Cryochimiothérapie dans le cancer pulmonaire humain

Congrès de Pneumologie
Dalat – Vietnam
Novembre 2010
Cryochimiothérapie dans le
cancer pulmonaire humain
Etude sur modèle animal
Réalisée à Montréal, Canada
V. Forest, R. Hadjeres, R.Bertrand et R. Jean-François
Cryothérapie avant
chimiothérapie
• Homasson, 1988
Merci à Jean-Michel Vergnon
Apoptose
1) Définir les meilleurs paramètres d’une association de cryo et
chimiothérapie dans le cancer pulmonaire in vivo.
 comparer:
- différentes séquences,
- différents intervalles de temps entre les 2 traitements.
2) Caractériser les voies de signalisation moléculaire activées par
ces traitements.
 Particulièrement l’implication des membres principaux de la
famille Bcl-2 , une famille de régulateurs majeurs de l’apoptose.
Matériel et Méthodes
• Modèle expérimental:
– Lignée cellulaire A549
Tumeurs
– Souris SCID
– Innoculation bilatérale

Traitements:
Cryothérapie:
Protoxyde d’azote (Erbe), cryosonde de 3 mm de diamètre, 3 cycles de
gel et dégel, -30 to -40°C dans la tumeur.
Chimiothérapie:
Injection IV de Navelbine (Vinorelbine ditartrate), 4.8 mg/kg.
Cryosonde
Effet Joule – Thomson

Groupes expérimentaux:

Aucun traitement (groupe contrôle)


Cryothérapie seule
Chimiothérapie seule

Cryochimiothérapie (simultanée)

Cryo/24/Chimiothérapie
Chimio/24/Cryothérapie



Cryo/48/Chimiothérapie
Chimio/48/Cryothérapie

Croissance tumorale:
- Dimensions mesurées quotidiennement.
- Volume tumoral déterminé par:
VT = Longueur x Largeur x Hauteur
- Volume Tumoral Relatif défini par:
VT au jour x
VTR =
VT au jour 0 (avant le traitement)
Analyse moléculaire:
A des temps déterminés après les traitements, les tumeurs sont
prélevées et divisées
Congélation
Coloration HES
Broyat
IHC de
la caspase-3
NECROSE
Extraction RNA
QRT-PCR
APOPTOSE
Expression des membres pro and antiapoptotiques de la famille Bcl-2 : puma, noxa,
bim, bax, mcl-1, bcl-2 and bcl-xL
Croissance tumorale:
5
Volume Tumoral Relatif
Untreated
4,5
4
Chemotherapy
3,5
Cryochemotherapy
3
2,5
*
2
*
1,5
*
*
1
0,5
*
*
*
*
*
2
3
6
7
Cryosurgery
*
Chemo/24/Cryo
*
*
*
*
*
*
**
*
** Chemo/48/Cryo
* Cryo/48/Chemo
13
Temps après traitement
(jours) * p<0.05
14
0
1
*
10
Cryo/24/Chemo
 Induction de mort cellulaire par NECROSE:
60
Région nécrotique relative(%)
Cryo
Chemo
Cryochemo
50
Cryo/24/Chemo
Chemo/24/Cryo
40
Cryo/48/Chemo
*
Chemo/48/Cryo
30
*
20
**
*
10
*
*
0
Untreated
2h
8h
24h
48h
4d
7d
Temps après traitement
14d
21d
* p<0.05
 Induction de mort cellulaire par APOPTOSE:
caspase-3
Cryo
100000
Chemo
Cryochemo
90000
80000
Cryo/24/Chemo
70000
Chemo/24/Cryo
60000
Cryo/48/Chemo
50000
Chemo/48/Cryo
40000
30000
20000
*
**
10000
0
Untreated
2h
8h
24h
48h
4d
7d
Temps après traitement
14d
21d
* p<0.05
 Expression des membres PRO-APOPTOTIQUES:
30
30
25
25
20
20
15
15
10
10
5
5
0
0
2h
8h
24h
48h
4d
7d
14d
21d
7
7
6
6
5
5
4
4
3
3
2
2
1
1
0
2h
8h
24h
48h
4d
7d
14d
21d
2h
8h
24h
48h
4d
7d
14d
21d
0
2h
8h
24h
48h
4d
7d
14d
Time after treatment
21d
Time after treatment
Cryo
Cryochemo
Chemo/24/Cryo
Chemo
Cryo/24/Chemo
Cryo/48/Chemo
Chemo/48/Cryo
 Expression des membres ANTI-APOPTOTIQUES:
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
2h
8h
24h
48h
4d
7d
14d
2h
21d
Temps après traitement
8h
24h
48h
4d
7d
14d
Temps après traitement
Cryo
Chemo
Cryochemo
Cryo/24/Chemo
Chemo/24/Cryo
Cryo/48/Chemo
Chemo/48/Cryo
21d

Réduction maximale du volume tumoral
et induction maximale de mort cellulaire
Lorsque les traitements sont
combinés et séquentiels
Pas d’avantages à effectuer la cryo et la chimiothérapie simultanément

L’ ordre des traitements est ici sans importance

Idéal dans notre modèle: chimio/48/cryo ou cryo/48/chimio.

Continuer l’étude des méchanismes moléculaires de l’apoptose induite par
les différents protocoles.
 Investiguer la voie des récepteurs de mort.
 Investiguer l’implication d’une sénescence prématurée.
Développer d’autres modèles animaux plus gros permettant des
observations plus prolongées
Utiliser d’autres lignées cellulaires tumorales
Explorer l’association cryo-chimio avec d’autres agents de
chimiothérapie
Merci de votre attention