile ou méthanol), affecte les mobilités des ions dans l'appareil.
Les ions qui entrent dans la cellule de mobilité forment des regroupements avec les molécules
du modificateur qui altèrent les caractéristiques de séparation. Les regroupements peuvent se
former sous des conditions de faible intensité du champ électrique mais se désintègre dans un
champ électrique de haute intensité, ce qui est connu comme un modèle de groupementdégroupement. L'effet net de la formation d'un groupement est que les différences entre les
champs de haute et de faible intensité sont amplifiées offrant ainsi un meilleur pouvoir de
séparation et une amélioration de la capacité du pic. En outre, la formation de groupement en
soi-même dépend de l'interaction spécifique entre un ion analyte et le modificateur sélectionné
par l'utilisateur, l'utilisation de modificateurs offre une dimension additionnelle à l'approche de la
chromatographie et la spectrométrie de masse traditionnelle. De plus ample informations sur les
effets des modificateurs peuvent se trouver dans l'article scientifique suivant: B.B. Schneider,
T.R. Covey, S.L. Coy, E.V. Krylov, and E.G. Nazarov, Anal. Chem. 2010, 82, 1867-1880.
Puisque l'utilisation de modificateur implique la chimie d'ions en phase gaseuse, certains
comportements généraux sont prévisibles. Dans le cas d'ions positifs, si le modificateur a une
plus grande affinité aux protons que l'ion analyte, ce dernier peut être dénudé de sa charge, ce
qui provoque un signal plus faible mais pas nécessairement un ratio signal - bruit plus faible. En
revanche, si le modificateur a une plus grande acidité de la phase gazeuse que l'analyte, le
courant d'ions négatifs sera réduit. La connaissance des caractéristiques de l'analyte et du
modificateur aide au choix du modificateur approprié. L'utilisation du 2-propanol comme
modificateur est un bon point de départ pour étudier l'effet des modificateurs sur la séparation
d'une DMS en particulier puisqu'il a été démontré qu'il améliore le pouvoir de séparation d'un
grand nombre de composés.
6 di 76
Réglage de l'instrument
Avant d'installer le dispositif SelexION™ sur le spectromètre de masse, il faut s'assurer qu'il est
réglé et étalonné.
Mode de fonctionnement avec la DMS Off
Lorsque le dispositif SelexION™ est installé sur l'instrument, les utilisateurs voudraient, dans
certains cas, acquérir des données spectrales sans avoir recours au dispositif SelexION. Au lieu
de retirer le dispositif SelexION™ du système, les utilisateurs peuvent utiliser le mode de
fonctionnement avec la DMS à l'arrêt pour acquérir les données. Le logiciel Analyst® fournit le
mode de fonctionnement avec la DMS Off qui permet à l'utilisateur de travailler dans un
environnement semblable au cas où le dispositif SelexION n'est pas installé sur l'instrument.
Toutefois, les intensités du signal seront considérablement réduites en mode DMS Off
comparativement aux intensités du signal des données acquis avec le dispositif SelexION
physiquement retiré de l'instrument.
Afin de pouvoir travailler en mode de fonctionnement avec la DMS Off, sélectionner la case à
cocher DMS Off disponible sur l'onglet MS de la fenêtre Acquisition method ou l'onglet MSde la
fenêtre Tune Method Editor.
Figure 1-2
La case à cocher DMS Off dans Tune Method Editor
En mode de fonctionnement avec le DMS Off, les modifications suivantes se produisent:
•
La plupart des paramètres de la DMS ne sont plus disponibles. Se reporter à
Tabella A-2 a pagina 69. Seul le paramètre de la température de la DMS (DT) est
visible en mode DMS Off et il peut être optimisé dans ce mode afin d'obtenir la
meilleure sensibilité.
7 di 76
•
Les paramètres de la DMS (SV, COV et DMO) sont retirés de la liste des paramètres
dans la fenêtre de dialogue Ramp Parameter Settings.
•
Le temps de pause entre les gammes de masse devient 5 ms.
8 di 76
Utilisation de l'appareil SelexION™
2
Un instrument des séries 5500 ou 6500 avec la technologie SelexION™ comporte un module du
contrôleur FSE ainsi que les pièces électroniques associées et l'appareil d'interface installé par
le client.
1
2
Figure 2-1
Article
Système AB SCIEX QTRAP® 6500 avec la technologie SelexION
Description
Commentaires
1
Module du contrôleur avec un
plateau secondaire
Mise à jour du FSE
2
Source d'ions IonDrive™ Turbo
V
Connecté à l'appareil SelexION installé par le client
Note : La source d'ions NanoSpray® peut être installé sur un instrument des séries
5500 ou 6500 équipé de la technologie SelexION mais vous ne pourrez pas utiliser des
modificateurs Vous pouvez créer des méthodes d'acquisition qui comportent des
informations et les débits du modificateur mais la pompe du modificateur demeurera
désactivé lorsqu'elles seront lancées.
9 di 76
L'appareil SelexION comporte les composantes suivantes qui peuvent être remplacées par le
client:
•
Cellule de mobilité des ions
•
Bague de raccord
•
Plaque rideau SelexION.
1
3
4
5
6
2
Figure 2-2
La technologie SelexION
Article Description
Commentaires
1
Composants de
Mise à jour du FSE
l'interface de dépression
2
Ensemble de drain
double
Mise à jour du FSE
3
Plaque à orifice en
céramique
Mise à jour du FSE
4
Cellule de mobilité des
ions
Installé par le client
5
Bague de raccord
Installé par le client
6
Plaque rideau SelexION Installé par le client
10 di 76
Installer le dispositif SelexION™
Le dispositif SelexION peut être facilement installé sur le spectromètre de masse.
Matériel requis
• Gants sans talc
AVERTISSEMENT!Danger de la surface chaude Certaines surfaces de l'interface
de dépression et de la source d'ions deviennent chaudes lors du fonctionnement
et doivent être refroidies pour au moins 10 minutes avant d'effectuer des
procédures de maintenance. Dans le cas de la source d'ions IonDrive™ Turbo V,
elle doit être refroidie pour au moins 90 minutes avant d'effectuer des procédures
de maintenance.
Attention :Dommage potentiel sur l'équipement : Les composantes de l'interface de
dépression doivent être maintenues propres et exemptes de contamination chimique ou
de poussières. Pour éviter la contamination, porter toujours des gants sans talc en
manipulant les composantes de l'interface de dépression.
1. Finir toute opération de balayage en cours ou cliquez surAcquire > Abort Sample.
2. Arrêter le débit de l'échantillon vers le spectromètre de masse.
3. Dans le logiciel Analyst®, désactiver le profil de matériel actif.
Attention :Blessures probables à l'utilisateur: Dans le cas de la source d'ions
IonDrive™ Turbo V, toucher seulement le couvercle en plastique bleu. Ne pas
toucher à la tour ni au drain au fond de la source.
4. Pivoter les deux taquets vers le haut en position ouverte de midi et tirer
tranquillement la source d'ions de la bague de raccord du SelexION.
5. Enlever la plaque rideau en la tirant hors de l'interface de dépression Il est maintenu
par trois billes de retenue montées en captif sur la plaque à trou.
Attention :Dommage potentiel de l'équipement : Manipuler les composants de
l'interface de dépression avec soin. Ils sont très fragiles et coûteux.
11 di 76
6. Positionner la cellule de mobilité des ions SelexION sur la plaque à orifice SelexION
en s'assurant que les connexions de la cellule de mobilité des ions sont alignées
avec la plaque à orifice puis serrer les vis à serrage à main.
1
2
3
2
Figure 2-3
Cellule de mobilité des ions SelexION
Article Description
1
Cellule de mobilité des ions
2
Vis à serrage à la main
3
Électrodes
Note : Le joint d'étanchéité en céramique sur la cellule de mobilité des ions
doit être maintenu exempt de contamination et d'égratignures.
7. Positionner la bague de raccord du SelexION sur le boîtier de l'interface de
dépression. Fixer les deux vis à serrage à la main sur la bague de raccord dans les
réceptacles du boîtier de l'interface de dépression puis les serrer.
Note : La bague de raccord a une goupille de montage dans le fond qui
pousse vers le bas dans une plaque à ressort dans le boîtier du double
drainage. Vous devrez positionner la goupille de montage sur le boîtier du
double drainage, incliner la bague de raccord vers vous puis incliner le haut
de la bague de raccord vers l'instrument.
12 di 76
1
2
3
2
3
4
5
7
6
Figure 2-4
Article
La bague de raccord de SelexION et le boîtier de drainage double
Description
1
Bague de raccord
2
Vis à serrage à la main
3
Réceptacles (pour les goupilles de
montage de la sources d'ions)
4
Connecteur d'interface
5
Goupille de montage
6
Drain double
7
Plaque à ressort
8. Aligner les goupilles de la plaque rideau du SelexION avec les orifices de la cellule
de mobilité des ions et emboutir par la suite la plaque rideau du SelexION dans la
cellule de mobilité des ions.
9. S'assurer que les deux taquets de la source sur la source d'ions sont positionnés
ouverts vers le haut en direction du midi.
10. Positionner la source d'ions sur la bague de raccord du SelexION. S'assurer que les
goupilles guides sur la source d'ions s'ajuste dans les réceptacles dans la bague de
raccord, pivoter par la suite les taquets vers le bas en position 6h30 pour verrouiller
la source d'ions en place. Se reporter à Figura 2-4.
11. Mettre la technologie SelexION sous tension.
13 di 76
Le commutateur est situé en arrière du module du contrôleur de SelexION.
Note : Le défaut de désactiver le profil de matériel actif avant de mettre le
module du contrôleur SelexION en marche ou à l'arrêt (afin d'ajouter ou de
retirer temporairement la technologie SelexION du système) peut causer
l'instabilité du spectomètre provoquant ainsi la perte de contrôle dans le
logiciel Analyst. Si le profil du matériel n'est pas désactivé et que le
spectromètre de masse devienne instable, le contrôle peut être retrouvé en
retirant et replaçant la source d'ions ou par le cyclage du courant du
spectromètre de masse et du module du contrôleur et la réactivation du
profil du matériel.
12. Purger la pompe de modificateur du SelexION avant d'effectuer une expérience qui
requiert des modificateurs. Se reporter à Purge du modificateur. a pagina 28.
AVERTISSEMENT!Risque de toxicité chimique : Prendre des précautions lors du
remplissage des bouteilles de modificateurs qui présentent des caractéristiques
caustiques ou sont toxiques.
.
Attention :Ne pas remplir la bouteille du modificateur lorsqu'elle est sur le plateau
secondaire. Disconnecter la ligne du liquide de la bouteille, remplir la bouteille dans un
endroit sécuritaire et remettre par la suite la bouteille et la ligne de liquide dans le plateau
secondaire.
Enlever le dispositif SelexION™
Retirer le dispositif SelexION et installer la plaque rideau standard afin de récupérer la
performance standard de l'instrument des séries 5500 ou 6500.
Matériel requis
• Gants sans talc
de maintenance.
1. Finir toute opération de balayage en cours ou cliquez surAcquire > Abort Sample.
2. Arrêter le débit de l'échantillon vers le spectromètre de masse.
3. Dans le logiciel Analyst, désactiver le profil de matériel actif.
14 di 76
4. Mettre la technologie SelexION hors tension.
Le commutateur est situé en arrière du module du contrôleur de SelexION.
Note : Le défaut de désactiver le profil de matériel actif avant de mettre le
module du contrôleur SelexION en marche ou à l'arrêt (afin d'ajouter ou de
retirer temporairement la technologie SelexION du système) peut causer
l'instabilité du spectomètre provoquant ainsi la perte de contrôle dans le
logiciel Analyst. Si le profil du matériel n'est pas désactivé et que le
spectromètre de masse devienne instable, le contrôle peut être retrouvé en
retirant et replaçant la source d'ions ou par le cyclage du courant du
spectromètre de masse et du module du contrôleur et la réactivation du
profil du matériel.
5. Retirer la bague de raccord en desserrant les vis à serrage à la main et tirer par la
suite la bague de raccord de l'interface de dépression.
Note : La bague de raccord a une goupille de montage dans le fond qui
pousse vers le bas dans une plaque à ressort dans le boîtier du double
drainage. Vous devez incliner le haut de la bague de raccord vers vous en
la retirant de l'interface de dépression. Se reporter à Figura 2-4.
6. Enlever la plaque rideau en la tirant hors de la cellule de mobilité des ions.
Attention :Dommage potentiel sur l'équipement : Les composants de
l'interface de dépression sont très fragiles et coûteux. Les manipuler avec
précaution.
7. Enlever la cellule de mobilité des ions SelexION en desserrant les vis à serrage à
main et en tirant la cellule de mobilité des ions de la plaque à orifice. Se reporter à
Figura 2-3.
8. Installer la plaque rideau standard.
Note : Vous n'êtes pas obligé de retirer la plaque à orifice SelexION ni
l'ensemble de drainage double. La source d'ions IonDrive Turbo V
fonctionne avec la plaque à orifice SelexION et utilise le trou de l'ensemble
de drain le plus proche du boîtier de l'interface.
