HemosIL - Instrumentation Laboratory

HemosIL®
Heparin - 0020009400
ENGLISH - Insert revision 02/2013
Intended use
Reagent storage and stability
Limitations/interfering substances
Automated chromogenic assay for the quantitative determination of unfractionated heparin (UFH) and low
molecular weight heparin (LMWH) activity in human citrated plasma on the IL Coagulation Systems.
Unopened reagents are stable until the expiration date shown on the vial when stored at 2-8°C.
Chromogenic substrate - Stability after reconstitution: 7 days at 15°C, 3 months at 2-8°C in the original vial or
48 hours at 15°C on the ACL Futura/ACL Advance Systems and ACL TOP® Family.
Factor Xa reagent - Stability after reconstitution: 7 days at 15°C, 3 months at 2-8°C in the original vial or 48
hours at 15°C on the ACL Futura/ACL Advance Systems and ACL TOP Family.
Antithrombin - Stability after reconstitution: 3 months at 2-8°C in the original vial.
Buffer - Opened reagent is stable 3 months at 2-8°C.
Working buffer - Stability after preparation: 7 days at 15°C and 2-8°C in a closed container or 48 hours at 15°C
on the ACL Futura/ACL Advance Systems and ACL TOP Family.
For optimal stability remove reagents from the system and store them at 2-8°C in the original vial.
Heparin results on the ACL and ACL Futura/ACL Advance Systems are not affected by hemoglobin up to 200
mg/dL, bilirubin up to 20 mg/dL and triglycerides up to 700 mg/dL.
Heparin results on the ACL TOP Family are not affected by hemoglobin up to 375 mg/dL, bilirubin up to 25
mg/dL and triglycerides up to 1630 mg/dL.
Summary and principle
Heparin is the most frequently used antithrombotic drug. The biological activity of this sulphated
glycosaminoglycan resides in its ability to accelerate (up to 2000-fold) the inhibitory effect of antithrombin on
coagulation proteases. In recent years, it has been shown that LMWH, besides being as useful therapeutically
as UFH, also has a longer half-life.
The Heparin kit is an assay based on a synthetic chromogenic substrate and on Factor Xa inactivation. Heparin
levels in patient plasma are measured automatically on IL Coagulation Systems in two stages.
1. Heparin is analyzed as a complex with antithrombin present in the sample. The concentration of this
complex is dependent on the availability of antithrombin. In order to obtain a more constant concentration of
antithrombin, purified human antithrombin is added to the test plasma.1 Factor Xa is added in excess and is
neutralized by heparin-antithrombin complex.
2. Residual Factor Xa is quantified with a synthetic chromogenic substrate. The paranitroaniline released is
monitored kinetically at 405 nm and is inversely proportional to the heparin level in the sample.2
Since different kinds of UF- and LMW- Heparins have their own specific anti-Factor Xa activity, the same kind of
heparin as is used in the patient sample should also be used for calibrating the standard curve.3,4
Composition
The Heparin kit consists of:
S Chromogenic substrate (Cat. No. 00020009410): 1 x 4 mL vial of the lyophilized chromogenic substrate
S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCl (3 mg/vial) and bulking agent.
E Factor Xa reagent (Cat. No. 00020009420): 1 x 5 mL vial of a lyophilized preparation containing purified
bovine Factor Xa (68 nkat/vial), Tris-buffer, EDTA, sodium chloride and bovine serum albumin.
A Antithrombin (Cat. No. 00020009430): 1 x 3 mL vial of a lyophilized preparation containing human
antithrombin (3 IU/vial), Tris-buffer, EDTA, sodium chloride and bovine serum albumin.
B Buffer (Cat. No. 00020009440): 1 x 8 mL vial of a concentrated solution containing Tris-buffer, pH 8.4,
EDTA, sodium chloride and detergent.
PRECAUTIONS AND WARNINGS:
The material in this product was tested with FDA cleared methods and found nonreactive for Hepatitis B surface
Antigen (HBsAg), Anti-HCV and HIV antibodies. Handle as if potentially infectious.5
Hazard class: None
Risk phrases: None
Safety phrases: None
All animal products should be treated as potentially infectious.
This product is For in vitro Diagnostic Use.
Preparation
Chromogenic substrate: Dissolve the vial contents with 4 mL of CLSI Type CLR water or equivalent.6 Replace
the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of the product. Keep the substrate at 1525°C for 30 minutes and invert to mix before use.
Factor Xa reagent: Dissolve the vial contents with 5 mL of CLSI Type CLR water or equivalent.6 Replace the
stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of product. Keep the reagent at 15-25°C for
30 minutes and invert to mix before use.
Antithrombin: Dissolve the vial contents with 3 mL of CLSI Type CLR water or equivalent.6 Replace the stopper
and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of product. Keep the reagent at 15-25°C for 30
minutes and invert to mix before use.
Buffer: Dilute the necessary quantity of concentrated buffer 1:10 (1+9) with CLSI Type CLR water or
equivalent.6 Mix before use.
Working buffer: To 24 mL of diluted buffer add 1 mL of reconstituted antithrombin reagent.
Note: An instant opalescence will occur in the lyophilized reagents but it will fade away within 2 minutes.
Instrument/test procedures
Refer to the appropriate IL instrument’s Operator’s Manual and/or Application Manual for the complete assay
procedure instructions.
Note: A cleaning cycle is recommended after running the Heparin assay on the ACL Classic (100-7000)
Systems.
Specimen collection and preparation
Nine parts of freshly drawn venous blood are collected into one part trisodium citrate. Refer to CLSI Document
H21-A5 for further instructions on specimen collection, handling and storage.7
Standardization
For preparation of the 0.8 U/mL standard use the same heparin as used for patient therapy.
Please Note: When preparing the 0.8 U/mL standard depending on the instrument being used either calibration
plasma or Normal Pooled Plasma (NPP) should be used.
ACL TOP Family: Normal Pooled Plasma (NPP) should be used in preparation of the 0.8 U/mL standard.
ACL Futura/ACL Advance: As indicated in the Operator’s manual, calibration plasma should be used in
preparation of the 0.8 U/mL standard.
ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: As indicated in the Operator’s manual, calibration plasma should be used in
preparation of the 0.8 U/mL standard.
ACL Classic (100-7000): As indicated in the Operator’s manual, Normal Pooled Plasma (NPP) should be used
in preparation of the 0.8 U/mL standard.
Additional reagent and control plasmas
The following are not supplied with the kit and must be purchased separately.
Americas and Pacific Rim
Europe
Cat. No.
Cat No.
Calibration plasma
0020003700
0020003700
Cleaning solution
0009831700
0009831700
Cleaning agent
0009832700
0009832700
Quality control
Two levels of controls are recommended for a complete quality control program.8 Each laboratory should
establish its own mean and standard deviation and should establish a quality control program to monitor
laboratory testing. Controls should be analyzed at least once every 8 hour shift in accordance with good
laboratory practice. Refer to the instrument’s Operator’s Manual for additional information. Refer to Westgard et
al for identification and resolution for out-of-control situations.9
Expected values
To obtain an optimal effect with minimum risk of bleeding or thromboembolic complications the heparin activity
should be in the range recommended by the heparin manufacturer.10
Performance characteristics
Precision:
Within run and total (run to run and day to day) precision was assessed over multiple runs using two levels of
sample of both UFH Heparin and LMWH Heparin.
ACL® Family
Mean (U/mL)
CV % (Within run)
CV % (Total)
UFH
0.77
1.84
2.18
UFH
0.23
7.76
8.23
LMWH
0.79
2.68
3.09
LMWH
0.23
7.99
9.69
ACL Futura/ACL Advance
Mean (U/mL)
CV % (Within run)
CV % (Total)
UFH
0.79
3.0
6.6
UFH
0.52
5.7
7.3
UFH
0.26
9.1
10.0
LMWH
0.76
4.1
4.5
LMWH
0.42
6.2
7.9
LMWH
0.22
10.7
11.9
ACL TOP Family
Mean (U/mL)
CV % (Within run)
CV % (Total)
UFH
0.82
1.8
6.4
UFH
0.53
3.4
4.3
UFH
0.25
4.6
8.5
LMWH
0.86
2.4
4.4
LMWH
0.49
6.1
8.2
LMWH
0.25
5.7
11.3
Correlation:
System
slope
intercept
r
Reference method
ACL Family
0.968
0.014
0.988
IL Heparin (Xa)
ACL Futura/ACL Advance 0.944
0.035
0.989
IL Heparin (Xa)
ACL TOP Family
1.012
-0.005
0.992
HemosIL Heparin (Xa)
on ACL Advance
The precision and correlation results were obtained using specific lots of reagent and controls.
