ETUDE COMPARATIVE DE LA PHARMACOGNOSIE DES

Transcription

N° Ordre ……../FHC/UMBB/2012
REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE
MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE
SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE M’HAMED BOUGARA-BOUMERDES
Faculté des Hydrocarbures et de la Chimie
Mémoire de Magister
Présenté par :
Melle GUEDOUARI Ratiba
En vue de l’obtention du diplôme de MAGISTER en :
Filière : Génie des Procédés Chimiques et Pharmaceutiques
Option : Industrie Pharmaceutique
ETUDE COMPARATIVE DE LA PHARMACOGNOSIE DES DIFFERENTES
PARTIES DU LAURUS NOBILIS L.
ESSAIS DE FORMULATIONS THERAPEUTIQUES.
Devant le jury :
Mr. HAMMOUDI Khaled
Professeur
UMBB
Président
Mr. NABIEV Mohamed
Professeur
UMBB
Rapporteur
Mr. KHIMECHE Kamel
M.C. (A)
EMP-Alger
Examinateur
Mme. FAZOUANE Fethia
Professeur
UMBB
Examinatrice
Année Universitaire : 2011/ 2012
I.20. Usages traditionnelles et médicamenteux : ..............................................................................21
II.14. b.2.2.Indice d’ester ( IE ) :( NF T 75-104 Juin 1982 ) .......................................................84
Dédicaces
Avec l’aide de dieu, j’ai pu réaliser ce modeste travail que je dédie :
À mes très chers parents pour leurs dévouements, leurs amours, leurs sacrifices et
leurs encouragements. Que ce travail soit, pour eux, un faible témoignage de ma
profonde affection et tendresse.
À ma grand-mère paternel, pour leur présence dans tous les instants, pour le
soutien qu’elle m’a apporté, avec toute mon affection et ma reconnaissance.
Je teins à adresser un hommage à ma grand-mère maternel qui m’a encouragée à
me battre pour trouver mon espace.
À mes frères et mes sœurs et à toute ma famille.
À tous mes amis .
Enfin à toutes les personnes qui comptent pour moi, intervenues dans ma vie à
un moment ou à un autre et qui ont participé à faire de moi celle que je suis
aujourd’hui…
Ratiba
Avant toute chose, je remercie Dieu, le tout puissant, pour m’avoir donnée la force et la
patience.
Une thèse, tant nominative soit elle, est avant tout un travail de réflexion collective, donc
au terme de ce travail, il m’est à la fois un plaisir et un devoir de remercier sincèrement
toutes les personnes qui ont participé à sa réalisation.
Ce travail a été réalisé au sein du laboratoire de synthèse pétrochimique de la faculté des
hydrocarbures et de la chimie de l’université M’HAMED BOUGARA de BOUMERDES,
sous la direction de Pr. NABIEV Mohamed.
Je tiens, en tout premier lieu, à remercier le personne sans qui ce présent travail n’aurait
jamais vu le jour : NABIEV Mohamed , Professeur à la faculté des hydrocarbures et de la
chimie, pour avoir encadré et dirigé ce travail avec une grande rigueur scientifique, sa
disponibilité, ses conseils et la confiance qu’il m’accordé. Qui a su trouver les mots pour
m’amener à exprimer mon rêve, faire de la recherche et transmettre les connaissances ainsi
mises en évidence ; il m’a soutenue tout au long de cette thèse, dans les bons moments,
comme dans les périodes de découragement. Je le remercie aussi pour ses qualités
humaines, qu’il trouve ici le témoignage de mon grand respect et de mon estime.
Je suis infiniment reconnaissante à Monsieur le Professeur K. HAMMOUDI, Professeur à
la faculté des hydrocarbure et de la chimie, pour l’inlassable soutient qu’il m’a toujours
accordé, pour la facilité de travail qu’il m’a procurée et pour les précieux conseils qu’il
m’a prodigués tout au long de mon travail. Votre dynamisme pour la recherche des
produits naturels a été pour moi une source de motivation; Recevez ici l’expression de ma
profonde reconnaissance pour vos qualités scientifiques.
Je remercie chaleureusement Monsieur le Professeur B.HAMADA, Professeur à la faculté
des hydrocarbures et de la chimie , pour son sens admirable des rapports humains, pour son
aide et ses encouragements.
Je remercie sincèrement Mme S. HAMMOUDI, Mme F. OUDJEDI, Mieur ZERAIBI, Mieur
RIBA qui m’ont aidée .Recevez ici l’expression de ma profonde gratitude.
Je tiens à remercier sincèrement Monsieur CHADER, maitre assistant à la faculté de
médecine et de pharmacie à Alger, pour son aide inestimable, sa gentillesse, sa
disponibilité pendant les moments difficiles. Qui m'a accueilli au sein du leur Laboratoire :
Un grand merci à toute l’équipe du laboratoire nationale de contrôle des produits
pharmaceutiques à Alger pour leurs accueils chaleureux pour leur gentillesse, leur humour.
Je n’aurai garde d’oublier Monsieur BOUCENNA, enseignant chercheur et chef de
département de génie des procédés chimiques et pharmaceutiques à l’université de
BOUMERDES, pour sa joie de vivre, les nombreuses discussion scientifiques qui m’ont
enrichies et pour ces pertinence conseils.
Mes remerciements s’adressent aussi aux membres du laboratoire de génie des procédés
chimiques et pharmaceutiques :Mieur AKOUCHE, Mme Hafsa ,Meme BOUDERBALA et à
Melle Djamila……... Qui ont mis à ma disposition les condition matérielles nécessaires
pour la réalisation de ce travail tout au long la période de recherche qu’ils ici mon respect
et reconnaissance.
J’aimerais également remercier tout les Professeurs et les Enseignants, du département de
génie des procédés chimiques et pharmaceutiques à la faculté des hydrocarbure et de la
chimie, Université de BOUMERDES.
Que les honorables membres du jury veuillent croire en mes remerciements anticipés pour
avoir accepté de faire partie de mon jury de thèse. J’ai apprécié notre interaction lors de
mon examen de thèse et lors de ma soutenance publique.
• Monsieur le professeur K. HAMMOUDI , Professeur à l’université de BOUMERDES ;
• Monsieur le professeur K. KHIMECHE, Maitre conférences (A) à EMP de BORDJ EL
BAHRI ( ALGER ) ;
• Madame le professeur F. FAZOUANE , Professeur à l’université de BOUMERDES.
Je tiens à remercier, également, tous ceux qui ont participé de près ou de loin à la
réalisation de ce modeste travail.
Liste des symboles et d’abréviations
AFNOR : Association Française de normalisation
ATCC : American Type Culture Collection
°C : dégrée Celcius
CCM: Chromatographie sur Couche Mince
CLHP : Chromatographie Liquide Haute Performance
CMI : Concentration Minimale Inhibitrice
CMB : Concentration Minimale Bactéricide
CMF : Concentration Minimale Fongicide
CPG : Chromatographie en Phase Gazeuse
DL50 : Dose létale 50
DMAPP : Diméthylallyl pyrophosphate
DMSO : Diméthylsulfoxyde
DO : Densité Optique
DPPH : 1,1-diphényl-2-picrylhydrazyle
Fig : Figure
μg : Microgramme
GC/MS : Chromatographie en phase gazeuse couplée à un spectromètre de masse
H : Taux d’humidité
HD : Hydrodistillation
HE : Huile essentielle
IA : Indice d’acide
IE : Indice d’ester
IPP : Diphosphate d’isopentényle
II : Indice d’iode
IR : Indice de réfraction
IR : Infrarouge
J : Jours
Kg : Kilogramme
μl : microlitre
LPP : Diphosphate de linalyle
μm : Micromètre
M-H : Muëller Hinton
μmol : micromole
MS : Spectrométrie de masse ( Mass Spectrometry)
MH : Masse humide de la matière végétale
MS : quantité de la matière végétale sèche
M0 : masse de l’échantillon avant étuvage
M1 : masse de l’échantillon après étuvage
MHE : Quantité d’extrait récupérée
nm : nanomètre
OMS : Organisation Mondiale de la Santé
P : Pression
Patm : pression atmosphérique
P.F. : point de fusion
pH : Potentiel d’Hydrogène
ppm : partie par million
RMN : Résonance Magnétique Nucléaire
SAB : sabouraud
SM : Spectrométrie de Masse
Teb : Température d’ébullition
tr : Temps de rétention
UI : unité internationale
UFC : Unité Formant des colonies
UV : Ultra-violet
Vf : Volume finale
Vi : Volume initiale
% : pourcentage
ml : milli Litre
PCA : Plat Count Agar
RHE : Rendement en Huile Essentielle
tr : trace
Résumé :
Les plantes sont capable de produire des substances naturelles très diversifiées, qui peuvent
être très utiles pour l’homme. Parmi ces substances on cite les huiles essentielles. A cet
effet , et dans le cadre de la valorisation de la flore Algérienne, on s’est intéresse aux
espèces de la famille des Lauracées qui est l’une des familles les plus utilisés dans le
monde comme source d’épice. La plante sur laquelle a porté notre choix est une espèce de
laurier ( Laurus nobilis L.) provenant de la région de larba (BLIDA). Dans ce contexte,
l’objectif de ce travail est l’étude comparative de la pharmacognosie des différentes parties
du laurus nobilis à savoir les feuilles, les tiges, les fleurs, les fruits et les racines .
L’analyse phytochimique a révélé la présence de quelques groupes chimiques (polyphénols
totaux, des alcaloïdes…..etc) .Les huiles volatiles ont été isolées par hydrodistillation à
partir des feuilles , des tiges, des fruits et des fleurs séchées du Laurus nobilis, les résultats
des rendements en huile essentielle sont différents ; 0.79%, 0.1%,1.15%, 0.82%,
respectivement. Les racines du laurus nobilis ne contenant pas d’huile essentielle. Les
quatre huiles essentielles obtenues ont été analysées qualitativement, ensuite ils ont été
caractérisées par leur composition chimique grâce à des analyses par CG et CG/SM ; dans
les tiges du laurier l’eugénol méthyl ether, terpényl acetate, linalool et caryophyllene oxide
apparaissent comme les constituants majoritaires de l'HE (10.62%, 9.24%, 5.66% et
5.05%). Outre le 1,8-cinéole (10.65% ) , les principales composantes des feuilles étaient le
linalool et le terpényl acetate qui apparaît comme les constituants majoritaires de l'HE (
11.07% , 11.49%), suivi du Eugénol méthyl ether ( 9.74 %).Alors que dans l'HE des fruits
les composants majeurs qui ont été trouvé sont le (E)-β-ocimene, le Lauric anhydride , le
cedren-13-ol et le β-élémène (21.83%, 16.42% ,15.05% et 11.46% ) . Les ocimenes étaient
absents dans les feuilles et les tiges. Le 1,8-cinéol, le composant majoritaire des feuilles
était présent aussi dans les tiges et les fruits mais avec un pourcentage faible. D’où la
composition chimique des huiles essentielles des feuilles, des tiges et des fruits du laurier
noble est différentes les une des autres.
Après avoir s’assurer de la bonne qualité de la matière première , il a été procédé à la
formulation des deux pommades à base de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis,
une décongestionnante et l’autre antiseptique. Les tests macroscopiques, l’homogénéité et
le pH des pommades ont été déterminés. Les résultats de teste de tolérance des pommades
préparés ont révélé non irritante.
Les extraits volatils, les pommades formulées ont été également soumis à un criblage pour
leur activité antimicrobienne possible in vitro, contre trois souches de bactéries pathogène
et une seule espèce de levure, en employant la méthode de diffusion à partir d’un disque
solide. Tous les extraits volatils ont réagi positivement au moins sur une des souches
microbiennes testées. Les extraits volatils d'une même plante ont montré des activités
différentes et les CMI ont été déterminée à partir des extraits les plus actifs en milieu
gélosé, l’huile essentielle de la feuille de Laurus nobilis a témoigné d’une forte activité
antimicrobienne même vis à vis de souches multirésistantes aux antibiotiques.
Mots clé :Laurus nobilis, étude phytochimique, huile essentielle, test de tolérance, activité
antimicrobienne.
Summary:
Plants are capable of producing highly diverse natural substances, which can be very useful
to humans. Among these substances are cited as essential oils. For this purpose, and
through the enhancement of the flora of Algeria, it was interested in the species of the
Lauraceae family, which is one of the most families in use worldwide as a source of spice.
The plant that has turned our choice is a species of laurel (Laurus nobilis L.) from the
region of Larba (BLIDA). In this context, the objective of this work is the comparative
study of pharmacognosy the different parts of Laurus nobilis ; leaves, stems, flowers, fruits
and roots. The phytochemical analysis revealed the presence of some chemical groups (
polyphenols, alkaloids, etc. .....). The volatile oils were isolated by hydrodistillation from
leaves, stems, fruits and dried flowers of Laurus nobilis, the results of essential oil yields
are different, 0.79%, 0.1%, 1.15%, 0.82%, respectively. The roots of Laurus nobilis are not
contain essential oil. The four essential oils obtained were analyzed qualitatively, then they
were characterized by their chemical composition through analysis by GC and GC / MS, in
the stems of laurel eugenol methyl ether, terpényl acetate, linalool and caryophyllene oxide
appears as predominant materials of the essential oil (10.62%, 9.24%, 5.66% and 5.05%).
Besides 1,8-cineole (10.65%), the main components of the leaves were linalool and
terpényl acetate appears to be the major constituents of the essential oil (11.07%, 11.49%),
followed by eugenol methyl ether (9.74% ). While in the fruit essential oil the major
components that have been found are the (E)-β-ocimene, the Lauric anhydride, cedren-13-
ol and β-elemene (21.83%, 16.42%, 15.05% and 11.46%). The ocimenes were absent in
the leaves and stems. 1,8-cineole, the major component of the leaves was also present in
the stems and fruits but with a low percentage. Hence the chemical composition of
essential oils from leaves, stems and fruits of the laurel is different from one another. After
ensuring the quality of the raw material, was carried to the formulation of the two
ointments essential oil from leaves of Laurus nobilis, a decongestant and other antiseptic.
The macroscopic tests, homogeneity and pH of ointments were determined . The results of
tolerance tests revealed ointments prepared non-irritating. The volatile extracts, ointments
made were also subjected to screening for their antimicrobial activity as possible in vitro
against three strains of pathogenic bacteria and one yeast species, using the diffusion
method from a solid disk. All volatile extracts reacted positively on at least one microbial
strains tested. The volatile extracts of the same plant showed different activities and MICs
were determined from the most active extracts in agar medium, the essential oil of Laurus
nobilis leaf has demonstrated a strong antimicrobial activity even screws Screw strains
resistant
to
multiple
antibiotics.
Key words: Laurus nobilis, phytochemical study, essential oil, tolerance test,
antimicrobial activity.
:‫ﻣﻠﺨﺺ‬
‫ ﻣﻦ ﺑﯿﻦ ھﺬه اﻟﻤﻮاد‬.‫ واﻟﺘﻲ ﯾﻤﻜﻦ أن ﺗﻜﻮن ﻣﻔﯿﺪة ﺟﺪا ﻟﻺﻧﺴﺎن‬،‫اﻟﻨﺒﺎﺗﺎت ﻗﺎدرة ﻋﻠﻰ إﻧﺘﺎج ﻣﻮاد طﺒﯿﻌﺔ ﻣﺘﻨﻮﻋﺔ ﻟﻠﻐﺎﯾﺔ‬
,Lauracees ‫ اھﺘﻤﻤﻨﺎ ﺑﻨﻮع ﻣﻦ أﺳﺮة‬,‫ وذﻟﻚ ﻣﻦ ﺧﻼل ﺗﻌﺰﯾﺰ اﻟﻨﺒﺎﺗﺎت ﻓﻲ اﻟﺠﺰاﺋﺮ‬،‫ ﻟﮭﺬا اﻟﻐﺮض‬.‫اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ‬
‫ اﻟﻤﺤﻄﺔ اﻟﺘﻲ ﺣﻮﻟﺖ‬.‫اﻟﺘﻲ ﺗﻌﺪ واﺣﺪة ﻣﻦ اﻟﻌﺎﺋﻼت اﻷﻛﺜﺮ اﺳﺘﺨﺪاﻣﺎ ﻓﻲ ﺟﻤﯿﻊ أﻧﺤﺎء اﻟﻌﺎﻟﻢ ﺑﺎﻋﺘﺒﺎرھﺎ ﻣﺼﺪرا ﻣﻦ اﻟﺘﻮاﺑﻞ‬
‫ ﻓﻲ ھﺬا اﻟﺴﯿﺎق ﻓﺎن اﻟﮭﺪف‬. ‫ ( ﺑﺎﻟﺒﻠﯿﺪة‬Larba ) ‫ ( ﻣﻦ ﻣﻨﻄﻘﺔ اﻷرﺑﻌﺎء‬nobilis Laurus) ‫ﺧﯿﺎرﻧﺎ ھﻮ ﻧﻮع ﻣﻦ اﻟﻐﺎر‬
،‫اﻟﻔﻮاﻛﮫ‬،‫ و ا ﻀﺎ اﻟﺴﯿﻘﺎن‬nobilis Laurus ‫ﻣﻦ ھﺬا اﻟﻌﻤﻞ ھﻮ دراﺳﺔ و ﻣﻘﺎرﻧﺔ ﻷﺟﺰاء ﻣﻦ اﻟﻌﻘﺎﻗﯿﺮ اﻟﻤﺨﺘﻠﻔﺔ ﻣﻦ أوراق‬
‫ اﻟﺦ‬،‫ ﻗﻠﻮﯾﺪات‬،‫ ﻛﺸﻒ اﻟﺘﺤﻠﯿﻞ اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﻲ اﻟﻨﺒﺎﺗﻲ وﺟﻮد ﺑﻌﺾ اﻟﻤﺠﻤﻮﻋﺎت اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﯿﺔ )اﻟﺒﻮﻟﯿﻔﯿﻨﻮل اﻟﻜﻠﻲ‬. ‫اﻟﺠﺬور واﻟﺰھﻮر‬
‫اﻟﺰھﻮر و اﻟﺠﺬور‬،‫ اﻟﻔﻮاﻛﮫ‬،‫ اﻟﺴﯿﻘﺎن‬،‫ ﻣﻦ اﻷوراق‬hydrodistillation ‫ و ﺗﻢ ﻋﺰل اﻟﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة ﺑﻮاﺳﻄﺔ‬.(...
‫ ﻋﻠﻰ‬٪0.82 ،٪1.15 ،٪0.1 ،٪0.79 ،‫ ﻧﺘﺎﺋﺞ ﻋﺎﺋﺪات اﻟﻨﻔﻂ اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ ﻣﺨﺘﻠﻔﺔ‬، Laurus bilisno ‫اﻟﻤﺠﻔﻔﺔ ﻣﻦ ﻧﺒﺘﺔ‬
‫ وﻗﺪ ﺗﻢ ﺗﺤﻠﯿﻞ اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ اﻷرﺑﻌﺔ‬. ‫ ) اﻟﻐﺎر ( ﻻ ﺗﺤﺘﻮي ﻋﻠﻰ اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ‬nobilis sLauru ‫ ﺟﺬور‬.‫اﻟﺘﻮاﻟﻲ‬
\GC ‫ و‬GC ‫ ﺛﻢ ﻛﺎﻧﺖ ﺗﺘﻤﯿﺰ اﻟﺘﺮﻛﯿﺒﺔ اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﯿﺔ ﻣﻦ ﺧﻼل اﻟﺘﺤﻠﯿﻞ ﺑﻮاﺳﻄﺔ‬،‫اﻟﺘﻲ ﺗﻢ اﻟﺤﺼﻮل ﻋﻠﯿﮭﺎ ﻣﻦ اﻟﻨﺎﺣﯿﺔ اﻟﻨﻮﻋﯿﺔ‬
‫‪ MS‬ﺑﻤﺎ ﯾﻠﻲ ‪ :‬ﻓﻲ ﺳﯿﻘﺎن ﻧﺒﺘﺔ اﻟﻐﺎر ﯾﺒﺪو اﻟﻐﺎﻟﺐ ﻣﻦ ﻣﻮاد ‪,terpenyl acetate ,eugenol methyl ether :‬‬
‫‪. ( % 5.05, % 5.66, %9.24 ,%10.62) aryophyllene oxidec ,aloollin‬‬
‫ﺑﺎﻹﺿﺎﻓﺔ إﻟﻰ ‪ ( 10.65%) 1 , 8-cineol‬ﻛﺎﻧﺖ اﻟﻌﻨﺎﺻﺮ اﻟﺮﺋﯿﺴﯿﺔ ﻟﻠﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة ﻟﻸوراق ‪linalool ،‬‬
‫‪) terpenylacetate،‬‬
‫ﻓﻲ ﺣﯿﻦ‬
‫أن‬
‫‪ ,( % 11.07, % 11.49‬ﺗﻠﯿﮭﺎ ‪. ( ٪ 9.74 ) eugenohtlmeytherel‬‬
‫ﻣﻜﻮﻧﺎت اﻟﻔﺎﻛﮭﺔ اﻟﺮﺋﯿﺴﯿﺔ‬
‫اﻟﺘﻲ ﺗﻢ اﻟﻌﺜﻮر ﻋﻠﯿﮭﺎ ھﻲ ‪:‬‬
‫‪ cedren-13 - ol , anhydride Iauric , (E) -ᵦ-ocimene‬و ‪, %16.42 , %21.83 )ᵦ -elemene‬‬
‫‪ ocimenes .(%11.46 ,%15.05‬ﻛﺎﻧﺖ ﻏﺎﺋﺒﺔ ﻓﻲ اﻷوراق واﻟﺴﯿﻘﺎن ‪ .‬وﻛﺎن ‪ 1 , 8-cineol‬اﻟﻌﻨﺼﺮ اﻟﺮﺋﯿﺴﻲ ﻓﻲ‬
‫اﻷوراق أﯾﻀﺎ ﻣﻮﺟﻮدة ﻓﻲ اﻟﺴﯿﻘﺎن واﻟﻔﻮاﻛﮫ وﻟﻜﻦ ﻣﻊ ﻧﺴﺒﺔ ﻣﻨﺨﻔﻀﺔ‪ .‬وﺑﺎﻟﺘﺎﻟﻲ اﻟﺘﺮﻛﯿﺒﺔ اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﯿﺔ ﻟﻠﺰﯾﻮت اﻟﻌﻄﺮﯾﺔ ﻣﻦ‬
‫اﻷوراق واﻟﺴﯿﻘﺎن و اﻟﻔﻮاﻛﮫ ﻣﻦ اﻟﻐﺎر ﺗﺨﺘﻠﻒ ﻋﻦ ﺑﻌﻀﮭﺎ اﻟﺒﻌﺾ‪ .‬ﺑﻌﺪ اﻟﺘﺄﻛﺪ ﻣﻦ ﻧﻮﻋﯿﺔ اﻟﻤﻮاد اﻟﺨﺎم‪،‬ﺗﻤﺖ ﺻﯿﺎﻏﺔ‬
‫ﻣﺮھﻤﯿﻦ ﺑﺎﻟﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة ﻟﻸوراق ‪ .‬ﺗﻢ ﺗﺤﺪﯾﺪ اﺧﺘﺒﺎرات اﻟﻌﯿﻨﯿﺔ‪ ،‬اﻟﺘﺠﺎﻧﺲ و درﺟﺔ اﻟﺤﻤﻮﺿﺔ ﻟﻠﻤﺮاھﻢ‪ .‬وﻛﺸﻔﺖ ﻧﺘﺎﺋﺞ‬
‫اﺧﺘﺒﺎرات اﻟﺘﺴﺎﻣﺢ ﻟﻠﻤﺮاھﻢ اﺳﺘﻌﺪاد ﻏﯿﺮ ﻣﺰﻋﺞ‪ .‬أدﺧﻠﺖ اﻟﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة اﻟﻤﺴﺘﺨﺮﺟﺔ و اﻟﻤﺮاھﻢ ﻋﻠﻰ اﻟﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﻧﺸﺎطﮭﻢ‬
‫اﻟﻤﻀﺎد ﻟﻠﻤﯿﻜﺮوﺑﺎت ﻓﻲ اﻟﻤﺨﺘﺒﺮ ﺿﺪ ﺛﻼﺛﺔ ﺳﻼﻻت ﻣﻦ اﻟﺒﻜﺘﯿﺮﯾﺎ اﻟﻤﺴﺒﺒﺔ ﻟﻸﻣﺮاض وﻧﻮع واﺣﺪ ﻣﻦ اﻟﺨﻤﯿﺮة ‪ ،‬ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام‬
‫طﺮﯾﻘﺔ اﻻﻧﺘﺸﺎر ﻣﻦ ﻗﺮص ﺻﻠﺐ‪ .‬ﻛﺎن رد ﻓﻌﻞ ﻛﻞ ﻣﻨﮭﺎ اﯾﺠﺎﺑﯿﺎ ﻋﻠﻰ اﻷﻗﻞ ﻋﻠﻰ واﺣﺪ ﻣﻦ اﻟﺴﻼﻻت اﻟﻤﯿﻜﺮوﺑﯿﺔ اﻟﺘﻲ ﺗﻢ‬
‫اﺧﺘﺒﺎرھﺎ‪ .‬اﻟﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة ﻣﻦ ﻧﻔﺲ اﻟﻨﺒﺎت أظﮭﺮت ﺗﺤﺪﯾﺪ ﻧﺸﺎط ﻣﺨﺘﻠﻒ ‪،‬و أظﮭﺮت اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ ﻷوراق‬
‫اﻟﻐﺎر ﻗﻮة ﻧﺸﺎطﮭﺎ ﺿﺪ اﻟﻤﯿﻜﺮوﺑﺎت اﻟﻤﻘﺎوﻣﺔ ﻟﻠﻤﻀﺎدات اﻟﺤﯿﻮﯾﺔ اﻟﻤﺘﻌﺪدة‪.‬‬
‫ﻛﻠﻤﺎت اﻟﺒﺤﺚ‪ :‬اﻟﻐﺎر ‪ ،‬دراﺳﺔ ﻧﺒﺎﺗﯿﺔ‪ ،‬اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ‪،‬اﺧﺘﺒﺎر اﻟﺘﺴﺎﻣﺢ‪ ،‬وﻧﺸﺎط ﻣﻀﺎدات اﻟﻤﯿﻜﺮوﺑﺎت‪.‬‬
Introduction
Introduction
Les témoignages retrouvés sur les parois rocheuses, des bas reliefs de son
environnement , des poteries en terre cuite, sont la preuve que l’homme s’est depuis la nuit
des temps servi des plantes, il leur a attribué des pouvoirs magiques, puis à appris peu à
discerner leurs propriétés. Ces plantes ont constitué pour lui une source de nourriture, voire
un moyen de guérir ses maladies . [1] On a même découvert que les animaux sauvages
utilisent instinctivement certaines plantes pour se soigner ! [2]
La promotion de la phytothérapie nous permettra de sauvegarder le savoir de nos
ancêtres qui tend à disparaitre. Alors
actuellement , beaucoup de laboratoires
pharmaceutiques s’intéressent de près aux savoirs médicinaux des guérisseurs des
peuplades primitives menant une vie très proche de la nature.[3] les plantes médicinales
sont aussi un facteur économique majeur pour les pays en voie de développement.[4]
En effet, la recherche scientifique a tendance à ce focaliser sur l’exploration de ces
substances qui constituent une alternative prometteuse aux anciennes substances d’origine
synthétique, dont l’usage s’accompagne des effets secondaires indésirables. Face à cette
situation préoccupante, d’énormes efforts sont consentis dans le domaine de la recherche
médicale en vue de trouver de nouvelles molécules naturelles actives efficaces et non
toxiques pouvant être substituées aux antibiotiques.