9. S'assurer que les deux taquets de la source sur le boîtier de la source d'ions sont
positionnés ouverts vers le haut en direction du midi.
10. Positionner la source d'ions sur l'interface de dépression. S'assurer que les goupilles
guides sur la source d'ions s'ajuste dans les réceptacles dans l'interface de
dépression et pivoter par la suite les taquets vers le bas en position 6h30 pour
verrouiller la source d'ions en place.
15 di 76
Nettoyer et aligner les électrodes de la cellule de
mobilité des ions
Nettoyer et aligner les électrodes de la cellule de mobilité des ions lorsqu'une contamination est
décelable sur les surfaces ou des erreurs de décharges de haute tension se produisent à
répétition.
Matériel requis
• Gants sans talc
• Petit tournevis pour écrous à fente
• papier à sabler #600
• Une solution méthanol-eau 50:50
• Entretoise de maintien
de maintenance.
1. Retirer la cellule de mobilité des ions. Exécuter les étapes 1 à 8 dans Enlever le
dispositif SelexION™ a pagina 14.
16 di 76
2. En utilisant le petit tournevis pour écrous à fente, desserrer les vis d'ajustement pour
que les électrodes puissent bouger librement dans la cellule de mobilité des ions et
ensuite retirer les électrodes de la cellule de mobilité des ions.
2
3
1
4
Figure 2-5
Article
Cellule de mobilité des ions SelexION
Description
Commentaire
1
Cellule de mobilité des ions –
2
Entretoise de maintien
Utilisée pour aligner les électrodes
3
Électrode
–
4
Vis d'ajustement
–
Note : Si les vis d'ajustement sont complètement retirés de la cellule de
mobilité des ions, s'assurer que les rondelles bombées sont remises dans
leurs positions originales
3. Frotter délicatement la suface plate de chaque électrode à l'aide du papier à sabler
#600 et rincer par la suite avec la solution méthanol-eau 50:50.
4. Permettre aux électrodes de sécher et les insérer par la suite dans la cellule de
mobilité des ions.
5. Glisser l'entretoise de maintien dans l'espace en avant des électrodes et, en utilisant
le petit tournevis pour les écrous à fente, aligner les électrodes dans la cellule de
mobilité des ions de manière que l'entretoise de maintien soit centré dans la cellule
de mobilité des ions.
S'assurer que l'entretoise de maitien s'ajuste entre les électrodes puis ajuster les vis
sur chaque côté de la cellule de mobilité des ions pour centrer les électrodes.
6. Positionner la cellule de mobilité des ions SelexION sur la plaque à orifice SelexION
et serrer par la suite les vis à serrage à main. Se reporter à Installer le dispositif
SelexION™ a pagina 11.
17 di 76
Nettoyer les surfaces de la technologie SelexION
Nettoyer les surfaces externes de la technologie SelexION après un déversement ou si elles
sont sales.
•
Utiliser de l'eau savonneuse tiède et un chiffon doux, essuyez les surfaces
extérieures.
18 di 76
3
Optimisation des paramètres de la séparation
par mobilité différentielle (DMS )
Les paramètres de la DMS doivent être optimisés afin afin d'obtenir le meilleur signal et la
meilleure séparation des composés d'intérêt. Pour de plus amples informations concernant la
DMS, veuillez consulter Descriptions des paramètres de la DMS a pagina 67.
Les paramètres de la DMS peuvent être optimisés de deux manières en mode Tune and
Calibrate :
•
Vous pouvez utiliser, comme point de départ, une méthode d'acquisition existante
qui fut créée pour le composé à être analysé et qui comporte les paramètres
optimisés pour le composé, les paramètres de la source et le débit du LC puis
optimiser les paramètres de la DMS.
Ou
•
Vous pouvez créer une nouvelle méthode d'acquisition, optimiser les paramètres du
composé, les paramètres de la source et le débit du chromatographe liquide (LC)
puis optimiser les paramètres de la DMS.
Ce chapitre décrit la deuxième méthode d'optimisation des paramètres de la DMS. La
première méthode est un sous-ensemble de la seconde méthode décrite dans cette
section.
Objectifs :
Dans ce chapitre, vous effectuerez ce qui suit :
•
Optimiser les paramètres de la DMS avec et sans un modificateur en mode de
réglage manuel.
•
Optimiser les paramètres de la DMS en utilisant l'optimisation du composé.
L'optimisation des paramètres de la DMS en
mode réglage manuel.
Objectifs de la section
Dans cette section, vous effectuerez ce qui suit :
•
Créer une méthode d'acquisition en mode de réglage manuel et optimiser les
paramètres de la DMS sans un modificateur.
•
Purger le modificateur.
•
Créer une méthode d'acquisition en mode de réglage manuel et optimiser les
paramètres de la DMS avec un modificateur sélectionné.
19 di 76
Optimisation des paramètres de la séparation par mobilité différentielle (DMS )
Note : Si vous avez l'intention d'obtenir des données en utilisant un modificateur, créez
la méthode d'acquisition et optimisez les paramètres de la DMSD avec le modificateur
sélectionné dans la méthode. Les paramètres de la DMS qui sont la tension de
séparation (SV), la tension de compensation (COV) et le décalage de la DMS (DMO)
sont influencés par le choix de modificateur. Ainsi, l'ajout ou le changement de
modificateur ou sa concentration après l'optimisation des SV, COV et DMO exige la réoptimisation de ces paramètres.
Conditions préalables
•
La technologie SelexION™ doit être installée sur le spectromètre de masse et le
module du contrôleur doit être en marche.
Note : Avant de mettre le module du contrôleur SelexION en marche ou à l'arrêt (afin
d'ajouter ou de retirer temporairement la technologie SelexION du système), désactiver
d'abord le profil actif du matériel dans le logiciel Analyst. À défaut de s'y conformer, le
spectomètre peut devenir instable provoquant ainsi la perte de contrôle dans le logiciel
Analyst. Si le profil du matériel n'est pas désactivé et que le spectromètre de masse
devienne instable, le contrôle peut être retrouvé en retirant et replaçant la source d'ions
ou par le cyclage du courant du spectromètre de masse et du module du contrôleur et la
réactivation du profil du matériel.
La création d'une méthode d'acquisition et l'optimisation des
paramètres de la DMS sans un modificateur
Vous pouvez optimiser les paramètres de votre composé en mode réglage manuel et les
enregistrer dans une nouvelle méthode d'acquisition.
Créer une méthode d'acquisition et optimiser les paramètres de la DMS sans un
modificateur
Vous créerez une nouvelle méthode d'acquisition et vous optimiserez les paramètres de la DMS
à l'aide de cette procédure. Un modificateur n'est pas utilisé dans ce scénario.
1. Activer un profil de matériel qui comporte une pompe seringue. Consulter La
création des profils de matériel et des projets dans le Guide de démarrage et le
Guide d'utilisation du système des séries d'instruments 6500.
2. Perfuser en T (ou perfuser en double) l'échantillon dans le courant du LC. Se
reporter à Perfusion- en T de l'échantillon dans le courant du LC a pagina 71.
3. Sur la barre de navigation, sous Tune and Calibrate, double cliquer sur Manual
Tuning.
4. Sélectionner un type de balayage, inscrire les gammes de masse, les transitions, la
vitesse de balayage et les autres informations requises. Optimiser les paramètres du
composé et de la source d'ions. Optimiser ensuite le débit du LC selon le
paramétrage de la méthode chromatographique. Consulter la Formation sur
l'optimisation manuelle.
5. Cliquer sur l'onglet DMS.
20 di 76
Figure 3-1
Les réglages par défaut des paramètres de la DMS d'un
instrument des séries 6500
Tous les paramètres de la DMS ont des valeurs par défaut. La tension de séparation
(SV) et la tension de compensation (COV) sont à zéro.
Optimiser les paramètres de la DMS pour obtenir les meilleures séparation et
sensibilité. Les paramètres suivants doivnt être optimisés dans l'ordre indiqué :
•
Température de la DMS : Cliquer sur Start pour comparer ce paramètre avec la
valeur par défaut Low. Pour le test, utiliser les valeurs par défaut pour les autres
paramètres de la DMS (SV = 0; COV = 0; Modificateur = Aucun) ou commuter vers
le mode arrêt de la DMS en sélectionnant la case à cocher DMS Off sur l'onglet MS.
Figure 3-2
Éditeur de réglage de méthode avec les réglages par défaut des
paramètres de la DMS d'un instrument des séries 6500
Les données s'affichent dans le volet au dessous de l'éditeur de réglage de
méthode. Si vous n'êtes pas satisfait avec le signal obtenu pour le pic d'intérêt,
21 di 76
changer la valeur de la DT soit à Medium ou High et évaluer de nouveau le signal
jusqu'à ce que le meilleur signal soit obtenu.
Note : Pour chaque changement de valeur de la DT, attendre au moins 10
à 15 minutes afin que le système atteint l'équilibre avant d'optimiser les
paramètres de la DMS.
•
Modificateur (MD): La valeur de ce paramètre doit être à Aucun.
•
Tension de séparation (SV) et tension de compensation (COV): Les SV et COV sont
testés ensemble de manière itérative afin de trouver la combinaison de SV et COV
qui fournit les meilleurs signal et séparation. Vous devez échelonner la SV entre 0 et
le maximum permis de la gamme tout en incrémentant la COV sur toute l'échelle.
Note : L'échelle de COV s'étend entre -100 et 100 volts. Toutefois,
l'optimisation de la plupart des composés se situe entre -20 et 30 volts en
absence de modificateur. Certains composés peuvent être optimisés à plus
de 30 volts. En présence d'un modificateur, nous recommandons une
échelle de COV se situant entre -60 et 20 volts car les déviations négatives
de certains composés peuvent être dramatiques pour certains composés.
La valeur maximale de la SV dépend des paramètres de la DT et de la
TEM.
•
Commencer avec une valeur de SV égale à 0.
•
Cliquer sur Edit Ramp.
La fenêtre de dialogue de paramétrage s'affiche.
•
Sélectionner Compensation Voltage dans le champ Parameter.
•
Inscrire -20 dans le champ Start.
•
Inscrire 30 dans le champ Stop.
•
Utiliser la valeur par défaut dans le champ Step ou inscrire la taille requise de
l'étape et cliquer ensuite sur OK.
La case à cocher Ramp Parameter est sélectionnée.
•
Cliquer sur Start.
méthode. Vérifier l'intensité maximale du signal et la noter. La valeur de la COV
correspondant à cette sensibilité maximale devrait être égale à zéro.
•
Modifier la valeur de la SV pour qu'elle se situe entre 0 et le maximum permis
de l'échelle (par exemple 2000). Vous pouvez utiliser des incréments de 500
ou plus puisque l'échelle tolérable de la SV est large.
•
Utiliser la même échelle de la COV pour incrémenter la valeur et cliquer
ensuite sur Start pour évaluer de nouveau le signal.
méthode. Vérifier l'intensité maximale du signal, la valeur de la COV pour atteindre
ce signal maximum et les noter.
22 di 76
•
Répéter le processus d'échelonnement de la SV et d'incrémenter la COV et
noter la valeur de la SV qui fournit la meilleur intensité du signal. Arrêter le
processus dès que l'intensité du signal commence à décroître. Vous pouvez
continuer le réglage de précision en répétant la procédure décrite ci-dessus
en utilisant des échelonnements plus petits (de l'ordre de 100 à 200 volts) et
en incrémentant la COV.
Suite à la détermination de la combinaison maximale de SV et COV, régler leurs
paramètres dans la méthode à ces valeurs.
•
Décalage de la DMS (DMO): Incrémenter la DMO à la valeur optimisée des SV et
COV. Par exemple:
•
Cliquer sur Edit Ramp.
La fenêtre de dialogue de paramétrage s'affiche.
•
Sélectionner DMS Offset dans le champ Parameter.
•
Inscrire -30 dans le champ Start.
•
Inscrire 30 dans le champ Stop.
•
Utiliser la valeur par défaut dans le champ Step ou inscrire la taille requise de
l'étape et cliquer ensuite sur OK.
•
Cliquer sur Start.
méthode. L'échelle tolérable de la DMO se situe entre –100 to 100 volts.
•
DMS Resolution Enhancement (DR): (dans les séries d'instruments 6500) Pour un
seul composé, la valeur Open (sans manette du gaz) de la DR doit être utilisée.
D'autres valeurs de la DR (Off, Low, Medium ou High) sont utilisées lorsque la
séparation des composés doit être améliorée. Par exemple, lorsque la séparation à
la ligne de base de deux composés dont les COV sont proches est requise, vous
pourriez essayer les valeurs Off, Low, Medium ou High de la DR pour obtenir la
meilleure séparation. Sélectionner la valeur requise (Off, Low, Medium ou High)
pour le paramètre de la DR et cliquer ensuite sur Start pour incrémenter la COV à
une valeur en particulier de la SV afin d'évaluer le signal et la séparation des
composés. Tester les différentes valeurs de la DR jusqu'à ce que vous soyez
satisfait avec la séparation des composés.