Linearity:
System
ACL Family and ACL Futura/ACL Advance
ACL TOP Family
0 - 1.0 U/mL
0 - 1.1 U/mL
Results
Heparin results are reported in U/mL. Refer to the instrument’s Operator’s Manual for additional information.
Heparin - 0020009400
DEUTSCH - Packungsbeilage Version 02/2013
Verwendung
Lagerung und Haltbarkeit
Ergebnisse
Automatisierter chromogener Test zur quantitativen Bestimmung der Aktivität von unfraktionierten oder
niedermolekularen Heparinen in menschlichem Plasma auf IL-Analysensystemen.
Die ungeöffneten Reagenzien sind bei Lagerung zwischen 2-8°C bis zu dem auf dem Etikett angegebenen
Verfallsdatum haltbar.
Chromogenic substrate - Haltbarkeit nach Rekonstitution:
- bei 15°C in der Originalflasche: 7 Tage
- bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate
- bei 15°C in ACL Futura/ACL Advance und Systemen der ACL TOP® Familie: 48 Stunden
Factor Xa reagent - Haltbarkeit nach Rekonstitution:
- bei 15°C in der Originalflasche: 7 Tage
- bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate
- bei 15°C in ACL Futura/ACL Advance und Systemen der ACL TOP® Familie: 48 Stunden
Antithrombin - Haltbarkeit nach Rekonstitution:
- bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate
Buffer - geöffnetes Reagenz:
- bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate
Working buffer (Arbeitslösung) - Haltbarkeit nach Herstellung:
- bei 15°C im geschlossenen Behälter: 7 Tage
- bei 2-8°C im geschlossenen Behälter: 7 Tage
- bei 15°C in ACL Futura/ACL Advance und Systemen der ACL TOP® Familie: 48 Stunden
Für eine optimale Haltbarkeit sollten die Reagenzien nach dem Gebrauch aus dem Gerät entnommen und im
Kühlschrank bei 2-8°C in der Originalflasche aufbewahrt werden.
Heparin Ergebnisse werden in U/mL dargestellt. Zusätzliche Informationen sind dem Bedienerhandbuch zu
entnehmen.
Testprinzip und Zusammenfassung
Heparin ist der am häufigsten eingesetzte antithrombotische Wirkstoff. Die biologische Aktivität der
sulfatierten Glykosaminoglykane beruht auf ihrer Fähigkeit den inhibitorischen Effekt des Antithrombin auf die
Gerinnungsproteasen um das bis zu 2000-fache zu beschleunigen. In den letzten Jahren wurde gezeigt, dass
niedermolekulare Heparine ebenso wie unfraktionierte Heparine zur Therapie eingesetzt werden können und
zudem eine längere Halbwertszeit besitzen.
Der Heparin Testkit basiert auf einem synthetischen chromogenen Substrat über die Inaktivierung von Faktor
Xa. Der Heparin-Spiegel des Patientenplasmas wird mit IL Gerinnungssystemen automatisch gemessen:
1. Heparin bildet mit dem in der Probe vorhanden Antithrombin einen Komplex. Die Konzentration dieses
Komplexes ist von der Verfügbarkeit des Antithrombin abhängig. Um eine möglichst konstante Konzentration
an Antithrombin zu erhalten, wird gereinigtes menschliches Antithrombin der Probe zugeführt.1 Faktor Xa
wird im Überschuss zugegeben und durch den Heparin-Antithrombin-Komplex neutralisiert.
2. Die Restaktivität von Faktor Xa wird mit einem synthetischen chromogenen Substrat gemessen. Das
freigesetzte Paranitroanilin wird kinetisch bei einer Wellenlänge von 405 nm erfasst und ist umgekehrt
proportional zum Heparin Spiegel der Probe.2
Da verschiedene Arten von unfraktionierten und niedermolekularen Heparinen unterschiedliche spezifische
Anti-Faktor Xa-Aktivitäten aufweisen, sollte bei der Kalibration der Standardkurve immer dasselbe Heparin wie
in der Patientenprobe eingesetzt werden.3,4
Inhalt
Die Heparin Packung enthält:
S Chromogenic substrate (Art. Nr. 00020009410): 1 Flasche x 4 mL lyophilisiertes chromogenes Substrat
[S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCl (3 mg/Flasche)].
E Factor Xa reagent (Art. Nr. 00020009420): 1 Flasche x 5 mL eines lyophilisierten Präparates, das Faktor
Xa bovinen Ursprungs (68 nkat/Flasche), Tris-Puffer, EDTA, Natriumchlorid und bovines Serum-Albumin
enthält.
A Antithrombin (Art. Nr. 00020009430): 1 Flasche x 3 mL eines lyophilisierten Präparates, das HumanAntithrombin (3 IU/Flasche), Tris-Puffer, EDTA, Natriumchlorid und bovines Serum-Albumin enthält.
B Buffer (Art. Nr. 00020009440): 1 Flasche x 8 mL einer konzentrierten Lösung, die Tris-Puffer, pH 8,4,
EDTA, Natriumchlorid und Detergenz enthält.
WARNUNG:
Das verwendete Material wurde mit FDA anerkannten Testmethoden auf HIV 1/2-Antikörper, Hepatitis-BAntigen und HCV-Antigen geprüft. Bitte beachten Sie die Bestimmungen zum Umgang mit potentiell infektiösen
Materialien.5
Gefahrenklasse: keine
Risikoeinstufung: keine
Sicherheitseinstufung: keine
Alle Tierprodukte sollten als potentiell infektiös behandelt werden.
Dieses Produkt ist nur für die in vitro Diagnostik geeignet.
Herstellung
Chromogenic substrate: Zum Inhalt einer Flasche wird 4 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B.
Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gelöst.6 Nach vollständiger Rekonstitution wird das
Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt.
Factor Xa reagent: Zum Inhalt einer Flasche wird 5 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua
bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gelöst.6 Nach vollständiger Rekonstitution wird das Reagenz
30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt.
Antithrombin: Zum Inhalt einer Flasche wird 3 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua
bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gelöst.6 Nach vollständiger Rekonstitution wird das Reagenz
30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt.
Buffer: Die benötigte Menge des konzentrierten Diluents 1:10 (1+9) mit CLSI Wasser (CLRW) oder
vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) verdünnen.6 Vor dem Gebrauch mischen.
Working buffer (Arbeitslösung): Zu 24 mL verdünntem Puffer wird 1 mL des rekonstituierten Antithrombin
Reagenzes zugegeben.
Hinweis: Auftretende Trübungen verschwinden innerhalb kurzer Zeit.
Bestimmungsansatz
Die ausführliche Beschreibung des Bestimmungsansatzes ist dem Geräte-Bedienerhandbuch und/oder dem
Applikationshandbuch zu entnehmen.
Hinweis: Es wird empfohlen im Anschluss an den Heparin Test einen Reinigungszyklus am ACL Classic (ACL
100-7000) durchzuführen.
Probenmaterial und -gewinnung
9 Teile frisches venöses Blut und 1 Teil Trinatriumcitratlösung werden sorgfältig in einem silikonisierten
Glasröhrchen gemischt. Hinweise zur Aufbereitung des Blutes sind den Empfehlungen des Deutschen Instituts
für Normung - DIN 58 905 - oder dem CLSI Document H21-A5 zu entnehmen.7
Standardisierung
Zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards sollte dasselbe Heparin wie in der Patientenprobe eingesetzt werden.
Hinweis: Zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards wird in Abhängigkeit vom verwendeten Gerät entweder
Kalibrationsplasma oder Normalpoolplasma (NPP) eingesetzt.
ACL TOP Familie: Normalpoolplasma (NPP) sollte zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden.
ACL Futura/ACL Advance: Wie dem Bedienerhandbuch zu entnehmen ist, sollte Kalibrationsplasma zur
Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden.
ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: Wie dem Bedienerhandbuch zu entnehmen ist, sollte Kalibrationsplasma
zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden.
ACL Classic (ACL 100-7000): Wie dem Bedienerhandbuch zu entnehmen ist, sollte Normalpoolplasma (NPP)
zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden.
Zusätzliche Reagenzien und Kontrollplasmen
Die folgenden Reagenzien sind nicht in der Packung enthalten und müssen zusätzlich bestellt werden:
Amerikan. und Pazifischer Raum
Europa
Art. Nr.
Art. Nr.
Kalibrationsplasma
0020003700
0020003700
Reinigungslösung
0009831700
0009831700
Reinigungslösung
0009832700
0009832700
Qualitätskontrolle
Es ist gängige Laborpraxis, die Qualität der Analyse mit Kontrollmaterialien im normalen sowie im
pathologischen Bereich zu überprüfen.8 Es wird empfohlen, als Kontrollmaterial die oben angegebenen
Kontrollen zu verwenden. Die Bereiche sind der jeweiligen Packungsbeilage zu entnehmen. Jedes Labor sollte
seinen eigenen Kontrollbereich ermitteln. Spätestens nach jeweils 8 Stunden sollte eine Qualitätskontrolle
durchgeführt werden. Algorithmen zur Beurteilung der Qualitätskontrollergebnisse siehe z.B Westgard et al.9
Siehe auch “Richtlinien der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung quantitativer
laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen” in der jeweils gültigen Fassung.