Alors, les substances naturelles comme les molécules bioactives issues des végétaux
suscitent actuellement un intérêt tout particulier par leurs multiples activités biologiques
(antibactérienne et antioxydante) tant appréciées dans le domaine de la santé humaine et de
l’industrie alimentaire, pharmaceutique ou cosmétique.[5]
En effet, une plante est dite médicinale lorsque l’un de ses organes par exemple la
feuille, possède des activités pharmacologiques pouvant conduire à des emplois
thérapeutiques.
Les plantes en général, se caractérisent par deux types de métabolismes qui englobe
l'ensemble de la fonction, primaire et secondaire fournissant deux types de métabolites
respectivement primaires en quantités élevées ( sucre, lipides, protéines ) et secondaires en
faible quantités mais de plus en plus grande importance qui ont été par la suite exploitées
par l'homme pour le rôle bénéfique dans un large éventail d'application.
Les huiles essentielles ou les essences, font partie de ce groupe de métabolites secondaires
et sont synthétisées et sécrétées par l’intermédiaire de cellules ou organes particuliers dans
lesquelles elles restent localisées. [ 6]
L’extraction de ces huiles essentielles est certainement la phase la plus délicate et la plus
importante du processus. Elle a pour but de capter les produits les plus subtils et les plus
fragiles élaborés par le végétal.
A cet effet, la région de la méditerranée, compte tenu de sa forte biodiversité végétale,
offre un potentiel en substances naturelles considérable. Environ 25000 espèces y ont été
retrouvées dont certaines sont largement consommées et appréciées comme traitement de
1|P a ge
Introduction
nombreuses pathologies. De fait, l’exploration de ces ressources végétales en vue d’établir
des bases scientifiques justifiant cette médication semble nécessaire.
Les méthodes d’exploration et d’exploitation des matières végétales ont connu des
progrès spectaculaires quant à l’extraction et la purification de leurs principes actifs, ainsi
le passage de leur emploi sous leur forme brute à des extraits concentrés et purifiés ont
permis d’en intensifier l’effet.
Parmi les pays méditerranéen, l’Algérie, qui possède une position géographique
particulière lui accordant une large bande de végétation très variée notamment les plante
aromatique médicinales. En Algérie, la phytothérapie est une pratique très ancienne. La
connaissance empiriques se sont transmises verbalement à travers les générations et se sont
enrichies grâce à la situation géographique stratégique bien connue du l’Algérie.
Cependant, jusqu’à présent, seul le coté botanique de cette biomasse a été largement
documenté, ses propriétés biologiques ne le sont que peu. A cet effet, et dans le cadre de la
valorisation de la flore Algérienne, on s’est intéressé aux espèces de la famille des
Lauracées.
Laurus nobilis est une plante abondante choisie de cette biomasse végétale en raison du
bénéfice des propriétés thérapeutiques que lui a attribuées la médecine traditionnelle, a
savoir: les industries de l’aromatisation, de la parfumerie, de la conservation, des
cosmétiques et de la pharmacologie grâce à ses divers effets antimicrobiens et
antioxydants.
C’est dans un cadre de contribution à la valorisation de notre patrimoine végétal que
nous avons jugé nécessaire d’identifier les principales classes des composés secondaires
de laurus nobilis L . La présente étude a pour objectif principal la valorisation de cette
plante ( laurus nobilis ) provenant de la région de BLIDA, par une étude
pharmacognosique de ses différentes parties sous l’évaluation de ses activités biologiques
liées aux composés détectés .
Cette étude comporte deux parties essentielles. Une partie relative à l’étude
bibliographique et une autre partie réservée à l’étude expérimentale, par conséquent dans
la partie bibliographique, nous présenterons un bilan bibliographique des connaissances
botaniques des Lauracées, en particulier l’espèce Laurus nobilis L., localisation ,
composition, utilisation….etc.
Ensuite, la partie expérimentale abordera l’analyse de la matière première, l’étude
phytochimique ( screening phytochimique ), l’extraction et l’identification des huiles
essentielles et la formulation des pommades thérapeutiques, à savoir l’évaluation de leurs
activités antibactériennes ( c.-à-d. huiles essentielles et pommades ) .
Enfin, une conclusion générale qui résume l’ensemble des résultats obtenus.
2|P a ge
Aperçus
bibliographique
Chapitre I
La pharmacognosie du
laurier noble.
Chapitre I
La pharmacognosie du laurier noble
I.1. Etude pharmacognosique :
La pharmacognosie ( officiel depuis 1969,CSP) ; science multidisciplinaire, au
carrefour de toutes les disciplines scientifiques et pharmaceutiques .C’est l’étude de la
composition et des effets des principes actifs contenus dans des matières premières
d’origine naturelle, animale ou végétale, cette étude étant le plus souvent limitée
seulement aux végétaux et produits issus des végétaux. Longtemps utilisé pour définir
l’étude des principes actifs d’origine végétale.
Les objectifs de cette étude sont :
·
Connaitre les principales matières premières d’origine végétale utilisées telles quelles
ou pour l’extraction de certain de leur constituants ;
·
Connaitre pour chacune de ces matières premières l’origine, l’identité, morphologie,
les modes de production et leur influence sur la composition chimique, les activités;
·
Pour les principes actifs majeurs utilisés en thérapeutique, connaitre les activités
pharmacologiques, leur
métabolisme, leur
pharmacocinétique, leurs effets
secondaires et les contre-indications ainsi que les propriétés physicochimiques
(stabilité , solubilité , extractibilité , structure, réactivités,….) ;
·
Comprendre l’usage de ces drogues ou de ces substances naturelles ( indications,
contre indication, effets secondaires, interactions médicamenteuses,…) en médecine
allopathique ou homéopathique, humaine ou vétérinaire; [7,8]
3|P a ge
Chapitre I
Historique :
Laurus nobilis est un arbre connu dans la mythologie grecque et romaine comme un
emblème de la victoire et le succès (Leung et Foster, 1999).Son nom commun viendrait du
celte lauer (semper virens) selon certains ou du latin laus, louange, pour souligner les
propriétés médicinales de la plante, déjà louées dans l’Antiquité. Le Laurus était consacré
à Apollon,le dieu grec de la lumière, et un symbole de paix et de la victoire utilisé pour
faire des couronnes des empereurs, des généraux, et les poètes.On pensait que, en le
mâchant, on obtiendrait le don de la prophétie. Selon Pline, le laurier était une plante
sacrée dédiée à Dionysos et à Jupiter, peut-être parce qu’on disait que les foudres
l’épargnaient. Selon Suétone, Jules César portait toujours une couronne de laurier (on
pense que c’était pour masquer sa calvitie).À Rome, on croyait que le dessèchement de
l’arbuste annonçait un désastre. À la même époque, les feuilles de laurier été à la fois un
médicament et une épice. Pendant les saturnales, des fêtes célébrées au mois de décembre,
le feuillage était tressé en guirlandes. En infusion, ses feuilles étaient consommées pour
leurs effets révulsifs et toniques sur l’estomac et la vessie ; sous forme de cataplasme,
elles passaient pour soulager les piqures de guêpe ou d’abeille. Au 1er siècle de notre ère,
le médecin grec dioscoride notait que l’écorce de laurier «brise les pierres(dans les reins)
et soulage les affections du foie ».
En Grèce ancienne, l’oracle de delphes utilisait le laurier dans ses rituels de divination.
Dans la Grèce antique, les vainqueurs des jeux olympiques ont été décorés avec des
couronnes de laurier, et ces feuilles est devenu un symbole immortel de la victoire et de
courage. Lorsque les médecins grecs ont terminé leurs études, ils ont été couronnés de
branches de laurier appelé lauris baca, et qui plus tard a donné naissance au baccalauréat
terme, qui désigne l'accomplissement d'un degré.Dans les temps bibliques, la baie était le
symbole de la richesse et de la méchanceté. En plus l'huile de laurier ou du beurre, obtenu
à partir des fruits (baies) de laurus nobilis est un ingrédient essentiel de la pommade
Laurin, une médecine populaire pour les rhumatismes et la goutte et pour le traitement de
la rate et maladies du foie. Il trouve également application en médecine
vétérinaire.[9,10,11,12,13,14]
I.3. Espèce :
Laurus nobilis L.
Laurier commun , laurier-sauce, laurier noble .
Nom latin du laurier, du celtique blaur = toujours vert. [9,11,15]
I.4. Famille :
Laurier (Laurus nobilis. L) est une plante à importance médicinales et aromatiques, qui
appartient à la famille des Lauraceae (Lauracées),famille botanique importante souvent
aromatiques, ses espèces peuvent être reconnues par leur odeur aromatique.Celle-ci
comprennent 32 genres et environ 2000-2500 espèces,dont certaines produisent des huiles
essentielles appréciées, comme la canelle, les sassafras, le camphrier, le laurier .
Les Lauraceae sont l'un des plus importants tropicales familles ligneuses (Gentry, 1988).
Des études récentes ont révélé une étroite relation entre ses genres, tous sont dioïque et la
plupart ont inflorescences ombelle sous-tendu par bractées. [16,17,18,19,20,21,22,23,24]
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Chapitre I
I.5. Dénomination internationale : Laurus nobilis L.[9, 11, 17,25, 26,51]
Tableau 1 : dénomination internationale de laurus nobilis
Francais
laurier sauce, laurier d’Apollon , laurier commun, laurier franc, laurier noble .
Allemand
Anglais
Lorbeersamen, lorbeer, lorbeerbaum, gewürzlorbeer .
laurel oil, sweet bay, bay tree, bay, bay laurel, true laurel, roman laurel, noble
laurel.
olio di alloro.
louro.
rand, habb r’ar
taselt , rend
Italien
Portugais
Arabe
Nom targui ou berbère
I.6. Autres espèce de laurus nobilis :
L’espèce se subdivise en plusieurs variétés qui se différencient selon la forme des
feuilles et la taille des fruits ; leurs usages culinaires sont cependant strictement non
identiques.[25]
Tableau 2 :Autres espèces du laurier noble ( laurus nobilis ).
Nom vernaculaire
Nom scientifique
Famille
Laurier-amande
Laurier benzoin
Laurier-cerise
Laurier d'Alexandrie
Laurier de Californie
Laurier des bois
Laurier des Iroquois ou pavame
Laurier du Portugal
Laurier rose
Laurier-tin ou lauretin
Laurier sassafras
Prunus laurocerasus L.
Lindera benzoin L.
Prunus laurocerasus L.
Danae racemosa
Umbellularia californica
Daphne laureola L.
Sassafras albidum
Prunus lusitanica L.
Nerium oleander L.
Viburnum tinus L.
Sassafras officinalis Nees
Rosacées
Lauracées
Rosacées
Liliacées
Lauracées
Thyméléacées
Lauracées
Rosacées
Apocynacées
Caprifoliacées
Lauracées
I.7. Classification botanique :
La classification botanique est relatée dans le tableau 3.[11 ]
Tableau 3. Classification botanique du laurus nobilis L.
Règne
Plantae
Sous-règne
Tracheophyta = Tracheobionta
(Cormophyta)
Magnoliophyta
Magnoliopsida
Laurales
Lauraceae
Laurus
Laurus nobilis L.,
Division
Classe
Ordre
Famille
Genre
Espèces
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Chapitre I
I.8. Caractérisation botanique et morphologie :
Le laurier noble est un arbre généralement dioique (à sexe
séparé),de 2 à 10m de la hauteur atteignant parfois une hauteur
de 15-20m(20 à 30 pieds) aux branches dirigées vers le haut,
et toujours verts qui pousse sauvages ou cultivées. [27,28,29,30,
31,32,33]
Figure1 : arbre de laurus nobilis.[34]
· Les feuilles :
Les feuilles sont persistantes, alternes,allongées à lancéolées,
d’environ 10 cm de long sur 3 à 5 cm de large ; elles se terminent en pointe des
2 cotés et sont courtement pétiolées ; leur limbe est glabre, entier, souvent
légèrement ondulé et épaissi sur les bords, recourbé vers l’intérieur,d’un vert
foncé. Si la feuille a une couleur brun-vert, il est trop âgés et est amer, sans
arôme.La feuille de laurier a une saveur forte, épicé, amer, piquant et de
refroidissement nuances. Lorsque la feuille entière séchée est cuit dans les aliments,
son arôme est libérée lentement et devient plus intense. [9, 12,25, 26,28,35, 36]
Figure 2 :feuilles de laurus nobilis. [34]
· Les fleurs :
Les fleurs sont petites odorantes en forme d'étoile à la fin du
printemps de couleur blanchâtres à jaune, les fleurs sont groupées à l’aisselle des
feuilles en petits bouquets en forme d’ombelles axillaires ou en courts
panicules.Elles sont enfermées dans un involure formé de bractées caduques à 4
dents (lobes) ; les fleurs males possèdent généralement 8 à12 étamines, dont la
plupart sont stériles, elles portent en leur centre une glande nectarifère, les fleurs
femelles portent 4 staminodes (étamines stériles), un ovaire courtement pétiolé et
divisé en 3 loges, et un stigmate court et émoussé. La floraison à lieu du mars à
mai. [12,25, 28,36,37]
Figure 3:fleurs de laurus nobilisL. [34]
· Les fruits :
charnue )
fruits ou baies de laurier (baies globuleuse,drupe aromatique
ressembler à une petite olive avec la forme ovale ou ellipsoïde. Les
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fruits sont de couleur vert au début et violet au noir profond à maturité
(Septembre). Les fruits secs sont drupacé,ovoïdes , d'environ 15 mm à 2cm de long
et 10 mm de large .La surface extérieure est glabre, brillant,presque noir et est
grossièrement ridé en raison de la contraction de la région étroite succulentes sous
l'épiderme.Il est constitué, de l’extérieur à l’intérieur, par le péricarpe (ou la
chair), le mésocarpe(ou la peau), l’endocarpe(ou noyau interne). Les baies restent
sur la plante tout l’hiver, parfois jusqu’au printemps, pouvant coexister avec la
nouvelle floraison.[9, 11, 12,18, 25,26, 28,35,37,38]
Figure 4 :fruits de laurus nobilis L. [34]
I.9. Répartition géographique :
Cette famille qui est principalement tropical, se trouve dans la région méditerranéene en
particulier dans la (Turquie, Grèce, Espagne,Italie, France).
Figure 5: la région Méditerranéene [34]
Le laurier est aussi largement cultivé dans les pays arabes de la Libye au
Maroc.Actuellement cette espèce, sauvage ou cultivées, est présent dans le sud et l'ouest de
l'Europe, et aux Etats-Unis comme plante ornementale. Il pousse spontanément dans la
garrigue
et
les
bois
en
Europe
et
autour
de
la
Méditerranée.
[9,14,19,27,28,37,39,40,41,42,43,44,45]
I.10. Répartition géographique en Algérie :
Dans les forets et ravins humides. Commun dans le tell algérois et constantinois.[15]
I.11. Pays d’origine : Il s’agit probablement de l’Asie mineure,bien que l’espèce se
rencontre aujourd’hui dans l’ensemble des pays méditerranéennes, dans l’ex-Yougoslavie
ainsi qu’en inde.[ 11,25, 46]
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I.12. Culture :
Laurus nobilis L. ,est un arbre abondant dans différents environnements il est cultivé
dans de nombreuses régions tempérées, subtropical et chaudes et à haute précipitations du
monde. Cette plante se rencontre aussi fréquemment dans des conditions semi-arides ,il
répondre au déficit hydrique et de s'adapter à la sécheresse grâce à de nombreux
changements physiologiques et biochimiques (Impa et al., 2005).La plante nécessite de
grandes quantités d'eau pendant la première année de l'établissement des plantes.La plante
préfère les sols perméables, riches en nutriments et en humus, situés dans des
endroits protégés du vent et très ensoleillés. Le sol tourbeux riche et abondamment avec
de l'eau et l'atmosphère humide sympathique près de la côte de la mer sont des conditions
favorables à une croissance rapide et luxriant .[ 9,10, 19, 29, 39, 31,47,48]
I.13. Récolte :
Récolté les feuilles et les jeunes branches , en été, les baies en octobre, novembre à leur
maturité complète, c-à-d lorsqu’elles commencent à ce détacher d’elles même.[49]
I.14. Séchage :
HAMROUNI Ibtissem, et d’autres chercheurs tunisiens en 2010,ont étudiés les
changements qualitatives et quantitatives dans l’HE de laurier noble affecté par différentes
méthodes de séchage et les résultats ont montrés que le séchage par l'air à température
ambiante et le séchage par infrarouge à 45°C présentent un rendement en HE plus
élevé.[27] D’autres part le séchage par l’étuve à 45°C et le séchage par l’air à température
ambiante n’ont causés pratiquement aucune perte de substance volatiles par rapport à
l’herbe fraiche.[50,51]
I.15. Conservation :
Les feuilles fraiches se conservent quelques jours dans un sac plastique ou bien roulées
dans un papier absorbant légèrement humide, au réfrigérateur . Les feuilles sèches peuvent
être stockées dans des récipients hermétiques (en porcelaine, en verre ou en métal), à
l’abri de l’humidité et de la lumière. Des feuilles séchées et conservées trop longtemps
prennent une teinte rougeâtre à la lumière. Une fois pulvérisées, elles perdent rapidement
leur caractère aromatique.[25,52]Les changements dans la composition des huiles
essentielles à partir des graines de laurier ont été étudiés au cours du stockage dans
l'obscurité et la lumière. Dans ces conditions, l'huile essentielles de laurier a conservé sa
composition pour 12 moi, puisque celle-ci a retenu une composition constante au cours du
stockage dans l'obscurité et la lumière. La résistance des composants d'huile de laurier à
l'oxydation est probablement associée à la présence de substance individuels ou combinés
dont les effets de stabiliser le potentiel redox du système.Probablement, terpinenes et
d'autres composés stabilisent le système de l’huile essentielle et inhibent l'oxydation des
substances réactives.[47]
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Chapitre I
I.16. Composition chimique :
Il a été signalé que la composition chimique de l'huile essentielle des feuilles, des tiges
et des fruits du Laurus nobilis sont différents les uns des autres dans une certaine
mesure.[43]
La composition chimiques des differents parties du Laurus nobilis L. est montionés dans
les tableaux 4,5,6,7,8 suivant :
Tableau 4: composition chimique des feuilles du laurus nobilis L.
Composition chimique des feuilles du Laurus nobilis L.
Composés chimiques
-Alcaloides isoquinoléiques
Types
de type aporphine et nor-aporphine (~0,1%),(+)-boldine , (+)actinodaphnine, (+)-cryptodorine, (+)-isodomesticine, (+)launobine, (+)-nandigérine, N-(+) méthylactinodaphnine, (+)néolitsine et (+)-réticuline.[25, 53,54]
-Les composés phénoliques
Compositionflavonoïdique
Kaempférol
(dix-huit flavonoïdes) des flavonoïdes non-polaires les flavones
libres(apigénine et lutéoline), les flavonols(kaempférol, la
quercétine et myricétine), la rutine - 3 ', 4' ,5,7tetrahydroxyflavone 3-rutinoside (rutine) -3,3 ', 4',5,7pentahydroxyflavone [25,53,55,56,54]
kaemperol 3-O-[2'', 4''-O-di-Ep-coumaroyla-Lpyranorhamnoside] ; 3,3', 4',5,6,7, 8-heptamethoxyflavone ;3',
4',5,6,7,8-hexamethoxyflavone (nobiletine) ; 4',5,6,7,8pentamethoxyflavone (tangérétine). [56,57]
Dérivés acylés du kaempférol 3-rhamnosides et 3-arabinosides du kaempférol,les kaempférol3-glucoside, 3-galactoside.
La quercétine et myricétine
Tanin
l’isoquercitrin, l’hypéroside, le quercétine-3-arabinoside [25,56]
Cathéchines,proanthocyanidines, (-)-épicatéchine et B2
procyanidine, encore (+) - catéchine, (+)-gallocatéchine, (-)épigallocatéchine, procyanidine B4, B5 et B7.
Proanthocyanidines [15,25, 55,56]
-Un principe amer et
mucilage, [15]
-Des matières résineuses et
pectiques,[15]
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Chapitre I
-Glycoside et ses aglycone
-Hétérosides de lignanes
- Anthraquinones et
Coumarines[10,11,33,58,59]
-les lactones
sesquiterpenoid
-Huiles volatiles
-La vitamine E ou alphatocophérol,[ 10,25, 54,65]
-Acides phénylacrylique et
phénolcarbonique,
D-glucose et L-rhamnose, les glycosides megastigmane, Dglucopyranosides, les disaccharides, RL-arabinofuranosyl-A-Dglucopyranosides, vicianocides.[41,59,58,60]
(+)-5'-méthoxyisolaricirésinol-9'-O-xyloside,(+)-5'sécoisolaricirésinol-9'-O-xyloside et schizandraside.[25]
Eremanthine ; C zaluzanin ; zaluzanin D ; reynosine,
déhydrocostuslactone ( teneur jusqu’à 65%) costunolide(
jusqu’à 35%) artémorine, érémanthine, désacétyllaurénobiolide, laurénobiolide, santamarine et verlotorine.[25,
54, 57,61]
1,8-cinéole (teneur entre 12 et 71%) et ses dérivés le 2,3déhydro-1 ,8-cinéole, sobrerols et menthadien-8-ols et linalool(6
à 30%),p-cymène( 0 à 20%), α-phellandrène(0 à 20%), géraniol
( 0 à 20%), eugénol( traces à 19%), acétate de linalyle ( 1 à
16%),α-pinène (2 à 16%), sabinène ( 4 à 13%),acétate d’αterpényle ( 0 à 12%), méthyleugénol ( eugénol-méthylméther, 2
à 12%), α-terpinéol (7 à 9%), β-pinène (3 à 5%) et terpinéol-4
(1 à 5%); ils sont accompagnés également de camphène, citral,
myrcène et γ-terpinène avec β-élémène l'acétate d'eugénol, le
carvacrol, primeverosides l’éthers des acides acétiques
isobutyrique et valérianique….etc. [15, 25, 29,42, 62,63,64,60]
libres ou estérifiés, on trouve aussi d’autres acides comme les
acides p-coumarique,férulique, sinapique, gentisique et
vanillique.[25,60]
Tableau 5: composition chimique des fleurs du laurus nobilis L.
Composition chimique des fleurs du laurus nobilis L.
Composés chimiques
-L'huile essentielle
Types
Outre le 1,8-cinéole et les pinènes,les principales composantes
dans l’huile essentielle des fleurs ont été α-eudesmol, β-élémène
et β-caryophyllène,l'ocimène E, le viridiflorène, le
germacradiénol et le germacrène D. [42,53,63]
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Chapitre I
Tableau 6 : composition chimique des tiges du laurus nobilis L.
composition chimique des tiges du laurus nobilis L.
Composés chimiques
-Monoterpènes, les
volatiles sesquiterpènes.
Types
1,8 cinéol et de l'eugénol,dehydrocostunolide ,α-pinène, βpinène, camphène, sabinène, terpinylacetate et
eugenolmethylether .[28]
Tableau 7 : composition chimique des fruits du laurus nobilis L.
Composition chimique des fruits du laurus nobilis L.
Composés chimiques
Types
Les fruits contiennent à la fois
les huiles fixes et volatiles.
Huile fixe de 17-30% (cette
l’huile est d'un vert foncé,
granulés, mélange de lard
comme fondant à 40°C, à un
fluide visqueux d’arome fort et
caractéristique, composé d'une
graisse semi-solide). [11,15,
29, 51]
Une variété de matières grasses
sont présents,
Cholesterol
10,0mg/kg
Composition en stérol :
mg/kg
[18,66]
2,4-methylenecholesterol 2,1 mg/kg
mg/kg
Campesterol
162 mg/kg
Campestanol
6,7 mg/kg
L'huile extraite des fruits Stigmaterol
16,9 mg/kg
contiennent des acides gras,
mg/kg
Clerosterol
27,7 mg/kg
Fraction saponifiable
mg/kg
[11,18]
Fraction insaponifiable
Acide caprique C10:0
1,3
Acide laurique C12:0
30,0
Acide myristique C14:0 0,8
Acide palmitique C16:0 14,7
Acide palmitoléique C16:1 0,2
Acide stéarique C18:0
0,8
Sitostanol
14,5
5-Avenosterol 80,5
7-Stigmaterol ND
7-Avenosterol ND
Eritrodiol
10,0
Sistosterol
1818
Acide oléique C18:1
22,1
C18:1 trans
1,0
Acide linoléique C18:2 25,6
Acide linolénique C18:3 1,1
Acide eicosénoique C20:1 0,5
( Acide arachidique)
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Chapitre I
L'huile essentielle des
baies ,
Les lactones sesquiterpéniques costunolide et déhydrocostuslactone, stérols, cires, vitamines et composés volatils,la
cyanidine Vasapollo 3-O-glucoside (41%) et la cyanidine 3-Orutinoside (53%) 23% d’amidon, 2% de sucre, 0,85% de
principes amers, une résine, du mucilage, de la bassorine,
anthocyanes la cyanidine. L’huile extraite contient un
pourcentage plus élevé avec un contenu en chlorophylle
supérieur à celui de l’huile extravierge d’olive.Cependant, la
vitamine E a été isolé à partir des fruits.[10,11,15,37]
Comprennent : b-ocimène (22%), le 1,8-cinéole (9,5%),
bicyclogermacrene (4,5%), et b-élémène (2%) sont les
principaux composés volatils dans les baies. trans-ocimène et
germacrène L’huile contient aussi les lactones sesquiterpéniques
costunolide et déhydrocostuslactone. [11,37,42,63,66]
Tableau 8 : composition chimique des racines du laurus nobilis L.