(Dans les séries d'instruments 5500) Pour un seul composé, la valeur Off (sans
manette du gaz) de la DR doit être utilisée. D'autres valeurs de la DR (Low, Medium
ou High sont utilisées lorsque la séparation des composés doit être améliorée.
Note : Pour les séries des instruments 6500, lorsque la valeur de la DR est
réglée sur Off, Low, Medium ou High, le débit de gaz est activé entre la
sortie du dispositif SelexION et l'entrée de l'orifice du spectromètre de
masse afin d'améliorer la résolution du dispositif SelexION. Pour les séries
des instruments 5500, la valeur Low, Medium ou High de la DR active le
débit de gaz entre la sortie du dispositif SelexION et l'entrée de l'orifice du
spectromètre de masse
L'utilisation du paramètre de la DR augmente le temps de séjour des ions dans la
cellule de mobilité des ions du SelexION™, ce qui mène à la réduction de la
sensibilité à cause de la plus grande perte du signal de diffusion. Lorsque la valeur
de la DR est modifiée, le temps de pause entre les échelles de masse et le temps
23 di 76
total de balayage sera mis à jour pour prendre en considération le transport de l'ion à
travers la cellule de mobilité de l'ion du SelexION. lorsque des balayages RF/DC
(balayages quadripoles) sont effectuées, le temps de pause entre les gammes de
masse et le temps total de balayage sera mis à jour.
Tabella 3-1 montre les différentes valeurs de la DR et la pause correspondante entre
les temps des gammes de masse.
Tableau 3-1 Les valeurs de la DR et la pause correspondante entre le temps
des gammes de masse
Valeurs de DR
Pause entre les valeurs des échelles de la
masse
Les séries
d'instruments 6500
Les séries
d'instruments 5500
Ouvert (par défaut) (disponible 20 ms (par défaut)
seulement pour les séries des
instruments 6500)
—
Off (par défaut pour les séries
d'instruments 5500)
20 ms
20 ms
Low
30 ms
30 ms
Moyen
40 ms
40 ms
Haut
50 ms
50 ms
Conseil!Les collationnements de la DR montrent la pression actuelle dans
la fenêtre de dialogue Mass Spec Detailed Status. Double cliquer sur l'icône
Mass Spec sur la barre de l'état afin d'ouvrir le dialogue.
6. Enregistrer la méthode d'acquisition après l'optimisation réussie des paramètres de
la DMR.
Créer une méthode d'acquisition avec un modificateur et
optimisation des paramètres de la DMS.
Note : Lorsque la source d'ions NanoSpray® est utilisée, les utilisateurs ne pourront
pas se servir de modificateurs. Les utilisateurs pourront créer des méthodes
d'acquisition qui comportent des informations et les débits du modificateur mais la
pompe du modificateur demeurera désactivé lorsqu'elles seront lancées.
Si les composés d'intérêt ne sont pas séparés adéquatement en mode DMS, un modificateur
peut être introduit pour les séparer. Un modificateur est un composé chimique ajouté au débit du
Curtain Gas™ pour améliorer la séparation des composés.
Vous pouvez sélectionner un modificateur et optimiser les paramètres en mode de réglage
manuel et créer une méthode d'acquisition afin d'enregistrer les paramètres optimisés.
Purger la ligne du modificateur avant de sélectionner un modificateur pour la première fois ou de
changer de modificateur. Se reporter à Purge du modificateur. a pagina 28.
24 di 76
Prérequis
•
Il faut s'assurer que la quantité de modificateur est suffisante dans sa bouteille pour
les fins d'acquisition. Pour de plus amples informations concernant le calcul de la
consommation du modificateur, veuillez consulterPour calculer la consommation
appropriée du modificateur pour un lot a pagina 51.
S'il faut remplir la bouteille du modificateur, veuillez consulter Remplir la bouteille du
modificateur a pagina 71.
Créer une méthode d'acquisition avec un modificateur sélectionné et optimiser les
1. Perfuser en T l'échantillon dans le courant du LC. Se reporter à Perfusion- en T de
l'échantillon dans le courant du LC a pagina 71.
2. Sur la barre de navigation, sous Tune and Calibrate, double cliquer sur Manual
Tuning.
3. Sélectionner un type de balayage, inscrire les gammes de masse, les transitions, la
vitesse de balayage et les autres informations requises. Optimiser les paramètres du
composé et de la source. Optimiser ensuite le débit du LC selon le paramétrage de
la méthode chromatographique. Consulter la Formation sur l'optimisation manuelle.
Note : Au lieu de créer une nouvelle méthode d'acquisition, vous pouvez ,
comme point de départ, utiliser une méthode d'acquisition existante qui fut
créée pour le composé à être analysé en l'absence de modificateur ou en
présence d'un modificateur autre que celui actuellement utilisé. Cette
méthode d'acquisition doit comporter les paramètres du composé optimisé,
de la source et de la DMS ainsi que le débit du LC. Toutefois, les
paramètres de la DMS doivent être ré-optimisés pour la méthode qui utilise
un modificateur.
4. Cliquer sur l'onglet DMS.
5. Optimiser le paramètre de la DT tel que décrit dans Créer une méthode d'acquisition
et optimiser les paramètres de la DMS sans un modificateur a pagina 20.
25 di 76
6. Dans le paramètre Modifier (MD), sélectionner un modificateur de la liste. Vous
pouvez sélectionner un des modificateurs présélectionnés mais si vous voulez un
autre modificateur, sélectionner Custom. Pour des informations concernant la valeur
personnalisée du modificateur, veuillez consulter passo 8 a pagina27.
Figure 3-3
le paramètre Modifier Composition (MDC) s'affiche avec sa valeur par défaut qui est
établie à bas.
Figure 3-4
26 di 76
7. Dans le paramètre MDC, si requis, sélectionnerHigh pour vérifier la concentration
du modificateur qui produirait la séparation optimale. Bas est 1,5% ou plus et haut
est une concentration du modificateur de 3,0%.
Le logiciel Analyst® utilise la valeur de débit du Curtain Gas ainsi que la densité et la
masse moléculaire du modificateur sélectionné pour calculer le débit du modificateur
et l'appliquer automatiquement.
8. Si vous sélectionnez Custom dans le paramètre Modifier (MD) danspasso 6 a
pagina26, vous devez fournir la densité et la masse moléculaire personnalisées tel
qu'illustré dans la figure suivante afin que le logiciel Analyst puisse calculer le débit
du modificateur à un réglage spécifique (bas ou haut) et l'appliquer.
Figure 3-5
Réglage des paramètres de la DMS d'un instrument des séries
6500
•
densité du modificateur (g/mL) (MDD): Spécifier la densité du modificateur
personnalisé. Le logiciel Analyst utilise cette densité ainsi que la masse
moléculaire et la valeur du débit du Curtain Gas pour déterminer le débit du
modificateur personnalisé.
•
Modificateur MW (MDW): Spécifier la masse moléculaire du modificateur
personnalisé en g/mol, Le logiciel Analyst utilise la valeur de ce paramètre
ainsi que la densité et la valeur du débit du Curtain Gas pour déterminer le
débit du modificateur personnalisé.
Conseil!Vous pouvez visualiser le débit de la pompe du modificateur sur la
boîte de dialogue Mass Spec Detailed Status. Double cliquer sur l'icône
Mass Spec sur la barre de l'état afin de visualiser le dialogue.
27 di 76
9. Pour le modificateur sélectionné et la valeur de la MDC, régler les paramètres des
SV, COV et DMO tel que décrit dans Créer une méthode d'acquisition et optimiser
les paramètres de la DMS sans un modificateur a pagina 20 jusqu'à ce que vous
soyez satisfait avec le signal et la séparation.
Si vous voulez essayer une concentration différente (haut ou bas) du modificateur
(sélectionné dans passo 6 a pagina26), sélectionner une différente valeur de MDC
(bas ou haut) et ré-optimiser les paramètres des SV, COV et DMO tel que décrit
dans Créer une méthode d'acquisition et optimiser les paramètres de la DMS sans
un modificateur a pagina 20.
Si voud désirez utiliser un modificateur différent, purger d'abord la ligne de
modificateur, sélectionner un autre modificateur dans la méthode d'acquisition,
spécifier la valeur de MDC pour le nouveau modificateur et ré-optimiser par la suite
les paramètres des SV, COV et DMO tel que décrit dans Créer une méthode
d'acquisition et optimiser les paramètres de la DMS sans un modificateur a pagina
20.
10. Si requis, optimiser le paramètre de la DT tel que décrit dans Créer une méthode
d'acquisition et optimiser les paramètres de la DMS sans un modificateur a pagina
20.
11. Enregistrer la méthode d'acquisition.
Contrôle des paramètres du modificateur en temps réel
Si vous commencez à acquérir des données à partir du réglage manuel en utilisant la méthode
d'acquisition créée dans le thème précédent et à changer par la suite la valeur de la MDC de bas
à haut ou de haut à bas au cours de l'acquisition, le logiciel Analyst® recalcule immédiatement le
débit requis de la pompe du modificateur et ajuste la pompe du modificateur conséquemment.
De la même manière, si vous changer, au cours de l'acquisition, la masse moléculaire ou la
densité moléculaire du modificateur personnalisé spécifié dans la méthode d'acquisition, le
logiciel Analyst recalcule immédiatement le débit requis de la pompe du modificateur et ajuste la
pompe du modificateur conséquemment.
Purge du modificateur.
Avant d'utiliser un nouveau modificateur, purger le modificateur actuellement utilisé de la pompe
de modificateur. La purge du modificateur requiert environ quatre minutes au cours desquelles le
spectromètre de masse ne sera pas disponible pour utilisation.
Un modificateur peut être purgé ou retiré de de la pompe du modificateur à partir du réglage
manuel ou le mode acquérir lorsque le dispositif SelexION™ est en marche.
Pour purger le modificateur en mode Manual Tuning ou Acquire lorsque le
dispositif SelexION est en marche
1. S'assurer que le module du contrôleur du SelexION est allumé et activer un profil de
matériel. Consulter La création de profils de matériels et de projets dans le Guide de
démarrage.
2. Brancher la bouteille contenant l'autre modificateur que vous voulez utiliser à la
pompe du modificateur.
28 di 76
3. Si vous êtes déjà en réglage manuel ou le mode acquérir, aller à l'étape 4. Si vous
êtes en mode aquérir avec des échantillons en file d'acquisition, veuillez consulter
Purge de modificateurs à partir du mode Acquire avec des échantillons en file
d'acquisition a pagina 31. Si vous êtes ni en réglage manuel ni en mode acquérir,
cliquer sur Acquire ou Tune and Calibrate sur la barre de navigation.
Figure 3-6
L'icône Purge Modifier
4. Cliquer sur l'icône Purge Modifier sur la barre d'outils.
Figure 3-7
La boîte de dialogue Purge Modifier
La boîte de dialogue Purge Modifier s'ouvre. Le statut est Ready, ce qui indique que
le système est prêt à démarrer le processus de purge.
5. Cliquer sur le bouton Purge.
29 di 76
Le processus de purge commence. Si la purge du modificateur est amorcé à partir
du mode Manual Tuning, le système entre automatiquement en mode de non
réglage et l'icône Reserve Instrument for Tuning devient inaccessible sur la barre
d'outils.
Le processus de purge entre en mode d'initialisation/équilibre. Au cours du mode
d'initialisation, une méthode d'acquisition et un fichier séquentiel sont créés. Le
système s'équilibre en mode Equilibrating.
Le statut de la boîte de dialogue Purge Modifier se change de initialisation/équilibre
à purge, ce qui indique que le modificateur se vide de la pompe du modificateur. Au
cours de la purge du modificateur, l'instrument effectue un balayage et les données
sont cueillies dans le dossier API Instrument\Data. À la fin de la purge, la méthode
d'acquisition, le fichier séquentiel et les données sont automatiquement retirés.
Lors de la purge, le bouton Purge change à Abort. Le temps de purge attendu
(quatre minutes) et le temps écoulé dans le cycle de purge sont affichés. Le logiciel
Analyst® règle automatiquement les paramètres de la DMS et de la source à de
nouvelles valeurs pendant quatre minutes (temps attendu de la purge). Pour
visualiser ces valeurs, veuillez consulter Valeurs des paramètres de DMS et de la
source utilisées lors de la purge du modificateur a pagina 70.
Conseil!Vous pouvez visualiser l'état du processus de purge du
modificateur sur la boîte de dialogue Mass Spec Detailed Status. Double
cliquer sur l'icône Mass Spec sur la barre de l'état afin de visualiser le
dialogue.