Heparin - 0020009400
Einschränkungen
Heparin Ergebnisse auf ACL- und ACL Futura/ACL Advance-Analysensystemen werden durch Konzentrationen
an Hämoglobin bis zu 200 mg/dL, Bilirubin bis zu 20 mg/dL und Triglyceriden bis zu 700 mg/dL nicht beeinflusst.
Heparin Ergebnisse auf Systemen der ACL TOP® Familie werden durch Konzentrationen an Hämoglobin bis zu
375 mg/dL, Bilirubin bis zu 25 mg/dL und Triglyceriden bis zu 1630 mg/dL nicht beeinflusst.
Referenzbereiche
Um einen optimalen Effekt bei einem minimierten Risiko bezüglich Blutungen oder thrombotischen
Komplikationen zu erzielen, sollte die Heparin-Aktivität in dem vom Heparin-Hersteller empfohlenen Bereich
liegen.10
Testcharakteristik
Präzision Die Präzision im Lauf und von Tag zu Tag wurde in mehreren Läufen unter Verwendung von je
zwei unterschiedlichen Konzentrationen mit unfraktioniertem (UFH) und niedermolekularem Heparin (LMWH)
ermittelt.
ACL Familie
Mittelwert (U/mL)
VK % (im Lauf)
VK % (Tag zu Tag)
unfrakt. Heparin
0,77
1,84
2,18
unfrakt. Heparin
0,23
7,76
8,23
niedermolek. Heparin
0,79
2,68
3,09
niedermolek. Heparin
0,23
7,99
9,69
ACL Futura/
ACL Advance
Mittelwert (U/mL)
VK % (im Lauf)
VK % (Tag zu Tag)
unfrakt. Heparin
0,79
3,0
6,6
unfrakt. Heparin
0,52
5,7
7,3
unfrakt. Heparin
0,26
9,1
10,0
niedermolek. Heparin
0,76
4,1
4,5
niedermolek. Heparin
0,42
6,2
7,9
niedermolek. Heparin
0,22
10,7
11,9
ACL TOP Familie
Mittelwert (U/mL)
VK % (im Lauf)
VK % (Tag zu Tag)
unfrakt. Heparin
0,82
1,8
6,4
unfrakt. Heparin
0,53
3,4
4,3
unfrakt. Heparin
0,25
4,6
8,5
niedermolek. Heparin
0,86
2,4
4,4
niedermolek. Heparin
0,49
6,1
8,2
niedermolek. Heparin
0,25
5,7
11,3
Korrelation:
System
Steigung
Ordinatenabschnitt
r
Referenzmethode
ACL Familie
0,968
0,014
0,988
IL Heparin (Xa)
ACL Futura/
0,944
0,035
0,989
IL Heparin (Xa)
ACL Advance
ACL TOP Familie
1,012
-0,005
0,992
HemosIL Heparin (Xa) am ACL Advance
Die Präzisions- und Korrelationsergebnisse sind mit spezifischen Reagenzien- und Kontrollchargen ermittelt
worden.
Linearität:
System
ACL Familie und ACL Futura/ACL Advance
ACL TOP Familie
0 - 1,0 U/mL
0 - 1,1 U/mL
ESPAÑOL - Revisión folleto 02/2013
Aplicación
Conservación y estabilidad de los reactivos
Limitaciones/Interferencias
Test Cromogénico automatizado para la determinación cuantitativa de la actividad de Heparina no Fraccionada
(UFH) y de Heparina de Bajo Peso Molecular (LMWH) en plasma humano citratado para los Sistemas de
Coagulación IL.
Los reactivos que no hayan sido abiertos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el vial si se
mantienen a 2-8°C.
Chromogenic substrate - Estabilidad después de la reconstitución: 7 días a 15°C, 3 meses a 2-8°C en el vial
original ó 48 horas a 15°C en los sistemas ACL Futura/ACL Advance y Familia ACL TOP®.
Factor Xa reagent - Estabilidad después de la reconstitución: 7 días a 15°C, 3 meses a 2-8°C en el vial original
ó 48 horas a 15°C en los sistemas ACL Futura/ACL Advance y Familia ACL TOP.
Antithrombin - Estabilidad después de la reconstitución: 3 meses a 2-8°C en el vial original.
Buffer - El reactivo abierto es estable 3 meses a 2-8°C.
Working buffer (Diluyente funcional) - Estabilidad después de su preparación: 7 días a 15°C y 2-8°C en un
vial cerrado ó 48 horas a 15°C en los sistemas ACL Futura/ACL Advance y Familia ACL TOP.
Para obtener una estabilidad óptima del reactivo reconstituido, sugerimos que acabado el trabajo, conserve el
reactivo en su vial original almacenado en nevera entre 2 y 8°C.
Concentraciones de Hemoglobina hasta 200 mg/dL, Bilirrubina hasta 20 mg/dL y Triglicéridos hasta 700 mg/dL
no alteran los resultados de la Heparina en los ACL Futura/ACL Advance.
Concentraciones de Hemoglobina hasta 375 mg/dL, Bilirrubina hasta 25 mg/dL y Triglicéridos hasta 1630
mg/dL no alteran los resultados de la Heparina en la Familia ACL TOP.
Principio
La Heparina es el fármaco antitrombótico usado más frecuentemente. La actividad biológica de este
glicosaminoglicano reside en su habilidad para acelerar (hasta 2000 veces) el efecto inhibidor de la
antitrombina sobre las proteasas de la coagulación. En los últimos años se ha demostrado que la LMWH,
además de ser tan útil terapéuticamente como la UFH, tiene una vida media más larga.
El kit Heparina es una técnica basada en un substrato cromogénico sintético y la inactivación del FXa. El nivel
de la Heparina en el plasma de los pacientes es medido automáticamente en los sistemas de coagulación IL
en dos etapas:
1. La Heparina es analizada como un complejo con la antitrombina presente en la muestra. La concentración
de este complejo es dependiente de la disponibilidad de antitrombina. Para obtener una concentración más
constante de antitrombina, se añade antitrombina humana purificada al plasma del test.1 El Factor Xa se
añade en exceso y es neutralizado por el complejo antitrombina-heparina.
2. El Factor Xa residual es cuantificado con un sustrato cromogénico sintético. La Paranitroanilina liberada es
medida cinéticamente a 405 nm siendo su nivel inversamente proporcional a la actividad de la Heparina
de la muestra.2
Dado que las diferentes clases de Heparina (tanto UFH como LMWH) tienen su propia actividad específica
anti-factor Xa, la misma clase de heparina usada en el tratamiento del paciente debe usarse en la calibración
de la curva estándar.3,4
Composición
El kit Heparin consta de:
S Chromogenic substrate (N° Cat. 00020009410): 1 x 4 mL vial de substrato cromogénico liofilizado
S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCL (3 mg/vial) y estabilizantes.
E Factor Xa reagent (N° Cat. 00020009420): 1 x 5 mL vial de una preparación liofilizada que contiene
Factor bovino Xa (68 nkat/vial), tampón Tris, EDTA, cloruro sódico y Albúmina de suero bovino.
A Antithrombin (N° Cat. 00020009430): 1 x 3 mL vial de una preparación liofilizada que contiene
Antitrombina humana (3 IU/vial), tampón Tris, EDTA, cloruro sódico y Albúmina de suero bovino.
B Buffer (N° Cat. 00020009440): 1 x 8 mL vial de solución concentrada que contiene tampón Tris, pH 8,4,
EDTA, cloruro sódico y detergente.
PRECAUCIÓN:
El material usado en este producto ha sido verificado por los métodos aprobados por la FDA y encontrado
no reactivo al Antígeno de Superficie de la Hepatitis B (HBsAg), Anti-HCV y anticuerpos HIV. Manejar con
precaución como si fuese potencialmente infeccioso.5
Indicaciones de Peligro: Ninguna
Frases de Riesgo: Ninguna
Frases de Seguridad: Ninguna
Todos los productos derivados de animales deberán manejarse como potencialmente infecciosos.
Este reactivo es para diagnóstico in vitro.
Preparación
Chromogenic substrate: Disolver el contenido de cada vial con 4 mL de agua tipo CLR de CLSI.6 Cerrar el
vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre
15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso.
Factor Xa reagent: Disolver el contenido de cada vial con 5 mL de agua tipo CLR de CLSI.6 Cerrar el vial y
homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y
25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso.