Composition chimiques des racines du laurus nobilis L.
Monoterpènes et de sesquiterpènes oxygénés. Les racines contenait le plus de flavonoïdes avec une
teneur de(11,12 mg équivalents catéchine), tannins condensés(9,76 - 0,1mg CE/gps). Composés
phénoliques totaux (55,45 - 2,9 mg GAME / g ps) . [10,53]
Figure 6 : composition chimiques de certains composants du Laurus nobilis L.
12 | P a g e
Chapitre I
I.16.1. Etude comparative de la composition chimique des huiles de
laurus nobilis de différents origines :
I.16.1.a Feuilles de laurus nobilis :
La composition chimique de l'huile essentielle des feuilles, obtenus à partir de
différentes méthodes d'isolement, ont été largement étudiés par de nombreux
chercheurs.Dans tous les cas, le 1,8-cinéole est le principal composant avec des
pourcentages compris entre 10 et 71%. D'autres composés sont présents en quantités
appréciables .En règle générale, le rendement et la composition de l'huile varie en fonction
de l'origine, la période de collecte, et le stade de croissance de la plante.[ 16,25,27]
Tableau 9 : Composition de l’huile essentielle des feuilles de laurier noble de différentes
origines.
Origine
Géographique
Jordan
Italy
Turky(A :Antaka
Y :Yayladagi,
S :Samandagi)
Turkey
(Izmir)
Italy (Calabria)
Morocco
Iran
(Tehran)
Croatia
Algérie
Tunisie
Constituants chimiques identifiés
α-pinene (5,82 %), sabinène ( 6,92%),β-pinene (4,55 %), 1,8-cinéol (40, 91%), αterpinenyl acetate (5,86%), humulene epoxide II (5,85%) . [67]
α-pinene (3,1 %), sabinène ( 8,2%),β-pinene (3 %), 1,8-cinéol(52,6%) , linalool(7,2%),
α-terpineol (3,1%), α-terpenylacetate (8%), methyl eugenol (3,2%).[68]
α-pinene (3,66 A- 2,19 Y- 2,61 S %), sabinène (14,05 A- 7,83 Y- 8,70 S %), 1,8-cinéol
(46,61 A- 47,63 Y- 59,94 S %), α-terpineol (6,83 A- 1,43 Y- 1,94 S %), α-terpenylacetate
(11,94 A- 25,70 Y- 16,33 S %), methyl eugenol (1,95 A- 3,39 Y- 0,41 S %).[43]
α-pinene (4,9 %), sabinène ( 6,8%),β-pinene (3,6 %), 1,8-cinéol(56,7%), α-terpineol
(7%), α-terpinen 4-ol (2,5%).[69]
Eudesmol(3,903 %), costunolide ( 2,342%),ermanthin(5,186 %), vitamine E (9,031%),
α-terpinyl acetate (7,145%), methyl eugenol (2,908%).[12]
α-pinene (3,71 %), sabinène ( 6,13%),β-pinene (3,14 %), 1,8-cinéol(52,43%), α-terpinyl
acetate (8,96%), limonene (5,25%).[39]
1) α-pinene (2,73 %), sabinène ( 5,44%),β-pinene (2,44 %), 1,8cinéol(27,58%),linalool (4%), 1,4-terpineol (4,20%), α-terpinyl acetate
(20,62%),eugenol (2,64%), methyl eugenol (9,72%),caryophyllene oxide
(2,29%).[70]
2) α-pinene (5,26 %), sabinène ( 3,42%),β-pinene (4,06 %), 1,8cinéol(55,80%),linalool (1,4%), terpinene-4-ol (5,27%), α-terpinyl acetate
(15,14%), β-cymene (2,70%).[71]
α-pinene (2,1 %), sabinène ( 5,7%), 1,8-cinéol(45,5%),linalool (8,5%), camphor (2,1%),
terpinen-4-ol (2,1%), α-terpinyl acetate (9,1%),eugenol (2,5%), methyl eugenol
(10%),trans-caryophyllene (2,1%).[72]
α-pinene (2,7 %), sabinène ( 4,6%), β-pinene (2,1 %), 1,8-cinéol(16,3%), linalool
(10,9%), α-cadinol (1,2%), α-terpineol (2,6%), α-terpinyl acetate (16,6%),eugenol
(2,5%), methyl eugenol (11%),(E)-caryophyllene (6,4%), elemicin (2%),caryophyllene
oxide(4,4%),δ-cadinene (1,4%).[30]
α-pinene (2,9 %), sabinène ( 7,2%), β-pinene (2,5 %), 1,8-cinéol(32,1%), linalool (2,1%),
α-cadinol (1,1%), α-terpineol (2,3%), α-terpinyl acetate (15,6%),eugenol (2,5%), methyl
eugenol (10,6%),(E)-caryophyllene (2,9%),elemicin (1%),caryophyllene oxide(tr),δcadinene (1,1%).[30]
13 | P a g e
Chapitre I
Italy ( Matera )
Germany
Egypte
Sicile
β-pinene (3,57%), sabinène ( 5,30%), 1,8-cinéol(24,84%),linalool (14,46%),linalylacetate
(2,02%), α-terpineol (3,38%), terpineol acetate (12,36%),eugenol (5,6%), methyl eugenol
(10,09%).[73]
α-pinene (3,9 %), sabinène ( 7,6%),β-pinene (3 %), 1,8-cinéol(32,1%), α-terpinyl acetate
(6,5%), limonene (2,5%).[63]
1,8-cinéole( 37,6%), p-cymène( 19,8%),acétate d’α-terpényle(7,1%),myrcène(4,7%), βpinène(3,7%), terpinéol-4(3,7%),α-terpinéol (3,5%) et linalol(2,8%).[25]
1,8-cinéole ( 46,5%), acétate d’α-terpényle ( 11,8 %), sabinène ( 7,3%),α-pinène (5,7 %),
β-pinène( 4,3%) et terpinéol-4 (2,4%).[25]
I.16.1.b Les fleurs de laurus nobilis :
Outre le 1,8-cinéole et les pinènes, les principales composantes dans l’huile essentielle
des fleurs ont été α-eudesmol, β- élémène et β -caryophyllène .
La composition chimique de l'huile essentielle de fleur est tout à fait différent des autres
parties de la plante, les feuilles,la tige (Fiorini et al. 1997).[9,42,63]
Tableau 10 : Composition de l’huile essentielle des fleurs de laurier noble de différentes
origines .
Origine
géographique
Germany
α-pinene (5,1%), camphene ( 2,4%),β-pinene (3,7%), 1,8-cinéol(8,8%), (E)- β-ocimene
(2,7%),bornylacetate (2,1%), β-elemene (5,4%),(E)- β-caryophyllene (5,1%),germacrene
D (2,4%), bicyclogermacrene (2,2%),α-eudesmol (11,8%).[63]
France
(toulouse)
Ocimene E(8%) , β-elemene(9,7%) ,β-caryophyllene (10%) , germacrene D, viridiflorene
(12,2%), germacradienol (10,1 %) ,α-eudesmol. [42,53]
I.16.1.c Les baies de laurus nobilis :
Tableau 11 : Composition de l’huile essentielle des fruits de laurier noble de différentes
origines .
Origine
géographique
Allemagne
Tunisie
Turky
A :Antakya,
Y :Yayladagi,
S :Samandagi
α-pinene (3,3 %), β-pinene (2,1 %), 1,8-cinéol(9,5%),(E)- β-ocimene(22,1%), β-elemene
(2%), bicyclogermacrene D (4,5%),costunolide (2,9%).[63]
α-pinene (10,3 %), sabinène ( 2,1%),camphene (3,8%),β-pinene (5,8 %), 1,8cinéol(8,1%),(Z)-β-ocimene (3%),(E)- β-ocimene(23,7%), linalool(4,2%), bornylacetate
(2,1%), α-terpinylacetate (3%), β-longipinene (6,8%),méthyl eugenol(1%), (E)caryophyllene (1,9%),germacrene D (1,8%), α-bulnesene (2,7%), trans-cadinene (2,1%), δcadinene (3,9%), spathulenol (1,4%), α-cadinol (1,1%).[18]
α-pinene (16,55 A- 11,31 Y- 6,82 S %), sabinène (6,03 A- 4,55 Y- 5,65 S %), 1,8cinéol(18,08 A- 11,06 Y- 17,37 S %), β-pinene (12,83 A- 11,06 Y- 7,87 S %), αphellandrene (15,87 A- 10,58 Y- 13,28 S %),trans-β-osimen (11,88 A- 19,89 Y- 28,35 S
%), β-elemene (3,06 A- 4,46 Y- 2,68 S %), α-terpinylacetate (4,10 A- 4,88 Y- 3,67 S
%),germacrene-A (2,81 A- 4,35 Y- 3,17 S %).[43]
14 | P a g e
Chapitre I
I.17. La variation saisonnière :
Les variations saisonnières ont également été observées dans la composition chimique
du laurus nobilis .[42] L’étude réalisé par Mohammadreza et Verdian-rizi décrit la
composition de l'huile essentielle des parties aériennes du Laurus nobilis dans différents
stades de croissance. Et les résultats obtenus par cette étude montre que le moment de la
récolte de cette plante n'a pas un effet majeur sur la composition chimique de l'huile
essentielle mais il a des effets sur la teneur en huile essentielle de la plante et la floraison
est le meilleur moment pour la récolte de la plante et l'obtention de l'huile essentielle.
[16,74,75] En outre, le meilleur temps de la récolte pour obtenir les huiles essentielles les
plus actifs pour Laurus nobilis (Lauraceae) est à Septembre.[76,77]
I.18. L’huile essentielle du laurus nobilis :
Les feuilles de Laurus nobilis donnent une huile jaune connu pour de nombreuses
indications thérapeutiques.Le principale composant de l’huile de laurier est le 1,8-Cinéole.
[16]
I.18.1 Eucalyptol (1,8-cinéole) :
1,8-cinéole (1,8-époxy-p-menthane), un éther de monoterpènes cycliques, ce composé
est populairement connu comme eucalyptol (Hervé et al., 2003). Les cineoles, possédant
des activités biologiques importantes (surtout pour le traitement des maladies des voies
respiratoires) sont volatils,symétrique monoterpenique éthers cycliques. Ce sont souvent
trouvés en tant que composants d'huiles essentielles de plantes aromatiques. Le1,8-cinéole
a un parfum frais et camphrée caractéristique et un goût âcre . [78,79,80]
Figure 7 : formule développée d’eucalyptol
I.18.1.a Biosynthese du 1,8-cinéole :
Figure 8 :Biosynthese des monoterpenes (1,8-Cinéole). [81]
15 | P a g e
Chapitre I
I.18.1.b Synthèse chimique :
Les cineoles peuvent être préparés synthétiquement par traitement des fractions de
terpènes ou de l'isoprène avec des acides minéraux, habituellement de l'acide sulfurique.
Les réarrangements de terpinéols et terpine catalysée par les acides minéraux est une
procédure connue pour la fabrication des cineoles, toutefois, les informations pertinentes
sont rares. Ces méthodes utilisent de très grandes quantités d'acides minéraux par substrat
et le résultat dans des mélanges complexes contenant des quantités relativement faibles de
1,4 - et 1,8-cinéole, avec d'autres produits tels que menthadiènes, cymènes et terpinènes.
Habituellement, le montant de 1,8-cinéole dans le final des mélanges ne dépasse pas 15%,
avec 1,4-cinéole
≤ 35%. Il est une préoccupation grave pour l'environnement sur ces
méthodes en raison de la formation d'une grande quantité de déchets. Par conséquent, le
développement d'une synthèse propre de cineoles est une tâche difficile.[80]
I.19. Laurus nobilis, propriétés pharmacologiques et recherche en cours :
Laurus nobilis est une plante d'importance industrielle utilisé comme matières
premières dans de nombreux domaines, y compris les parfums, cosmétiques,
aromathérapie, phytothérapie et de la nutrition (Buchbauer, 2000).En raison d’utilisation
large des feuilles, des baies et leurs huiles essentielles, ils ont été largement étudiés
(Caredda et al. 2002 , Kilic et al. 2004). Néanmoins, le bois et l'écorce ont des composés
volatils peu étudiés. Les graines, les feuilles et les racines sont utilisées, mais les graines
sont les plus actifs en médecine et la partie normalement appliqués. [18,28,39, 63]
I.19.a .Comme additif dans l’industrie alimentaire :
Les feuilles et les graines du laurus nobilis sont utilisés comme des épices précieuses et
aromatisantes dans les industries alimentaires (Conforti et al,2006). Elles servent
d’aromate dans les cuisines. Elles forment un ingrédient essentiel du mélange d'herbes
''Bouquet Garni''(Ozcan & Chalchat, 2005). [10,12,15, 27, 32, 45, 63,69,82]
I.19.b .Effets fumigènes et insecticides :
Treize huiles essentielles dont ceux du Laurus nobilis ont été examinées sous leurs
formes de vapeur contre une espèce d’insectes attaquant les produits stockés,
Acanthoscelides obtectus (bruche du haricot). Les résultats ont indiqués que l’huile
essentielle des feuilles du Laurus nobilis a une action répulsive, réduit la fécondité,
diminue la couvaison d’oeufs, augmente la mortalité larvaire de nouveau-né .(Papachristos
et Stamopoulos, 2002). Une étude similaire a été réalisée par Erler et ses collaborateurs
(2006), où l’huile essentielle extraite à partir du feuillage frais du Laurus nobilis a été
examinée pour son activité répulsive contre les femelles adultes d’une espèce de moustique
(Culex pipiens), cette huile a montré un degré de répulsion intéressant contre ces parasites
vecteurs de plusieurs maladies comme la malaria, fièvre jaune, dengue, encéphalite…etc.
[83,84] Récemment, il ya un intérêt croissant pour l’utilisation probable des extraits de
plantes comme solution de rechange aux insecticides synthétiques. [42, 68,71, 72,85, 86,
87, 88]
16 | P a g e
Chapitre I
I.19.c.Propriétés antirhumatismales :
Comme une plante médicinale, les feuilles,les baies de laurier ont été utilisées comme
un remède contre les douleurs rhumatismales.[ 10,29,45, 63,89] L'huiles grasses provenant
du fruit est utilisé aussi en usage externe pour le traitement des furoncles,des entorses, des
contusions. [12,33]
I.19.d.Utilisation en parfumerie et cosmétique :
En outre, l’huile essentielle des feuilles est employée par l’industrie cosmétique
en parfumerieet dans la fabrication des savons[26,29]. Les baies sont
généralement utilisés dans la production du savon parfumé (pour l'acné
et le traitement des pellicules) et de la fabrication des bougies à
cause de leur teneur élevée en acide gras.[17,28,43]Il est également
Figure 9: savon à base de
utilisé par l'industrie cosmétique dans les crèmes.[12,26,27]
l’huile du laurus nobilis
I.19.e.Effet inhibiteur d’enzyme :
Ferreira et ses collaborateurs (2006) ont été étudié l’effet de l’huile essentielle, l’extrait
d’éthanol et la décoction des feuilles du Laurus nobilis sur l’activité de
l’acétylcholinestérase (AChE),enzyme qui catalyse l’hydrolyse de l’acétylcholine donnant
la choline et l’acétyle. La fraction d’éthanol a montré une valeur élevée d’inhibition
d’AChE de 64% (1g/ml), donc la plante Laurus nobilis peut aider à traité ou soulager des
patients souffrant de la maladie d’Alzheimer, puisque les drogues approuvées pour la
thérapie de cette maladie agissent en contrecarrant le déficit d’acétylcholine.[90]
I.19.f. Propriété anti hémorroïdal :
L'huile essentielle obtenue à partir des feuilles de cette plante a été utilisée pour
soulager les hémorroïdes.[ 39, 75] Comme une crème a base de l’huile de laurier en
application externe pour les hémorroïdes.[26]
I.19.g. Effet curatif de blessures :
L’effet curatif de blessures de l’huile de feuille du Laurus nobilis a été examiné par
Khalil et ses collaborateurs (2007). Une blessure en pleine épaisseur a été faite dans le
secteur dorsal des souris Mus musculus. Les blessures ont été traitées quatre fois avec la
préparation d’huile pendant deux jours successifs. Cette opération est répétée pendant
plusieurs jours avec 12 h d’intervalle. Après le 16ième jour, les animaux ont été sacrifiés et
l’histologie du secteur de blessure est examinée. L’huile de Laurus nobilis a montrée une
bonne activité curative de blessures.[59] Une autre étude réalisé par Nayak S et al. en 2006
dont l' objectif était d'examiner l’extrait aqueux du Laurus nobilis pour évaluer leur activité
de cicatrisation chez les rats.Les données de cette étude ont indiqué que l'extrait du laurus
nobilis possède une activité de cicatrisation et il peut être utilisé pour traiter différents
types de blessures chez les êtres humains aussi.[33]
17 | P a g e
Chapitre I
I.19.h. Contre les troubles digestifs ou effet gastroprotectif:
Les feuille de laurier est traditionnellement utilisée comme analgésique pour traiter une
variété de plaintes, les névralgies et les crampes intestinales et encore parfois d'être
apprécié pour son effet bénéfique sur le système digestif.[91] Des études récentes ont
montré que les feuilles et l'huile essentielle obtenue à partir des feuilles favorise
l’augmentation de la sécrétion gastrique . Une seule étude a été réalisée à ce sujet par
Gϋrbϋz et autres (2002) où cinq plantes aromatiques dont Laurus nobilis, sont employées
traditionnellement en Turquie pour traiter le mal d’estomac. Ils ont été choisis pour
déterminer leur pouvoir anti-ulcèrogène. Une décoction et un extrait méthanolique ont été
préparés à partir des fruits de Laurier pour déterminer leurs effets sur un modèle d’ulcère
gastrique induit par l’éthanol chez des rats. Les expériences pharmacologiques et les
techniques histopathologiques ont clairement montré que ces extraits donnés oralement ont
significativement protégé l’estomac contre ce modèle d’ulcère. [11,12,16,28]
I.19.i. Effet anticonvulsive :
L’huile essentielle des feuilles de Laurus nobilis a été évaluée pour l’activité
anticonvulsive contre des saisies expérimentales, l’huile a protégé des souris contre des
convulsions toniques, induites par électrochoc maximal et particulièrement par
pentylènetétrazol. Aux doses d’anticonvulsivant, l’huile essentielle a produit la sédation et
relâchement du coeur. Les composants responsables de cet effet peuvent être le cinéol,
eugénol et le méthyle eugénol mais d’autres études sont exigées avant que toutes
conclusions puissent être tirées. [92]
I.19.j.Diminution du glucose plasmatique :
Les feuilles du Laurus nobilis, ont été rapporté d'avoir un effet antidiabétique et de
renforcer en glutathion S-transférase hépatique (TPS). L'administration de 200 et 600
mg/kg de doses de l'extrait éthanolique des feuilles de laurus nobilis produit une
diminution significative de la glycémie chez les lapins diabétiques.[93]L'objectif d’une
autre étude était de déterminer si les feuilles de laurier peuvent être important dans la
prévention et / ou l'atténuation de diabète de type 1.Cette étude démontre que la
consommation des feuilles de laurier, 3 g / j pendant 30 jours, diminue les facteurs de
risque pour le diabète et les maladies cardiovasculaires et suggère que les feuilles de laurier
peuvent être bénéfique pour les personnes diabétiques de type 1. [82, 94]
I.19.k. Propriété antifongiques :
Les aspects de l'activité antifongique de l'huile essentielle de laurier obtenue au moyen
d'un dioxyde de carbone supercritique (SFE-CO2) contre les champignons , ont été étudiés
dans le travail de recherche réalisé par U. De Corato et al.(2010) ; dans leurs essais
expérimentaux des tests effectués sous conditions in vitro et in vivo. Cette étude a
démontré que l'huile essentielle du laurus nobilis est un agent potentiel et prometteur
antifongique qui pourraient être utilisés comme fongicides botaniques dans le post-récolte
de protection des pêches et kiwis contre M. laxa et B. cinerea .[73, 95] Des études in vitro
ont été réalisées pour tester l'activité antifongique d’extrait de Laurus nobilis réalisée avec
18 | P a g e
Chapitre I
de l'eau froide distillée ou l’eau distillée en ébullition sur deux champignons pathogènes,
Alternaria alternata et Fusarium oxysporum. Les résultats ont révélé que l’extrait de la
plante,en particulier celle effectuées avec l’eau distillée froide avait une forte activité
antifongique significative avec l'inhibition de la croissance des 2 champignons testés. [96]
Les résultats d’autres études ont confirmés que les extraits du laurus nobilis peuvent être
utilisés comme fongicide naturel pour lutter contre les champignons pathogènes, réduisant
ainsi la dépendance sur les fongicides synthètique.[ 54,68,97,98, 99,100]
I.19.l.L’activité anti-bactérienne :
L’huile essentielle de laurier noble constituent une riche source de composés
biologiquement actifs. Il ya eu un intérêt accru pour la recherche des propriétés
antibactériennes des extraits de cette plante aromatique ( laurier noble ), en particulier
l’huile essentielle . L’activité antibactérienne de l' huile essentielle des feuilles du Laurus
nobilis a été étudié par divers chercheurs contre plusiers souches bactériennes
(Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius , Klebsiella pneumoniae……).Et les
résultats ont montré une activité bactéricide très efficace.[ 32, 39, 75, 91,101, 102] Dans la
recherche de Lawrence and Palombo ,l'huile essentielle du laurier noble a été étudié pour
identifier l’activité contre les spores Bacillus subtilis (ATCC 6051). Les résultats ont
indiqué que l’huile exposée présente un certain niveau d'activité sporicide après 24 h .
Toutefois , pour déterminer si l'acidité d’huiles essentielle a été responsable de leurs
activités, le pH de l’huile a été déterminé, indiquant que le caractère acide de l'huile
essentielle n’étaient pas responsable de l’effets sporicide.[103] Luna-Herrera et al. ont
montré que l'activité antimycobactérienne contre des isolats de M.tuberculosis résistantes
aux médicaments cliniques était meilleure pour le mélange ( HE de laurier noble) que pour
des composés purs (fraction de deux lactones sesquiterpéniques).[104]
En outre, 24 extraits aqueux, d'éthanol, de butanol, d'hexane, de chloroforme et de
méthanol des feuilles, écorces, fruits et fleurs de Laurus nobilis ont été testés pour leur
activités anti-bactériennes . L'activité supérieure était celle de l'extrait d'écorce aqueuse
contre Staphylococcus aureus résistant (25 mm) par rapport à la pénicilline G (33 mm).