30 di 76
La purge du modificateur de la pompe du modificateur prend environ quatre
minutes. À la fin du processus de purge, le statut de la boîte de dialogue Purge
Modifier change à complété. Le bouton Abort change de nouveau à Purge. Le
système retourne automatiquement au mode Manual Tuning si la purge du
modificateur est initialisé à partir du mode de réglage manuel. Les valeurs de
certaines valeurs de la DMS et de la source sont réglées de nouveau. Pour
visualiser ces valeurs, veuillez consulter Valeurs des paramètres de la DMS et de la
source après la fin ou l'abandon de la purge du modificateur. a pagina 70.
6. Cliquer sur X pour fermer la boîte de dialogue Purge Modifier.
À la fin de la purge du modificateur, permettre au système de s'équilibrer pour environ 10
minutes avec les conditions requises de la source et le nouveau modificateur en exécution avant
d'acquérir de nouveaux échantillons.
Pour abandonner le processus de purge
1. Dans la boîte de dialogue Purge Modifier, cliquer sur Abort.
Le cycle de purge est terminé et les valeurs de certains paramètres de la DMS et de
la source sont rétablies. Pour visualiser ces valeurs, veuillez consulter Valeurs des
paramètres de la DMS et de la source après la fin ou l'abandon de la purge du
modificateur. a pagina 70.
Le statut est changé à Aborted et le bouton Abort est changé à Purge.
Si la purge du modificateur est initialisé à partir du mode Manual Tuning, après
l'abandon, le système est réglé de nouveau en mode Manual Tuning.
Après l'abandon de la purge du modificateur, permettre au système de s'équilibrer pour environ
10 minutes avec les conditions requises de la source et le nouveau modificateur en exécution
avant d'acquérir de nouveaux échantillons.
Purge de modificateurs à partir du mode Acquire avec des échantillons en file
d'acquisition
Si vous êtes en mode Acquire avec des échantillons en d'acquisition et que vous aviez
sélectionné l'icône Purge Modifier, un message de file occupée s'affiche dans la boîte de
dialogue Purge Modifier.
31 di 76
Figure 3-8
Message Queue Busy
Si vous cliquez sur le bouton Purge dans la boîte de dialogue, un message s'affiche pour
indiquer que l'acquisition est actuellement en cours. Pour continuer la purge, vous devez soit
compléter ou annuler le processus d'acquisition tout en s'assurant qu'il n'y a pas d'échantillons
en attente dans la file.
Statut Modifier Purge
Tableau 3-2 Statut Modifier Purge
État de la puge
Description
Prêt
Le système est prêt pour démarrer le processus de purge.
Initialisation/équilibre
Création de fichiers de méthode et séquentiels/le système
s'équilibre
Purging
Purge du modificateur en cours.
Aborted
Le cycle de purge est terminé.
Queue Busy
Acquisition en cours; la purge n'est pas possible,
Travail achevé
Le processus de purge est terminé.
Optimisation des paramètres de la DMS en
utilisant Compound Optimization
Le type d'optimisation de la perfusion en T en mode d'optimisation du composé permet
d'optimiser automatiquement ce qui suit:
•
Paramètres de la DMS (SV, COV et DMO)
•
Paramètres du composé et de la DMS (SV, COV et DMO)
Le type d'optimisation FIA permet d'optimiser le paramètre de la COV uniquement à une certaine
SV pour la technologie SelexION™. Il peut servir également à optimiser les paramètres qui
dépendent de la sourceet du composé.
32 di 76
Note : Dans le cas d'utilisation d'un système LC de Shimadzu pour l'optimisation FIA
du composé, il faut prendre en considération que la durée par défaut des méthodes LC
de Shimadzu est de 90 minutes. Il faut le changer en utilisant le programme de temps
pour le système LC de Shimadzu inclus dans Acquisition Method Editor. Par contre, en
réglant avec la durée du balayage du spectromètre de masse (qui est plus courte que la
durée du programme de temps), vous ne pourriez pas arrêter l'exécution du réglage à
travers le logiciel Analyst après que le spectromètre de masse ait terminé le balayage.
Si cela se produit, appuyer sur Run sur le CBM du Shimadzu pour arrêter l'exécution.
Objectifs de la section
Dans cette section, vous effectuerez ce qui suit :
•
Optimiser les paramètres de la DMS avec la perfusion en T.
•
Optimiser les paramètres du composé et de la DMS avec perfusion en T.
•
Optimiser la COV avec la FIA.
Prérequis
•
Avant d'optimiser la perfusion en T, il faut créer une méthode d'acquisition qui sera
considérée comme une méthode d'acquisition de départ pour l'optimisation de la
perfusion en T. Cette méthode doit comporter ce qui suit :
•
Une méthode LC isocratique (facultative si une pompe isocratique externe est
utilisée).
•
Une méthode de pompe seringue (facultative si une pompe seringue externe
est utilisée).
•
Un type de balayage MRM ou Q1 MI.
•
Paramètres optimisés de la source.
•
Paramètre de la température de laDMS optimisé avec les valeurs par défaut
des SV, COV et DMO.
•
Le type et le débit du modificcateur peuvent ou pas être spécifiés.
•
Si un pilote AAO ou un pilote intégré du Shimadzu est utilisé comme pompe
du LC, la durée du LC doit être suffisamment longue pour l'acquisition. Le
logiciel Analyst® ne peut pas modifier le temps de LC.
•
Nombre maximum de composés = 20.
Optimisation des paramètres de la DMS uniquement avec le
type d'optimisation de la perfusion en T.
Utiliser la procédure suivante pour optimiser les paramètres des SV, COV et DMO DMS:
Pour optimiser uniquement les paramètres de la DMS avec le type d'optimisation
de la perfusion en T
1. Le profil du matériel doit être activé. Si la méthode de départ comporte une méthode
de pompe seringue ou une méthode de pompe LC, le profil du matériel doit contenir
33 di 76
respectivement une pompe seringue ou une pompe LC. Consulter La création de
profils de matériels et de projets dans le Guide de démarrage.
2. Perfuser en T l'échantillon dans le courant du LC. Se reporter à Perfusion- en T de
l'échantillon dans le courant du LC a pagina 71.
3. Sur la barre de navigation, sous Tune and Calibrate, double cliquer sur Compound
Optimization.
Figure 3-9
Boîte de dialogue du réglage de l'instrument des séries 6500
34 di 76
4. Sur la page Instruments Settings dans le groupe Inlet, cliquer sur T-Infusion.
Figure 3-10 Boîte de dialogue du réglage de l'instrument des séries 6500
5. Dans le champ Default Acq. Method, sélectionner, de la liste, une méthode
d'acquisition qui sera utilisée comme une méthode de départ.
6. S'assurer que DMS Only est sélectionné.
L'option du spectromètre de masse (MS Analysis ou MS/MS Analysis) est établi
selon le type de balayage dans la méthode d'acquisition de départ.
35 di 76
7. Cliquer sur Next (Suivant).
La boîte de dialogue DMS s'ouvre. Les valeurs par défaut Start, Stop et Step des
paramètres des SV, COV et DMO s'affichent dans la boîte de dialogue.
8. Spécifier dans la boîte de dialogue DMS Options les valeurs à utiliser pour optimiser
les paramètres des SV, COV et DMO. Les valeurs par défaut ou des gammes plus
petites peuvent être utilisées afin de réduire le temps requis pour le processus
d'optimisation. La taille de l'étape par défaut sera utilisée à moins qu'une autre taille
soit spécifiée pour les SV, COV et DMO. Les gammes permises pour les SV, COV et
DMO sont énumérées dans Tabella 3-3.
Tableau 3-3 Échelles acceptées pour les SV, COV et DMO
Nom du paramètre
Stop
Tension de séparation (SV) 0
La SV maximale permise selon les
valeurs de DT et TEM spécifiées dans
la méthode d'acquisition de départ est
affichée dans ce champ.
Tension de compensation
(COV)
-100
100
Décalage de la DMS
(DMO)
-100
100
36 di 76
Start
La COV sera incrémentée à chaque niveau de SV. Après que la COV soit
incrémentée, la DMO le sera.
Note : La plupart des composés sont optimisés entre –20 et 30 volts en
absence d'un modificateur. Certains composés peuvent être optimisés à
plus de 30 volts. En présence d'un modificateur, nous recommandons une
9. Cliquer sur Finish pour démarrer le processus d'optimisation.
Le processus d'optimisation commence. L'écran affiche activement deux fenêtres;
une fenêtre de fichier texte et une fenêtre d'acquisition. Vous aurez besoin de
minimiser l'une d'entre elles pour visualiser l'autre. L'axe des x représente le
paramètre à être optimisé, la COV en volts par exemple. L'axe des y représente
l'intensité exprimée en comptes par seconde (cps). La fenêtre du fichier texte est
mise à jour dès la génération de résultats.
À la fin du processus d'optimisation, la combinaison de paramètres qui produit la
plus grande intensité de signal est enregistrée. Si l'intensité est plus basse que la
valeur minimale (100 cps), un message d'erreur s'affichera dans la fenêtre du fichier
texte.
Quand le processus d'optimisation est complété avec succès, les paramètres
optimisés seront ajoutés dans une copie de la méthode de départ et la nouvelle
méthode sera enregistrée sous le nom : “[startmethodname]_DMS.dam”, dans le
dossier C:\Analyst Data\Projects\[Votre dossier de projet]\Acquisition Methods. Le
fichier texte est enregistré dans le dossier C:\Analyst Data\Projects\[Votre dossier de
projet]\Log.
Tous les fichiers .wiff générés lors du processus d'optimisation sont enregistrés dans
le dossier C:\Analyst Data\Projects\[Votre dossier de projet]\Data.
Pour optimiser les paramètres du composé et de la DMS avec
le type d'optimisation de la perfusion en T
Le logiciel Analyst® offre une option pour optimiser simultanément les paramètres du composé et
de la DMS en mode Compound Optimization. Lorsque cette option est utilisée, les paramètres
du composé sont optimisés en premier dans la perfusion en T en utilisant un flux semblable à
l'optimisation de la perfusion et les paramètres de la DMS sont optimisés par la suite
pareillement qu'avec l'option DMS seulement.
Pour optimiser uniquement les paramètres de la DMS avec le type d'optimisation de la perfusion
en T
Optimization.
2. Sur la page Instruments Settings dans la section Inlet, cliquer sur T-Infusion.
3. Dans le champ Default Acq. Method, sélectionner, de la liste, une méthode
d'acquisition qui sera utilisée comme une méthode de départ.
4. Cliquer sur Compound et DMS.
Les options du spectromèetre de masse sont activés
37 di 76
5. Cliquer sur MS Analysis ou MS/MS Analysis selon le type de balayage sélectionné
dans votre méthode d'acquisition par défaut.
La boîte de dialogue Ions to use in MS/MS Analysis s'ouvre.
7. Sur la boîte de dialogue Ions to use in MS/MS Analysis, inscrire les valeurs de tous
les champs. Consulter la Formation sur l'optimisation automatique.
8. Cliquer sur Criteria à côté de l'option Auto Select.
9. Sur la boîte de dialogue Product Ion Auto Selection Criteria, inscrire les valeurs de
tous les champs. Consulter la Formation sur l'optimisation automatique.
10. Cliquer sur OK pour enregistrer les modifications dans les critères de sélection,
12. Dans la boîte de dialogue Target Components, inscrire les noms des composés ainsi
que leurs masses Q1 et Q3. Consulter la Formation sur l'optimisation automatique.
La boîte de dialogue DMS s'ouvre. Les valeurs par défaut Start, Stop et Step des
paramètres des SV, COV et DMO s'affichent dans la boîte de dialogue.
38 di 76
14. Spécifier dans la boîte de dialogue DMS Options les valeurs à utiliser pour optimiser
les paramètres des SV, COV et DMO. Les valeurs par défaut ou des gammes plus
petites peuvent être utilisées afin de réduire le temps requis pour le processus
d'optimisation. La taille de l'étape par défaut sera utilisée à moins qu'une autre taille
soit spécifiée pour les SV, COV et DMO. Les gammes permises pour les SV, COV
et DMO sont énumérées dans Tabella 3-4.
Tableau 3-4 Échelles acceptées pour les SV, COV et DMO
Nom du paramètre
Start
Stop
Tension de séparation (SV) 0
La SV maximale permise selon les
valeurs de DT et TEM spécifiées dans
la méthode d'acquisition de départ est
affichée dans ce champ.
Tension de compensation
(COV)
-100
100
Décalage de la DMS
(DMO)
-100
100
La COV sera incrémentée à chaque niveau de SV. Après que la COV soit
incrémentée, la DMO le sera.
Le processus d'optimisation commence. L'écran affiche activement deux fenêtres;
une fenêtre de fichier texte et une fenêtre d'acquisition. Vous aurez besoin de
minimiser l'une d'entre elles pour visualiser l'autre fenêtre. L'axe des x représente le
paramètre à être optimisé, la COV en volts par exemple. L'axe des y représente
l'intensité exprimée en comptes par seconde (cps). La fenêtre du fichier texte est
mise à jour dès la génération de résultats.
À la fin du processus d'optimisation, la combinaison de paramètres qui produit la
plus grande intensité de signal est enregistrée. Si l'intensité est plus basse que la
valeur minimale (100 cps), un message d'erreur s'affichera dans la fenêtre du fichier
texte.