Antithrombin: Disolver el contenido de cada vial con 3 mL de agua tipo CLR de CLSI.6 Cerrar el vial y
homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y
25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso.
Buffer: Diluir la cantidad necesaria de Tampón concentrado 1:10 (1+9) con agua tipo CLR de CLSI.6 Mezclar
antes de su uso.
Working buffer (Diluyente funcional): A 24 mL de Tampón diluido, añadir 1 mL de reactivo reconstituido de
Antitrombina.
Nota: Una opalescencia instantánea ocurrirá temporalmente al reconstituir los reactivos liofilizado, pero
desaparecerá en un par de minutos.
Método de Ensayo
Seguir las instrucciones de la técnica de acuerdo al Manual del Operador de los instrumentos IL o bien al
Manual de Aplicaciones.
Nota: Se recomienda un ciclo de lavado después de cada sesión de ensayos de Heparina en los modelos ACL
Clásicos (100-7000).
Recolección y Preparación de las muestras
Recoger nueve partes de sangre recién extraída por punción venosa y una parte de anticoagulante citrato
trisódico. Para la recolección, manejo y conservación del plasma seguir las recomendaciones del documento
H21-A5 de la CLSI.7
Estandarización
Para la preparación del estándar de 0.8 U/ml utilice la misma heparina que la empleada para la terapia del
paciente.
Atención: para preparar el estándar de 0.8 U/mL deberá utilizarse plasma calibrador o un Pool de Plasma
Normal (NPP), dependiendo del analizador que se vaya a emplear.
Familia ACL TOP: preparar el estándar de 0.8 U/ mL utilizando Pool de Plasma Normal (NPP).
ACL Futura/ACL Advance: tal y como indica el Manual del Operador, para preparar el estándar de 0.8 U/ mL
deberá utilizarse plasma calibrador.
ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: tal y como indica el Manual del Operador, para preparar el estándar de 0.8
U/ mL debería utilizarse plasma calibrador.
ACL Clásico (100-7000): tal y como indica el Manual del Operador, para preparar el estándar de 0.8 U/ mL
debería utilizarse Pool de Plasma Normal (NPP).
Reactivos adicionales y plasmas de control
Los siguientes reactivos no se suministran con el kit y deberán pedirse por separado.
Américas y Pacific Rim
Europa
N° Cat.
N° Cat.
Plasma de Calibración
0020003700
0020003700
Agente de Limpieza
0009831700
0009831700
Agente de Limpieza
0009832700
0009832700
Control de Calidad
Para realizar un programa completo de control de calidad, se recomienda el uso de dos niveles de control.8
Tanto el Control Heparina Bajo*, como el Control Heparina Alto* están diseñados específicamente para este
programa. Cada laboratorio debe establecer su propia media y desviación estándar, asimismo establecer un
programa de Control de Calidad para monitorizar los resultados de su laboratorio. Los controles deben ser
usados como mínimo una vez dentro del turno de 8 horas, de acuerdo a la normativa de Buenas Prácticas
en el Laboratorio. Referirse al Manual del Operador para información adicional. Consultar la publicación de
Westgard y col. para una identificación y resolución de situaciones anormales del Control de Calidad.9
Valores esperados
Para obtener un efecto óptimo con un mínimo riesgo de sangrado o de complicaciones tromboembólicas, la
actividad de la heparina debe estar en el rango de actividad recomendado por el fabricante del fármaco.10
Características técnicas
Precisión:
Se evaluó la precisión intraserie y total (serie a serie y dia a dia) a partir de múltiples series utilizando dos
niveles de muestras tanto para la Heparina UFH como para la Heparina LMWH.
Familia ACL
Media (U/mL)
CV % (Intraserie)
CV % (Total)
UFH
0,77
1,84
2,18
UFH
0,23
7,76
8,23
LMWH
0,79
2,68
3,09
LMWH
0,23
7,99
9,69
ACL Futura/ACL Advance
Media (U/mL)
CV % (Intraserie)
CV % (Total)
UFH
0,79
3,0
6,6
UFH
0,52
5,7
7,3
UFH
0,26
9,1
10,0
LMWH
0,76
4,1
4,5
LMWH
0,42
6,2
7,9
LMWH
0,22
10,7
11,9
Familia ACL TOP
Media (U/mL)
CV % (Intraserie)
CV % (Total)
UFH
0,82
1,8
6,4
UFH
0,53
3,4
4,3
UFH
0,25
4,6
8,5
LMWH
0,86
2,4
4,4
LMWH
0,49
6,1
8,2
LMWH
0,25
5,7
11,3
Correlación:
Sistema
Pendiente
Intersección
r
Método de Comparación
Familia ACL
0,968
0,014
0,988
IL Heparina (Xa)
ACL Futura/
0,944
0,035
0,989
IL Heparina (Xa)
ACL Advance
Familia ACL TOP
1,012
-0,005
0,992
HemosIL Heparina (Xa) en ACL Advance
Estos resultados de precisión y correlación se obtuvieron utilizando lotes específicos de reactivos y controles.
Linealidad:
Sistema
Familia ACL y ACL Futura/ACL Advance
Familia ACL TOP
0 - 1,0 U/mL
0 - 1,1 U/mL
Resultados
Los resultados de la Heparina se informan en U/mL. Referirse al Manual del Operador para información
adicional.
Symbols used / Verwendete Symbole / Símbolos utilizados / Symboles utilisés / Simboli impiegati / Símbolos utilizados
In vitro diagnostic medical device
In-vitro Diagnostikum
De uso diagnóstico in vitro
Dispositif mèdical de diagnostic in vitro
Per uso diagnostico in vitro
Dispositivo médico para utilização em diagnóstico in vitro
Batch code
Chargen-Bezeichnung
Identificación número de lote
Désignation du lot
Numero del lotto
Número de lote
Use by
Verwendbar bis
Caducidad
Utilisable jusqu’à
Da utilizzare prima del
Data límite de utilização
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
Temperature limitation
Festgelegte Temperatur
Temperatura de Almacenamiento
Températures limites de conservation
Limiti di temperatura
Límite de temperatura
Consult instructions for use
Beilage beachten
Consultar la metódica
Lire le mode d’emploi
Vedere istruzioni per l’uso
Consultar as instruções de utilização
Control
Kontrollen
Control
Contrôle
Controllo
Controlo
Biological risks
Biologisches Risiko
Riesgo biológico
Risque biologique
Rischio biologico
Risco biológico
Manufacturer
Hergestellt von
Fabricado por
Fabricant
Prodotto da
Fabricado por
Authorised representative
Bevollmächtigter
Representante autorizado
Mandataire
Rappresentanza autorizzata
Representante autorizado
301825 R10 02/2013
HemosIL®
Heparin - 0020009400
FRANÇAIS - Révision de la notice 02/2013
Utilisation
Dosage chromogène automatisé pour la détermination quantitative de l’Héparine non Fractionnée (HNF) ou de
l’Héparine de Bas Poids Moléculaire (HBPM) dans les plasmas citratés sur les analyseurs de coagulation IL.
Principe
L’héparine est le médicament antithrombotique le plus fréquemment utilisé. L’activité biologique de ce
glycosaminoglycane sulfate réside en sa capacité à accélérer (jusqu’à 2000 fois) l’effet inhibiteur de
l’antithrombine sur les protéases de la coagulation. Ces dernières années, il a été montré que les HBPM, en
plus d’être aussi utile en thérapeutique que les HNF, ont aussi une 1/2 vie plus longue.
Le réactif Héparine est un dosage basé sur l’inactivation de FXa et l’utilisation d’un substrat chromogène
synthétique.
Le taux d’héparine dans le plasma du patient est mesuré automatiquement sur les analyseurs de coagulation
IL en 2 étapes:
1. L’héparine est analysée sous forme d’un complexe avec l’antithrombine présent dans l’échantillon. La
concentration de ce complexe est dépendant de la disponibilité de l’antithrombine. Afin d’obtenir une
concentration constante, de l’antithrombine humaine purifiée est ajoutée en excès au plasma à tester.1 Le
facteur Xa est additionné en excès et est neutralisé par le complexe héparine-antithrombine.
2. L’activité FXa résiduelle est quantifiée avec un substrat chromogène synthétique. La paranitroaniline libérée
est mesurée cinétiquement à 405 nm et est inversement proportionnelle à la quantité d’héparine dans le
spécimen à tester.2
Les différentes sortes d’héparine NF et BPM ont leur propre activité anti-facteur Xa. Aussi, il est conseillé que la
même héparine que celle utilisée chez le patient, soit utilisée pour générer la courbe d’étalonnage.3,4
Composition
Le coffret Heparin (Héparine) contient:
S Chromogenic substrate (Réf. 00020009410): 1 flacon de 4 ml de substrat chromogène lyophilisé
S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCl (3 mg/flacon).