Une activité modérée anti-bactérienne des fleurs, des fruits et des extraits de feuilles contre
Klebsiella pneumoniae (Gram négatif) et Salmonella typhimurium a été également
enregistrée. Les valeurs des CMI pour les bactéries étaient relativement élevés, ce qui est
compréhensible puisque nous traitons avec des extraits bruts.Les résultats d’une étude
semblable montrent que les extraits éthanolique des feuilles de laurier noble, par exemple,
présentent un large spectre d’activité antibactérienne contre P. aeruginosa (17 mm de
zone d'inhibition) par rapport à la tétracycline (15 mm).[ 61,105,106, 107,108,109]
I.19.m. Activité antioxydante:
Ces dernières années, il a été intérêt croissant à trouver les antioxydants naturelle à
partir des plantes pour une utilisation dans les aliments et les matières médicinales pour
remplacer les antioxydants synthétiques. Depuis ces antioxydants sont restreints en raison
de leurs effets secondaires tels que la cancérogénicité. [10, 54, 56, 64,72] Le but de travail
de Ahmed M. Emam et al. était d'examiner l'activité antioxydante in vitro des feuilles du
Laurus nobilis . L’extrait éthanolique (70%) du Laurus nobilis a été exposé au balayage
19 | P a g e
Chapitre I
radicalaire contre le 1,1-diphényl-2-picrylhydrazyle (DPPH). Dans cette étude, ils ont
constaté que les feuilles du Laurus nobilis sont des sources potentielles des composants
antioxydants qui permettrait d'accroître la capacité antioxydante de l'organisme et lui
protègent contre la peroxydation lipidique ou utilisés comme additifs alimentaires pour
retarder la détérioration des aliments.[45] D’autre part l’activité antioxydante de l’extrait
méthanolique des feuilles, des fruits et d’écorce du Laurus nobilis a été étudié au niveau de
la peroxydation de lipide (LP) dans les liposomes, induite par le système Fe+2/ascorbate et
mesuré spectrophotométriquement à 533nm. Le résultat à montré que l’extrait de
recherche possédait une activité antioxydante. [101, 110, 111,112]
I.19.n .Action diurétique :
L’extrait aqueux des feuilles de laurier sauce est utilisé dans la médecine
traditionnelle turque en tant que diurétique.[75] Ils sont également largement utilisés en
médecine populaire pour traiter les troubles urinaires et les pierres .[27] Les fruits sous la
forme d'une infusion presente des propriétés diurétiques.[12]
I.19.o . Effet cytotoxiques :
Parmi trois extraits testés préparés à partir des fleurs, des feuilles et des fruits du Laurus
nobilis, l'extrait le plus cytotoxique active contre l'ovaire lignée de cellules cancéreuses qui
a été trouvé est l'extrait des fruits avec une inhibition de 98%. Ils ont réalisé l’isolement et
l’identification des composés des feuilles et des fruits du Laurus nobilis supposés être
cytotoxique. Ils ont isolé six lactones sesquiterpènes connue et un nouveau sesquiterpène le
lauroxepine, ces substances actives se sont avérées fortement cytotoxiques contre la lignée
cellulaire ovarienne cancéreuse A2780. [113]
Dans l’étude J.Z. Al-Kalaldeh et al. (2010) , les épices sélectionnées utilisés en Jordanie
ont été analysés chimiquement et étudiés pour leur activité anti-proliférative à
l'adénocarcinome de la lignée cellulaire du sein (MCF7). Les activités antiprolifératives
des huiles volatiles et les extraits bruts d'éthanol et d'eau ont été évalués en utilisant le test
B Sulphorhodamine.Les extraits bruts d'éthanol de laurier noble ont montré une activité
anti-proliférative de cellules MCF7 avec IC50 (24,49 pg / ml).[ 48,67, 114,115]
I.19.p.L'activité anti-inflammatoire :
L'extrait éthanolique (80%) des feuilles de laurier séchées, administré par intubation
gastrique à des rats à une dose de 100,0 mg / kg, a entraîné une inhibition de 19% de
l'œdème induit. L’acétate d'éthyle et l’extraits d'hexane des feuilles, appliquée
extérieurement [(TPA)-inflammation de l'oreille] sur des souris à une dose de 20,0
microlitres /animal, étaient actifs comparativement au tétradécanoyl acétate de phorbol
.[44] L'huile essentielle des feuilles du Laurus nobilis a été évaluée pour les activités
antinociceptifs et anti-inflammatoires chez les souris et les rats par un équipe iranien
.L'effet analgésique et anti-inflammatoire de l'huile essentielle a été comparable aux
antalgiques de référence et auux anti-inflammatoires: la morphine et le piroxicam. les
résultats Présentés font l'huile essentielle digne d'investigations complémentaires.( Sayyah
,Saroukhani et al.,2003).[116] L'objectif de l’étude de F. Fang et al.(2005) était d'identifier
20 | P a g e
Chapitre I
les composés des fruits et des feuilles du Laurus nobilis, qui sont responsables à l'effet
anti-inflammatoire induisant. L'isolement des composés actifs a été réalisé et six composés
ont été identifiés; ils sont tous des lactones sesquiterpènes .Ces composés possédent
différentes propriétés pharmacologiques y compris l’effet anti-inflammatoire.[117]
I.19.q . Utilisation contre l’hystérie :
Récemment cette plante fait l'objet de la recherche, les feuilles, les fruits ont été utilisés
contre l'hystérie ,le parkinsonisme, comme emménagogue et aussi pour traiter l'épilepsie.
[75]
I.19.r. Autres utilisations de laurus nobilis :
Par ailleurs, l'infusion aqueuse obtenue à partir des feuilles de laurier noble a été utilisé
pendant de nombreuses années chez les femmes européennes pour soulager les douleurs du
placenta .En outre,le laurier favorise l’apparition des règles et agir contre les règles
douloureuses.[ 13, 15, 91] L'huile essentielle obtenue à partir des feuilles du laurier noble
fourni la matière la plus élevé de protection in vitro contre la nitration de tyrosine.[118]
I.20. Usages traditionnelles et médicamenteux :
Bien que cette plante n'a pas de fonctions importantes dans la médecine traditionnelle,
ces dernières études révèlent que Laurus nobilis a suscité un intérêt renouvelé en raison
des propriétés pharmacologiques et les avantages potentiels pour la santé liés à plusieurs
composés présents dans la plante.[10,32]
I.20.a. Afghanistan : La feuille, mélangée avec de l'anis et Casuarina equisetifolia, est
inséré par voie vaginale pour induire la pregnance.[44]
I.20.b. Argentine : La décoction des feuilles séchées est pris par voie orale pour traiter
les infections des voies respiratoires et urinaires .La moitié de 1 gramme du fruit est pris
par voie orale afin d'accélérer la mise en bas. Le jus des feuilles,3-4 gouttes dans l'eau, est
prise oralement à promouvoir les menstruations.[44]
I.20.c. Angleterre : le jus du fruit est pris oralement pour stimuler les
menstruations.[44]
I.20.d. Europe : le fruit est pris oralement lors de l'accouchement pour accélérer la
délivrance.[44]
I.20.e. Grèce : l'extrait aqueux chaude des feuilles est pris par voie orale comme
contraceptive.[44]
I.20.f. Inde : L'extrait aqueux chaude des feuilles sèches est pris par voie orale comme un
emménagogue, Le fruit est pris oralement par les femmes comme une emménagogue.[44]
I.20.g. Iran : La décoction des fruits secs est pris par voie orale pour stimuler l’appétit et
aider la digestion.L’infusion de la feuille sèche est pris par voie orale comme
21 | P a g e
Chapitre I
diaphorétique, pour les crampes, l'aménorrhée et le catarrhe, et à fortes doses comme
émétique.[44]
I.20.h. Israël : l'extrait aqueux chaud des feuilles séchées, avec Ruta chalepensis, est
utilisé en perfusion intraveineuse pour les problèmes respiratoires. Le bain de vapeur des
feuilles séchées, en combinaison avec Salvia fruticosa, chalepensis Ruta et satureja
thymbra, est pris pour le rhumatisme et comme tonique générale. L'huile essentielle des
fruits utilisés en usage externe sur les plaies et pour les névralgiques. Le Drupe a
également été utilisé par la population juive de Djerba dans le traitement de la jaunisse et
les douleurs rhumatismales.[10,44]
I.20.i. Italie : l'extrait aqueux des feuilles séchées est utilisé contre les inflammations .
L'infusion est pris par voie orale pour aider la digestion .L’infusion de la feuille est pris par
voie orale comme antispasmodique pour les coliques abdominales, et comme sédatif
.L’huile essentielle est utilisée comme émollient pour les hémorroïdes.Le fruit macéré dans
l'alcool, est mélangé avec l’huile d'olive et utilisés extérieurement comme
antirhumatismale.[44]
I.20.j. Jordan : La décoction des feuilles est prise oralement comme anti-diarrhée .[44]
I.20.k. Maroc : La feuille est prise oralement pour les troubles du foie et pour l’hygiène
dentaire.[44]
I.20.l. Peru : L’extrait aqueux des fruits secs est pris par voie orale comme un stimulant
circulatoire et utilisé en usage externe pour adoucir les tumeurs et l’extrait aqueux chaud
de la feuille sèche est pris par voie orale comme un stimulant circulatoire réglementaire, et
à l'extérieur il est utilisé pour adoucir les tumeurs et les ulcers.[44]
I.20.m. Tunisie : Les feuilles séchées est pris oralement comme un tranquillisant et
utilisé en usage externe pour les problèmes rhumatismales.[44]
I.20.n. États-Unis : L’extrait des feuilles par l’eau chaude est pris par voie orale comme
un carminative, astringent. [44]
I.20.o. Turquie: Elle est utilisée en massage pour les rhumatismes et pour tuer les
parasites du corps. Les vétérinaires utilisent l'oléum (Oleum lauri, de l'huile fixe provenant
des fruits) comme analgésique. Le pétrole des baies parfois utilisé comme un liniment ou
analgésique pour les maux d'oreilles. Un savon jaune de l'oléum à traiter des affections de
la peau et la perte des cheveux. Le fruit, préparé à partir des différentes manières, est dit
pour aider les fibromes utérins, la rate et du foie, tumeurs internes et les tumeurs du l'œil.
[48]
I.20.p. Liban :
L’extrait des feuilles et des baies, utilisé comme carminatif, est
étroitement bouché et trempé dans du brandy au soleil pendant plusieurs jours. Le résidu,
après distillation ultérieure est utilisé comme un liniment pour les rhumatismes et les
entorses, le distillat comme emménagogue. Alpinistes libanais sont dit d'utiliser les baies
pour provoquer l'avortement . Les baies macérés dans de la farine ont été cataplasmes sur
22 | P a g e
Chapitre I
les dislocations.La baie contient des composés repoussant les cafards, y compris le
cinéole.(Peirce,1999) [48]
I.21. Pharmacodynamique d’huile essentielle de laurier :
Les dérivés térpéniques de l’huile essentielle du laurus nobilis, traditionnellement
utilisés comme antiseptiques des voies respiratoires, ces dérivés terpénique peuvent
abaisser le seuil épileptogène. [119]
I.22. Etude toxicologique :
Les feuilles de laurier et l'huile essentielle qu'ils ne semblent pas avoir d'effets toxiques
significatifs. Mais ces derniers peuvent provoquer des réactions de sensibilisation
(dermatite de contact allergique ) puisqu’elles renferment des lactones sesquiterpéniques
dont le principale est le costunolide.[9,120]La présence des lactones sesquiterpéniques
présentant un groupement méthyle exocyclique explique le potentiel de sensibilisation
modéré exercé par la drogue. La plante ne perd pas son caractère allergisant après cuisson
, ils peuvent donc conduire à des manifestations allergiques comme des inflammations
buccale et/ou stomacale. [25] Les études de toxicité relatives à l’huile artisanale du fruit
donnent un profil de réponse similaire à celui de l’HE des feuilles, avec une probable
hépatotoxicité dose-dépendante .[11] Il a été depuis les temps anciens utilisés à des fins
rituelles et médicinales dont les principes actifs sont distribués dans les feuilles, les fleurs,
les racines et les baies. Les principaux composés sont le 1,8-cinéole, l'eugénol et le
géraniol. Selon la dose, les symptômes neurologiques tels que des hallucinations visuelles
et auditives à des changements dans la couleur, le temps et l'espace, des convulsions, des
tremblements, léthargie, confusion, délire et la psychose peuvent apparaître qui pourrait
durer jusqu'à 2-3 jours.[121]
Attention :
Ne jamais utiliser l’huile essentielle de laurier par voie interne. Ne pas appliquer l’huile
essentielle pure sur la peau en raison des risques d’allergie.[13]
23 | P a g e
Partie
Expérimentale
24 | P a g e
Partie pratique
II. 1. Plan de travail :
25 | P a g e
Partie pratique
II.2.But et objectifs :
Le but du présent travail consiste principalement en comparaison de la composition
chimique des différentes parties du laurus nobilis L. à savoir ( les feuilles, les tiges, les
fruits, les fleurs et les racines), afin de valoriser les plantes algériennes et de développer les
recherches toutes en satisfaisant les besoins de soins de santé.
Les principaux objectifs sont :
1. Contrôle de qualité du matériel végétal ;
2. Identification et étude phytochimique des différentes parties de la plante laurus
nobilis L. ;
3. Extraction des huiles essentielles ;
4. Analyse qualitative et quantitative des extraits obtenus (huiles essentielles) ;
5. Essai de formulation des pommades a base des huiles essentielle extraites et leurs
analyses.
II.3.Matériel et méthode :
II.3.1.Matériel technique:
II.3.1.a. Verrerie et appareillage :
On a utilisé pour l’étude, le matériel suivant : Balance analytique, Becher, Fioles,
Erlenmeyer, Ballons, Cuves ,Broyeur , Mortier et pilon, Eprouvettes graduées, Entonnoirs
en verre, Papiers filtre Wattman, Flacons, Pipette et micropipettes, Pince, Règle graduée,
Bain marie , Ampoule à décanter, Réfrigérants, Supports, Tubes à essais ….. etc.
II.3.1.b. Solvant :
Eau
distillée,
Acide
sulfurique,
Methanol,
Ethanol,
Acide
chlorhydrique,
Chloroforme……etc
Caractéristiques des réactifs utilisés :
La plupart des réactifs ont été acquis
directement au près de firmes de renommées et n’ont pas nécessité de contrôle. Par contre
certains produits ont du être soumis aux méthodes habituelles de purification pour s’assurer
d’un haut degré de pureté. [122]
26 | P a g e
Partie pratique
II.3.1.c. Matériel technique pour le test d’irritation cutanée :
Tendeuse électrique , Scalpel stérile , Pansement stériles et bandes de gazes , Para film ,
Bande adhésive.
II.3.1.d. Matériel technique pour le test microbiologique :
Autoclave ,Incubateur ,Bec bunsen , Boites de pétri stériles de diamètre 90mm , Pince
stérile, Disques stériles.
II.3.2.Matériel biologique :
II.3.2.a. Matériel animal :
Espèce : lapin ;
Race : néozélandaise ;
Elevage : animalerie de l’Institut pasteur (Alger) ;
Poids :2,5 kg au moins ;
Couleur : blanche.
II.3.2.b. Souches microbiennes testées :
Les souches utilisées dans notre étude font parties de trois groupes de micro-organismes,
qui sont des pathogènes et des contaminants.
Les tests sont réalisés sur 3 bactéries et une levure, provenant essentiellement du
laboratoire de microbiologie de l’UNS de KOUBA et du laboratoire de microbiologie de
l’université d’USTHB de BAB ELZOUAR.
27 | P a g e
Partie pratique
Tableau 12 : souches microbiennes utilisés.
Nom de la
Type
Gram
Famille
Escherichia coli Bactérie
-
Enterobacteriaceae
Bactérie
-
Bactérie
+
Micrococcaceae
Levure
/
Cryptococcaceae
souche
Pseudomonas
Pseudomonadaceae
aeruginosa
Staphylococcus
aurus
Candida
albicans
# Milieu de culture utilisés :
Suivant la méthode employée dans l’essai et selon les souches choisies, nous avons utilisé
comme milieux de culture les suivants : ( Annexe IV)
a). Gélose nutritive, Gélose Muller Hinton pour les bactéries ;
b). Milieu Sabouraud pour les levures ;
c). Tween 80.
II.3.2.c. matériel végétal :
Le matériel végétale utilisé : les feuilles,
les fleurs, les tiges, les fruits et les racines
du Laurus nobilis L.
Figure10 : arbre de laurier noble.[34]
28 | P a g e
Partie pratique
II.4.Description botanique :
Le laurier noble (Laurus nobilis), objet de notre étude , appelé « Rand » en arabe. C’est
un arbre généralement dioïque, de 2 à 10m de la hauteur. L’écorce lisse et noire peut être
vert olive ou bleu rougeâtre avec des tiges courtes, lancéolées, acuminées, coriacés de 3-8
cm de large. Les feuilles sont alternes, coriaces, persistantes, elliptiques, lancéolées,
ondulées au bords. Les fleurs sont dioïques, blanchâtres, odorantes, en petites ombelles
axillaires pédonculées et involucrées et enfin les fruits sont drupacés, noir à maturité,
ovoïde de 2cm de long sur 1cm de large.
Figure 11 :différentes parties de la plante du Laurus nobilis L.( feuille, fleur et fruit ).[34]
Afin de tirer la meilleure partie des plantes médicinales, il convient de veiller à ce que
les herbes et leurs dérivés soient d’excellente qualité. Cela exige qu’elles soient cultivées
dans de
bonnes conditions, correctement séchées, bien conservée et que leur date limite de
consommation soit respectée. Le recours à des plantes de mauvaise qualité est bien souvent
une perte de temps et d’argent étant donné que vous n’en tirerez pas tous les bienfaits.
S’agissant de plantes médicinales, la qualité prime avant tout .
II.5.Récolte de laurus nobilis : La récolte des feuilles, des tiges, des fruits, des fleurs
et des racines ont été réalisé à la région de LARBA (BLIDA), durant les périodes
mentionnés au tableau suivant :
29 | P a g e
Partie pratique
Tableau 13 : période de récolte du laurus nobilis L.
Durée de la récolte
Feuille
Avril à Juin 2010, Larbaa ( BLIDA ) ;
Avril 2011 , M’SILA , TIZI OUZOU.
Tige
Avril à Juin 2010
Fleur
Mars à Avril 2011
Fruit
Juin 2011
Racine
Mai 2011,Corso (BOUMERDES)
II.5.a. Caractérisation du lieu de récolte :
Tableau 14 : caractérisation du lieu de récolte . [123, 124,125]
Région
LARBA
Wilaya
BLIDA
Distance entre Alger centre et Larba
23,57 km
Situation géographique
Sud est d’Alger
Latitude.
36.5666667°
Longitude
3.15°
DMS Latitude
36° 34 min 0.11999999999989 sec
(dégrées, minutes et secondes):
DMS Longitude
3° 9 min 0 sec
(dégrées, minutes et secondes):
Figure 12 : lieu de récolte du laurier noble ( Laraba-BLIDA ) . [123, 124,125]
30 | P a g e
Partie pratique
II.6.Séchage :
Les échantillons ont été séchées au niveau de laboratoire de synthèse pétrochimique à
l’air libre et à l’abri de la lumière et de l’humidité. Nous avons disposé de paillasses
sur lesquelles, nous avons étalé les plantes pendant quelques jours.
Figure 13 : feuille fraiche et sèche du laurier noble .
II.7.Pulvérisation :
Cette opération a été faite après le séchage des plantes récoltées.
Les
matières séchées ont
été ensuite broyer dans
un broyeur
électrique. Au préalable la plante entière a été concassée . ( voir
tableau 17 )
Figure 14: broyeur .
II.8.Conservation :
Les échantillons ont été conservées jusqu’au moment de l’utilisation dans des bouteilles
en verre à l’abri de la lumière.
31 | P a g e
Partie pratique
Tableau 15: les différents états du laurus nobilis L.
Parties du
laurus nobilis L.
Matières séchés
Matières concassés
Matières broyés
Feuille
Fleur
Tige
Fruit
Racine
32 | P a g e
Partie pratique
II.9.Identification de la matière première :
II.9.a. Etude botanique :
Le laurier , utilisé dans cette étude a été identifier par le département de botanique, de
l’institut national d’agronomie d’Alger comme étant le laurus nobilis L.
Ordre : Laurales
Famille : Lauracées
Genre : Laurus
Espèce : Laurus nobilis L.
II.9.b. Caractères morphologiques :
·
Les feuilles sèches de Laurus nobilis sont de couleur
brunâtre ,aromatique et
légèrement amer.
·
Les racines sèches de Laurus nobilis sont de couleur brunâtre , non aromatique .
·
Les fleurs sèches de Laurus nobilis sont de couleur jaune brunâtre ,aromatique.
·
Les tiges sèches de Laurus nobilis sont de couleur gris à brunâtre .
·
Les
fruits sèches de Laurus nobilis sont de couleur noires ,aromatique et
légèrement amer.
II.9.c. Caractères microscopiques :
Laurus nobilis , feuille à structure bifaciale :
La feuille des végétaux vasculaires est un organe généralement aplati, ce qui lui confère
une symétrie bilatérale. Les feuilles sont exclusivement portées par la tige.
La vascularisation de la feuille est assurée par les nervures qui sont issues des "traces
foliaires" émises par le cylindre central de la tige au niveau des noeuds. La nervure
principale fait généralement saillie à la face inférieure de la feuille, on dit parfois, de façon
abusive, la face ventrale. Mais les feuilles n'ont ni dos ni ventre et le caractère "supérieur"
ou "inférieur" des faces n'est pas discriminant : si leur position physiologique la plus
fréquente chez les Dicotylédones est d'être aplaties dans un plan perpendiculaire à
l'allongement de la tige qui les porte, les exceptions sont nombreuses.
33 | P a g e
Partie pratique
La feuille de Laurus nobilis
Un épiderme fortement cutinisé est présent sur les deux faces mais les stomates
n'existent que sur la face abaxiale (3). On qualifie cette disposition des stomates
d'hypostomatique (on dira épistomatique pour des feuilles dont les stomates sont sur la face
adaxiale et amphistomatique lorsque les stomates sont sur les deux faces).
En dehors de la nervure principale le mésophylle présente une structure bifaciale typique
(3). Sous l'épiderme de la face adaxiale se reconnaît un parenchyme palissadique formé de
deux assises cellulaires. Chez les Dicotylédones ce parenchyme qui recèle quelque 80 %
des chloroplastes est le lieu privilégié de la photosynthèse.
Du côté de la face abaxiale, le parenchyme est de type lacuneux, dans lequel s'ouvrent les
chambres sous-stomatiques. De grosses cellules sécrétrices d'essence se rencontrent dans
ces deux types de parenchyme (1, 3).
Le cordon vasculaire de la nervure principale est à symétrie bilatérale, en forme de
croissant dans la concavité duquel se reconnaissent de nombreux pointements de xylème,
désignant la face adaxiale ; des massifs de phloème leur sont superposés. Entre les deux, le
cambium libéro-ligneux a produit des files de formations secondaires : bois adaxial et liber.
Cette lame vasculaire est entourée d'un manchon de sclérenchyme.
Cet ensemble est rigidifié par du collenchyme ; celui de la face adaxiale, sous l'épiderme,
donne un bon exemple de collenchyme rond (2).
34 | P a g e
Partie pratique
Figure 15: Images de coupe transversale de feuille de laurus nobilis L.(Laurier noble) et
schéma conventionnel correspondant.[126]
II.9.d. Caractères organoleptiques :
La poudre des feuilles de Laurus nobilis est de couleur vert vif, d’odeur aromatique
forte , piquante et de saveur astringente .
La poudre des tiges de laurus nobilis est de couleur jaune marron .
La poudre des fleurs de laurus nobilis est de couleur jaune vert, d’odeur aromatique.
La poudre des fruits de laurus nobilis est de couleur marron , d’odeur aromatique forte.
La poudre des racines de laurus nobilis est de couleur jaune marron.
35 | P a g e
Partie pratique
II.10.Contrôle du matériel végétal :
Afin d’assurer la qualité de la drogue végétale, celle-ci a été soumise à une série de tests :
II.10.1.taux d’humidité :
Principe :
Voir annexe I ( Dosage de l’eau par entrainement azéotropique ).
Mode opératoire :
Dans un ballon séché, introduire 200 ml de toluène et environ 2 ml d’eau . Distiller
pendant 2 h, laisser refroidir 30 min et noter le volume d’eau à 0,05 ml près. Introduire
ensuite 20g de la matière végétale dans le ballon. Chauffer légèrement pendant 15 min en
assurant une ébullition régulière. Lorsque le toluène commence à bouillir, distiller à la
vitesse de 2 gouttes/seconde environ jusqu’à ce que la plus grande partie de l’eau soit
entrainée, puis augmenter la vitesse de distillation jusqu’à 4 gouttes par seconde. Lorsque
toute l’eau a été entrainée, rincer l’intérieur du réfrigérant ascendant par le toluène.
Continuer à distiller encore pendant 5 min. arrêter le chauffage et laisser refroidir le tube
collecteur à température ambiante. Après séparation de l’azéotrope noter le volume d’eau
recueillie.
La teneur en eau a été calculée comme suit :
W=(
−
)/m *100
W : taux d’humidité ou teneur en eau (%).
m : masse de l’échantillon (g).
:volume d’eau recueillie dans la première distillation (ml).
:volume d’eau recueillie à l’issue des deux distillations (ml).
La teneur en eau doit être inférieure ou égale à 10%. [127]
Résultat et discussion :
36 | P a g e
Partie pratique
Tableau 16:le taux d’humidité dans les différentes parties du laurus nobilis L.
Echantillons
m (g)
W (%)
Normes
Poudre de feuille de laurus nobilis
20
2,5
3,90
7
< 10%
Poudre de tige de laurus nobilis L.
20
2,5
3,25
3,75
< 10%
Poudre de fleur de laurus nobilis L.
20
2,5
3,80
6,5
< 10%
Poudre de baie de laurus nobilis L.
20
2,5
3,40
4,5
< 10%
Poudre de racine de laurus nobilis
20
2,43
2,71
1,4
< 10%
(ml)
(ml)
L.
L.
variation du taux d'humidité
pourcentage d'humidité ( % )
7
6
5
4
3
2
1
0
Feuille
Tige
Fleur
Fruit
Racine
Figure 16: variation du taux d’humidité dans les différentes parties du laurus nobilis L.
Discussion :
Les résultats obtenus montrent clairement que la drogue possède une teneur en eau,
inférieure à 10% dans ses différentes parties, d’où les échantillons sont bien conservés .
II.10.2.perte a la dessiccation :
Principe :
Voir annexe I ( Perte à la dessiccation )
37 | P a g e
Partie pratique
Mode opératoire :
Peser rapidement 1g de la matière végétale dans une capsule à fond plat de diamètre 50
mm et de 30 mm de hauteur .Dessécher dans l’étuve à 100-105°C durant 02 h .Placer
dans un dessiccateur contenant du gel de silice anhydre. Laisser refroidir puis peser.[127]
La perte en masse a été calculée suivant la formule suivante :
PD=(P1-P2)/P1 *100
PD :perte a la dessiccation (%).
P1 :poids initial de l’échantillon (g).
P2 :poids de l’échantillon après séchage (g).
Figure 17: dessiccateur
Figure 18: Etuve
Résultat:
Le résultat est reporté dans le tableau 17.
Tableau 17:résultats de perte à la dessiccation.
Echantillons
P1(g)
P2(g)
PD(%)
Normes
Poudre des feuilles de laurus nobilis L.
1,0083
0,9235
8.41
< 10%
Poudre des tiges de laurus nobilis L.
1,0102
0,9590
6.05
< 10%
Poudre des fleurs de laurus nobilis L.
1,0018
0,9131
8.85
< 10%
Poudre des baies de laurus nobilis L.
1,0025
0,9306
7.17
< 10%
Poudre des racines de laurus nobilis L.
1,0006
0,9476
5.29
< 10%
38 | P a g e
Partie pratique
variation de la perte à dessiccation
8.41%
10
6.05%
Feuille
7.17%
5
8.85%
Tige
5.29%
Baie
0
Feuille
Racine
Tige
Diagramme
Baie
Racine
Fleur
Fleur
Figure 19 : variation de pourcentage de la perte à dessiccation dans les différentes parties
du laurus nobilis L.