Quand le processus d'optimisation est complété avec succès, les paramètres
optimisés seront ajoutés dans une copie de la méthode de départ et la nouvelle
méthode sera enregistrée sous le nom : “[startmethodname]_DMS.dam”, dans le
dossier C:\Analyst Data\Projects\[Votre dossier de projet]\Acquisition Methods. Le
fichier texte est enregistré dans le dossier C:\Analyst Data\Projects\[Votre dossier de
projet]\Log.
Tous les fichiers .wiff générés lors du processus d'optimisation sont enregistrés dans
le dossier C:\Analyst Data\Projects\[Votre dossier de projet]\Data.
39 di 76
Optimisation de la COV par l'intermédiaire de Flow Injection
(FIA)
La COV est le seul paramètre de la DMS qui peut être optimisé en utilisant la méthode du FIA. La
méthode du FIA est aussi utilisée pour régler avec précision les paramètres qui dépendent de la
source et du composé.
Avant de débuter l'optimisation du FIA, il faut d'abord créer une méthode d'acquisition avec des
paramètres de souce, de composé et de la DMS optimisés en utilisant la méthode de la
perfusion en T décrite en Pour optimiser les paramètres du composé et de la DMS avec le type
d'optimisation de la perfusion en T a pagina 37. Aussi, l'optimisation du FIA requiert un
échantionneur automatique. Il faut donc ajouter cet appareil à la méthode d'acquisition. Cette
méthode sera utilisée comme méthode de départ pour le FIA.
Pour optimiser le paramètre de la COV avec le FIA
Optimization.
2. Sur la page Instrument Settings inscrire ce qui suit selon le type de cheminée
utilisée:
Tableau 3-5 Page Instrument Settings
Champ
Valeur
Entrée
FIA
Acquisition par défaut Méthode
Méthode d'acquisition de démarrage
Code du carrousel
Spécificité de l'échantillonneur automatique
Position du carrousel
Spécificité de l'échantillonneur automatique
Volume injecté
Volume de l'échantillon injecté en µL
Spectromètre de masse
Analyse MS/MS
4. Sur la page FIA Target Compounds, ne pas sélectionner Int. Std. case à cocher car
toute transition identifiée comme étalon interne ne sera pas optimisée.
5. Dans la section Resolution, sélectionner Unit dans les deux champs Q1 Resolution et
Q3 Resolution.
7. Sur la page FIA Source Parameters, inscrire, si requis, au moins deux valeurs pour
chaque paramètre à optimiser et sélectionner par la suite la case à cocher dans la
colonne Optimize. Consulter la Formation sur l'optimisation automatique.
9. Sur la page FIA Source Parameters, inscrire, si requis, les valeurs à utiliser pour
chaque composé pour optimiser le potentiel de dégroupement, l'énergie de collision
et le potentiel de collision à la sortie de la cellule. Consulter la Formation sur
l'optimisation automatique.
10. Sur la même page, inscrire les valeurs pour optimiser le paramètre de la COV de
chaque composé dans la colonne Values for Optimization séparées par des pointsvirgules (;). Par exemple, 2.1;2.2;2.3;.
40 di 76
11. Sélectionner la case à cocher dans la colonne Optimize pour la COV.
Les champs du nombre total d'injections et du volume total d'chantillon sont mis à
jour automatiquement. The Mass Spec. Le champ de la durée affiche la durée de la
méthode départ sélectionnée à l'étape 2.
Le logiciel Analyst® exécute les valeurs spécifiées pour les paramètres dépendants
de la source et du composé y compris la COV et sélectionne la valeur qui donne la
plus haute réponse afin d'obtenir le meilleur signal pour les composés d'intérêt.
Quand le logiciel effectue l'optimisation, il crée un rapport d'optimisation FIA. Le
rapport d'optimisation FIA indique les vaeurs optimales de COV pour la SV spécifiée
dans la méthode de départ pour chaque composé.
13. Le logiciel génère une méthode d'acquisition FIA finale optimisée sous le nom
“*_DMS.dam”. Vous pouvez ouvrir cette méthode et l'enregistrer sous un nom plus
simple.
Si l'optimisation de la COV à une autre valeur de SV est requise, il faudrait alors
modifier la méthode de départ et exécuter de nouveau l'optimisation FIA.
Optimisation de l'instrument
L'optimisation de l'instrument avec le dispositif SelexION™ installé ne doit être utilisée que pour
le dépannage ou la correction de problèmes mineurs de résolution ou d'étalonnage. Pour
l'optimisation complète de l'instrument, nous recommandons que la cellule de mobilité des ions
SelexION soit retiré de la source d'ions avant d'effectuer l'optimisation de l'instrument.
41 di 76
42 di 76
4
Création de méthodes d'acquisition avec les
paramètres de la DMS
Objectifs :
•
Créer une méthode d'acquisition avec des paramètres de DMS fixes en mode
Acquire.
•
Savoir plus sur la capacité de la technologie SelexION™ de séparer des cmposés
isobares.
•
Différencier les composés isobares dans MRM et des méthodes d'acquisition de
l'algorithme Scheduled MRM™.
•
Créer une méthode d'acquisition de l'algorithme Scheduled MRM™.avec les
•
Pour créer une méthode d'acquisition IDA pour la COV incrémentée lors mode
d'acquisition par lot
•
En savoir plus sur les calculs de consommation du modificateur.
•
La technologie SelexION™ doit être installée sur l'instrument et le module du
contrôleur doit être en marche.
Créer une méthode d'acquisition avec des
paramètres de DMS fixes en mode acquérir.
Vous pouvez utiliser cette procédure si vous avez déjà les valeurs optimisées pour tous les
paramètres de la DMS et vous voudriez créer une nouvelle méthode d'acquisition en utilisant ces
valeurs.
Pour créer une nouvelle méthode d'acquisition et ajouter les valeurs fixes des
paramètres optimisés de la DMS en mode acquérir.
1. Activer un profil de matériel. Consulter La création des profils de matériel et des
projets dans le Guide de démarrage et le Guide d'utilisation du système des séries
d'instruments 6500.
2. Sur la barre de Navigation, sous Acquire, double cliquer sur Build Acquisition
Method.
La fenêtre Acquisition Method s'ouvre.
3. Cliquer sur Mass Spec dans le volet Acquisition method.
4. Il est à noter que la case à cocher Ramp COV dans la page de l'onglet MS n'est pas
sélectionnée. Ceci est pour permettre l'utilisation de la valeur fixe de la COV et ne
pas incrémenter le paramètre de la COV.
43 di 76
Création de méthodes d'acquisition avec les paramètres de la DMS
5. Sélectionner un type de balayage et inscrire, le cas échéant, la gamme de masse,
les transitions MRM, le temps de résidence, la vitesse de balayage et les autres
informations requises Consulter la Formation sur l'optimisation manuelle.
6. Cliquer le bouton droit dans le tableau de la gamme de masse et sélectionner
Separation Voltage SV.
Une nouvelle colonne intitulée SV (volts) est ajoutée au tableau des gamme de
masse.
7. Inscrire la valeur optimisée de la SV dans la première rangée de la colonne SV
(volts).
8. Cliquer le bouton droit dans le tableau de la gamme de masse et sélectionner
Compensation Voltage COV.
Une nouvelle colonne intitulée COV (volts) est ajoutée au tableau des gamme de
masse.
9. Inscrire la valeur optimisée de la COV dans la première rangée de la colonne COV
(volts).
10. Cliquer le bouton droit dans le tableau de la gamme de masse et sélectionner DMS
Offset DMO.
Une nouvelle colonne intitulée DMO (volts) est ajoutée au tableau des gamme de
masse.
11. Inscrire la valeur optimisée de la DMO dans la première rangée de la colonne DMO
(volts).
12. Inscrire les masses et les autres informations y compris la valeurs des SV, COV et
DMO pour tous les autres composés dans le tableau des gammes de masse.
13. Cliquer sur le bouton Edit Parameters.
La boîte de dialogue Period 1 Experiment 1 parameter Table s'affiche.
14. Inscrire les valeurs optimisées des paramètres du composé dans l'onglet
Compound. Inscrire les valeurs optimisées des paramètres de la source d'ions et du
gaz dans l'onglet Source/Gas. S'assurer que la température de la DMS spécifiée ici
est la même que celle utilisée pour optimiser les paramètres des DMS. Consulter la
Formation sur l'optimisation manuelle.
15. Sélectionner l'onglet DMS et ensuite sélectionner les valeurs désirées pour les
paramètres DMS Temperature (DT), Modifier (MD) et DMS Resolution Enhancement
(DR). S'assurer que la température de la DMS spécifiée ici est la même que celle
utilisée pour optimiser les paramètres des DMS.
44 di 76
16. Cliquer sur OK.
17. Si requis, fournir les valeurs des paramètres des appareils périphériques compris
dans le profil de matériel actif.
18. Enregistrer la méthode d'acquisition.
Le temps de pause entre les gammes de masse est lié à la valeur de DMS Resolution
Enhancement (DR) mais les utilisateurs peuvent se servir de leurs valeurs préférées. Toutefois,
l'utilisation de temps de pause entre les gammes de masse inférieure à la valeur par défaut (20
ms) établie par le logiciel Analyst® peut causer la perte de signal.
Note : Si vous voulez optimiser des différentes valeurs des paramètres de la DMS,
vous pouvez le faire en ouvrant une méthode d'acquisition en mode Manual Tuning et
ensuite optimiser les paramètres de nouveau avec les nouvelles valeurs.
Séparer les composés isobares à l'aide de la
technologie SelexION™
Les composés isobares ont la même masse nominale et ne peuvent donc pas être distingués par
le spectromètre de masse. La technologie SelexION™ élimine automatiquement la diaphonie et
sépare les composés isobares.
En créant une méthode d'acquisition MRM pour plusieurs composés isobares, nous
recommandons d'alterner les masses isobares avec des gammes de masse d'autres composés
si possible et d'éviter d'avoir des masses isobares dans des transitions de MRM consécutives.
Par exemple, si vous avez deux composés isobares et deux autres non isobares dans une
45 di 76
méthode MRM, il faut donc inscrire les gammes de masse d'un composé isobare d'abord,
ensuite les gammes de masse d'un composé non isobare, ensuite celles du second composé
isobare et finallement le scond composé non isobare. Cet arrangement non consécutif de
composés isobares élimine toute diaphonie possible entre les isobares.
Si l'arrangement consécutifs des isobares ne peut pas être évité dans une certaine méthode, le
logiciel prendra des précautions pour éviter la diaphonie au dépend d'un temps de cycle
légèrement plus long.
Différencier les composés isobares dans MRM et l'algorithme
des méthodes d'acquisition Scheduled MRM™.
En enregistrant une méthode d'acquisition MRM, Q1 MI, Q3 MI ou l'algorithme d'une méthode
d'acquisition Scheduled MRM™ qui comporte deux composés isobares consécutifs ou plus avec
les mêmes masses Q1 et Q3, le logiciel Analyst® affichera un avertissement. L'avertissement
indique que si vous utilisez cette méthode pour la quantification, les chromatogrammes dans le
tableau des résultats pour les composés isobares seront identiques et correspondront à
seulement un de ces composés isobares.
Pour résoudre ce conflit, différencier les composés isobares dans la méthode d'acquisition en
ajoutant au moins 0,001 Da à la masse de Q1 ou Q3 d'un des (ou plus) composés isobares. Par
exemple, les masses Q1 de certains composés isobares consécutifs peuvent être changées de
cette façon: 700,000, 700,001, 700,002 et ainsi de suite.
Une autre méthode pour différencier les composés isobares consiste à inscrire leurs noms dans
le champ Compound ID de la méthode d'acquisition. Ceci aidera à identifier facilement les
composés isobares correctement en créant la méthode de quantification pour ces composés.
Si les analyses et la quantification des données sont effectuées avec le logiciel MultiQuant™, les
masses identiques seront quantifiées séparément selon l'identité du composé.
Utiliser les paramètres DMS dans une méthode
d'acquisition de l'algorithme Scheduled MRM™
Le logiciel Analyst® supporte l'utilisation des paramètres de la DMS avec l'algorithme Scheduled
MRM™ afin d'obtenir le meilleur signal et séparation du composé d'intérêt.
Vous pouvez utiliser cette procédure si vous avez déjà les valeurs optimisées pour tous les
paramètres de la DMS et vous voudriez créer une nouvelle méthode d'acquisition de l'algorithme
Scheduled MRM.
46 di 76
Note : Au lieu de créer une nouvelle méthode d'acquisition de l'algorithme Scheduled
MRM., vous pouvez utiliser, comme point de départ, une méthode d'acquisition
existante qui contient des paramètres de composé, de source et de DMS optimisés et le
débit de la LC. À cette méthode d'acquisition, ajouter les informations requises
concernant la planification de la MRM. Consulter Formation sur l'algorithme de laMRM
planifiée.