E Factor Xa reagent (Réf. 00020009420): 1 flacon de 5 ml d’une préparation lyophilisée contenant du
Facteur Xa bovin purifié (68 nkat/flacon), du tampon Tris-EDTA, du chlorure de sodium et de la sérum
albumine bovine.
A Antithrombin (Réf. 00020009430): 1 flacon de 3 ml d’une préparation lyophilisée contenant de
l’antithrombine humaine (3 IU/flacon), du tampon Tris-EDTA, du chlorure de sodium et de la sérum
albumine bovine.
B Buffer (Réf. 00020009440): 1 flacon de 8 ml d’une solution concentrée contenant du tampon Tris-EDTA
pH 8,4, du chlorure de sodium et un détergent.
PRECAUTIONS:
Ces réactifs contiennent des produits d’origine humaine. Ils ont été trouvés négatifs pour les anticorps anti VIH
1/2, anti VHC et l’antigène de surface de l’hépatite B (AgHBs), en utilisant des trousses de dépistage de 3ème
génération. Cependant, aucune technique ne permettant d’assurer l’absence totale du virus HIV ou de l’hépatite
B ou de tout autre agent infectieux, ces réactifs sont à manipuler avec les précautions d’usage.5
Classification risque: Aucune
Phrases risque: Aucune
Phrases sécurité: Aucune
Toutes les substances d’origine animale doivent étre considérées comme potentiellement infectieuses.
Ce produit est à usage diagnostique in vitro.
Préparation
Chromogenic substrate: Dissoudre le contenu de chaque flacon avec 4 ml d’eau de type CLR selon les
normes CLSI ou équivalent.6 Replacer le capuchon et agiter doucement. Assurez-vous de la complète
reconstitution du produit. Conserver le réactif à 15-25°C pendant 30 minutes et mélanger avant utilisation.
Factor Xa reagent: Dissoudre le contenu de chaque flacon avec 5 ml d’eau de type CLR selon les normes
CLSI ou équivalent.6 Replacer le capuchon et agiter doucement. Assurez-vous de la complète reconstitution du
produit. Conserver le réactif à 15-25°C pendant 30 minutes et mélanger avant utilisation.
Antithrombin: Dissoudre le contenu de chaque flacon avec 3 ml d’eau de type CLR selon les normes CLSI ou
équivalent.6 Replacer le capuchon et agiter doucement. Assurez-vous de la complète reconstitution du produit.
Conserver le réactif à 15-25°C pendant 30 minutes et mélanger avant utilisation.
Buffer: Diluer la quantité nécessaire de diluant concentré 1:10 (1+9) avec de type CLR selon les normes CLSI
ou équivalent.6 Mélanger avant utilisation.
Working buffer (Diluant de Travail): A 24 ml de tampon dilué ajouter 1 ml de réactif Antithrombine reconstitué.
Note: Une opalescence instantanée peut apparaître dans les réactifs lyophilisés mais elle doit s’affaiblir dans
les 2 minutes.
Conservation et stabilité du réactif
Conservés à 2-8°C, les réactifs sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur les flacons.
Chromogenic substrate - Stabilité après reconstitution: 7 jours à 15°C, 3 mois à
2-8°C dans le flacon d’origine, ou 48 heures à 15°C sur les analyseurs ACL Futura, ACL Advance et de la
famille ACL TOP®.
Factor Xa reagent - Stabilité après reconstitution: 7 jours à 15°C, 3 mois à 2-8°C dans le flacon d’origine, ou 48
heures à 15°C sur les analyseurs ACL Futura / ACL Advance et de la famille ACL TOP.
Antithrombin: Stabilité après reconstitution: 3 mois à 2-8°C dans le flacon d’origine.
Buffer: Le tampon ouvert est stable 3 mois à 2-8°C.
Working buffer (Diluant de Travail): La stabilité après préparation est de 7 jours à 15°C et 2-8°C, si cette
dernière est conservée dans un flacon fermé, ou 48 heures à 15°C sur les analyseurs ACL Futura, ACL
Advance et de la famille ACL TOP.
Pour une stabilité optimale, retirer le réactif du système et le conserver à 2-8°C dans le flacon d’origine entre
chaque utilisation.
Procédures de test/Instrument
Se référer au mode d’emploi de l’instrument IL approprié et/ou au manuel d’application pour des informations
complémentaires sur les procédures de dosage.
Note: Un cycle de décontamination est recommandé après le test Héparine et ceci sur les analyseurs ACL
100-7000.
Recueil des spécimens et préparation
9 parts de sang fraîchement prélevé sont collectées avec 1 part de citrate trisodique. Se référer au document
CLSI H21-A5 ou au document GEHT (STV, numéro spécial, 1-40, 1998 et ses modifications parues sur le
site du GEHT en 2007) pour plus d’informations sur le prélèvement des échantillons, leur manipulation et leur
stockage.7
Standardisation
Pour la préparation du standard de concentration 0,8 UI/ml, utiliser la même héparine que celle qui est utilisée
pour la thérapie du patient.
Note : Lors de la préparation de la solution standard à 0,8 UI/ml, un plasma de calibration ou un pool de
plasmas normaux peuvent être utilisés, ceci dépendant de l’analyseur sur lequel le dosage est réalisé.
Famille ACL TOP : Un pool de plasmas normaux peut être utilisé pour la préparation de la solution standard
à 0,8 UI/ml.
ACL Futura/ACL Advance : Comme indiqué dans le mode d’emploi, un plasma de calibration peut être utilisé
pour la préparation de la solution standard à 0,8 UI/ml.
ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000 : Comme indiqué dans le mode d’emploi, un plasma de calibration peut être
utilisé pour la préparation de la solution standard à 0,8 UI/ml.
ACL 100-7000 : Comme indiqué dans le mode d’emploi, un pool de plasmas normaux peut être utilisé pour la
préparation de la solution standard à 0,8 UI/ml.
Réactifs auxiliares et plasma de contrôle
Non fournis avec la trousse, ils doivent faire l’objet d’une commande séparée:
Amérique et Pacifique
Europe
Réf.
Réf.
Plasma de calibration
0020003700
0020003700
Solution de nettoyage
0009831700
0009831700
Solution de nettoyage
0009832700
0009832700
Contrôle de qualité
Deux taux de contrôle sont recommandés pour un programme de contrôle de qualité complet.8 Les plasmas
de Contrôle Héparine Bas* et Héparine Haut* sont spécifiques à ce programme. Chaque laboratoire doit établir
sa propre moyenne et déviation standard et son programme de contrôle de qualité afin de vérifier l’état de
fonctionnement de son système analytique.
A titre d’exemple, les contrôles pourraient être analysés une fois toutes les 8 heures en regard des bonnes
pratiques de laboratoire. Se référer au mode d’emploi de l’instrument pour des informations complémentaires.
Se reporter à Westgard et al pour l’identification et la résolution des contrôles hors limites.9
Heparin - 0020009400
Résultats
Les résultats de l’Héparine sont reportés en U/ml. Se référer au mode d’emploi de l’instrument pour des
informations complémentaires.
Limites de la méthode et substances interférant avec celle-ci
Les résultats de l’Héparine sur les analyseurs ACL Futura et ACL Advance ne sont pas affectés par
l’hémoglobine jusqu’à 200 mg/dl (2 g/l), par la bilirubine jusqu’à 20 mg/dl (200 mg/l) et par les triglycérides
jusqu’à 700 mg/dl (7 g/l).
Les résultats de l’Héparine sur les analyseurs de la famille ACL TOP ne sont pas affectés par l’hémoglobine
jusqu’à 375 mg/dl (3,75 g/l), par la bilirubine jusqu’à 25 mg/dl (250 mg/l) et par les triglycérides jusqu’à 1630
mg/dl (16,3 g/l).
Valeurs attendues
Pour obtenir un effet optimum avec un minimum de risques de saignements ou de complications
thromboemboliques l’activité de l’héparine devra se trouver dans les limites thérapeutiques recommandées par
le fabricant de l’héparine.10
Caractéristiques et performances
Fidélité:
La répétabilité (CV% intra séries) et la reproductibilité (CV% total, inter séries et de jour à jour) ont été évaluées
au cours d’essais multiples, en utilisant deux taux d’échantillons pour chacun des 2 types d’héparines non
fractionnée (HNF) et de bas poids moléculaire (HBPM).