Discussion :
Le résultat obtenu, montre que la poudre des feuilles, tiges, fleurs, fruits et racines ont
perdu presque ; 8.41, 6.05, 8.85, 7.17, 5.29% respectivement de leurs poids massique lors
de la dessiccation. Les résultat sont tous inférieur à 10%, d’où on peut déduire que ces
résultats sont conformes aux normes exigées par la pharmacopée européenne . [128]
II.10.3.Dosage des cendres :
IV.10. 3.1.Cendres totales :
Principe :
Voir annexe I ( Dosage des cendres totales).
Mode opératoire :
Chauffer au rouge un creuset de porcelaine pendant 30 min. Laisser refroidir dans un
dessiccateur contenant du gel de silice anhydre, puis peser. Introduire dans le creuset 1g de
la drogue pulvérisée. Dessécher pendant 1 h à 100-105°C, puis incinérer dans un four à
moufle à une température de 600 ± 25°C jusqu’à masse constante. [127]
La masse résiduelle a été déterminée comme suit :
CT=( PF-PV )/PE * 100
CT : cendres totales (%).
PV : poids vide du creuset (g).
PE : poids de la prise d’essai (g).
PF : poids final du creuset (g).
39 | P a g e
Partie pratique
Résultat :
Tableau 18 : résultats des cendres totales.
Echantillons
L.
PV (g)
PE (g)
PF (g)
CT (%)
Normes
19,3930
1,0000
19,4330
4
< 6%
21,5990
1,0030
21,6330
3,38
< 6%
12,2357
0,9735
12,2536
1,83
< 6%
22,8011
0,9748
22,8255
2,50
< 6%
12,2358
0,9730
12,2735
3,87
< 6%
Poudre de racine de laurus nobilis
L.
II.10.3.2.Cendres sulfuriques :
Principe :
Voir annexe I ( Dosage des cendres sulfuriques).
Mode opératoire :
Chauffer un creuset de porcelaine à 600 ±50°C pendant 30 min. Laisser refroidir dans un
dessiccateur sur du gel de silice et peser. Placer ensuite 1g de la matière pulvérisée.
Humecter la matière avec une quantité suffisante de H2SO4 dilué (environ 1M) et chauffer
lentement jusqu’à carbonisation complète de la matière. Après refroidissement, humecter
le résidu avec un peu de H2SO4 dilué au demi, chauffer de la même manière jusqu’à ce
qu’il n’y ait plus de dégagement de fumées blanches. Calciner ensuite à 600 ±50°C jusqu’à
incinération complète du résidu. Laisser refroidir le creuset dans un dessiccateur, puis
peser. [127]
Résultat :
Tableau 19 :résultats des cendres sulfuriques.
Echantillons
Poudre de feuille de laurus nobilis L.
Poudre de racine de laurus nobilis L.
PV (g)
19,3970
20,3320
53,2567
53,2567
22,1227
PE (g)
1,0000
1,0010
0,9770
0,9509
0,9970
PF (g)
19,4560
20,3720
53,2785
53,2875
22,1726
CS (%)
5,90
3,99
2,23
2,97
5,00
Normes
< 6%
< 6%
< 6%
< 6%
< 6%
II.10.3.3. Cendres chlorhydriques (cendres non solubles dans l’acide chlorhydrique) :
Principe :
Voir annexe I ( Dosage des cendres chlorhydriques).
40 | P a g e
Partie pratique
Mode opératoire :
Dans le creuset, ajouter au résidu obtenu, lors de la détermination des cendres sulfuriques
ou totales,15 ml d’eau et 10 ml d’HCl à 10%. Recouvrir d’un verre de montre et faire
bouillir doucement pendant 10 min. Filtrer le résidu et laver à l’eau très chaude. Dessécher
et incinérer jusqu’au rouge sombre. Laissez refroidir au dessiccateur et peser dans le
même creuset. [127]
Résultat :
Tableau 20 : résultats des cendres chlorhydriques.
CC(%) Normes
0,10
< 0,5 %
Echantillons
Poudre de feuille de laurus nobilis L.
PV (g)
19,3930
PE (g)
1,0000
PF (g)
19,3940
21,5980
1,0030
21,5990
0,09
< 0,5 %
12,2357
0,9735
12,2364
0,07
< 0,5 %
22,8011
0,9748
22,8019
0,08
< 0,5 %
12,2358
0,9730
12,2378
0,20
< 0,5 %
pourcentage des cendres ( % )
6
5
4
cendre totale
3
cndre sulfurique
2
cendre chlorhydrique
1
0
feuille
tige
fleur
fruit
partie traitée du laurus nobilis
racine
Figure 20: pourcentage ( % ) des cendres dans les différents parties de laurus nobilis L.
Discussion :
41 | P a g e
Partie pratique
Les résultats obtenus des cendres totales, sulfuriques et chlorhydriques, indiquent, d’une
part, une faible teneur en substances minérales (≤ 6 %), et d’autre part une très faible
contamination par la poussière ou le sable (≤ 0.5 %).
On remarque à partir de la figure 20 que les cendres sont plus élevés dans les racines, les
tiges et les feuilles par rapport aux fleurs et fruits ( mais dans les normes ).Cela explique
que les racines, les tiges et même les feuilles sont faiblement contaminés par la poussière
ou le sable, ce qui exige le lavage de ces parties avant leurs séchages.
D’après la figure on remarque aussi que pour toute les échantillons , le pourcentage des
cendres sulfuriques est le plus élevé , suivie par le pourcentage des cendres totales et le
pourcentage des cendres chlorhydriques est le plus faible.
II.10.4. Indice de gonflement :
Principe :
Voir annexe I ( principe de l’indice de gonflement ).
Mode opératoire :
Dans une éprouvette graduée à bouchon rodé, de 20 cm de hauteur sur 20 mm de
diamètre, introduire 1g de drogue pulvérisée. Humecter la drogue avec 1ml d’alcool et
ajouter 25 ml d’eau. Agiter énergiquement toutes les 10 min pendant 1 h. Laisser reposer
pendant 3h. Mesurer le volume occupé par la drogue. Effectuer 3 essais
simultanément.[127]
L’indice de gonflement est donné par la moyenne des 3
essais.
IG = ( V1+V2+V3) /3
Les plantes à mucilages possèdent un indice de gonflement
supérieur ou égale à 10. [127]
Figure 21 : calcule du l’indice de gonflement.
Résultats:
42 | P a g e
Partie pratique
Tableau 21 : résultats de l’indice de gonflement .
Echantillons
L.
V2 (ml)
5,3
V3 (ml)
4,8
IG
4,93
4,3
5,4
5,5
5,06
5
5
5
5
9,5
9,75
10
9,75
5
6
5,5
5,5
V1 (ml)
4,7
Valeur de l'indice de gonflement
12
10
8
6
4
2
0
feuille
tige
fleur
fruit
racine
Figure 22 : résultats de l’indice de gonflement .
discussion
L’indice de gonflement des feuilles, des tiges, des fleurs, et des racines est presque
identique (5 à 6) , mais pour les fruits est plus ou moins supérieur ( 9 à 10 ) .
L’indice de gonflement indique une valeur proche de 10 seulement pour les fruits du
laurus nobilis , ce qui montre la présence de mucilages dans les fruits du laurus nobilis L.
43 | P a g e
Partie pratique
II.10.5. Dosages de certaines substances extractibles :
II.10.5.a. Substances extractibles par l’éthanol à 80% :
Introduire dans un erlenmeyer 1g de poudre puis 20ml d’éthanol à 80%, laisser macérer
pendant 24 heures à la température du laboratoire après avoir fermer à l’aide d’un verre de
montre . Filtrer avec du papier filtre. Peser le bécher vide (m).
Mettre le filtrat dans ce bécher, évaporer à sec et peser le bécher avec le résidu (m’).
P.E : prise d’essai. [129, 130, 131]
×
Substance extractible par l’éthanol à 80% =
.
II.10.5.b. Substances extractibles par l'eau :
Pour déterminer le pourcentage de substances solubles dans l’eau, nous avons réalisé
une décoction pendant 15 mn d’un gramme de poudre dans 20 ml d’eau distillée. Ensuite
laisser refroidir et filtrer sur un papier filtre.
Transvaser le filtrat dans une capsule préalablement tarée (m) et placer dans l’étuve pour
l’évaporation à sec. Peser de nouveau la capsule (m’). Les substances extractibles par l’eau
ont été évaluées par la formule . Avec P.E : prise d’essai . [129, 130, 131]
Substance extractible par l’eau =
×
.
Résultats :
Tableau 22: résultats de recherche des substances extractible par l’eau et par l’éthanol.
Rendement (%)
Extraits
Feuilles
Eau
Ethanol
5.68
6.81
Fleurs
/
/
Tiges
Fruits
5.5
9.95
4.39
20.32
Racines
/
/
44 | P a g e
Partie pratique
II.11.Screening chimiques :
Pour identifier la composition en métabolite secondaire présent dans la plante du
laurus nobilis, un screening chimique est fait. La colorimétrie et la gravimétrie ont
été les deux principales voies d’identification de ces groupes de substances en
solution. Il s’agit principalement des alcaloïdes, des flavonoïdes, des hétérosides
cardiotoniques , des quinones, des saponines et des tanins .
Pour notre travail, le screening s’est effectué sur les feuilles, les tiges, les fleurs, les
baies et les racines de la plante laurus nobilis L. Cet examen est effectué soit sur la
poudre du broyat de la plante sèche soit sur son extrait (infusé).
Réactions de caractérisation (Détermination
de
quelques
substances
biologiques
actives dans la drogue végétale) :
II.11.1.Détermination des alcaloïdes dans la drogue végétale :
Extraction :
Introduire 10g de poudre végétale à analyser dans un erlenmeyer de 250ml, ajouter
100ml d’acide sulfurique à 10%, puis boucher l’erlenmeyer.
Agiter et laisser macérer pendant 24 heures à la température du laboratoire. Filtrer et laver
de façon à obtenir 50ml de filtrat.
Réactions de précipitations
Introduire 1ml de filtrat dans un tube à essais , ajouter cinq gouttes de réactif de
Dragendorff. En laissant reposer 10 minutes. En présence d’alcaloïde , le réactif de
dragendroff , donne un précipité rouge-orange. [129, 130, 131]
Réaction caractéristique :
Résultats :
45 | P a g e
Partie pratique
Tableau 23: résultats de la recherche des alcaloïdes.
Groupes chimiques
Partie unitaire
Résultat
feuilles
+
tiges
+
fleurs
+
baies
+
racines
+
alcaloïdes
N.B. : +++ :très abondant ; + : présent ; - :absent
Détermination du pourcentage en alcaloïdes :
Schéma d’extraction et de la détermination du pourcentage en alcaloïde totaux.
Introduire 3g de poudre à étudier dans un erlenmeyer de 250 ml contenant 25ml d’acide
sulfurique dilué à 10% et 5ml d’eau distillée. Boucher, agiter et laisser macérer à la
température du laboratoire pendant 24 heures. Filtrer et compléter à 50ml avec de l’eau
distillée.
Alcaliniser par l’ammoniaque jusqu’à odeur (pH : 8 à 9). Ajouter du chloroforme (CHCl3),
agiter sans former d’émulsion et après décantation, soutirer la phase organique. Faire cette
opération 3 fois au total (20ml de CHCl3 la première, 20ml la deuxième et 10ml la
troisième fois).Recueillir les phases organiques dans un erlenmeyer, sécher sur sulfate de
sodium anhydre et filtrer dans une capsule au préalable pesée. Evaporer au bain-marie
jusqu’à sec et repeser la capsule. [132]
46 | P a g e
Partie pratique
Drogue pulvérisée 3g
Macération 24 heures dans 25 ml
d’H2SO4 et 5 ml d’eau distillée
solution aqueuse épuisée
solution aqueuse acide de sels d’alcaloïdes
neutralisation puis
a
alcalinisation par NH4OH
solution aqueuse basique d’alcaloïdes
1er épuisement par 20 ml de
CHCl3
Solution aqueuse épuisée
solution organique d’alcaloïdes : S1
2eme épuisement par 20 ml de CHCl3
3eme épuisement par 10 ml de CHCl3
Figure 23: schéma d’extraction des alcaloïdes.
Si P1 est le poids de la capsule vide et P2 celui de la capsule après évaporation, le
pourcentage en alcaloïdes (%Alcaloïdes) se calcule de la façon suivante :
%Alcaloïdes =
(
)×
47 | P a g e
Partie pratique
Résultats :
Tableau 24 : pourcentage en alcaloïdes totaux.
Poids de
la capsule
vide P1 =
tare (g)
27,8043
Poids de la
capsule après
évaporation P2
(g)
27,8505
Tige de Laurus nobilis L.
33,5273
baie de Laurus nobilis L.
Feuille de Laurus nobilis
Masse
alcaloïdes (g)
Pourcentage
en alcaloïdes
(%)
0,0462
1,54
33,5495
0,0222
0,74
70,6042
70,6352
0,031
1,03
Fleur de Laurus nobilis L.
70,6042
70,6137
0,0095
0,31
Racine de Laurus nobilis
33,5273
33,5289
0,0016
0,05
L.
L.
Racine
Fleur
Baie
Tige
Feuille
0
Figure 24 :
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
Pourcentage d'alcaloide ( % )
1,4
1,6
1,8
pourcentage d’alcaloïdes dans les différentes parties de la plante laurus
nobilis .
Discussion :
Ce tableau confirme les résultats obtenus dans le tableau 23, à savoir que les feuilles de
laurus nobilis sont les plus riches en alcaloïdes.
II.11.2.Détermination des tanins dans la drogue végétale :
Préparation de l’infusé :
Dans un erlenmayer de 250 ml , introduire 5g de poudre végétale dans 100 ml
d’eau distillée bouillante. Fermer avec un verre de montre. Laisser infuser pendant
48 | P a g e
Partie pratique
15 mn puis filtrer sur papier filtre et rincer le résidu avec un peu d’eau distillée
chaude, de manière à obtenir 100 ml de filtrat.
Recherche des tanins
Introduire dans un tube à essai 5 ml de l’infusé à 5%, ajouter goutte à goutte environ
1ml de solution aqueuse diluée de FeCl3 à 1% : en présence des tanins, il se développe
une coloration verdâtre (tanins catéchiques) ou bleu noirâtre (tanins galliques).
·
Recherche des tanins cathéchiques :
A 5 ml de l’infusé, ajouter 1 ml d’acide chlorhydrique concentré et porter à
ébullition pendant 15 mn. La présence des tanins catéchiques se confirme par la
formation d’un précipité rouge soluble dans l’alcool isoamylique. [132]
·
Les tanins galliques :
La différenciation des tanins (cathéchiques et galliques) est obtenue par la réaction
de Stiasny (10ml de formol + 5ml d’acide chlorhydrique) :
A 30ml d’infusé à 5%, ajouter 15ml de réactif de Stiasny puis chauffer au bainmarie à 90°C pendant 15 à 30 minutes dans un ballon muni d’un réfrigérant à
reflux. L’apparition d’un précipité montre la présence des tanins cathéchiques.
Filtrer et saturer le filtrat avec 10ml d’une solution d’acétate de sodium pulvérisée
puis ajouter quelques gouttes de solution de FeCl3 à 1% (1ml).Le développement
d’une teinte bleu-noirâtre indique la présence des tanins galliques non précipités
par le réactif de Stiasny.[132]
Résultat :
Tableau 25: recherche des tanins dans laurus nobilis.
Groupe chimique
Tanins totaux
Partie unitaire
Résultat
feuilles
+++
49 | P a g e
Partie pratique
Tanins galliques
Tanins catéchiques
tiges
++
fleurs
+++
baies
++
racines
++
feuilles
+
tiges
-
fleurs
-
baies
-
racines
-
feuilles
+++
tiges
++
fleurs
+++
baies
++
racines
++
II.11.3.Détermination des flavonoïdes dans la drogue végétale :
Détermination des anthocyanes dans la drogue végétale :
2 ml d’infusé sont ajoutés à 2 ml d’acide chlorhydrique 2N. L’apparition d’une
coloration rose-rouge qui vire au bleu-violacé par addition d’ammoniac indique la présence
d’anthocyanes. [133]
50 | P a g e
Partie pratique
Résultat :
Tableau 26: résultats de recherche des anthocyanes .
Groupe chimique
Partie utilisé
Anthocyanes
Résultat
feuilles
-
tiges
-
fleurs
-
baies
-
racines
-
Recherche des proanthocyanidols :
À 2 ml d’infusé sont additionnés 2 ml d’acide chlorhydrique concentré ; le tout
est laissé pendant cinq minutes dans un bain-marie bouillant ; l’apparition d’une
coloration rouge indique une réaction positive. [133]
Résultat :
Tableau 27 : résultats de recherche des proanthocyanidols .
Groupe chimique
Partie utilisé
feuilles
Résultat
+
Proanthocyanidols
51 | P a g e
Partie pratique
tiges
+
fleurs
++
baies
+
racines
+
Réaction cyanhydrique ( cyanidine) :
Dans un tube à essai , introduire 5 ml d’infusé et ajouter 5 ml d’alcool
chlorhydrique (éthanol à 95%, eau distillée, HCl concentré à parties égales en volume
) puis quelques copeaux de zinc ou de magnésium et 1 ml d’alcool isoamylique.
L’apparition d’une coloration : rose orangée (flavones), rose violacé (flavonones) ou
rouge ( flavonols, flavanonols) rassemblé
dans
la
couche
surnageant
d’alcool
isoamylique indique la presence d’un flavonoide libre (génine).Les colorations sont
moins intenses avec les hétérosides flavonoique, négative avec les chalcons, les
dihydrochalcones , les aurones , les catéchines et les isoflavones. [131]
Résultats :
Tableau 28: résultat de recherche des flavonoïdes .
Groupe chimique
Partie utilisé
feuilles
Flavonoïde
Résultat
+++
Rose-orangé : flavones
Couche surnageant rouge :
génine
52 | P a g e
Partie pratique
tiges
++
génine
fleurs
+++
génine
baies
+
Beige marron : hétérosides
flavonoique.
racines
+
Beige orangé : hétérosides
flavonoique
Recherche des leucoanthocyanes :
Nous avons effectué la réaction à la cyanidine sans ajouter les copeaux de magnésium
et chauffé au bain-marie pendant 15 mn. En présence de leucoanthocyanes, il se développe
une coloration rouge cerise ou violacée.
Les catéchols donnent une teinte brun-rouge. [131]
53 | P a g e
Partie pratique
Tableau 29 : résultats de recherche des leucoanthocyanes.
Groupe chimique
Partie utilisé
Résultat
feuilles
-
tiges
+
fleurs
+
baies
+
racines
-
Leucoanthocyanes
II.11.4.Détermination des quinones dans la drogue végétale (dérivés
anthracéniques) :
Anthraquinones libres :
Préparation de l’extrait :
À 1g de poudre , ajouter 10 ml de chloroforme et chauffer pendent 3 mn sur bainmarie. Filtrer à chaud et compléter à 10 ml avec le même solvant si nécessaire .
Hydrolysat :
À une partie du résidu de la poudre épuisée par le chloroforme, ajouter 10ml d’eau
distillée et 1ml d’acide chlorhydrique concentré, ensuite maintenir le tube à essais dans un
bain marie bouillant pendant 15 minutes. Refroidir le tube sous un courant d’eau et filtrer.
Réaction de borntager :
À 1 ml de l’extrait chloroformique obtenu, ajouter 1 ml de NH4OH diluée puis
agiter. Une coloration plus au moins rouge indique la présence d’anthraquinones
libres.
54 | P a g e
Partie pratique
les anthraquinones combinés :
Sur la poudre précédemment épuisée par le dichlorométhane, ajouter 10 ml d’eau
distillée et un ml de HCl, chauffer au bain marie pendant 15 mn puis filtrer.
Prendre 5 ml de ce filtrat, extraire avec 5 ml de dichlorométhane. A la phase organique
ajouter un ml de NH4OH diluée à 25%.
L’apparition d’une coloration rouge indique la présence d’anthraquinone sous la forme de
O-hétérosides. [130]
Résultats :
Tableau 30 : résultats de recherche des dérivés anthracéniques.
Groupe
Partie unitaire
Résultat
chimique
feuilles
-
tiges
-
fleurs
-
baies
-
racines
-
feuilles
-
tiges
+
Quinones
libres
Quinones
combinés
55 | P a g e
Partie pratique
fleurs
-
baies
+
racines
-
II.11.5.Détermination des hétérosides cardiotoniques dans la drogue végétale :
Extraction :
Ajouter à 1g de poudre 10 ml d’éthanol à 60% et 5 ml d’acétate de plomb à
10%. chauffer sur bain-marie pendant 10mn et filtrer.
Agiter le filtrat avec 10ml de chloroforme sans formation d’émulsion. Laisser décanter.
Puis soutirer la phase chloroformique et évaporer à sec. Reprendre le résidu avec 2
ml d’isopropanol.
Caractérisation :
·
Réaction de Libermann Burchard :A 1 ml de l’extrait, ajouter 1/5 du volume
d’anhydride acétique, puis, goutte à goutte de l’acide sulfurique concentré : il se
développe d’abord une coloration rouge, ensuite bleue et enfin verte. La
réaction de Liebermann n’est pas employée en général, elle est caractéristique pour
les substances dérivés de la bufanolide.[127]
Résultats :
Tableau 31 : résultats de recherche des hétéroside cardiotonique.
Groupe chimique
Partie unitaire
Résultat
feuilles
(-) pour les bufanolides.
56 | P a g e
Partie pratique
Hétéroside cardiotonique
tiges
fleurs
(+) pour les bufanolides.
baies
(-)pour les bufanolides.
racines
II.11.6.Détermination des stérols et terpènes dans la drogue végétale :
Extrait :
Introduire dans un tube à essais 1g de poudre et 20ml d’éther. Boucher, agiter et laisser
en contact pendant 24 heures. Après ce temps, filtrer et compléter à 20ml avec de l’éther.
Caractérisations :
1.Réaction de Liebermann-Buchard :
Evaporer à sec dans une capsule 10ml d’extrait. Dissoudre le résidu dans 1ml
d’anhydride acétique avec 1ml de chloroforme et recueillir la solution dans un tube à
essais. Ajouter 1 à 2ml d’acide sulfurique concentré au fond du tube à essais à l’aide d’une
pipette et ne pas agiter. La formation d’un anneau rouge-brunâtre ou violet à la zone de
57 | P a g e
Partie pratique
contact des deux liquides et la coloration verte ou violette de la couche surnageant révèlent
la présence de stérols et de triterpènes.[132]
2. Caroténoïdes : Carr et Price
Evaporer 5ml d’extrait éthéré dans une capsule jusqu'à sec, ajouter 2 à 3 gouttes de
solution saturée de chlorure d’antimoine (SbCl3) dans le chloroforme ou dans le
tétrachlorure de carbone (CCl4). Il se développe en présence de caroténoïdes une coloration
bleu-rouge par la suite. [132]
Résultat :
Tableau 32 : résultats de recherche des stérols et terpènes et des caroténoïdes.
Groupe chimique
Stérols et triterpènes
Caroténoïdes
Partie unitaire
Résultat
feuilles
+
tiges
+
fleurs
++
baies
+
racines
+
feuilles
+
tiges
+
fleurs
+
baies
+
racines
+
II.11.7.Détermination des stéroïdes dans la drogue végétale :
Test de Salkowski :
5 gouttes de H2SO4 concentré sont ajoutées à un ml d’extrait, l’observation d’une
coloration rouge dans chaque extrait indique la présence de stéroïdes.
58 | P a g e
Partie pratique
Tableau 33 : résultats de recherche des stéroïdes .
Groupe chimique
Partie unitaire
Résultat
feuilles
++
tiges
+
fleurs
-
baies
++
racines
-
Stéroïdes
II.11.8.Détermination des sennosides dans la drogue végétale :
Dans une fiole conique introduire 2,5 g de poudre ; puis ajouter 50 ml d’eau
distillée et 2 ml d’acide chlorhydrique concentré, chauffer dans un bain-marie
pendant 15 mn, laisser refroidir et agiter avec 40ml d’éther, séparer la couche
éthérée puis évaporer.
Au résidu refroidi, ajouter 5 ml d’ammoniaque diluée (1/2). Il se développe une
coloration jaune ou orange en présence de sennoside .
chauffer au bain-marie pendant 2 mn, il se développe une coloration violette rouge
en présence de sennosides.
Résultats :
Tableau 34: résultats de recherche des sennosides.
Groupe chimique
Sennosides
Partie unitaire
Résultat
feuilles
+
tiges
+
fleurs
+
baies
+
avant
59 | P a g e
Partie pratique
après
racines
-
II.11.9.Détermination des saponisides dans la drogue végétale :
Méthode 1 :(test de mousse)
Dans un tube à essai un ml d’infusé est agité vigoureusement pendant 2mn.
L’observation de mousse indique la présence de saponiside dans la drogue. [130]
Méthode 2 :(test d’émulsion)
5 gouttes d’huile d’olive son ajoutées à 1ml d’infusé dans un tube à essai et la mixture
est agitée vigoureusement .
La formation d’une émulsion stable indique la présence de saponiside. [130]
Résultats :
60 | P a g e
Partie pratique
Tableau 35 : résultats de recherche des saponines.
Groupe chimique
Saponiside
Partie unitaire
Résultat
feuilles
++
·
Présence de mousse.
·
Formation d’une émulsion stable.
tiges
++
·
·
fleurs
++
·
·
baies
+++
·
·
racines
+++
·
·
Méthode 3:( calcul de l’indice de mousse)
Préparation du décocté à 1% :
À l’aide d’un erlenmeyer de 250ml, faire une décoction de 1g de poudre dans 100ml
d’eau distillée. Chauffer pendant 15 minutes tout en maintenant une ébullition modérée.
Filtrer après refroidissement et ajuster à 100ml.
61 | P a g e
Partie pratique
Caractérisation :
Dans une série de 10 tubes à essais numérotés de 1 à 10, répartir successivement
1,2,….10ml de décocté à 1% préparé, ajuster le volume dans chaque tube à 10ml avec de
l’eau distillée et agiter chaque tube dans le sens de la longueur pendant 15 secondes à
raison de 2 agitations par seconde. Laisser reposer pendant 15 minutes et mesurer la
hauteur de la mousse dans chaque tube. Le tube dans lequel la hauteur de la mousse est de
1cm permet de calculer l’indice de mousse.