Utiliser les paramètres DMS dans une méthode d'acquisition de l'algorithme
Scheduled MRM™
d'instruments 6500.
Method.
4. Créer une méthode d'acquisition de l'algorithme Scheduled MRM™. Consulter
Formation sur l'algorithme de laMRM planifiée.
5. Ajouter les valeurs des SV, COV et DMO optimisées au tableau des gammes de
masse pour la transition de la MRM en utilisant les étapes suivantes:
•
Cliquer le bouton droit dans le tableau de la gamme de masse et sélectionner
Separation Voltage SV à partir du menu obtenu par le clic de droite.
Une nouvelle colonne intitulée SV (volts) est ajoutée au tableau des gamme de
masse. La valeur optimisée de la SV est aussi ajoutée.
•
Compensation Voltage COV à partir du menu obtenu par le clic de droite.
Une nouvelle colonne intitulée COV (volts) est ajoutée au tableau des gamme de
masse. La valeur optimisée de la COV est aussi ajoutée.
•
DMS Offset DMO à partir du menu obtenu par le clic de droite.
Une nouvelle colonne intitulée DMO (volts) est ajoutée au tableau des gamme de
masse. La valeur optimisée de la DMO est aussi ajoutée.
6. Répeter l'étape 5 pour toutes les transitions de la MRM dans la méthode
d'acquisition.
Compound. Inscrire les valeurs optimisées des paramètres de la source d'ions et du
gaz dans l'onglet Source/Gas. S'assurer que la température de la source spécifiée ici
9. Sélectionner les valeurs requises pour les paramètres DMS Temperature (DT),
Modifier (MD) et DMS Resolution Enhancement (DR). S'assurer que la température
47 di 76
de la DMS spécifiée ici est la même que celle utilisée pour optimiser les paramètres
des DMS.
10. Cliquer sur OK.
dans le profil de matériel actif et ensuite enregistrer la méthode d'acquisition.
Dans une méthode d'acquisition de l'algorithme Scheduled MRM, le temps de pause entre les
gammes de masse est lié à la valeur de DMS Resolution Enhancement (DR) mais les utilisateurs
peuvent se servir de leurs valeurs préférées. Toutefois, l'utilisation de temps de pause entre les
gammes de masse inférieure à la valeur par défaut (20 ms) établie par le logiciel Analyst® peut
causer la perte de signal.
Création d'une méthode d'acquisition des
données pour Ramp COV in the Batch
Acquisition Mode
Pour l'analyse d'échantillons par perfusion (métabolisme utilisant les techniques
d'échantillonnage de surface, par exemple) le dispositif SelexION™ peut être utilisé pour la
séparation des composés au lieu de la chromatographie liquide et la fonctionnalité de l'incrément
de la tension de compensation (SV) peut être utiliser pour imiter le gradient de LC.
Outre le mode de réglage manuel, le paramètre de la COV peut être aussi incrémenté lors de
l'acquisition par lot en sélectionnant la case à cocher Ramp COV dans une méthode
d'acquisition dans l'éditeur de méthode d'acquisition. Le paramètre de la COV est traité comme
un paramètre dépendant du cycle. La fonctionnalité d'incrément de la COV fonctionne pour une
méthode d'acquisition DMS à une seule période.
Cette procédure peut être utilisé lorsque vous avez déjà les valeurs optimisées ou par défaut
acceptables pour tous les paramètres de la DMS sauf la COV.
d'instruments 6500.
Method.
4. Sélectionner un type de balayage et inscrire, le cas échéant, la gamme de masse,
les transitions MRM, le temps de résidence, la vitesse de balayage et les autres
informations requises pour tous les composés. Consulter la Formation sur
l'optimisation manuelle.
5. Sélectionner la case à cocher Ramp COV sur la page de l'onglet MS et donner
ensuite les valeurs suivantes de COV dans la gamme permise de –100 à 100 volts:
•
Départ: Inscrire la tension à laquelle l'incrément débute.
48 di 76
•
Arrêt: Inscrire la tension à laquelle l'incrément arrête.
•
Étape: Établir l'ampleur de l'étape pour chaque cycle.
Compound. Consulter la Formation sur l'optimisation manuelle.
8. Inscrire les valeurs optimisées des paramètres de la source d'ions et du gaz dans
l'onglet Source/Gas. S'assurer que la température de la source (TEM) spécifiée ici
9. Sélectionner l'onglet DMS et effectuer ce qui suit:
•
Sélectionner les valeurs requises pour les paramètres DMS Temperature
(DT), Modifier (MD), and DMS Resolution Enhancement (DR) . S'assurer que
la température de la DMS spécifiée ici est la même que celle utilisée pour
optimiser les paramètres des DMS.
•
Inscrire la valeur de SV optimisée pour tous les composés dans le champ
Separation Voltage (SV).
•
Inscrire la valeur de DMO optimisée pour tous les composés dans le champ
DMS Offset (DMO), Cliquer sur OK.
49 di 76
6.53631  MMW  MDC  CUR  + 84.185214  MMW  MDC 
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------  MDD
100 – MDC
11. Enregistrer la méthode d'acquisition. Elles peuvent servir à incrémenter la COV au
cours d'une acquisition en lot et à acquérir les données.
Création et soumission de lots pour l'acquisition
de données
En utilisant les méthodes créées dans ce guide, créer et soumettre des lots pour acquérir des
données. Consulter Guide de démarrage et le Guide d'utilisation du système des séries
d'instruments 6500.
Calcul de la consommation du modificateur
Le débit de la pompe du modificateur pour les modificateurs prédéfinis dans le logiciel Analyst®
est calculé par le logiciel en utilisant la densité et la masse moléculaire du modificateur. La
densité et la masse moléculaire des modificateurs prédéfinis dans le logiciel Analyst sont
énumérés dans Tabella 4-1.
50 di 76
Tableau 4-1 Densité et masse moléculaire des modificateurs prédéfinis
Modificateur
Masse moléculaire (g/mol)
Densité(g/cm3)
2-Propanol
60,10
0,7860
Acétonitrile
41,05
0,7822
Méthanol
32,04
0,7918
Acétone
58,08
0,7925
Le logiciel Analyst utilise l'équation suivante pour calculer le débit de la pompe du modificateur
en µL/min :
Débit de la pompe du modificateur =
Où
•
MMW: Masse moléculaire du modificateur (g/mol)
•
MDC: Composition du modificateur
•
MDD: Densité du modificateur (g/mL)
•
CUR: Valeur du débit du Curtain Gas™
Exemple de calcul de la consommation du modificateur
Comme exemple, les calculs de la consommation approximative de tous les modificateurs
prédéfinis dans le logiciel Analyst dont le débit du Curtain gas est de 20 psi et à différentes
concentrations du modificateur pour un lot de 24 heures sont affichés dans Tabella 4-2.
Tableau 4-2 La consommation approximative du modificateur (en mL) à un débit de 20 psi
du Curtain Gas pour un lot de 24 heures
Modificateur\Concentration Bas (1,5%) (mL/24h)
High (3,0%) (mL/24h)
2-Propanol
360
730
Acétonitrile
250
500
Méthanol
190
390
Acétone
340
700
Pour calculer la consommation appropriée du modificateur pour un lot
1. Déterminer la durée du lot
2. Déterminer le d.bit de la pompe du modificateur à partir de la boîte de dialogue Mass
Spec Detailed Status en cliquant sur l'icône Mass Spec sur la barre d'état dans le
coin inférieur à droite de la fenêtre du logiciel Analyst en exécutant la méthode à
partir du logiciel Analyst.
3. Multiplier le débit de la pompe du modificateur (µL/min) par la durée du lot (en
minutes) pour obtenir le volume approximatif de modificateur requis pour le lot.
Note : Nous recommandons l'utilisation de bouteilles de 2L pour le modificateur pour
exécuter de grands lots à de hautes valeurs de CUR et de fortes concentrations de
modificateur.
51 di 76
52 di 76
5
L'analyse et le traitement de données
quantitatives
Objectifs :
•
Visualiser les paramètres de la DMS dans File Information en visualisant les fichiers
de données.
•
Créer une méthode de quantification et générer un tableau de résultats.
•
Quantifier des composés isobares.
•
Transmettre les données.
•
Réviser un fichier de données acquis avec un paramètre de COV incrémentée
•
Afficher un graphique de contour pour les données acquises avec le paramètre de
COV incrémentée.
•
Visualiser les paramètres de la DMS dans File Information en visualisant les fichiers
de données.
Analyse des données quantitatives
Visualiser les paramètres de la DMS dans File Information en
visualisant les fichiers de données.
Les conditions expérimentales utilisées pour cueillir les données sont enregistrées dans le fichier
des données avec les résultats. Vous pouvez voir les paramètres de la DMS qui sont utilisés
pour acquérir les échantillons dans le File Information du fichier des données.
Visualiser les paramètres de la DMS dans File Information en visualisant les
fichiers de données.
1. Sur la barre de Navigation, sous Explore, double cliquer sur Open Data File.
Une fenêtre sur la sélection de l'échantillon s'ouvre.
2. Dans le volet Data Files, sélectionner le fichier .wiff que vous voulez visualiser.
3. Dans le volet Samples, sélectionner l'échantillon que vous voulez visualiser et cliquer
sur OK.
Les données acquises de l'échantillon s'ouvrent.
4. Pour visualiser les informations sur le fichier, cliquer sur l'icône Show File Info sur la
barre d'outils.
Le volet File Information s'ouvre au dessous du graphique.
53 di 76
L'analyse et le traitement de données quantitatives
5. Étendre la période requise dans le volet de gauche du volet File Information et
ensuite cliquer sur le lien de l'expérience de la période requise.
Les valeurs départ, arrêt et étape du paramètre de la COV utilisé lors de l'acquisition
de l'échantillon sont enregistrées sous la section de la période. Les valeurs de
départ et d'arrêt de la COV pour chaque composé sonr enregistrées sous la section
de l'expérience de la période. Tous les paramètres de la DMS (sauf la COV) et les
paramètres du modificateur utilisés lors de l'acquisition de l'échantillon sont
enregistrés dans le Parameter table section for the selected period and experiment.
Consulter le module Analyse et traitement des données dans le Guide de
démarrage et le Guide d'utilisation du système des séries d'instruments 6500.
Création de méthodes de quantification et la génération de
tableaux de résultats
Vous pouvez créer des méthodes de quantification et générer des tableaux de résultats en
utilisant les informations disponibles dans le module Analyse quantitative dans le Guide de
démarrage. Vous pouvez consulter Guide d'utilisation du système des séries d'instruments 6500
et le Guide d'utilisation avancée.
Quantifier des composés isobares.
En créant une méthode de quantification pour les composés isobares, il est plus facile de les
identifier si le nom du composé est inscrit dans le champ Compound ID de la méthode
d'acquisition. C'est à cause que le nom de chaque composé isobare (ou tout composé présent
dans la méthode d'acquisition) est automatiquement inscrit à côté de ses masses Q1 et Q3 dans
le tableau Analyte en construisant la méthode de quantification.
Si le nom du composé n'a pas été fourni dans la méthode de quantification des composés
isobares, il faut identifier les identifier correctement et inscrir manuellement leurs noms à côté de
ses masses Q1 et Q3 lors de la création de la méthode de quantification. Pour plus
d'informations, consulter la section Différencier les composés isobares dans MRM et l'algorithme
des méthodes d'acquisition Scheduled MRM™. a pagina 46.
Pour la création de méthodes de quantification et la génération de tableaux de résultats pour
eux, utiliser les informations disponibles dans Analyse quantitative dans le Guide de démarrage.
Transmettre les données.
Vous pouvez créer des rapports à partir du Results Table en utilisant le logiciel Reporter.
Consulter le Guide d'utilisation de Reporter disponible à Start > All Programs > AB SCIEX >
Reporter > Reporter Help.
Si le logiciel MultiQuant™ est utilisé pour quantifier les données, sa fonctionnalité qui utilise le
logiciel Reporter peut être utilisé pour générer des rapports,
54 di 76
Analyse des données quantitatives
Réviser un fichier de données acquis avec un paramètre de
COV incrémentée
Pour réviser un fichier de données acquises avec le paramètre de la COV incrémentée et un
type de balayage MRM, utiliser la procédure suivante:
Pour visualiser des données acquises avec le paramètre de la COV incrémentée et
un type de balayage MRM
1. S'assurer d'être dans le dossier du projet où les données ont été acquises.
3. À partir de la liste Data Files, sélectionner le fichier .wiff qui contient les données IDA
acquises que vous voulez visualiser.
4. Si requis dans la liste Samples, cliquer sur l'échantillon voulu et ensuite cliquer sur
OK.
Le XIC des données sélectionnées s'ouvre. L'axe des X affiche la COV en volts et
l'axe des Y affiche l'intensité en cps. Le XIC de chaque composé est affiché dans
une couleur différente.
5. Sélectionner la gamme de COV désirée dans le XIC, cliquer sur le bouton droit et
sélectionner Show Spectrum.