Famille ACL
Moyenne (U/ml)
CV % (Intra-séries)
CV % (Intra séries)
HNF
0,77
1,84
2,18
HNF
0,23
7,76
8,23
HBPM
0,79
2,68
3,09
HBPM
0,23
7,99
9,69
ACL Futura/
ACL Advance
Moyenne (U/ml)
CV % (Intra-séries)
CV % (Intra séries)
HNF
0,79
3,0
6,6
HNF
0,52
5,7
7,3
HNF
0,26
9,1
10,0
HBPM
0,76
4,1
4,5
HBPM
0,42
6,2
7,9
HBPM
0,22
10,7
11,9
Famille ACL TOP
Moyenne (U/ml)
CV % (Intra-séries)
CV % (TIntra séries)
HNF
0,82
1,8
6,4
HNF
0,53
3,4
4,3
HNF
0,25
4,6
8,5
HBPM
0,86
2,4
4,4
HBPM
0,49
6,1
8,2
HBPM
0,25
5,7
11,3
Corrélation:
Analyseur
Pente
Ordonnées à l’origine
r
Méthode de référence
Famille ACL
0,968
0,014
0,988
IL Héparine (Xa)
ACL Futura/
0,944
0,035
0,989
IL Héparine (Xa)
ACL Advance
Famille ACL TOP
1,012
-0,005
0,992
HemosIL Héparine (Xa) sur ACL Advance
Les résultats de fidélité et de corrélation sont obtenus en utilisant des lots spécifiques de réactifs et de contrôles.
Linéarité:
Analyseurs
Famille ACL et ACL Futura/ACL Advance
Famille ACL TOP
0 - 1,0 U/ml
0 - 1,1 U/ml
ITALIANO - Revisione dell’inserto 02/2013
Utilizzo
Kit con substrato cromogenico per la determinazione automatica quantitativa dell’eparina non frazionata e a
basso peso molecolare nel plasma umano citratato sui sistemi di coagulazione ACL.
Principio del metodo
L’eparina è il farmaco antitrombotico più utilizzato. L’attività biologica di questo glicosaminoglicano (GAG) risiede
nelle sua capacità di potenziare fino a 2000 volte l’effetto inibitorio dell’antitrombina sulle proteasi plasmatiche.
Recentemente si è dimostrato che le eparine a basso peso molecolare, oltre ad essere altrettanto valide sotto
l’aspetto terapeutico, hanno una emivita più lunga delle eparine non frazionate.
Il kit per l’Eparina è un metodo basato su un substrato cromogenico sintetico e sull’inattivazione del Fattore Xa.
I livelli di eparina nei campioni in esame sono misurati automaticamente sui sistemi per la coagulazione ACL
in due fasi:
1. Nel campione in esame è presente un complesso eparina-antitrombina. La concentrazione di questo
complesso dipende dalla disponibilità dell’antitrombina. Per ottenere una concentrazione più costante di
antitrombina, si aggiunge al plasma umano una certa quantità di antitrombina umana purificata.1 Infine il
Fattore Xa, aggiunto in eccesso, è neutralizzato dal complesso eparina-antitrombina.
2. Il Fattore Xa residuo è dosato utilizzando un substrato cromogenico sintetico. La paranitroanilina rilasciata è
monitorata cineticamente a 405 nm ed è inversamente proporzionale al livello di eparina nel campione.2
Poiché i diversi tipi di eparine (non frazionate e a basso peso molecolare) hanno una diversa e specifica attività
anti-Fattore Xa, è necessario calibrare lo strumento utilizzando la stessa eparina somministrata al paziente.3,4
Composizione
Il kit Heparin è composto da:
S Chromogenic substrate (Nr. Cat. 00020009410): 1 flacone da 4 mL di substrato cromogenico liofilizzato
S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCL (3 mg/flacone) con eccipienti e stabilizzanti.
E Factor Xa reagent (Nr. Cat. 00020009420): 1 flacone da 5 mL di Fattore Xa bovino, purificato e liofilizzato
(68 nkat/flacone), con aggiunta di tampone Tris, EDTA, cloruro di sodio e albumina bovina serica.
A Antithrombin (Nr. Cat. 00020009430): 1 flacone da 3 mL di antitrombina umana liofilizzata (3 UI/flacone),
con aggiunta di tampone Tris, EDTA, cloruro di sodio e albumina bovina serica.
B Buffer (Nr. Cat. 00020009440): 1 flacone da 8 mL di una soluzione concentrata di tampone Tris, pH 8,4,
EDTA, cloruro di sodio e tensioattivo.
ATTENZIONE:
Questo prodotto contiene materiale di cui è stata verificata all’origine, con metodi raccomandati dalla FDA,
l’assenza dell’antigene di superficie dell’epatite B (HBsAg) e degli anticorpi anti-HCV e anti-HIV 1/2. Trattare
come potenzialmente infetto.5
Simbolo di pericolo: nessuno
Frasi di rischio: nessuno
Consigli di prudenza: nessuno
Tutti i prodotti animali dovrebbero essere trattati come potenzialmente infetti.
Per uso diagnostico in vitro.
Preparazione
Chromogenic substrate: Sciogliere il contenuto di ciascun flacone con 4 mL di acqua di Tipo CLR secondo il
documento CLSI o equivalente.6 Chiudere con il tappo e miscelare delicatamente. Assicurarsi della completa
ricostituzione del prodotto. Mantenere il reagente a 15-25°C per 30 minuti e miscelare nuovamente prima
dell’uso.
Factor Xa reagent: Sciogliere il contenuto di ciascun flacone con 5 mL di acqua di Tipo CLR secondo il
documento CLSI o equivalente.6 Chiudere con il tappo e miscelare delicatamente. Assicurarsi della completa
ricostituzione del prodotto. Mantenere il reagente a 15-25°C per 30 minuti e miscelare nuovamente prima
dell’uso.
Antithrombin: Sciogliere il contenuto di ciascun flacone con 3 mL di acqua di Tipo CLR secondo il documento
CLSI o equivalente.6 Chiudere con il tappo e miscelare delicatamente. Assicurarsi della completa ricostituzione
del prodotto. Mantenere il reagente a 15-25°C per 30 minuti e miscelare nuovamente prima dell’uso.
Buffer: Diluire la quantità necessaria di tampone concentrato 1:10 (1+9) con acqua di Tipo CLR secondo il
documento CLSI o equivalente.6 Miscelare prima dell’uso.
Working buffer (Diluente di lavoro): A 24 mL di tampone diluito aggiungere 1 mL di reattivo Antitrombina.
Nota: L’iniziale opalescenza visibile dopo ricostituzione dei reagenti liofilizzati scomparirà in due minuti circa.
Risultati
Conservazione e stabilità dei reagenti
I risultati del test Eparina su strumenti ACL Futura/ACL Advance non sono influenzati in presenza di livelli di
emoglobina fino a 200 mg/dL, bilirubina fino a 20 mg/dL e trigliceridi fino a 700 mg/dL.
I risultati del test Eparina su ACL TOP non sono influenzati in presenza di livelli di emoglobina fino a 375 mg/dL,
bilirubina fino a 25 mg/dL e trigliceridi fino a 1630 mg/dL.
I reagenti sigillati sono stabili a 2-8°C fino alla data di scadenza stampata sull’etichetta del flacone.
Chromogenic substrate - Stabilità dopo la ricostituzione: 7 giorni a 15°C, 3 mesi a 2-8°C nel flacone originale
o 48 ore a 15°C su strumenti ACL Futura, ACL Advance e sistemi ACL TOP®.
Factor Xa reagent - Stabilità dopo la ricostituzione: 7 giorni a 15°C, 3 mesi a 2-8°C nel flacone originale o 48
ore a 15°C su strumenti ACL Futura, ACL Advance e sistemi ACL TOP.
Antithrombin - Stabilità dopo la ricostituzione: 3 mesi a 2-8°C nel flacone originale.
Buffer - Il reagente aperto è stabile per 3 mesi a 2-8°C.
Working buffer (Diluente di lavoro) - Stabilità dopo la preparazione: 7 giorni a 15°C e 2-8°C in contenitori
chiusi, o 48 ore a 15°C su strumenti ACL Futura, ACL Advance e sistemi ACL TOP.
Al termine dei cicli lavorativi si consiglia di conservare i reagenti a 2-8°C nel flacone originale per una migliore
stabilità.
Metodo
Per le metodiche e le procedure di lavoro fare riferimento al Manuale dell’Operatore e/o al Manuale Applicativo
degli strumenti IL.
Nota: si consiglia di eseguire un ciclo di lavaggio dopo l’esecuzione del test Heparin, sui sistemi ACL 10007000.
Preparazione dei campioni
Aggiungere a nove parti di sangue fresco venoso una parte di trisodio citrato. Per informazioni aggiuntive sulla
preparazione, il trattamento e la conservazione dei campioni fare riferimento al documento CLSI H21-A5.7
Standardizzazione
Utilizzare la stessa eparina somministrata al paziente per la preparazione dello standard da 0,8 U/mL.
Nota: Lo standard da 0,8 u/mL deve essere preparato con plasma calibrante o Normal Pool Plasma (NPP) a
seconda dello strumento utilizzato.