Indice de mousse (Idm) =
×
Avec n = numéro du tube dans lequel la hauteur de la mousse est égale à 1cm.
Si la hauteur de la mousse est inférieure à 1cm dans tous les tubes, l’indice de mousse est
inférieur à 100.
Si la hauteur de la mousse est supérieure à 1cm dans tous les tubes, l’indice de mousse est
supérieur à 100. [131]
Tableau 36 : résultats de calcule de l’indice de mousse .
Laurus nobilis L.
Recherche
Hauteur de la
mousse
feuilles
fleurs
tiges
baies
racines
=1cm dans
˃1cm dans
˃1cm dans
˃1cm dans
˃1cm dans
le tube n°9
le tube
le tube
les tubes n°
les tubes n°
˃1cm dans
n°10
n°10
8,9,10
9,10
le tube n°10
Indice de mousse
(Idm)
211,111
100
100
336,111
211,111
Le calcule de l’indice de mousse nous a confirmé la présence des saponisides dans tous les
parties de la plante laurus nobilis, et surtout concentré dans les baies (fruits).
II.11.10.Détermination des coumarines dans la drogue végétale :
Faire bouillir à reflux 2 g de poudre dans 20 ml d’alcool éthylique on le
fait bouillir pendant 15 mn puis filtrer après refroidissement. A 5 ml du filtrat
rajouter 10 gouttes de la solution alcoolique de KOH à 10% et quelques gouttes
d’HCl à 10 % .
62 | P a g e
Partie pratique
Résultats :
Tableau 37 : résultats de recherche des coumarines .
Groupe chimique
Partie unitaire
Résultat
feuilles
coumarine
++
tiges
+
fleurs
+
baies
+
racines
++
II.11.11.Détermination des glucosides dans la drogue végétale :
Réaction à l’acide sulfurique :
63 | P a g e
Partie pratique
Mettre deux gouttes de l’acide sulfurique concentré sur une masse de la poudre
végétale. En présence des glucosides. La masse se colore en rouge brique, puis en
violet. [127]
Résultats :
Tableau 38 : résultats de recherches des glucosides .
Groupe chimique
Glucoside
Partie unitaire
Résultat
feuilles
++
tiges
++
fleurs
+
baies
++
racines
+++
II.11.12.Détermination des composés réducteurs dans la drogue végétale :
À 5 ml d’infusé on ajoute quelque gouttes de H2SO4 concentré , au quel on
ajoute une solution aqueuse de KMnO4 ( de couleur violette foncé), le changement
de couleur ( transparent) indique la présence des composés réducteurs dans la drogue
végétale.
[127]
Résultats :
Tableau 39: résultats de recherche des composés réducteurs .
Groupe chimique
Partie unitaire
Résultat
feuilles
+++
tiges
+++
Composés réducteurs
64 | P a g e
Partie pratique
fleurs
+
baies
-
racines
+
II.11.13.Détermination de l’amidon dans la drogue végétale :
À 2 g de la poudre végétale rajouter quelques gouttes d’iode (I2),la couleur bleuviolet indique la présence d’amidon dans la drogue végétale.
Résultats :
Tableau 40:résultats de recherche d’amidon .
Groupe chimique
amidon
Partie unitaire
Résultat
feuilles
-
tiges
-
fleurs
+
65 | P a g e
Partie pratique
baies
++
racines
-
II.11.14.Détermination de stupéfiants dans la drogue végétale:(les
tétrahydrocannabinols )
À 0,5 gramme de la poudre ajouter 5 ml d’éther de pétrole et agiter pendant 15 mn,
filtrer dans une capsule et évaporer le filtrat à sec au bain marie. Au résidu ajouter trois à
quatre gouttes de KOH à 5% dans l’alcool : une coloration violette indique la présence de
tétrahydrocannabinols. [130]
Résultats :
Tableau 41 : résultats de recherche des stupéfiants .
Groupe chimique
Partie unitaire
Stupéfiants ou
feuilles
-
tiges
-
fleurs
-
baies
-
racines
-
Tétrahydrocannabinols.
Résultat
II.11.15.Détermination des iridoides dans la drogue végétale :
Faire une décoction 1g dans 5ml d’eau distillée. Faire une filtration et ajouter 1ml
d’acide chlorhydrique, rapprocher le tube au feu doux d’une flamme bleue.
Laisser au repos et observer ensuite le précipité noir qui caractérise la présence des
irridoides en cas de leur présence.
Résultat :
Tableau 42 : résultats de recherche des iridoides .
66 | P a g e
Partie pratique
Groupe chimique
Irridoides
Partie unitaire
Résultat
feuilles
+++
tiges
++
fleurs
+
baies
+
racines
+
II.11.16.Détermination de mucilage ( polyuronides ) dans la drogue végétale :
Nous avons introduit 1 ml du décocté à 10 % dans un tube à essai et ajouté 5 ml
d’éthanol absolu. Après une dizaine de minutes, l’obtention d’un précipité floconneux par
mélange, indique la présence de mucilages. [131]
Résultats :
Tableau 43: résultats de recherche de mucilage.
Groupe chimique
Partie unitaire
Résultat
feuilles
++
tiges
+
fleurs
+
baies
+
Mucilage ou polyuronides
67 | P a g e
Partie pratique
racines
+
II.12.17.Tableau récapitulatif :
Tableau 44: Tableau récapitulatif de l’étude phytochimique.
Plante : Laurus nobilis L.
feuille
tige
fleurs
fruit
racine
Alcaloïde
+
+
+
+
+
Tanin
+++
++
+++
++
++
Flavonoïde
+++
++
+++
+
+
Anthocyane
-
-
-
-
-
Proanthocyanidols
+
+
++
+
+
Quinones libres
-
-
-
-
-
combinés -
+
-
+
-
-
-
+
-
-
Saponine
++
++
++
+++
+++
Coumarine
++
+
+
+
++
Composé réducteur
+++
+++
+
-
+
Amidon
-
-
+
++
-
Mucilage
++
+
+
+
+
Irridoide
+++
++
+
+
+
Glucoside
++
++
+
++
+++
Stérols et terpènes
+
+
+++
+
+
Carténoide
+
+
+
+
+
Stéroide
++
+
-
++
-
Stupéfiants
-
-
-
-
-
Heteroside
cariotonique
68 | P a g e
Partie pratique
Discussions :
Les tests phytochimiques consistent à détecter les différentes familles de composés
existantes dans la partie étudiée de la plante par des réactions de précipitation ou de
coloration en utilisant des réactifs spécifiques à chaque famille de composés.
L’étude phytochimique est résumée dans le tableau ci-dessus qui a montré :
- une réaction positive avec le réactif de Dragen Dorff montre la présence des
alcaloïdes dans les feuilles, les tiges, les fleurs, les fruits et les racines; mais en faible
quantité.
- Les anthocyanes, les quinones et les stupéfiants sont absents dans la plante du laurus
nobilis.
-Les hétérosides cardiotoniques sont présents dans les fleurs seulement, de même l’amidon
existe seulement dans les fleurs et les baies de laurier. Tandis que les composés réducteurs
existent dans les feuilles, les fleurs, les tiges, les racines et absents dans les baies.
-Les coumarines , les mucilages, stérols, carténoide, iridoide, les glucosides et les
saponisides donnent des réactions positives ce qui indique leur présence dans les
différentes parties de la drogue végétale, a savoir ( les feuilles, les fleurs, les tiges, les
fruits et les racines). Il apparait donc que la plante laurus nobilis possède un éventail
de substances bioactives, notamment les saponisides, les coumarines,….etc.
Les saponisides présents dans la plante pourraient servir a la plante pour des agents
de
communication. De
toutes
les
façons, les
saponisides
peuvent
faciliter
l’assimilation des génines sucrées et augmenter aussi leur action de détergence.
Cette étude a révélé la richesse des feuilles de laurus nobilis en composants actifs
( polyphénol : flavonoïdes, tanins, proanthocyanidols, ) reconnus pour leurs propriétés
biologiques et thérapeutiques intéressantes. Par ailleurs, nous pouvons dire que la
présence des flavonoïdes ou les polyphénols en générale, pourrait intervenir selon les
propriétés physiologiques anti-oxydantes .
69 | P a g e
Partie pratique
II.12.Les huiles essentielles :
II.12.1.procédé d’extraction :
Dans notre étude, l’extraction de l’huile essentielle a été effectuée au niveau du
laboratoire de synthèse pétrochimique de BOUMERDES . Pour ce faire, un appareillages
a été utilisés pour extraire l’huile essentielle de laurus nobilis L.
II.12.1.a. Hydrodistillation :
Figure 25 : Montage d’hydrodistillation employé à l’échelle industrielle et en laboratoire
pour l’extraction de l’huile essentielle.
L’hydrodistillation à l’échelle laboratoire a été réalisée à l’aide du dispositif schématisé par
la figure 26.
100g de plante sèche est introduite dans un ballon , imprégné d’eau distillée ( 600 à 700
ml ) , l’ensemble est porté a ébullition pendant 3 heures.
Les vapeurs chargées d’huile , en traversant un réfrigérant se condensent et chutent dans
une ampoule à décanter, l’eau et l’huile se séparent par différence de densité.
L’huile séparée de l’eau aromatique est déshydratée par congélation, et/ou par le sulfate de
sodium ( Na2SO4) et conservée à +5°C.[29,134]
70 | P a g e
Partie pratique
Figure 26: dispositif d’hydrodistillation à l’échelle de laboratoire . [135]
- Légende :
1 : Vallet (support)
5 : Arrivée et Sortie de l’eau
2 : Mélange (Eau-Drogue végétale)
6 : Éprouvette
3 : Thermomètre
7 : drogue végétale broyée.
4 : Réfrigérant à eau
8 : huile essentielle .
Résultats d’extraction par hydrodistillation :
La distillation est conduite pendant une durée nécessaire à l’épuisement de la matière
première en huile essentielle dans les conditions opératoires décrites ci-dessus. Les essais
ont été répétés plusieurs fois .
Le rendement en huile essentielle est exprimé par la quantité d’huile (en ml) obtenue pour
100g de matière végétale sèche.
II.12.2. calcul du rendement :
Le rendement en huile essentielle est le rapport entre le poids de l’huile extraite et le
poids de la plante à traiter. [136]
Le rendement, exprimé en pourcentage est calculé par la formule suivante :
R= PB/PA x100
ou
R= [∑PB ⁄ ∑PA]x 100
R : rendement de l’huile en %. PA : poids de la plante en g. PB : poids de l’huile en g.
71 | P a g e
Partie pratique
Tableau 45: rendement des huiles essentielles des feuilles, des tiges, des fruits, des fleurs et
des fruits du laurus nobilis.
PA ( g )
R (%)
Feuilles
0.7900
100
0.79
Tiges
0,1000
100
0,10
Baies
1,1509
100
1.15
Fleurs
0.8206
100
0.82
Racines
0
100
0
pourcentages en huiles
essentielles ( % )
PB ( g )
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
%0
0
Feuilles
Tiges
Fruits
Fleurs
Racines
Figure 27 :comparaison des rendements de feuille, de tige, de fruit et fleur du laurus
nobilis L.
Discussion :
Les résultats du calcul des rendements des feuilles, des fruits, des tiges, des fleurs et des
racines du laurus nobilis montrent clairement que le pourcentage le plus élevé est celui des
fruits (1.15 %) , ensuite le pourcentage des fleurs ( 0.82 %) suivie par celui des feuilles
(0,79 %) et enfin le pourcentage le plus faible est celui des tige (0.1 %), tandis que les
racines ne contenant plus d’huiles essentielles (0 %). Ces résultats sont en accord avec
Marzouki, Khaldi et al. , qui ont montrer que l’extraction par hydrodistillation des feuilles
du laurus nobilis d’Algérie contiennent un pourcentage de ( 0.5 ± 0.2 ) % en huile
essentielle des feuilles. [30]
II.12.3. Etude de variation du rendement de l’huile essentielle des feuilles du laurus
nobilis :
72 | P a g e
Partie pratique
Il es intéressant de réalisé une autre étude de variation du rendement en fonction des
différentes paramètres : l’états des feuilles de laurus nobilis (feuille fraiche ou séché ;
concassé ou broyé…), le mois de récolte ,le climat de récolte , la méthode d’extraction
( hydrodistillation, micro-onde ..),selon la température d’extraction , afin de déterminer le
meilleur rendement pour l’extraction des huiles essentielles de notre étude.
Tableau 46 : variation de rendement de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis en
fonction de certains paramètres ( climat, saison, méthode…….).
Matière végétale du laurus nobilis
PB (g)
PA (g)
R(%)
Feuilles fraiches par hydrodistillation
0.1633
100
0.16
Feuille sèche 100g de matière première
0.7900
100
0.79
Feuille fraiche de matière végétal extraite par micro-onde
0.2957
50
0.59
Feuille sèche par hydrodistillation au mois d’octobre
0.5440
100
0.54
Feuille sèche par hydrodistillation au mois de janvier
0.6120
100
0.61
Feuille sèche par hydrodistillation au mois d’avril
0.7910
100
0.79
Feuille sèche par hydrodistillation au mois de juillet
0.4320
100
0.43
Feuille sèche par hydrodistillation de TIZI-OUZOU
0.6300
100
0.63
Feuille sèche par hydrodistillation de M’SILA
0.6540
100
0.65
Feuille sèche par hydrodistillation de larba ( BLIDA)
0.7910
100
0.79
Feuille sèche à 50g de matière première extraite par micro-onde
0.4139
50
0.82
Feuilles sèches broyés en poudre fine extraite par hydrodistillation
0,4361
100
0,43
Feuilles sèches concassé extraite par hydrodistillation
0,6700
100
0.67
Feuille sèche à faible température d’extraction ( vitesse faible de
0.8100
100
0.81
vapeur)
Discussion :
L’étude de variation du rendement en fonction du climat, la méthode d’extraction ..etc ,
confirment d’une part que l’extraction soit par hydrodistillation ou par micro-onde des
feuilles fraiches présente un rendement faible par rapport les feuilles séchés.
D’autre part, le broyage en poudre fine donnent des résultats faible par rapport au
concassage.
73 | P a g e
Partie pratique
Le meilleur moment d’extraction des huiles essentielles est en avril ( moment de floraison
). Parce que c’est le moment de la synthèse des différents composants chimiques.
L’extraction par hydrodistillation présente un rendement légèrement faible par rapport à
l’extraction par micro onde.
On a aussi comparés le rendement de l’huile essentielle de 3 origines différentes (
TIZI-OUZOU, M’SILA, BLIDA). Les résultat ont montré que le rendement est presque
semblable.
L'étude a indiqué aussi que le taux de vapeur est un paramètre très important. Le tableau 46
montre l'ensemble récupération du pétrole par rapport au temps de la distillation de la
vapeur pour les taux différents appliqués. Il est clair que le démarrage avec un taux de
vapeur à basse donne un meilleur rendement d'huile. Une taux de vapeur à haute au début
de la distillation à vapeur donne des taux réduits de récupération du pétrole. [137]
En matières végétales sèches, les huiles sous-cutanées ne peuventt être facilement
établi à la surface de la matière sauf si le matériau est mouillé assez suffisant pour la
diffusion doit avoir lieu. Par conséquent, pour ces taux matériaux vapeur basse au début de
la distillation est nécessaire afin de suffisamment humidifier le matériel végétal . Une fois
que les huiles sont apparus, alors le taux de vapeur peut être augmenté, étape par étape
pour faire évaporer l'huile gouttelettes par la vapeur qui passe.[134,137]
Mais l’extraction avec un taux de vapeur faible aux début de l’hydrodistillation peut
causer quelques réaction indésirable (hydrolyse, isomérisation,….etc) , toute en influant
sur la qualité de l’huile essentielle extraite.
II.12.4. Etude cinétique d'extraction: influence du temps d’extraction sur le rendement
en huile essentielle du laurus nobilis L.
La cinétique a été explorée en effectuant des prélèvements horaires à intervalles
réguliers sur les phases aqueuses et organiques durant l’hydrodistillation. Afin d’en
récupérer des quantités significatives et mesurables, les essences ont été extraites avec un
solvant organique (éther diéthylique).
La cinétique de l’extraction par hydrodistillation de l’huile essentielle du Laurus
nobilis a été effectué pour les différentes parties de cette plante.
74 | P a g e
Partie pratique
La détermination de l’évolution du rendement de l’huile essentielle du laurus nobilis L. en
Rendement en huile essentielle ( % )
fonction du temps est illustrée dans la figure 28.
2,5
2
Racine
1,5
Tige
1
Baie
Fleur
0,5
Feuille
0
0
30
60
90 120 150 180
Temps d'extraction ( min )
210
240
Figure 28 : Évolution du rendement des huiles essentielles des tige, des baie, des fleur des
racine, et des feuille du laurus nobilis lors de l’hydrodistillation ,à partir de 200g de
matière végétale.
En se basant sur la figure 28, nous constatons que l’allure générale des courbes est
croissante et qu’elle tend vers un paliers au bout de 120 min.
Étude de la cinétique d’extraction = Suivi du rendement :
Le suivi cinétique accompli et l’évolution du rendement en fonction du temps est
représenté dans la figure 28.
La cinétique se divise en trois étapes :
- dans la première, nous observons un palier pour un rendement nul, correspondant à la
phase de chauffage de la matrice.
- la seconde correspond à un saut marqué de la quantité d’HE récupérée (30 à 120 mn).
- enfin, au cours de la troisième étape, la courbe tend vers un second palier qui correspond
au rendement maximum possible à atteindre.
En effet, le rendement augmente rapidement durant les première 120 minutes ou plus de
80% de l’huile sont extraites respectivement pour les feuilles, les tiges, les fruits et les
fleurs , son évolution devient plus lente par la suite pour atteindre un rendement égal à
1.58% ;0.2% ;2.3% et 1 .64% , respectivement pour laurus nobilis L à partir de 200g de la
matière première.
75 | P a g e
Partie pratique
Dans le cas où les structures sécrétrices sont superficielles, la membrane externe ou la
cuticule qui constitue la seule barrière à la libération de l’HE, est vite rompue à ébullition.
Les composés volatils sont aussitôt évaporés d’où la courte durée pour atteindre le pic
cumulatif lors de l’extraction. Lorsque les essences sont sous-cutanées, elles doivent
d’abord diffuser à travers l’épaisseur du tissu végétal avant d’entrer en contact avec l’eau
ou sa vapeur. Elles seront alors lentement évaporées en comparaison avec les structures
sécrétrices superficielles. [137] Les cellules à huiles essentielles des lauracées ( laurus
nobilis L.) localisées sur ou à proximité de la surface de la plante .
II.13. Extraction de 1,8-cinéole :
Un certain nombre d’huiles volatiles de certaines espèces des plantes ( eucalyptus ,…)
contiennent invariablement eucalyptol aussi élevés que 10% à 70%. Il se produit également
dans l’huile de feuille de laurier noble ( laurus nobilis L. ) . [138]
Toutefois, eucalyptol peut être
isolée de ces huiles en adoptant l’une des méthodes
suivantes :
Méthode à l’acide phosphorique ;
Méthode à l’acide bromhydrique ;
Méthode à l’orthocrésol ;
Extraction du cinéol par solvant ;
Extraction du cinéol par cristallisation ;
Récupération par distillation fractionnée ;
La chromatographie d’adsorption. ( voir annexe I )
Parmi les différentes méthodes de récupération du 1,8-cinéol (eucalyptol), constituant
majoritaire de l’huile essentielle des feuilles du Laurus nobilis , on distingue :
Méthode à l’acide phosphorique :
Cette méthode consiste à dissoudre dix (10) ml d’essence dans cinquante (50) ml
d’éther de pétrole et à ajouter peu à peu à froid, de l’acide phosphorique concentré ; la
combinaison blanche (C10H18OH3PO4) qui se dépose prend une teinte jaunâtre ou
rougeâtre. La masse cristalline est alors essorée, lavée avec de l’éther de pétrole puis
décomposée en utilisant de l’eau ; le cinéol est récupéré par décantation.
76 | P a g e
Partie pratique
Figure 29 : réactif utilisées pour l’extraction d’eucalyptol.
Figure 30: l’huile essentielle des feilles du laurier noble dans l’ether de pétrole ( mélange 1).
Figure 31 : le mélange 1 et quelques gouttes d’acide phosphorique ( mélange 2 ).
77 | P a g e
Partie pratique
Figure 32: séparation d’éther de pétrole a partir mélange 2.
Figure 33 : complexe acide phosphorique et l’eucalyptol ( 1,8- cinéol ).
Figure 34 : décantation de cinéol après l’ajout d’eau distillée.
Figure 35 : l’eucalyptol extrait.
Figure 36: Eucalyptol.
78 | P a g e
Partie pratique
Description du cinéol ( eucalyptol ) obtenu :
Couleur: liquide jaune pale……………………………………..…………………conforme
Odeur : camphrée, aromatique et caractéristique ..……...…………………..……conforme
Gout : piquant et laisse une sensation de froid……………………………………conforme
Solubilité : insoluble dans l’eau, soluble dans les solvants organiques , de la paraffine, les
huiles fixes et de l’éthanol à 90%.............................................................................conforme
On remarque que les résultats sont conforme aux norme exiger par la pharmacopée
britannique. [138, 139, 140,141]
Propriétés physiques et chimiques: (Voir annexe I).
Informations toxicologiques : (Voir annexe I).
Autres données : (Voir annexe I).
Stockage:
Conserver à température ambiante (15 à 25°C recommandés). Garder hermétiquement
fermé et à l'abri du soleil ou de l'humidité.
Stable pendant 12 mois dans les conditions normales de stockage et dans son emballage
d’origine scellé.
Essais chimiques :
1.Il forme des composés plus caractéristique avec HCl, HBr et H3Po4 avec points fusion
bien défini. [138, 139] ……………………………………………………….…….conforme
79 | P a g e
Partie pratique
II.14. Analyse de l’huile essentielle extraite :
Les propriétés organoleptiques et physico-chimiques constituent un moyen de
vérification et de contrôle de la qualité de l’huile essentielle. Nos essais ont été effectués
selon un protocole précis et obéissent aux normes édictées par AFNOR et par la
pharmacopée . Pour l’huile essentielle de laurier (laurus nobilis L.). [142]
IV.14. a. Caractéristiques organoleptiques de l’huile essentielle du laurus nobilis :
Après l’extraction , on a pu déterminer les caractères organoleptiques de
notre l’huile essentielle et on a les comparés avec ceux de la norme
AFNOR .
Les différentes caractéristiques organoleptiques (aspect, couleur, odeur) de l’essence
du laurier noble ou ( laurus nobilis L. ) ont été notées et présentés ci-dessous :
Tableau 47 : propriétés organoleptiques des huiles de laurier noble.
HE des feuilles du
laurus nobilis L.
Couleur
Jaune clair à jaune
Aspect
liquide mobile
limpide
Odeur fraîche,
épicée, camphrée,
d'une grande
originalité,
avec un fond
d’eucalyptus.
Odeur
HE des tiges
du laurus
nobilis L.
Jaune très pale
à jaune
liquide mobile
limpide
aromatique,
épicée, avec
un fond
d’eucalyptus
HE des baies du
laurus nobilis L.
HE des fleurs du
laurus nobilis L.
Jaune à jaune pale
Jaune à jaune pale
liquide mobile
limpide
aromatique,
épicée,
caractéristique
liquide mobile
limpide
aromatique,
épicée,
caractéristique
Huile
essentielle
80 | P a g e
Partie pratique
A l’issue des distillations, les huiles essentielles obtenus de chaque partie de la plante
laurus nobilis , sont liquides mobiles limpides de couleur jaune à jaune pale avec des
odeurs aromatiques caractéristiques.
En particulier , l'huile essentielle extraite a partir des feuilles est d'aspect liquide mobile
limpide, de couleur jaune clair à jaune, d'odeur aromatique, épicée, avec un fond
d'eucalyptus .
Les paramètres organoleptiques de nos HE sont en accord avec ceux répertoriés dans les
normes .[142,137,143]
II.14. b. Caractéristiques physico-chimiques de l’huile essentielle du laurus nobilis L. :
La valeur commerciale d’une huile essentielle est la plus part du temps estimée d’après
ses qualités organoleptiques ( l’odeur en particulier) auxquels s’ajoutent un certain nombre
de constantes appelées « indices », déterminés à partir de normes établies, parmi lesquelles
nous pouvons citer les normes AFNOR. Ces normes définissent deux types d’indices : les
indices physiques ( densité relative, pouvoir rotatoire, indice de réfraction ……..) et les
indices chimiques ( indice d’acides, indice d’ester,….).
Ces tests physico-chimiques ont été réalisés au laboratoire de synthèse pétrochimique de
Boumerdès.
II.14. b.1.caractéristiques physiques de l’huile essentielle :
Toutes les méthodes d’analyse et les formules présentées dans ce paragraphe proviennent
du recueil de normes AFNOR.
II.14. b.1.1.pouvoir rotatoire à 20°C : (NF T 75-113 Juin 1982)
Définition :
( voir annexe I ).
Calcul :
Le pouvoir rotatoire, exprimé en degrés d’angle, est donné par l’équation suivante :
PR= A x 100/ L
Où :
A : valeur de l’angle de rotation en degré d’angle
L : longueur du tube utilisé en millimètres
Signaler les pouvoirs rotatoires lévogyres par le signe négatif (-)
81 | P a g e
Partie pratique
II.14. b.1.2.indice de réfraction à 20°C : ( NF T 75-112 Aout 1977 )
Définition :
( voir annexe I ).
Principe:
( voir annexe I ).
Mode opératoire :
Régler le refractomètre en mesurant les indices de réfraction des produits étalons tels
que : l’eau distillée, benzoate de benzyle, éthanol.
L’appareil a été étalonné par éthanol ayant un indice de réfraction connu égale à 1.3611 à
20°C.
Calcul :
L’indice de réfraction à la température de référence t est :
=
+ 0,0004 × ( − )
Où la température de référence est de 20°C.