55 di 76
Avec l'intensité sur l'axe des Y et les masses Q1 et Q3 en Da sur l'axe des X pour la
gamme de COV sélectionnée, le spectre apparait sous le XIC. Il affiche l'intensité de
tous les composés qui apparaissent dans la cellule de mobilité des ions SelexION™
dans la gamme sélectionnée de COV. La gamme sélectionnée de COV apparait
dans le titre du spectre ouvert.
Afficher un graphique de contour pour les données acquises
avec le paramètre de COV incrémentée.
Le logiciel Analyst® peut afficher un graphique de contour pour les données qui sont acquises en
utilisant la méthode d'acquisition avec le paramètre de COV incrémentée et un type de balayage
complet. Les graphiques de contour permettent la visualisation de la séparation des composés.
Pour de plus amples informations concernant les graphiques de contour, consulter Graphiques
de contour dans le chapitre Analyse et traitement des données du Guide de démarrage et
Analyse qualitative des données dans Guide d'utilisation avancée.
Pour afficher un graphique de contour pour les données acquises avec le
paramètre de COV incrémentée.
2. Dans la boîte de dialogue Select Sample, dans la case Data Files, sélectionner les
données (fichier .wiff) pour lesquelles vous voulez afficher le graphique de contour.
3. Dans le volet Samples, sélectionner l'échantillon pour lequel vous voulez afficher le
graphique de contour et cliquer sur OK.
56 di 76
Le TIC des échantillons sélectionnés s'ouvre. L'axe des X affiche la COV en volts et
l'axe des Y affiche l'intensité en cps.
4. Mettre en surbrillance la gamme dontvous voulez visualiser le graphique de contour.
Si aucune sélection n'est faite, visualiser la gamme complète.
5. Cliquer le bouton de droite sur le TIC et sélectionner Show Contour Plot.
Le graphique de contour de l'échantillon sélectionné apparait sous la fenêtre du TIC.
L'axe des X affiche la COV en volts et l'axe des Y affiche le m/z en Da.
6. Pour visualiser le spectre, sélectionner la région désirée sur le graphique de contour,
cliquer sur le bouton droit et sélectionner Show Spectrum.
57 di 76
Le spectre de la gamme de COV sélectionnée apparait sous la fenêtre du graphique
de contour. Elle affiche l'intensité (axe des Y) de toutes les valeurs de m/z (axe des
X) dans la gamme de COV sélectionnée. La gamme sélectionnée de COV apparait
dans le titre du spectre ouvert.
Visualiser les paramètres de la DMS incrémentée dans File
Information en visualisant les fichiers de données.
Les conditions expérimentales utilisées pour cueillir les données sont enregistrées dans le fichier
des données avec les résultats. Vous pouvez voir les paramètres de la DMS qui sont utilisés
pour acquérir les échantillons dans le File Information des fichiers des données.
Visualiser les paramètres de la DMS incrémentée dans File Information en
visualisant les fichiers de données.
2. Dans le volet Data Files, sélectionner le fichier .wiff que vous voulez visualiser.
3. Dans le volet Samples, sélectionner l'échantillon que vous voulez visualiser et cliquer
sur OK.
Le XIC des échantillons sélectionnés s'ouvre.
4. Pour visualiser les informations sur le fichier, cliquer sur l'icône Show File Info sur la
barre d'outils.
Le volet d'informations sur le fichier s'ouvre au dessous du TIC.
5. Cliquer sur Period 1 da ns le volet de gauche du volet File Information.
Les valeurs de départ, d'arrêt et d'étape utilisées pour le paramèetre de laCOV
incrémentée sont affichées ainsi que d'autres informations dans le volet de droite du
volet File Information.
58 di 76
Vous pouvez sélectionner la période et l'expérience désirées du volet de gauche
pour voir les divers programmes expérimentaux utilisés dans la méthode
d'acquisition que vous vous êtes servi pour cueillir vos données. Tous les
paramètres de la DMS utilisés lors de l'acquisition de l'échantillon sont enregistrés
au même endroit aussi.
59 di 76
60 di 76
6
Utilisation des paramètres de la DMS dans
IDA
Objectifs :
•
Créer une méthode d'acquisition dépendante de l'information (IDA) pour incrémenter
la tension de compensation (au cours du mode d'acquisition par lot.
•
Visualiser les données IDA acquises avec la COV incrémentée dans l'explorateur
IDA .
•
La technologie SelexION™ doit être installée sur l'instrument et le module du
contrôleur doit être en marche.
Création d'une méthode d'acquisition des
données pour Ramp COV During Batch
Acquisition (incrémenter la COV lors de
l'acquisition par lot)
Au lieu d'utiliser la chromatographie liquide LC pour analyser les échantillons, le dispositif
SelexION™ peut être utilisé avec la perfusion pour séparer les composés d'intérêt et filtrer le
bruit chimique ou l'interférence. Dans le cas du dispositif SelexION, la fonctionnalité d'incrément
de la COV du logiciel Analyst® peut être utilisée pour imiter le gradiant de la LC.
Outre le mode dManual Tuning, le paramètre de la COV peut être aussi incrémenté lors de
l'acquisition par lot en sélectionnant la case à cocher Ramp COV dans une méthode
d'acquisition dans Acquisition Method Editor. Le paramètre de la COV est traité comme un
paramètre dépendant du cycle. La fonctionnalité d'incrément de la COV fonctionne pour une
méthode d'acquisition DMS à une seule période.
Les méthodes IDA, Dynamic Fill Time (DFT) et l'algorithme Scheduled MRM™ sans paramètre
incrémenté rouleront pour la durée requise par la méthode mais les méthodes IDA et DFT avec
la COV incrémentée rouleront le nombre de cycles requis selon les valeurs départ, arrêt et étape
de la COV incrémentée. Le fonctionnement de la méthode se terminera lorsque la dernière étape
de la COV est atteinte et non selon la durée de la méthode. La valeur de la COV est
dynamiquement calculée et établie pour chaque cycle.
Les valeurs des OV, SV, DT et DMO des transitions MRM dans le balayage d'exploration (ou tout
autre balayage d'exploration supporté par l'IDA) sont automatiquement propagées vers les
balayages dépendants dans une méthode IDA. Le même principe s'applique à la méthode
algorithme IDA Scheduled MRM et le pré-balayage DFT et une méthode IDA amorcée par la
MRM avec des balayages DFT.
Le modificateur utilisé dans le balayage d'exploration d'une méthode MRM IDA est propagé
aussi vers les balayages dépendants.
61 di 76
Utilisation des paramètres de la DMS dans IDA
Cette procédure peut être utilisé lorsque vous avez déjà les valeurs optimisées pour tous les
paramètres de la DMS sauf la COV.
d'instruments 6500.
2. Créer une méthode IDA avec un balayage MRM comme balayage d'exploration.
Consulter la Formation sur l'IDA.
3. Dans l'éditeur de la méthode d'acquisition, dans la méthode IDA ouverte créée à
l'étape précédente, cliquer sur MRM dans le volet méthode d'acquisition.
4. Sélectionner la case à cocher Ramp COV sur la page de l'onglet MS et donner
ensuite les valeurs suivantes de COV dans la gamme permise de –100 à 100 volts:
•
Départ: Inscrire la tension à laquelle l'incrément débute.
•
Arrêt: Inscrire la tension à laquelle l'incrément arrête.
•
Étape: Établir l'ampleur de l'étape pour chaque cycle.
62 di 76
La boîte de dialogue Period 1 Experiment 1 parameter Tables'affiche.
Compound. Consulter la Formation sur l'optimisation manuelle.
7. Inscrire les valeurs optimisées des paramètres de la source d'ions et du gaz dans
l'onglet Source/Gas. S'assurer que la température de la source (TEM) spécifiée ici
8. Sélectionner l'onglet DMS et effectuer ce qui suit:
•
Sélectionner les valeurs requises pour les paramètres DMS Temperature
(DT), Modifier (MD), and DMS Resolution Enhancement (DR) . S'assurer que
la température de la DMS spécifiée ici est la même que celle utilisée pour
optimiser les paramètres des DMS.
•
Inscrire la valeur de SV optimisée pour tous les composés dans le champ
Separation Voltage (SV).
•
Inscrire la valeur de DMO optimisée pour tous les composés dans le champ
DMS Offset (DMO),
63 di 76
9. Cliquer sur OK.
11. Enregistrer la méthode d'acquisition. Elles peuvent servir à incrémenter la COV au
cours d'une acquisition en lot et à acquérir les données.
Note : Si le balayage dépendant est un balayage LIT, il est alors à conseiller
d'augmenter le temps de réglage de 20 ms dans le balayage d'exploration afin d'éviter
que des ions résiduelles apparaissent dans le balayage d'exploration dans certains cas.
Création et soumission de lots pour l'acquisition
de données
En utilisant la méthode d'acquisition IDA créée dans ce chapitre, créer et soumettre des lots pour
acquérir des données. Consulter Formation sur l'IDA, Guide de démarrage, Guide d'utilisation du
système d'instruments des séries 6500 et Guide d'utilisation avancée.
Visualiser les données IDA
Si les donn.es sont acquis en utilisant une méthode IDA, les données n'ouvriront pas dans le
visualiseur d'IDA jusqu'à la fin de l'acquisition mais apparaitront dans la fenêtre Explore au cours
de l'acquisition.
64 di 76
Pour rendre la visualisation des données IDA plus facile, l'IDA Explorer peut être régler comme
votre visualiseur préréglé. L'onglet du IDA Explorer peut être utilisé dans la boîte de dialogue
Appearance Options pour sélectionner l'IDA Explorer qui sera utilisé lors de l'affichage des
données d'acquisition. Vous pouvez aussi sélectionner les colonnes pour le volet de visualisation
de liste Mass-List. L'IDA Explorer est préréglé pour afficher les échantillons IDA.
Pour de plus amples informations, consulter Visualiser les données IDA dans la Formation sur
l'IDA.
Visualiser les données IDA acquises avec la COV incrémentée dans l'explorateur
IDA .
1. S'assurer d'être dans le dossier du projet où les données IDA ont été acquis.
La boîte de dialogue Select Sample s'affiche.
3. À partir de la liste Data Files, sélectionner le fichier .wiff qui contient les données IDA
acquises que vous voulez visualiser.
4. dans la liste Samples, cliquer sur l'échantillon voulu et ensuite cliquer sur OK.
L'IDA Explorer apparait. La partie de gauche du volet présente la liste des masses
envoyé au balayage dépendant en arborescence ou en forme de liste. Vous pouvez
permuter entre les vues en sélectionnant Tree View ou List View à la partie inférieure
du volet Mass List.
La partie de droite du volet affiche graphiquement les données IDA acquises. À
noter qu'au lieu du temps, la gamme de COV incrémentée est affiché sur l'axe des X
dans les graphiques TIC et XIC.
5. Utiliser les deux boutons au dessus du graphique pour permuter entre l'affichage du
graphique simple et le graphique multiple. Pour visualiser le graphique actif, cliquer
sur Show only active graph. Pour retourner à la vue de multi-graphiques, cliquer sur
Show all the graphs. Pour visualsier tous les graphiques dans Explorer, cliquer sur
Export all the graphs to Explorer.
65 di 76
3
2
1
Figure 6-1
Article
Boutons sur IDA Explorer
Nom du bouton
1
Afficher tous les graphiques
2
Afficher le graphique actif seulement
3
Exporter tous les graphiques vers Explorer
66 di 76
A
Informations supplémentaires
Descriptions des paramètres de la DMS
Tableau A-1 Paramètres de la DMS, descriptions et réglages possibles
Nom du paramètre
Description
Valeurs possibles
Température de la
DMS (DT)
• Low (150 °C; par
Elle est la temp.rature appliquée sur
défaut)
l'élément chauffant en céramique installé en
arrière de la plaque rideau échangeur de
• Medium (225 °C)
chaleur.
• High (300 °C)
Pour chaque changement de valeur de la
DT, attendre au moins 10 à 15 minutes afin
que le système atteint l'équilibre avant
d'optimiser les paramètres de la DMS.
Lorsque la nouvelle température est
atteinte, “DMS Temperature reached”
s'affiche au dessus du champ DT.
Modificateur (MD)
Composition du
modificateur (MDC)
Densité du
modificateur (g/mL)
(MDD)
Il est un composé chimique ajouté au débit
du Curtain Gas™ pour améliorer la
séparation d'ions. Si la valeur de la MD est
réglée à aucun, les paramètres des MDC,
MDD et MDW ne sont pas disponibles. Si la
valeur de la MD est réglée à une autre
valeur qu'aucun, le paramètre de la MDC
devient disponible. Si une valeur
personnalisée est attribuée à la MD , les
paramètres des MDC, MDD et MDW
deviennent disponibles.
• None (par défaut)
Le paramètre de la MDC contrôle la
concentration du modificateur. Le logiciel
Analyst® utilisera la densité et la masse
moléculaire du modificateur sélectionné et
la valeur de débit du Curtain Gas pour
calculer le débit de la pompe du
modificateur et l'appliquer
automatiquement.