Sistemi ACL TOP: Utilizzare il Normal Pool Plasma (NPP) nella preparazione dello standard da 0,8 U/mL.
ACL Futura/ACL Advance: Utilizzare il plasma calibrante nella preparazione dello standard da 0,8 U/mL come
indicato nel manuale dell’operatore.
ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: Utilizzare il plasma calibrante nella preparazione dello standard da 0,8
U/mL come indicato nel manuale dell’operatore.
ACL 100-7000: Utilizzare il Normal Pool Plasma (NPP) nella preparazione dello standard da 0,8 U/mL come
indicato dal manuale dell’operatore.
Reagenti ausiliari e plasmi di controllo
I seguenti prodotti non sono forniti insieme al kit e devono essere ordinati separatamente.
Codice
Plasma Calibrante
0020003700
Soluzione detergente (Clean A)
0009831700
Soluzione detergente (Clean B)
0009832700
Controllo di qualità
Per un completo programma di controllo di qualità si raccomanda l’uso di plasmi normali e patologici.8 Ogni
laboratorio dovrà stabilire i propri valori medi e le deviazioni standard per ogni controllo ed individuare le
corrette procedure di analisi. I controlli dovranno essere analizzati almeno una volta ogni 8 ore in accordo con
le esigenze del laboratorio. Consultare il Manuale dell’Operatore dello strumento per ulteriori informazioni. Per
l’identificazione e la risoluzione di situazioni particolari, fare riferimento all’articolo di Westgard et al.9
Heparin - 0020009400
I risultati dei pazienti sono riportati in U/mL. Riferirsi al Manuale dell’Operatore per ulteriori informazioni.
Limitazioni/sostanze interferenti
Valori attesi
Per ottenere un effetto ottimale senza incorrere nel rischio di sanguinamento o di complicanze
tromboemboliche, l’attività eparinica deve essere nell’intervallo raccomandato dal produttore dell’eparina
stessa.10
Prestazioni
Precisione:
La precisione nella serie e totale (tra sessioni e tra giorni) è stata calcolata eseguendo numerose determinazioni
su due campioni di livello diverso con eparina non frazionata ed eparina a basso peso molecolare.
ACL 200 - 10000
Media (U/mL)
CV % (nella serie)
CV % (Totale)
Eparina non frazionata
0,77
1,84
2,18
Eparina non frazionata
0,23
7,76
8,23
Eparina a basso peso molecolare
0,79
2,68
3,09
Eparina a basso peso molecolare
0,23
7,99
9,69
ACL Futura/ACL Advance
Media (U/mL)
CV % (nella serie)
CV % (Totale)
Eparina non frazionata
0,79
3,0
6,6
Eparina non frazionata
0,52
5,7
7,3
Eparina non frazionata
0,26
9,1
10,0
Eparina a basso peso molecolare
0,76
4,1
4,5
Eparina a basso peso molecolare
0,42
6,2
7,9
Eparina a basso peso molecolare
0,22
10,7
11,9
Sistemi ACL TOP
Media (U/mL)
CV % (nella serie)
CV % (Totale)
Eparina non frazionata
0,82
1,8
6,4
Eparina non frazionata
0,53
3,4
4,3
Eparina non frazionata
0,25
4,6
8,5
Eparina a basso peso molecolare
0,86
2,4
4,4
Eparina a basso peso molecolare
0,49
6,1
8,2
Eparina a basso peso molecolare
0,25
5,7
11,3
Correlazione:
Sistema
pendenza
intercetta
r
Metodo di riferimento
ACL 200 - 10000
0,968
0,014
0,988
Eparina (Xa) IL
ACL Futura/ACL Advance 0,944
0,035
0,989
Eparina (Xa) IL
Sistemi ACL TOP
1,012
-0,005
0,992
HemosIL Eparina (Xa) su ACL
Advance
I risultati dei test di precisione e di correlazione sono stati ottenuti usando uno specifico lotto di reagenti e
controlli.
Linearità:
Sistema
ACL 200 - 10000 e ACL Futura/ACL Advance
Sistemi ACL TOP
0 - 1,0 U/mL
0 - 1,1 U/mL
PORTUGUÊS - Revisão do folheto 02/2013
Aplicação Prevista
Teste cromogénico automático para a determinação quantitativa de Heparina não fraccionada (HNF) ou
Heparina de baixo peso molecular (HBPM) em plasma humano citratado, nos Sistemas de Coagulação IL.
Resumo e Príncipio
A heparina é o fármaco antitrombótico mais frequentemente utilizado. A actividade biológica deste
glicosaminoglicano sulfatado consiste na capacidade de acelerar (até 2000 vezes) o efeito inibidor da
Antitrombina nas proteases da coagulação. Actualmente tem-se verificado que a HBPM, para além de ser
terapeuticamente útil tal como a HNF, também tem uma maior semi-vida.
O kit Heparina é um ensaio da heparina baseado num substrato cromogénico sintético e na inactivação do
Factor Xa. Os níveis de Heparina existentes no plasma do doente são medidos automaticamente no Sistema
de Coagulação da IL em duas etapas:
1. A Heparina é analisada como um complexo com a Antitrombina presente na amostra. A concentração
deste complexo está dependente da Antitrombina disponível. Para obter uma maior estabilidade de
concentração da Antitrombina, ao plasma é adicionada a Antitrombina humana purificada.1 O Factor Xa é
adicionado em excesso e neutralizado pelo complexo Antitrombina-Heparina.
2. O Factor Xa residual é quantificado utilizando um substrato cromogénico sintético. A para-nitroanilina
libertada é monitorizada cineticamente a 405 nm e é inversamente proporcional ao nível de Heparina
existente na amostra.2
Uma vez que os diferentes tipos de Heparinas HNF e HBPM possuem uma actividade específica do Factor
anti-Xa, a mesma Heparina que é utilizada na amostra do doente também deve ser usada para a calibração
da curva padrão.3,4
Composição
O kit Heparin (Heparina) é composto por:
S Chromogenic substrate (Núm. Cat. 00020009410): recipiente 1 x 4 mL de substrato cromogénico
liofilizado S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCL (3 mg/recipiente) e estabilizadores.
E Factor Xa reagent (Núm. Cat. 00020009420): recipiente 1 x 5 mL de preparação liofilizada contendo
Factor Xa bovino purificado (68 nkat/recipiente), Tampão-Tris, EDTA, cloreto de sódio e albumina de soro
bovino.
A Antithrombin (Núm. Cat. 00020009430): recipiente 1 x 3 mL de preparação liofilizada contendo
antitrombina humana (3 UI/recipiente), Tampão-Tris, EDTA, cloreto de sódio e albumina de soro bovino.
B Buffer (Núm. Cat. 00020009440): recipiente 1 x 8 mL de solução concentrada contendo Tampão Tris, pH
8,4, EDTA, cloreto de sódio, detergente e albumina de soro bovino.
AVISOS E PRECAUÇÕES:
O material utilizado neste produto foi analisado com testes aprovados pela FDA e verificou-se a ausência de
reacção ao Antigénio de Superfície da Hepatite B (HBsAg), aos anticorpos para anti-HCV e anti-HIV 1/2. No
entanto, deve-se manipular com precaução, como potencialmente infeccioso.5
Classe de risco: nenhuma
Frases de risco: nenhuma
Frases de segurança: nenhuma
Todos os produtos de origem animal devem ser tratados como potencialmente infecciosos.
Para uso em diagnóstico in vitro.
Preparação
Chromogenic substrate: Dissolver o conteúdo de cada recipiente em 4 mL de água tipo CLR segundo o CLSI
ou equivalente.6 Fechar o recipiente e homogeneizar suavemente. Verificar se o produto fica completamente
dissolvido. Conservar o reagente entre 15 e 25°C durante 30 minutos. Misturar invertendo o recipiente, antes
de utilizar.
Factor Xa reagent: Dissolver o conteúdo de cada recipiente em 5 mL de água tipo CLR segundo o CLSI ou
equivalente.6 Fechar o recipiente e homogeneizar suavemente. Verificar se o produto fica completamente
dissolvido. Conservar o reagente entre 15 e 25°C durante 30 minutos. Misturar invertendo o recipiente, antes
de utilizar.
Antithrombin: Dissolver o conteúdo de cada recipiente em 3 mL de água tipo CLR segundo o CLSI ou
equivalente.6 Fechar o recipiente e homogeneizar suavemente. Verificar se o produto fica completamente
dissolvido. Conservar o reagente entre 15 e 25°C durante 30 minutos. Misturar invertendo o recipiente, antes
de utilizar.
Buffer (Tampão): Diluir a quantidade necessária de tampão concentrado 1:10 (1+9) com água tipo CLR
segundo o CLSI ou equivalente.6 Misturar antes de utilizar.