: valeur de lecture
t : température de l’HE
II.14. b.1.3. Densité à 20°C : ( NF T 75-111 juin 1982)
Définition :
( voir annexe I ).
Principe :
( voir annexe I ).
Mode opératoire :
Nettoyer soigneusement le pycnomètre , peser le pycnomètre vide. Remplir le
pycnomètre avec de l’eau distillée récemment bouillie, puis refroidie aux environs de
20°C. Plonger le pycnomètre dans le bain thermostatique. Au bout de 30 mn, ajuster si
nécessaire le niveau d’eau au trait repère, boucher le pycnomètre s’il y a lieu, et essuyer
l’extérieur avec un chiffon sec ou un papier absorbant, lorsque l’équilibre de température
avec la salle des balances est réalisé, peser le pycnomètre muni de son bouchon , s’il y a
lieu, à 0.001 g prés.
82 | P a g e
Partie pratique
Vider le pycnomètre, puis le rincer et le sécher, effectuer les mêmes opérations en
remplaçant l’eau par l’échantillon pour essai (huile essentielle).
Calcul :
Densité relative a température ambiante :
=
−
/
−
:masse de pycnomètre vide
Densité relative à 20°C :
=
/0,9982( 0,0007{
− 20})
Où :
0,9982 g/ml est la masse volumique de l’eau à 20°C
0,0007 est un facteur correctif
: température ambiante
: densité à température ambiante
II.14. b.1.4. Evaluation de la miscibilité à l’éthanol ( NF T 75-101 Juin 1982 ) :
Définition :
( voir annexe I ).
Principe :
( voir annexe I ).
Mode opératoire :
Introduire, dans l’éprouvette ou la fiole, 1ml d’huile essentielle, mesuré à l’aide de la
pipette. Ajouter, à l’aide de la burette, un mélange hydro-éthanolique de titre
alcoométrique déterminé préalablement amené à une température de 20°C± 0.2°C , par
fractions de 0.1ml, jusqu’à miscibilité complète , en agitant énergiquement après chaque
addition. Lorsque le mélange est parfaitement limpide, noter le volume du mélange hydroéthanolique utilisé.
Poursuivre l’addition du mélange hydro-éthanolique, par fractions de 0.1 ml jusqu’à un
total de 20 ml, en n’oubliant pas d’agiter après chaque addition. S’il se produit un trouble
ou une opalescence avant l’addition complète, noter le volume qui a provoqué ce trouble
ou cette opalescence et , éventuellement, le volume avec lequel celui-ci disparait.
83 | P a g e
Partie pratique
Dans le cas ou une solution limpide n’est pas obtenue après l’addition des 20 ml de solvant
, utiliser le mélange hydro-éthanolique de titre alcoométrique immédiatement supérieur .
IV.15. b.2.caractéristiques chimiques de l’huile essentielle :
Toutes les méthodes d’analyse et les formules présentées dans ce paragraphe proviennent
du recueil de normes AFNOR.
II.14. b.2.1.Indice d’acide ( IA ) : ( NF T 75-103 Juin 1982 )
Définition :
( voir annexe I ).
Mode opératoire :
Introduire la prise d’essai dans la fiole. Ajouter 5ml d’éthanol, et 5 gouttes de
phénolphtaléine neutraliser le liquide avec la solution d’hydroxyde de potassium (0.1mol/l)
contenu dans la burette.
Calcul :
IA= 56,11xVxC/ m
Où :
V : volume en ml de KOH utilisé
m : masse en g de la prise d’essai
C : concentration exacte de KOH (0.1) en mol/l
II.14. b.2.2.Indice d’ester ( IE ) :( NF T 75-104 Juin 1982 )
Définition :
( voir annexe I ).
Mode opératoire :
On prend 0.5 ml de l’échantillon pour essai. Introduire la prise d’essai dans le ballon,
puis à l’aide d’une burette ajouter 15 ml de solution de KOH ( 0.5 mole/l ). Puis on place
un réfrigérant ascendant on plonge l’ensemble dans un bain-marie , on chauffe jusqu’à
ébullition pendant 30 min. On détermine la fin de la réaction de saponification lorsqu’on
obtient une solution transparente et homogène ( Absence de trace d’huile ).
Laisser refroidir le ballon et démontrer le réfrigérant. Ajouter 5 gouttes de solution de
phénolphtaléine titrer l’excès de KOH avec la solution d’acide chlorhydrique à 0.5 mole/l,
on réalise parallèlement un essai à blanc dans les même conditions c'est-à-dire 15 ml de
84 | P a g e
Partie pratique
solution de KOH titrées par HCl 0.5 N la différence des volumes dépensés lors du titrage
de l’essai à blanc et de l’échantillon correspondant à la quantité de KOH dépensé pour la
saponification et pour la neutralisation des acides libres contenus dans l’échantillon.
Calcul :
IE = 28,05 / m x ( V0 - V1) - IA
Où :
V0 : volume en ml d’HCl pour le blanc ;
V1 : volume en ml d’HCl pour la détermination ;
m : masse de la prise d’essai ;
IA : indice d’acide.
II.14. b.2.3.Mesure de l’indice d’iode :
L’indice d’iode exprime le degré d’insaturation du corps gras.
Définition :
( voir annexe I ).
Principe :
( voir annexe I ).
Mode opératoire :
Dans une fiole conique bien sèche de 200ml, bouchant à l’émeri, introduire une prise
d’essai convenable de la substance ( le poids de la prise d’essai est déterminé par l’indice
d’iode de la substance, on prend de préférence 32g./II) exactement pesée et 10ml de
chloroforme ou de tetrachlorure de carbone. Agiter le mélange jusqu’à dissolution
complète et ajouter 25ml exactement mesurés de réactif. Boucher, agiter et abandonner le
mélange 1 heure à l’obscurité. Puis ajouter 20ml d’une solution à 10% d’iodure de
potassium, 100ml environ d’eau distillée et titrer l’iode libre au moyen d’une solution de
Na2S2O3 0.1N.
Effectuer un essai à blanc dans les mêmes conditions.
Soient, n : le volume en ml de Na2S2O3 utilisé pour l’essai à blanc.
n’ : le volume en ml de Na2S2O3 utilisé pour la prise d’essai.
P.E. : prise d’essai.
85 | P a g e
Partie pratique
L’indice d’iode est égal à :
× .
I I=
.
(1ml de Na2S2O3 à 0.1N correspond à 126mg d’Iode d’où :
× .
.
×
) [142,144]
Résultats :
Tableau 48 : caractéristiques physico-chimiques de l’huile essentielle des feuilles du laurus
nobilis L.
Normes
[142,144,145,146,14
7,148 , 149, 150]
Huile essentielle des feuilles
du laurus nobilis conservé
pendant 1 semaine
du laurus nobilis conservé
pendant 1 ans
Caractéristique physiques
Pouvoir
rotatoire
(PR)
Indice de
réfraction
(IR)
Densité
-15°
1.4773
0.915
-14°
1.4773
0.915
-10° à
-22°
1.4670 à
1.4775
0.912 à
0.945
miscibilité à
l’éthanol
Soluble dans
1 à 3 partie
d’alcool à
80%
Soluble dans
1à 3 partie
d’alcool à
80%
Soluble dans
1 à 3 partie
d’alcool à
80%.
Soluble dans
3 à 10 partie
d’alcool à
70%.
Caractéristique chimiques
Indice
d’acide
(IA)
Indice
d’ester
(IE)
Indice de
saponnification
(IS)
4.40
49.09
53.5
2.6
40.5
43.1
Indice
d’iode
65
60.94
1à3
20 à 50
36 à 96
En
général
<5
86 | P a g e
75-100
Partie pratique
Tableau 49: caractéristique phisico-chimique de l’huile essentielle des fruits du laurus
nobilis.
Pouvoir
rotatoire
(PR)
Indice de
réfraction
(IR)
Baies du
laurus
nobilis
/
/
Normes
[142 , 149,
150]
Caractéristique physiques
/
/
miscibilité à
l’éthanol
Soluble dans
1partie d’alcool à
80%
Soluble dans 1 à 3
partie d’alcool à
80%.
Soluble dans 3 à 10
partie d’alcool à
70%.
Caractéristique chimiques
Indice
d’acide
(IA)
Indice
d’ester
(IE)
Indice de
saponnification (IS)
pH
Indice
d’iode
2.2
67.925
70.125
/
/
1à3
30 à 70
36 à 96
/
/
A partir de ces valeurs, il en ressort que toutes ces constantes étant influencées par les
conditions édaphiques et climatiques ainsi que les pratiques culturales .
Cependant et malgré ces fluctuations, nous remarquons que les paramètres physicochimiques de nos HE sont en accord avec ceux mentionnés par les normes.
Pour les constantes chimiques, par exemple l'indice d'acide donne une idée sur le taux
d'acides libres. Notre étude confirme que cet indice, certes dans les normes, demeure
relativement élevé dans l’huile d’un an ( conservé pendant une année ) par rapport à l’huile
d’une semaine (conservé pendant une semaine ) . Cela peut trouver une explication dans la
dégradation de l'HE (hydrolyse des esters,….) durant sa conservation ( un an ), ce qui est à
terme préjudiciable. Inversement, un IA inférieur ou égale à 3 est une preuve de bonne
conservation de l’essence (faible quantité d'acides libres) c’est le cas de l’HE d’une
semaine .
Un indice de réfraction variant essentiellement avec la teneur en monoterpènes et en
dérivés oxygénés. Une forte teneur en monoterpènes donnera un indice élevé. Pour certains
auteurs, le faible indice de réfraction de l'HE indique sa faible réfraction de la lumière ce
qui pourrait favoriser son utilisation dans les produits cosmétiques. [137]
D’après la méthode d’extraction et l’étude de différent paramètre physico-chimiques de
l’huile essentielle extrait nous pouvons conclure que l’essence des feuilles du laurus
nobilis
étudiée à de bonne caractéristique et peut être utilisée comme produit
pharmaceutique.
87 | P a g e
Partie pratique
La détermination des propriétés physico-chimiques est une étape nécessaire mais demeure
non suffisante pour caractériser l'HE. Il sera donc primordial de déterminer le profil
chromatographique de l'essence aromatique.
La détermination de la composition de l’essence de différentes parties du laurus nobilis à
fait l’objet de notre travail afin de caractériser les diverses constituants de ses huiles
essentielles .
Pour cela la méthode d’analyse utilisé est la chromatographie en phase gazeuse.
II.15. Analyse chromatographique d’huile essentielle du laurus nobilis L. :
Les analyses de la composition chimique de nos huiles essentielles du laurus nobilis
ont été réalisées par la chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de
masse ( GC-MS).
II.15.a. Chromatographie en phase gazeuse couplée spectromètre de masse :
Cette dernière est réalisée sur un chromatographe en phase gazeuse de type HewlettPackard ( série HP 6890) couplé avec un spectromètre de masse ( série HP 5973 N MS,
ionisation par impact électronique).Cette technique permet de déterminer simultanément le
nombre de constituants de l’essence, leurs concentrations respectives, et leurs ordres de
sorties, qui renseignent sur la volatilité, c'est-à-dire de leurs masses moléculaires, et de
leurs polarités.
Figure 37: Appareil de chromatographie en phase gazeuse couplé masse spectrale.
Cette analyse a été effectuée au laboratoire de chimie organique (chromatographie) au
centre de recherche et de développement (C.R.D.) de SONATRACH (Boumerdes) selon
les conditions opératoires suivantes :
CPG ( Chromatographie en Phase Gazeuse ) :
Colonne capillaire 5% Phényl Méthyl Siloxane possède les caractéristiques suivantes :
-
Longueur : 30m
88 | P a g e
Partie pratique
-
Diamètre interne : 0,25mm
Epaisseur du film : 0,25 m
Les conditions opératoires sont :
-
La température de l’injecteur splitless : 250°C
La programmation de température : de 35°C à 250°C à raison de 6°C/mn
La température de l’interface : 280°C
Le gaz vecteur : He à 1ml/mn (vitesse linéaire moyenne = 36 cm/sec)
La quantité injecté : 0,2 μ litre
Spectromètre de masse :
-
Les températures de la source et du quadripôle sont fixées respectivement à 230°C
et 150°C ;
L’énergie d’ionisation 70 eV ;
Gamme de masse : 35 à 400.
Résultats :
Dans les trois tableaux 50, 53 et 56 les résultats sont classés selon leurs temps de rétention
( c.à.d. selon leur ordre de sortie ).
II.15.a.1. Résultats chromatographiques de l’huile essentielle des feuilles du Laurus
nobilis L. :
Tableau 50 : résultats de profil chromatographiques de l’huile essentielle de feuille du
Laurus nobilis L.
Les composants chimiques
Feuilles de laurus nobilis L.
Temps de rétention (mn)
Pourcentage ( % )
α-thujène
α-pinène
camphène
Sabinene
β-pinène
Myrcene
11.712
11.932
12.424
13.316
13.407
13.878
0.045
0.441
0.090
1.259
0.630
0.218
∆3-carene ( carene)
α-terpinene
1,8-cinéol
Cis (β) terpineol
14.490
14.711
15.302
16.255
0.068
0.121
10.655
0.267
Linalool
17.449
11.072
Bornéol
18.552
0.070
Iso-bornéol
Terpen-4 ol
19.184
19.515
0.978
1.533
89 | P a g e
Partie pratique
α-terpineol
19.926
3.247
Nerol
20.729
0.357
bornylacétate
22.253
1.000
Terpényl acetate
Eugénol
23.969
24.129
11.495
3.864
β-élémène
Eugénol méthyl ether
α-gurjunene
β-caryophyllene
α-guaiene
24.962
25.242
25.413
25.764
26.025
1.992
9.748
0.599
5.874
0.955
α-caryophyllene
cedrene
β-elinene
τ-elemene
–guaiene
β-cadinene
elémicine
spathulenol
caryophyllene oxide
β-guaiene
α-cadinol
∑
Autres composés non identifiés
26.466
27.098
27.218
27.409
27.559
27.910
28.422
29.204
29.335
30.248
30.739
-
0.846
1.693
1.086
1.810
1.434
1.478
1.691
1.835
2.218
1.004
2.190
83.863
15.881
-
99.744
Total
Figure 38: Chromatogramme des feuilles du laurus nobilis L.
90 | P a g e
Partie pratique
Tableau 51: Composés majoritaires de l’HE des feuilles du laurus nobilis L.
Composés
%
1,8-cinéol
linalool
α-terpineol
Terpényl acetate
Eugénol
β-caryophyllene
caryophyllene oxide
α-cadinol
10.655
11.072
3.247
11.495
3.864
9.748
5.874
2.218
2.190
La composition de l'huile essentielle des feuilles du laurus nobilis
est exprimée en
pourcentage de divers composés des familles des oxydes terpéniques, des monoterpénols,
des phénols , des monoterpènes , des sesquiterpenes et des esters terpéniques :
Tableau 52: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des feuilles de
laurus nobilis L.
Classes
biochimiques
oxydes
terpéniques
Composants chimiques
%
1,8-cinéole ( 10.655% )
10.655%
Monoterpénols
Linalol ( 11.072%), terpinén-4-ol( 1.533%), alphaterpinéol ( 3.247%)
15.852%
Phénols
eugénol méthyl éther ( 9.748%), eugénol( 3.864%)
13.612%
sabinène (1.259%), béta-pinène (0.630%), alpha-pinène
(0.441%), myrcène (0.218%), camphène (0.090%), alpha2.759%
Monoterpènes
terpinène (0.121%)
Esters
terpéniques
Totale identifiées
acétate d'alpha-terpényle (11.495%), acétate de bornyle
(1%)
/
12.495
55.373
91 | P a g e
Partie pratique
18
pourcentage des classes
biochimiques (%)
16
14
12
10
8
6
4
2
0
oxydes
terpéniques
monoterpénols
phénols
monoterpènes
esters
terpéniques
Figure 39 : Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des feuilles du laurus
nobilis L.
Composition chimique de l'huile essentielle des feuilles du laurus nobilis L. :
Les résultats de l’analyse par Chromatographie en phase gazeuse -Spectrométrie de
masse de la composition chimique des huiles essentielles des feuilles du laurus nobilis sont
présentés dans le tableau 50, dans lequel les composés identifiés sont listés suivant leur
temps de rétention.
Au total, et parmi les 91 composés (99.744 % ) seulement 35 ont été identifiés ce qui
correspond à un pourcentage de (83.863% ) par rapport à l'ensemble des constituant
isolés.
Le 1,8-cinéol , linalool et terpényl acetate apparaît comme les constituants majoritaires de
l'HE (10.655%, 11.072% , 11.495%), suivi de l’eugénol méthyl éther ( 9.748 %), du βcaryophyllene (5.874 %), de l’eugénol (3.864 %) et de α-terpinéol (3.247%) .
Biochimiquement parlant, cette HE est composée essentiellement des monoterpénols
(15.85%). Les phénols forment un pool à moins de 14%, suivis des esters terpéniques
(12.49 %). Les oxydes terpéniques
sont à un taux assez important (10.65%) mais
constituées uniquement de 1,8-cinéol . Enfin, les composés minoritaires appartiennent à la
famille des monotérpènes (sabinène , béta-pinène , alpha-pinène ….), (Tableau 54 ).
[137,143]
92 | P a g e
Partie pratique
Le profil chromatographique de notre plante montre que son essence possède tous les
constituants nécessaires. En effet, cette HE est marquée par un taux de cineol plus
important .
Autre différence biochimique entre les autres cultivars réside dans la présence ou non de
certains composés caractéristiques .
II.15.a.2. Résultats chromatographiques de l’huile essentielle des tiges du Laurus nobilis
L. :
Tableau 53: Résultats de profil chromatographiques de l’huile essentielle des tiges du
Laurus nobilis L.
tiges de laurus nobilis L.
Pourcentage ( % )
α-thujène
α-pinène
camphène
sabinene
β-pinène
1.551
11,732
12,243
13,106
13,196
3.192
0,006
0,014
0,020
0,016
α-terpinene
1,8-cinéol
carene
Cis (β) terpineol
14,51
14,971
15,834
16,065
0,012
2,188
0,045
0,040
Linalool
Bornéol
Iso-bornéol
Terpinèn-4 ol
17,108
18,703
18,974
19,294
5,668
0,295
0,620
1,106
α-terpinéol
Nerol
Bornéol acétate
19,676
20,538
22,063
2,148
0,210
0,759
α-terpényl acetate
Terpényl acetate
Engénol = 1,3,4 eugénol
22,815
23,708
23,878
0,481
9,242
2,709
β-élémène
α-gurjunene
β-caryophyllene ,trans caryophyllene
24,741
25,002
25,222
25,513
0,970
10,62
0,335
3,529
α-caryophyllene
26,276
0,728
Cedrene
26,907
1,034
93 | P a g e
Partie pratique
β-guaiene
–cadinol
β-cadinene
27,379
27,600
27,740
1,752
1,621
2,729
Elémicine (elemcin)
spathulenol
caryophyllene oxide
Globulol
guaien
τ-cadinol
α-cadinol
28,241
29,044
29,174
29,335
30,077
30,308
30,579
2,635
2,492
5,058
1,369
1,240
2,240
4,287
α-copaen-11 ol
30,899
2,324
acide hexadecanoic (palmetic)
∑
Total
36,015
-
2,616
76.350
23.103
99.453
Figure 40:Chromatogramme de l’huile essentielle des tiges du laurier noble (laurus nobilis
L.)
Tableau 54 : Composés majoritaires de l’HE des tiges du laurus nobilis L.
Composés
%
α-thujène
1,8-cinéol
linalool
α-terpineol
Terpényl acetate
Engénol
3.192
2.188
5.668
2.148
9.242
2.709
10.62
94 | P a g e
Partie pratique
3.529
2.729
2.635
2.492
5.058
2.240
4.287
2.324
β-caryophyllene
β-cadinene
Elémicine
Spathulenol
caryophyllene oxide
τ-cadinol
α-cadinol
α-copaen-11 ol
Tableau 55: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des tiges du laurus
nobilis.
Classes
biochimiques
Oxydes
terpéniques
%
2.188
1,8-cinéole (2.188 % )
8.922
Monoterpénols
Linalol ( 5.668%), terpinén-4-ol ( 1,106%), alphaterpinéol
( 2.148%)
13.329
Phénols
eugénol méthyl éther ( 10.62 %), engénol ( 2.709 %)
0.068
Monoterpènes
sabinène (0.02%), béta-pinène (0.016%), alpha-pinène
(0.006%), camphène (0.014 %), alpha-terpinène (0.012%)
Esters
terpéniques
10.482
acétate d'alpha-terpényle (0,481%), acétate de bornyle
(0,759%) , térpényle acétate ( 9.242 %)
Totale identifiées
/
34.989
95 | P a g e
Partie pratique
14
pourcentage des calsses
biochimiques ( % )
12
10
8
6
4
2
0
oxydes
terpéniques
monoterpénols
phénols
monoterpènes
esters
térpéniques
Figure 41: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des tiges du laurus
nobilis .
Composition chimique de l'huile essentielle des tiges du laurus nobilis L. :
Les résultats de l’analyse par Chromatographie en phase gazeuse-Spectrométrie de
masse de la composition chimique des huiles essentielles des tiges du laurus nobilis sont
temps de rétention.
Au total, et parmi les 146 composés (99.45%) seulement 38 ont été identifiés ce qui
correspond à un pourcentage de 76.35% par rapport à l'ensemble des constituant isolés.
L’eugénol méthyl ether, terpényl acetate, linalool et caryophyllene oxide apparaît comme
les constituants majoritaires de l'HE (10.62%, 9.242%, 5.668% et 5.058%), suivi du αcadinol ( 4.287 %), du β-caryophyllene (3.529%), du α-thujène (3.192%) et de 1,8-cinéol
(2.188%) .
Biochimiquement parlant, cette HE est composée essentiellement des phénols (13.32%).
Les esters terpéniques forment un pool de 10.48%, suivis des monoterpénols (8.92 %). Les
oxydes terpéniques sont à un taux faible par rapport à celui des feuilles (10.65%). Enfin,
les composés minoritaires appartiennent à la famille des monotérpènes , qui présente un
taux très faible (0.068%) (Figure 41 ).
En effet, l’HE des tiges du laurier est différentes à l’HE des feuilles du laurier .[137,143]
II.15.a.3. Résultats chromatographiques de l’huile essentielle des fruits du Laurus
nobilis L. :
96 | P a g e
Partie pratique
Tableau 56: Résultats de profil chromatographiques de l’huile essentielle des fruits du
Laurus nobilis L.
Fruits ( baies) de laurus nobilis L.
Pourcentage ( % )
1,8-cinéol ( Eucalyptol )
linalool
4-Terpinèol
α-terpinéol ( P-menth-1-en-8-ol )
16.209
18.227
20.536
20.907
0.717
0.531
0.295
1.029
Bornylacétate
α-cubebene
β-élémène
caryophyllene
azulene
Eudesma-4(14), 11 diène
cubenol
Lauric anhydride
cedrene
cedren-13-ol
(E)-β-ocimene
23.336
24.885
24.988
26.091
26.800
27.114
28.354
29.120
30.240
31.360
32.092
32.566
0.437
0.584
0.554
11.462
0.848
0.338
1.118
6.365
16.424
0.981
15.057
21.838
Lanceol, cis
Caryophyllene oxide
Spathulenol
Hexadecanoic acide
Acide oleique
∑
33.812
34.201
34.28
37.299
40.236
-
2.664
1.049
1.290
1.194
0.519
85.294
-
14.704
99.998
Total
Figure 42:Chromatogramme de l’huile essentielle des fruits du laurier noble (laurus nobilis
L.)
97 | P a g e
Partie pratique
Tableau 57 : Composés majoritaires de l’HE des fruits du laurus nobilis L.
Composés
%
β-élémène
Eudesma-4(14), 11 diène
cubenol
Lauric anhydride
cedren-13-ol
(E)-β-ocimene
Lanceol, cis
Spathulenol
11.462
1.118
6.365
16.424
15.057
21.838
2.664
1.290
Tableau 58: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des fruits du laurus
nobilis.
Classes
biochimiques
%
Oxydes
terpéniques
1,8-cinéole (0.717 % ), Lanceol, cis ( 2.664 % ) ,
4.671
Spathulenol ( 1.290 % ).
Linalol ( 0.531%), 4-terpinéol ( 0.295%), alpha-terpinéol
1.855
Monoterpénols
( P-menth-1-en-8-ol ) ( 1.029%).
Phénols
Eugénol méthyl éther ( 0%), engénol ( 0 %).
Sesquiterpénéols Cubenol ( 6.365 % ).
Sesquiterpènes
0
6.365
β-élémène ( 11.462 % ).
11.462
sabinène (0%), béta-pinène (0%), alpha-pinène (0%),
36.895
Monoterpènes
camphène (0%), alpha-terpinène (0%), (E)-β-ocimene
( 21.838 %) , cedren-13-ol ( 15.057 % ).
Esters
terpéniques
alpha-terpénylacétate (0.584%), acétate de bornyle
1.021
(0.437%).
Totale identifiées
/
62.269
98 | P a g e
pourcentage des calsses biochimiques ( % )
Partie pratique
40
35
30
25
20
15
10
5
0
Figure 43: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des fruits du laurus
nobilis .
Composition chimique de l'huile essentielle des fruits du laurus nobilis L. :
Les résultats de l’analyse par Chromatographie en phase gazeuse-Spectrométrie de
masse de la composition chimique de l’huile essentielle des fruits du laurus nobilis sont
temps de rétention. Au total, et parmi les 46 composés (99.99 %) seulement 24 ont été
identifiés ce qui correspond à un pourcentage de 85.29 % par rapport à l'ensemble des
constituant isolés.
Le (E)-β-ocimene, Lauric anhydride , cedren-13-ol , β-élémène
apparaît comme les
constituants majoritaires de l'HE des fruits du laurier (21.83%, 16.424% ,15.057% et
11.462% ), suivi du Cubenol ( 6.365 % ), du Lanceol (2.664%), du Spathulenol (1.290%).
Le 1,8-cinéol ( ou eucalyptol ) existe aussi dans les fruits du laurus nobilis mais en quantité
très faible (0.717 %) par rapport a celle des feuilles et des tiges de la même plante.