• Off (0)
• 2-Propanol
• Acétonitrile
• Méthanol
• Acétone
• Personnalisé
• Low (par défaut; 1,5%
ou plus)
• High (3,0)
Elle est la densité du modificateur
Spécifier la densité en g/
personnalisé. Le logiciel Analyst utilise cette mL de votre modificateur.
densité ainsi que la masse moléculaire et la
valeur du débit du Curtain Gas pour
déterminer le débit de la pompe du
modificateur personnalisé.
67 di 76
Tableau A-1 Paramètres de la DMS, descriptions et réglages possibles (Suite)
Nom du paramètre
Description
Valeurs possibles
Modificateur MW
(MDW)
Elle est la masse moléculaire en g/mol d'un Spécifier la masse
modificateur personnalisé. Le logiciel
moléculaire (g/mol) de
Analyst utilise la valeur de ce paramètre
votre modificateur.
ainsi que la densité et la valeur du débit du
Curtain Gas pour déterminer le débit de la
pompe du modificateur.
Tension de séparation Elle est l'amplitude d'un pic à l'autre pic des • 0,0 (par défaut)
(SV)
ondes de la tension de séparation.
• Échelle acceptable: De
0 à la valeur maximale
de la SV selon les
paramètres des DT et
TEM de chaque
méthode
• Spécifier la tension de
séparation.
Tension de
compensation (COV)
Décalage de la DMS
(DMO)
Elle est le potentiel de décalage en CD
entre les deux électrodes du dispositif de
mobilité. Par exemple, si la COV est de 5
volts, cela signifie qu'une des deux
électrodes a un potentiel appliqué 5 volts
plus élevé que l'autre.
• Échelle acceptable: 100 à 100
• Spécifier la tension de
compensation qui sera
appliquée.
Elle est la tension appliquée aux deux
• -3,0 volts en polarité
électrodes de la cellule de mobilité des ions
positive, 3,0 volts en
SelexION™ relativement au potentiel de
polarité négative (par
l'orifice. Par exemple, si le potentiel de
défaut)
décalage de la DMS est de 5 volts et le
• Gamme d'accès -100 à
potentiel de l'orifice est de 100 volts, le
100
potentiel des deux électrodes devant
l'entrée de l'orifice est donc de 105 volts. Le • Spécifier la valeur de la
DMO.
décalage de la DMS est une manière de
régler la transmission à partir de la cellule
de mobilité des ions SelexION vers le
spectromètre de masse.
68 di 76
• 0,0 (par défaut)
Tableau A-1 Paramètres de la DMS, descriptions et réglages possibles (Suite)
Nom du paramètre
Description
Valeurs possibles
Amélioration de la
résolution de la DMS
(DR)
Ce paramètre contrôle le débit du gaz
d'azote qui peut être activé entre la sortie du
dispositif SelexION et l'entrée de l'orifice
vers le spectromètre de masse. Pour les
séries des instruments 6500, lorsque la
valeur de la DR est réglée sur Off, Low,
Medium ou High,, le débit de gaz est activé
afin d'améliorer la résolution du dispositif
SelexION.
Pour les séries
d'instruments 6500
Pour les séries des instruments 5500, la
valeur Off, Low, Medium ou High,de la DR
active le débit de gaz qui améliore la
résolution du dispositif SelexION.
• Open (0; par défaut)
• Off (10)
• Low (22)
• Medium (34)
• High (43)
Pour les séries
d'instruments 5500
• Stop (0; par défaut))
DR est aussi connue sous soupape de gaz. • Low (10)
• Medium (25)
• High (40)
DR peut être réglé au
mode Operator dans
Parameter Settings
Editor et la gamme
permise est de 0 à 100.
Mode State of DMS Parameters in the DMS Off
Tableau A-2 Mode State of DMS Parameters in the DMS Off
Paramètres de la DMS
Mode State in DMS Off
Température de la DMS (DT)
Visible sur UI (interface utilisateur); valeur = bas (par
défaut)
Modificateur (MD)
Caché; valeur = aucun
Tension de séparation (SV)
Caché; valeur = 0
Tension de compensation (COV)
Caché; valeur = 0
Décalage de la DMS (DMO)
Cachée; valeur = -3,0 volts en polarité positive, 3,0 volts
en polarité négative (par défaut)
Amélioration de la résolution de la
DMS (DR)
Cachée; valeur = Ouverte (pour les instruments des
séries 6500); valeur = arrêt (pour les instruments des
séries 5500).
69 di 76
Valeurs des paramètres de DMS et de la source
utilisées lors de la purge du modificateur
Tableau A-3 Paramètres de DMS et de la source utilisées lors de la purge du modificateur
Nom du paramètre
Réglage de la valeur pendant la purge du
modificateur
Débit de la pompe du modificateur
1000 (µL/min)
Température (TEM)
300
Température de la DMS (DT)
225
Amélioration de la résolution de la
DMS (DR)
0
0
0
Décalage de la DMS (DMO)
3
Source d'ions gaz 1 (GS1)
50
Ion Source Gas 1 (Source d'ions Gaz
1) (GS1)
50
Débit de Curtain Gas (CUR)
20
IonSpray Voltage (Tension IonSpray
(EST))
0
Gaz de collision (CAD)
Défaut du système
Valeurs des paramètres de la DMS et de la source
après la fin ou l'abandon de la purge du
modificateur.
Tableau A-4 Réglage des paramètres de la DMS et de la source après la fin ou l'abandon
de la purge du modificateur
Nom du paramètre
Valeur après la purge du modificateur est terminée ou
abandonnée
Température de la DMS (DT) 150
Température (TEM)
0
Débit de la pompe du
modificateur
0
GS1
20
GS2
0
CUR
30
70 di 76
Tableau A-4 Réglage des paramètres de la DMS et de la source après la fin ou l'abandon
de la purge du modificateur (Suite)
Nom du paramètre
Valeur après la purge du modificateur est terminée ou
abandonnée
CAD
6 (pour les systèmes AB SCIEX Triple Quad™ 5500 etAB
SCIEX Triple Quad 6500); 9 (moyen) pour les systèmes
QTRAP® 5500 et QTRAP 6500
Perfusion- en T de l'échantillon dans le courant
du LC
AVERTISSEMENT!Risque de toxicité chimique : S'assurer que l'écrou de la
tubulure de l'échantillon est serré adéquatement avant de faire fonctionner cet
équipement. Si l'écrou du tube d'échantillon n'est pas serré, l'échantillon peut fuir
et vous risquez d'être exposé à des produits chimiques dangereux.
1. Remplacer le raccord de mise à terre à deux voies par le raccord de mise à terre à
trois voies (PN 018786: Raccord 0,15 mm, calibre; PN 018787: Raccord en T) sur la
source d'ions.
2. Connecter le tube PEEK rouge de la pompe seringue au raccord de la mise à terre
de la source d'ions.
3. Connecter le raccord de mise à terre de la source d'ions à la pompe de la LC.
4. Connecter la tubulure de l'échantillon au raccord de la mise à terre à l'aide du tube
PEEK rouge de 30 cm. Consulter le thème Connecter les tubes et les câbles dans
Guide d'utilisation de la source d'ions Turbo V™ .
Conseil!La perfusion en T (perfusion séparé) peut être aussi effectuée en utilisant un T
externe pour connecter les trois lignes. Les courants de LC et de la seringue se
connectent au T qui, à son tour est connecté au raccord de mise à terre à deux voies.
AVERTISSEMENT!Risque de choc électrique : Ne pas contourner la connexion de
la mise à la terre Le raccord de mise à terre fournit une mise à terre entre le
spectromètre de masse et le dispositif d'introduction de l'échantillon.
Remplir la bouteille du modificateur
Attention :Ne pas remplir la bouteille du modificateur lorsqu'elle est sur le plateau
secondaire.
1. Déconnecter la ligne de liquide de la bouteille du modificateur dans le plateau
secondaire.
2. Remplir la la bouteille de modificateur dans un endroit sécuritaire en prnant les
mesures de sécurité appropriées.
71 di 76
AVERTISSEMENT!Risque de toxicité chimique : Prendre des
précautions lors du remplissage des bouteilles de modificateurs qui
présentent des caractéristiques caustiques ou sont toxiques.
3. Remettre la bouteille du modificateur dans le plateau secondaire et reconnecter la
ligne de liquide.
72 di 76
B
Dépannage
Problème #1
Un message d'erreur s'affiche indiquant la détection de décharges dans la cellule de mobilité des
ions SelexION™ lors de l'acquisition oe de l'équilibrage de l'échantillon.
Solution
Baisser la SV de 100 volts et ré-optimiser les paramètres de la DMS.
Lorsque une décharge est détecté dans la cellule de mobilité des ions SelexION lors de
l'acquisition de l'échantillon, le logiciel Analyst® abandonne l'acquisition de l'échantillon et
enregistre l'erreur dans le journal de bord. Si vous double cliquez l'échantillon abandonné dans
la file, un message d'erreur s'affiche.
Pour éviter la répétition de décharges dans la cellule de mobilité des ions SelexION dans la
même méthode, utiliser des valeurs de tension de séparation (SV) ou de température de DMS
(DT) plus basses dans la méthode d'acquisition. Les paramèetres de la DMS doivent être réoptimisés pour la nouvelle valeur de SV ou DT.
Si vous remarquez des décharges avec des combinaisons de SV et DT qui fonctionnaient dans
le passé, nettoyer et aligner les électrodes de la cellule de mobilité des ions SelexION. Se
reporter à Nettoyer et aligner les électrodes de la cellule de mobilité des ions a pagina 16.
Lorsque le défaut est corrigé, l'instrument demeure en mode d'attente.
Problème #2
Lorsque FIA Compound Optimization est en cours en utilisant le système LC de Shimadzu, le
processus d'optimisation apparait être bloquée.
Solution
La durée pour les méthodes de Shimadzu est de 90 minutes. En réglant avec la durée du
balayage du spectromètre de masse plus courte que la durée du programme de temps(comme
pour la méthode de réglage par défaut), vous ne pourriez pas arrêter l'exécution du réglage à
travers le logiciel Analyst® après que le spectromètre de masse ait terminé le balayage. Appuyer
sur Run sur le contrôleur pour arrêter l'exécution ou changer le temps d'exécution par défaut du
Shimadzu pour correspondre à la durée du MS dans l'éditeur de méthode Shimadzu.
Problème #3
Lorsque le module du contrôleur SelexION est allumé ou éteint, l'icône Mass Spectrometer du
logiciel Analyst devient et demeure rouge.
Solution
Avant de mettre le module du contrôleur SelexION en marche ou à l'arrêt (afin d'ajouter ou de
retirer temporairement la technologie SelexION du système), désactiver d'abord le profil actif du
73 di 76
Dépannage
matériel dans le logiciel Analyst. À défaut de s'y conformer, le spectomètre peut devenir instable
provoquant ainsi la perte de contrôle dans le logiciel Analyst. Si le profil du matériel n'est pas
désactivé et que le spectromètre de masse devienne instable, le contrôle peut être retrouvé en
retirant et replaçant la source d'ions ou par le cyclage du courant du spectromètre de masse et
du module du contrôleur et la réactivation du profil du matériel.
74 di 76
Indice
A
Analyse
données quantitatives 53, 55
C
Calcul de la consommation du modificateur 50
Composants de l'interface de dépression 9, 10
G
Graphique de contour 56
I
Incrément de la COV
mode d'acquisition par lot 48
incrémenter la COV
IDA 61
L
Perfusion en T 33
P
Paramètres de la DMS
Amélioration de la résolution de la DMS
(DR) 23, 69
Composition du modificateur (MDC) 26, 67
Décalage de la DMS (DMO) 23, 68
Densité du modificateur (MDD) 27, 67
Modificateur (MD) 22, 67
Modificateur MW (MDW) 27, 68
Température de la DMS 21, 67
Tension de compensation (COV) 22, 68
Tension de séparation (SV) 22, 68
perfuser en double 20
perfuser en T 20
Perfusion en T
DMS seulement 33
Paramètres du composé et de la DMS 37
l'optimisation des paramètres de la DMS en
mode réglage manuel. 19
La technologie DMS 5
avantages 6
Les composés isobares
différencier 46
R
M
S
Mode de fonctionnement avec la DMS Off 7
modificateur
abandonner la purge 31
purge 28
Séparer les composés isobares 45
O
Optimisation de l'instrument 41
Optimisation des paramètres de la DMS
utilisation de l'optimisation du composé. 32
Optimisation du composé 32
FIA 40
Guide d'utilisation de la technologie
SelexION™
réglage de l'instrument 7
Réglage manuel
optimisation avec un modificateur 24
optimisation sans un modificateur 20
T
Technologie DMS
rôle des modificateurs 6
augmentation. Voir tension de séparation
(SV) 22
échelonnement Voir la tension de compensation (COV) 22
Le logiciel Analyst® 1.6 avec composantes
Indice
76 di 76

Le logiciel Analyst® 1.6 avec composantes pour instruments

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