Working buffer (Tampão de trabalho): Para 24 mL de tampão diluído juntar 1 mL de reagente Antitrombina
reconstituído.
Nota: Nos reagentes liofilizados pode ocorrer opalescência mas desaparecerá ao fim de 2 minutos.
Conservação e estabilidade do reagente
Os reagentes fechados, que ainda não foram utilizados, são estáveis até ao final do prazo de validade, que
consta no rótulo, desde que conservados entre 2-8°C.
Chromogenic substrate - Estabilidade depois da reconstituição: 7 dias a 15°C, 3 meses a 2-8°C dentro do
recipiente original, ou 48 horas a 15°C nos Sistemas ACL Futura, ACL Advance e Família ACL TOP®.
Factor Xa reagent - Estabilidade depois da reconstituição: 7 dias a 15°C, 3 meses a 2-8°C dentro do recipiente
original, ou 48 horas a 15°C nos Sistemas ACL Futura, ACL Advance e Família ACL TOP.
Antithrombin - Estabilidade depois da reconstituição: 3 meses a 2-8°C dentro do recipiente original.
Buffer (Tampão) - Depois de aberto, o reagente é estável durante 3 meses entre 2-8°C.
Working buffer (Tampão de trabalho) - Estabilidade depois da preparação: 7 dias entre 15°C e 2-8°C num
contentor selado, ou 48 horas a 15°C nos Sistemas ACL Futura, ACL Advance e Família ACL TOP.
Para obter uma estabilidade óptima retire os reagentes do aparelho e conserve-os entre 2-8°C, nos recipientes
originais.
Método de ensaio
Seguir as instruções da técnica de acordo com o Manual do Operador dos aparelhos IL ou com o Manual de
Aplicações dos Aparelhos IL.
Nota: Recomenda-se um ciclo de limpeza depois de efectuar a análise com o ensaio da Heparina nos
sistemas ACL Classic (100-7000).
Recolha e preparação da amostra
Adicionar nove partes de sangue extraído recentemente por punção venosa a uma parte de citrato trissódico.
Para efectuar a recolha, o manuseamento e a conservação da amostra devem seguir-se as recomendações
referidas no documento H21-A5 da CLSI.7
Padronização
Para preparação do padrão 0.8 U/mL utilize a mesma heparina , utilizada na terapêutica do doente.
Por favor note que: Quando preparar o padrão 0.8 U/mL , dependendo do instrumento que está ser utilizado,
deve utilizar-se plasma de calibração ou um Pool de Plasma Normal (NPP).
ACL TOP Family: Deve utilizar-se um Pool de Plasma Normal (NPP) na preparação do padrão 0.8 U/mL.
ACL Futura/ACL Advance: Conforme indicado no Manual do Operador, deve ser utilizado o plasma de
calibração, na preparação do padrão 0.8 U/mL .
ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: Conforme indicado no Manual do Operador, deve ser utilizado o plasma de
calibração, na preparação do padrão 0.8 U/mL .
ACL Classic (100-7000): Conforme indicado no Manual do Operador, deve ser utilizado o Pool de Plasma
Normal (NPP) na preparação do padrão 0.8 U/mL .
Reagentes adicionais e plasmas de controlo
Este kit não inclui os produtos abaixo mencionados, pelo que deverão ser pedidos em separado:
Américas e Pacífico
Europa
Núm Cat.
Núm Cat.
Plasma de Calibração
0020000000
0008467300
Solução de limpeza
0009831700
0009831700
Solução de limpeza
0009832700
0009832700
Controlo de Qualidade
Para realizar um programa completo de controlo de qualidade recomenda-se a utilização de dois níveis de
controlos.8 Os controlos adequados para este programa são o controlo Baixo* e o controlo Alto* de Heparina.
Cada laboratório deve estabelecer a sua própria média e desvio padrão e deve efectuar um programa de
controlo de qualidade para monitorizar os seus resultados. Os controlos devem ser analisados uma vez em
cada turno de 8 horas, de acordo com a norma vigente no Laboratório. Ver Manual do Operador para mais
informações. Consultar a publicação de Westgard e col. para identificar e solucionar situações anormais do
Controlo de Qualidade.9
Resultados
Os resultados de Heparina são expressos em U/mL. Para mais informações consultar o Manual do Operador
do Aparelho.
Limitações/interferências
Concentrações de Hemoglobina até 200 mg/dL, Bilirrubina até 20 mg/dL e Triglicéridos até 700 mg/dL não
alteram os resultados de Heparina nos Sistemas ACL Futura/ACL Advance.
Concentrações de Hemoglobina até 375 mg/dL, Bilirrubina até 25 mg/dL e Triglicéridos até 1630 mg/dL não
alteram os resultados de Heparina no Família ACL TOP.
Valores Esperados
Para obter um efeito óptimo do reagente, minimizando o risco de hemorragias ou complicações
tromboembólicas, é necessário que a actividade de Heparina esteja dentro dos limites recomendados pelo
fabricante.10
Características de desempenho
Precisão:
A precisão entre análises e total (análise a análise e dia a dia) foi avaliada ao longo de múltiplas análises, com
dois níveis de heparina não fraccionada e de heparina de baixo peso molecular.
Familia ACL
Média (U/mL)
CV% (Intra-série)
CV% (Total)
HNF
0,77
1,84
2,18
HNF
0,23
7,76
8,23
HBPM
0,79
2,68
3,09
HBPM
0,23
7,99
9,69
ACL Futura/ACL Advance
Média (U/mL)
CV% (Intra-série)
CV% (Total)
HNF
0,79
3,0
6,6
HNF
0,52
5,7
7,3
HNF
0,26
9,1
10,0
HBPM
0,76
4,1
4,5
HBPM
0,42
6,2
7,9
HBPM
0,22
10,7
11,9
Familia ACL TOP
Média (U/mL)
CV% (Intra-série)
CV% (Total)
HNF
0,82
1,8
6,4
HNF
0,53
3,4
4,3
HNF
0,25
4,6
8,5
HBPM
0,86
2,4
4,4
HBPM
0,49
6,1
8,2
HBPM
0,25
5,7
11,3
Correlação:
Sistema
declive
intersecção
r
Método de referência
Familia ACL
0,968
0,014
0,988
IL Heparina (Xa)
ACL Futura/ACL Advance 0,944
0,035
0,989
IL Heparina (Xa)
Familia ACL TOP
1,012
-0,005
0,992
HemosIL Heparina (Xa) em ACL Advance
Estes resultados de precisão e de correlação foram obtidos utilizando lotes específicos, de reagente e de
controlo.
Lineariedade:
Sistema
Familia ACL e ACL Futura/ACL Advance
Familia ACL TOP
0 - 1,0 U/mL
0 - 1,1 U/mL
Bibliography / Literatur / Bibliografía / Bibliographie / Bibliografia /Bibliografia
1. Teien AN, Lie M. Evaluation of an Amidolytic Heparin Assay Method: Increased Sensitivity by Adding
Purified Antithrombin III, Thromb. Res. 1977; 10: 399-410.
2. Teien AN, et al. Assay of Heparin in Plasma using a Chromogenic Substrate, Thromb. Res. 1976; 8: 413416.
3. Fareed J, Hoppenstadt D, Jeske W, Clarizio R, Waleng JM, Bick RL. The Available Low Molecular Weight
Heparin Preparations Are Not the Same, Clin. Appl. Thrombosis/Hemostasis. 1997; 3 (suppl. 1): s38-s52.
4. Holmer E, Kurachi K, Söderström. The Molecular-Weight Dependence of the Rate-Enhancing Effect of
Heparin on the Inhibition of Thrombin, Factor Xa, Factor IXa and Kallikrein by Antithrombin, Biochem J.
1981: 193: 395-400.
5. Richmond JY, McKinney RW eds. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, U.S. Dept. of
Health and Human Services, Public Health Service, 4th Edition, 1999.
6. Clinical and Laboratory Standards Institute. Preparation and Testing of Reagent Water in the Clinical
Laboratory; Approved Guideline. Fourth, Edition, CLSI Document C3-A4; Vol. 26 No.22
7. Clinical and Laboratory Standards Institute. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for
Testing Plasma-Based Coagulation and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline - Fifth Edition,
CLSI Document H21-A5; Vol. 28 No. 5
8. Zucker S, Cathey MH, West B. Preparation of Quality Control Specimens for Coagulation, Am J. Clin. Pathol.
1970; 53: 924-927.
9. Westgard JO, and Barry PL. Cost-Effective Quality Control: Managing the Quality and Productivity of
Analytical Process, AACC Press 1986.
10.Holm HA, Abildgaard U, Kalvenes S. Heparin Assays and Bleeding Complications in Deep Venous
Thrombosis with Particular Reference to Retroperitonal Bleeding, Thromb. Haemost. 1985; 53: 278-281.
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