Biochimiquement parlant, cette l’HE est composée essentiellement des Monoterpènes
(36.89%) et des Sesquitérpènes (11.46%). Les Sesquiterpénéols forment un pool de
(6.36%), suivis des oxydes terpéniques (4.67%).
Les Monoterpénols (1.85%), les Esters terpéniques (1.02%) sont à un taux faible (les
composés minoritaires) par rapport à celui des feuilles et des tiges. (Figure 43 ).
99 | P a g e
Partie pratique
En effet, l’HE des fruits du laurier est différentes totalement à l’HE des feuilles et des
tiges du laurier noble .
II.15.a.4. Résultats chromatographiques bibliographique de l’huile essentielle des fleurs
du Laurus nobilis L. :
Tableau 59: Résultats bibliographique de profil chromatographiques de l’huile essentielle
des fleurs du Laurus nobilis L.
Pourcentage ( % ) en composants chimiques
dans les fleurs du laurus nobilis L.
Tricyclene
Thujone
a-Pinene
Camphene
Sabinene
b-Pinene
Myrcene
a-Phellandrene
t
0.2
5.1
2.4
1.7
3.7
0.6
0.1
D3-Carene
ρ-Cymene
Limonene
1,8-Cineole
(Z )-b-Ocimene
Phenylacetaldehyde
(E)-b-Ocimene
(E)-Sabinene hydrate
Linalool
Pinocarvone
Borneol
a-Terpineol
Linalyl acetate
Bornyl acetate
2-Undecanone
d-Terpinyl acetate
a-Terpinyl acetate
Eugenol
a-Ylangene
a-Copaene
iso-b-Elemene
b-Cubebene
b-Elemene
Eugenol methyl ether
(E)-b-Caryophyllene
(E)-Isoeugenol
0.4
–
t
8.8
0.3
–
2.7
t
–
–
0.4
t
–
2.1
–
0.3
1.8
–
0.9
0.3
0.4
–
5.4
–
5.1
0.5
100 | P a g e
Partie pratique
a-Humulene
Alloaromadendrene
(E )-b-Farnesene
γ-Muurolene
GermacreneD
b-Selinene
Bicyclogermacrene
a-Farnesene
Germacrene A
γ-Cadinene
d-Cadinene
Ni(sesquiterpene)
Elemol
Germrene D-4-ol
a-Eudesmol
Costunolide
0.5
–
0.1
–
2.4
0.3
2.2
1.3
1.1
–
t
3.4
–
–
11.8
–
t : trace .
25
20
15
10
5
0
Feuilles
α-thujène
camphène
β-pinène
1,8-cinéol
Cis (β) terpineol
Bornéol
Terpinèn-4 ol
Nerol
Engénol
β-caryophyllene ,trans caryophyllene
Cedrene
–cadinol
Elémicine (elemcin)
caryophyllene oxide
guaien
α-cadinol
acide hexadecanoic (palmetic)
azulene
cubenol
cedren-13-ol
Lanceol, cis
pourcentage des composants ( % )
Diagramme montrant la composition des
differentes parties de laurus nobilis avec leur
pourcentage
Figure 44: Diagramme montrant la composition des différentes parties de laurus nobilis
avec leur pourcentage (%).
101 | P a g e
Tiges
fruits
Partie pratique
II.16.Formulations des pommades :
II.16. A. Contrôle de qualité de la matière première :
II.16. A.1. contrôle de qualité des excipients :
Avant de préparer (formuler) une pommade, le contrôle de sa matière première
s’impose. [139, 151]
1. Vaseline :
Dénomination commune internationale : vaseline officinale.
Composition : c’est un mélange d’hydrocarbure qu’on obtient par raffinage de diverses
fractions lourdes du pétrole pour augmenter sa consistance, on peut ajouter des petites
quantités des paraffines.
Aspect : substance blanchâtre d’une consistance analogue à celle de l’axonge, translucide
en couches minces et légèrement fluorescente quand elle est fondue, insipide ( qui n’a
aucune saveur ), incolore et dégage une faible odeur lors de chauffage.
Solubilité :
Tableau 60: Tests de solubilité de la vaseline.
Chloroforme
0,5 parties de benzene
L’eau
L’acétone
Soluble
Soluble
Insoluble
Soluble
Identification :
Tableau 61 : Les différents contrôles sur la vaseline.
Densité D20
Tf
Norme
0,830 à 0,900
38 à 50°C
Valeur
0,832
43°C
Acidité :
A 10 g de vaseline, ajouter 20 ml d’eau bouillante et agiter rigoureusement pendant une
minute, refroidir et décanter. A 10 ml de la phase aqueuse, ajouter 0,1 ml de la solution de
phénolphtaléine, la solution est incolore, le virage au rose de l’indicateur ne nécessite plus
de 1ml de NaOH à 0,01 M.
Volume de NaOH utilisé = 0,1ml ……………………………………………….( conforme)
2. Menthol :
Formule brute : C10H20O
102 | P a g e
Partie pratique
Appellation chimique : isopropyl-2-méthyl-5-cyclohexanol
Caractères :
poudre cristalline, libre ou agglomérée ou cristaux prismatiques ou acicules, incolore,
brillants, d’odeur forte caractéristique rappelant la menthe pratiquement insoluble dans
l’eau.
Solubilité :
Tableau 62: Tests de solubilité de menthol.
L’eau
L’acétone
Benzène
Chloroforme
L’éther du pétrole
Difficilement soluble
Très soluble
Très soluble
Très soluble
Soluble
Identification :
Tableau 63 : Les différents contrôles effectués sur le menthol.
Pouvoir rotatoire
Point de fusion
Norme
-48 à -50
41 à 45°C
Résultat
-50
44°C
Essais :
Solution « s » :Dissoudre 2,5 g de menthol dans 10ml d’alcool et compléter à 25ml avec le
même solvant.
Aspecte de la solution : La solution est limpide et incolore.
Acidité ou alcalinité :
Dissoudre 1,0 g de menthol dans l’alcool et compléter à 10ml avec le même solvant,
ajouter 0,1 ml de solution de phénolphtaléine. La solution est incolore, le virage au rose de
l’indicateur nécessite quelques gouttes de NaOH à 0,01 M.
Volume de NaOH utilisé = 0,3 ml ……………………………………………...( conforme )
Résidu à l’évaporation :
Evaporer au bain-marie 2 g de menthol puis chauffer à l’étuve 100-105°c pendant une
heure.
Les masses du résidu ne sont pas supérieures à 0,1 mg ( 0,05% ).
Masse de résidu = 0,08 mg ……………………………………………………..( conforme )
103 | P a g e
Partie pratique
3. Salicylate de méthyle :
Caractères :
Aspect : liquide incolore ou faiblement jaune ………………………………….( conforme )
Solubilité : très peu soluble dans l’eau , miscible à l’alcool, aux huiles grasses et aux huiles
essentielles……………………………………………………………………... ( conforme )
Identification :
A/ le point de fusion : 156°C à 161°C ………………………………………….. ( 159,6°C )
B/ réaction de coloration : Pour 10 ml d'une solution saturée ajouter 0,05 ml de solution de
chlorure ferrique . Il se développe une coloration violette ……………….....…( conforme )
Essai :
Aspect de la solution : la solution est limpide et n’est pas plus fortement coloré que la
solution témoin ………………………. …………………………………….….( conforme )
Acidité : < 0,4 ml de NaOH 0,1M………………………………………………. ( 0,00 ml )
Densité : 1,180 à 1,186 …………………………………………………………….( 1,183 )
Indice de réfraction : 1.535 à 1.538…………………………………………….......(1.5351)
Dosage :
titrimétrie -NaOH 0,1 M 99,0% à 100,5% ……………………………………..( 99,15% )
4. Analyse du camphre :
Caractères :
Poudre cristalline blanche, très volatile même à température ambiante.
Solubilité :
Tableau 64: tests de solubilité de camphre.
L’eau
Alcool
Ether et éther de pétrole
Huiles grasses
Glycérol
peu soluble
très soluble
très soluble
facilement soluble
soluble
conforme
conforme
conforme
conforme
conforme
Identification :
Point de fusion : Le point de fusion du camphre doit varier dans l’intervalle : 174180°c.
104 | P a g e
Partie pratique
Point de fusion = 175°c………………………………………………..……....( conforme ).
Point de fusion des cristaux du camphre : Le point de fusion des cristaux doit varier dans
l’intervalle : 118-121°c.
Point de fusion = 119,8°c…………………………………………………...…( conforme ).
Angle de rotation optique : On le détermine sur la solution « s », il doit varier entre + 0,15°
et -0,15°.
Angle de rotation optique = 0°……………………………………………...…...(conforme).
Essais :
Solution « s » : Dissoudre 2 g de camphre dans 10 ml puis compléter à 25 ml avec le même
solvant.
Aspecte de la solution « s » : La solution « s » est limpide et incolore.
Acidité : Dissoudre 10 g de camphre dans 10 ml d’alcool, ajouter 0,1 ml de solution de
phénophtaléine, la solution est alors incolore, titrer par l’hydroxyde de sodium à 0,1N.
Volume de NaOH à 0,1N = 1,8 ml …………………………………………....( conforme ).
5. Analyse de lanoline :
Composition :
C’est une substance cireuse purifiée et anhydre obtenue à partir de la laine du mouton. Elle
peut contenir au maximum 200 parties par million de butylhydroxytoluène.
Aspect :
Substance jaune pale de consistance onctueuse et d’odeur caractéristique fondue.
La grasse de laine est un liquide jaune limpide.
Solubilité:
Figure 65: Tests de solubilité de lanoline.
L’eau
Chloroforme
L’éther et éther de pétrole
pratiquement insoluble
soluble
soluble
conforme
conforme
conforme
Identification :
Densité : La densité de lanoline est de 0,932 à 0,945 à 15°c.
Point de fusion : Le point de fusion de lanoline est de 238°c.
Point de fusion = 238°c……………………………………………………….( conforme).
105 | P a g e
Partie pratique
Indice de réfraction : L’indice de réfraction de la lanoline varie entre 1,478 et 1,482.
6.Analyse de lidocaïne:
Solubilité :
Très soluble dans l'eau, facilement soluble dans l'éthanol (96 pour cent).
Identification :
Pour environ 5 mg, ajoutez 0,5 ml d'acide nitrique fumant R. Evaporer à sec sur un bainmarie, cool, et dissoudre le résidu dans 5 ml d'acétone R. Ajoutez 0,2 ml d'hydroxyde de
potassium alcoolique solution R. Une couleur verte se développe.
Essai :
pH 4,0 à 5,5.
Stockage :
Protégé de la lumière.
7.Analyse de l’acide salicylique :
2-Hydroxybenzenecarboxylic acide.
Apparence :
Blanche ou presque blanche, poudre cristalline blanche ou incolore, cristaux aciculaires.
Solubilité :
Légèrement soluble dans l'eau, facilement soluble dans l'éthanol (96 pour cent), peu
soluble dans le chlorure de méthylène.
Identification :
Dissolvez environ 30 mg dans 5 ml de 0,05 M d'hydroxyde de sodium, de neutraliser, si
nécessaire ml et diluer avec de l'eau à 20 R. 1 ml de la solution donne la réaction (a) des
salicylates.
Essais :
Dissoudre 2,5 g dans 50 ml d'eau R bouillante distillée, refroidir et filtrez.
Aspect de la solution :
La solution est limpide et incolore.
106 | P a g e
Partie pratique
Stockage : Protégé de la lumière.
8.Analyse de l’oxyde de zinc :
Apparence :
Doux, blanc ou légèrement jaunâtre-blanc, poudre amorphe, exempte de particules
graveleuses.
Solubilité :
Pratiquement insoluble dans l'eau et l'éthanol (96 pour cent).
Identification :
Dissolvez 0,1 g dans 1,5 ml de acide chlorhydrique dilué et complétez à 5 ml avec de l'eau
. La solution donne la réaction du zinc.
Essai :
Alcalinité :
Agitez 1,0 g avec 10 ml d'eau bouillante . Ajoutez 0,1 ml de solution de phénolphtaléine et
filtrez.
Si le filtrat est rouge, pas plus de 0,3 ml de 0,1 M d'acide chlorhydrique est nécessaire pour
changer la couleur de l'indicateur.
II.16. A.2. Contrôle de qualité de l’huile essentielle des feuilles du laurus
nobilis :
L’analyse a été faite dans la première partie de ce travail , nous avons constaté que cette
huile essentielle peut être utilisé pour la formulation des préparas médicamenteux.
Les différents contrôles effectuées sur les excipients et l’huile essentielle montre qu’ils
sont conformes aux normes de la pharmacopée européenne ce qui permet leurs utilisation
dans une formulation pharmaceutique.
Dans cette partie nous avons formulé quelques pommades y compris celle qui peut avoir
une propriété décongestionnante destinée a dégager les voies respiratoires, grâce aux
propriétés décongestionnantes des voies respiratoires du 1,8-cinéol composant majoritaire
de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis .
Nous avons opté l’utilisation de la vaseline en grande proportion comme excipient de
cette pommade qui à comme rôle la fixation des principes actifs, on a aussi utilisé la
lanoline qui à une importance, car elle aide l’absorption des principes actifs en les
véhiculant jusqu’au sang ( circulation sanguine ).
107 | P a g e
Partie pratique
II.16. B. Pommade décongestionnante des voies respiratoires :
Tableau 66: Formulation de pommade décongestionnant [152].
Constituants
Essai I
%
g
Hydrochlorure de
lidocaïne (anesthésine)
0
0
Solution de hydrochlorure
d’adrénaline
0
Vaseline blanche
Essai II
%
Essai III
g
%
g
0,3
0,3
0,3
0,3
0
x
x
x
x
55
55
53
53
53
53
Lanoline
27
27
24
24
24
24
Huile de vaseline
13
13
10
10
10
10
de laurier noble
0
0
x
x
2x
2x
Camphre
4
4
3
3
3
3
Menthe
1
1
1
1
1
1
Huile essentielle
d’eucalyptus
0
0
x
x
x
x
Salicylate de méthyle
0
0
x
x
x
x
Bentonite
0
0
0,5
0,5
0,5
0,5
ZnO
0
0
0,5
0,5
0,5
0,5
Mode opératoire :
Dans un creuset en porcelaine, on pulvérise en poudre fine l’ensemble de menthol,
camphre, bentonite et l’oxyde de Zn.
Faire liquéfier une quantité de vaseline sur la plaque chauffante. Incorporer
successivement le menthol jusqu’à solubilisation puis le camphre, la bentonite, l’oxyde de
Zn et on laisse refroidir.
108 | P a g e
Partie pratique
Figure 45: Mélange vaseline, camphre, bentonite et l’oxyde de Zn.
Mettre dans un mortier lanoline puis la solution d’hydrochlorure d’adrénaline et le
salicylate de méthyle, mélanger jusqu’à homogénéisation, on ajoute le mélange vaseline
additionné aux autre constituants.
Figure 46: Pommade formulée.
Mélanger le tout puis ajouter de l’anesthésie( lidocaine ). Après avoir mélangé on
obtient un mélange uniforme, ensuite en y ajoute l’huile de vaseline. Une fois que le
mélange commence à refroidir, on ajoute l’huile essentielle de laurier et celle de menthe
polio et d’eucalyptus en dernier car c’est des produits très volatils, on arrive à avoir un
mélange homogène en triturant à l’aide du pilon l’ensemble principes actifs et excipients.
II.16. C. Pommade antiseptique :
Tableau 67: Formulation de pommade antiseptique.
Constituants
Lidocaïne (Anesthésine)
Huile essentielle de laurus nobilis
Acide salicylique
Tetraborate de Na
Streptocide
Vaseline blanche
lanoline
Menthe
Camphre
Salicylate de méthyle
Essai ( % )
1
x
1
1
0,5
60
30
1,2
x
3
Mode opératoire :
109 | P a g e
Partie pratique
Dans un cristallisatoire, faire liquéfier une quantité de vaseline sur la plaque chauffante.
Incorporer successivement le menthol jusqu’à solubilisation, puis le streptocide, le
tetraborate de Na ,l’acide salicylique et enfin le camphre et on laisse refroidir.
Figure 47: Mélange vaseline, menthol et camphre .
Mettre dans un mortier lanoline puis le salicylate de méthyle, mélanger jusqu’à
homogénéisation, on ajoute le mélange vaseline additionné aux autre constituants.
Figure 48 : Mélange lanoline et le salicylate de méthyle.
Mélanger le tout puis ajouter de l’anésthésine. une fois que le mélange commence à
refroidir, on ajoute l’huile essentielle de laurier en dernier.
Figure 49: Pommade antiseptique formulée .
Mettre chaque pommade dans un récipient hermétique et conserver ces derniers dans un
endroit frais.
110 | P a g e
Partie pratique
II.16. D. Contrôles du produit fini :
II.16. D. 1. Contrôle de la pommade décongestionnante des voies respiratoires :
II.16. D. 1.a. Examen des caractéristiques macroscopiques :
L’examen des caractéristiques macroscopique constitue la première approche de la
qualité de la préparation et doit faire l’objet d’une étude approfondie de la part du
fabriquant, afin de lui permettre l’observation de toute anomalie. En effet, des
modifications perçues au niveau des caractéristiques visuelles, olfactives, sont des
indicateurs possibles d’une dégradation de causes diverses ( oxydation, variation de
pH).[152]
Figure 50: pommade décongestionnante formulée.
a). Essai galéniques :
Aspect : assez épaisse sans présence de grumeaux à l’étalement.
Couleur : jaunâtre à jaune blanchâtre .
Odeur : arome de laurier noble et une odeur camphrée .
b). Homogénéité :
Macroscopiquement, nous vérifions l’homogénéité de chaque pate en étalant une couche
mince sur une surface plane d’une feuille qu’on plie, que nous ouvrons et sur laquelle nous
effectuons l’étalement d’une deuxième couche. Il est vérifié à l’œil nu l’absence des
agrégats et la bonne répartition des produits. Dans le cas de nos pommades nous ne voyons
aucune présence de grumeaux, donc elles sont parfaitement homogènes.
111 | P a g e
Partie pratique
Figure 51: pommade décongestionnante étalée .
c). Mesure du pH :
Le pH a été déterminé en mesurant celui d’une dilution au dixième de pommade dans de
l’eau distillée chaude.
Figure 52 : mesure de pH de la pommade décongestionnante.
Le pH de la pommade antirhume à base d’HE du laurus nobilis est égal à 6,88.
D’après la valeur du pH qui est ni très basique ni acide, nous pouvant dire que la
pommade ne provoquent pas d’irritation sur la peau.
d). La viscosité :
la viscosité représente la résistance qu’opposent les molécules d’un liquide à une force
tendant à les déplacer par glissement.
Pour caractériser physiquement un produit , on détermine sa courbe d’écoulement.
On appelle équation rhéologique d’état d’une substance, la relation qui existe entre la
déformation de cisaillement « ε » et la contrainte de cisaillement « σ ». Cette relation est
notée : ε = f (σ ).
Les courbes qui traduisent graphiquement l’équation rhéologique d’état sont appelées
rhéogramme.
La viscosité est définie par la relation : η= σ / v
112 | P a g e
Partie pratique
Avec :
σ : La contrainte de cisaillement.
v : la vitesse de cisaillement correspondante.
Elle est réalisée par la méthode sur l’appareil à mobile tournant, cette méthode est utilisée
quelle que soit la consistance de l’émulsion.
Elle est basée sur la mesure des forces de cisaillement, et permet de mesurer la viscosité
dynamique exprimée en milli pascal / seconde.
Condition opératoires :
L’essai est réalisé dans un rhéomètre AR2000 avec géomètre cône-plan
Con : de diamètre F=6cm.
Nom : CSR 1
Nombre d’intervalles : 4
Application : RHEOPLUS/32 V3.21 21002984-33025
Dispositif : MCR301 SN80133964 ; FW3.00 ; Slot2
Système de mesure : CP25-2-SN9301 ; d=0.053 mm
Accessoires : TU1= P-PTD200-SN80106708
Nombre de points de données : 1
Réglage de l’heure : 1 Meas. Pts.
Meas. Pts. Durée : 1min
Taux de cisaillement d ( gamma )/ dt = 1/s à température T= 20°C.
La courbe écoulement : t=0…..1000s-1 et chaque seconde 1 point.
Les résultats obtenus sont relevés sur le tableau 68 et sont représentés dans les figures
53 ;54 :
Tableau 68: Valeur du taux de cisaillement, de la contrainte de cisaillement et de viscosité
de la pommade.
Meas.
Pts.
1
2
3
4
Shear
Rate [1/s]
0.1
0.134
0.18
0.241
Shear
Stress [Pa]
97
95.6
97.3
101
Viscosity
[Pa.s]
970
713
541
418
Speed
[1 / min]
0.0334
0.0449
0.0602
0 ?0807
Torque
[μ Nm]
397
391
398
412
113 | P a g e
Partie pratique
0.324
0.434
0.583
0.781
1.05
1.41
1.89
2.53
3.39
4.55
6.11
8.19
11
14.7
19.8
26.5
35.6
47.7
64
85.8
115
154
207
278
373
500
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
105
108
111
115
119
124
129
137
145
155
166
178
193
215
246
282
326
383
453
529
583
541
651
677
700
705
324
249
191
147
114
88.1
68.6
54
42.6
34
27.1
21.7
17.6
14.6
12.4
10.6
9.16
8.03
7.08
6.16
5.06
4.15
3.14
2.44
2.13
1.87
0.108
0.145
0.195
0.261
0.351
0.47
0.631
0.846
1.13
1.52
2.04
2.74
3.67
4.93
6.61
8.87
11.9
16
21.4
28.7
38.5
51.7
69.3
92.9
125
167
428
442
456
471
487
506
529
558
591
633
677
728
788
878
1000
1150
1330
1570
1850
2160
2380
2620
2660
2770
3250
3820
Viscosité en fonction de taux de cisaillement
800
700
viscosité [Pa.s]
600
500
400
300
200
100
0
0
100
200
300
400
taux de cisaillement [1/s]
500
600
Figure 53: Courbe représente la viscosité en fonction de taux de cisaillement.
114 | P a g e
Partie pratique
Contrainte de cisaillement [Pa ]
Contrainte de cisaillement en fonction de
temps de cisaillement
800
700
600
500
400
300
200
100
0
0
100
200
300
400
500
600
Taux de cisaillement [1/S]
Figure 54: Diagramme représentant la contrainte de cisaillement en fonction de taux de
cisaillement.
La rhéologie est la science des écoulements de la matière. La mesure de la viscosité d’un
fluide en fait partie. Le graphe indiquant la viscosité en fonction du taux de cisaillement
montre que la pommade étudiée est du type dit « rhéo-fluidifiant » car sa viscosité diminue
lorsque le taux de cisaillement augmente ( Figure 53). C’est le cas des bonnes pommades
qui sont fluides à l’étalement mais plus visqueuses au toucher, évitant ainsi les
« coulures ». Les molécules, sous l’effet de la vitesse de cisaillement ont tendance à
s’aligner progressivement le long des couches ce qui favorise un glissement relatif.
Une seconde interprétation consiste à envisager une modification de la structure du
matériau sous l’effet du gradient de vitesse ( déstructuration par rupture de liaison de type
Van der Waals, défloculation des particules ….).
Cependant, ce fluide est dit à seuil, car il faut dépasser un seuil en contrainte σ0 avant qu’il
ne puisse s’écouler .Par définition, un seuil d’écoulement décrit la contrainte requise pour
produire l’écoulement d’une substance plastique.
Le seuil d’écoulement sert à déterminer l’épaisseur d’une couche de revêtement et à
s’assurer de la stabilité au stockage.
Donc cette pommade est un fluide plastique, ce qui signifie qu’elle s’écoule à partir d’une
certaine valeur de contrainte σ0 . Au repos, elle possède une structure tridimensionnelle
rigide ( particules emboitées ).
Les résultats obtenus sont conformes, et la nature de la pommade est un fluide non
Newtonien pseudo plastique .
115 | P a g e
Partie pratique
II.16. D. 2. Contrôle de la pommade antiseptique :
II.16. D. 2.a. Examen des caractéristiques macroscopiques :
Figure 55: Pommade antiseptique formulée.
a). Essai galéniques :
Aspect : assez épaisse sans présence de grumeaux à l’étalement.
Couleur : jaunâtre.
Odeur : arome de laurier noble et une odeur camphrée .
b). Homogénéité :
Dans le cas de la pommade antiseptique nous ne voyons aucune présence de grumeaux,
donc elle est parfaitement homogène.
Figure 56: Pommade antiseptique étalée .
116 | P a g e
Partie pratique
c). Mesure du pH :
Figure 57 : Mesure de pH de la pommade antiseptique.
Le pH de la pommade antiseptique à base d’HE du laurus nobilis est égal à 5,63.
D’après la valeur du pH qui est ni très basique ni acide, nous pouvant dire que la
pommade ne provoquent pas d’irritation sur la peau.
Paramètre du contrôle de qualité :
Les caractères macroscopiques ( couleur et la consistance ), l’homogénéité et le pH des
pommades sont reportés dans le tableau 69 :
Tableau 69 : Caractères macroscopiques, homogénéité et pH des pommades.
Paramètres
Pommade antirhume
Pommade antiseptique
Couleur
Jaunâtre à jaune blanchâtre
Jaunâtre
Homogénéité
Homogène
Homogène
Consistance
Molle assez épaisse
Molle assez épaisse
pH
6,88
5,63
117 | P a g e
Partie pratique
II.17. Essai de la tolérance locale :
La réaction cutané érythème et œdème est évaluée et quantifiée sur la zone préalablement
scarifiée ou intacte. Selon l’échelle numérique proposé par le « Journal Officiel de la
République Française » . [153]
Test de tolérance :
L’application, sur la peau saine ou lésée, de produits chimiques, est susceptible de
provoquer chez certains sujets des irritations d’intensité variable.
Les tests de tolérance locale cutanée ont pour but de prédire, à partir de la connaissance de
la toxicité sur un organisme animal vivant, le risque toxicologique chez l’homme.
Le test de tolérance a été réalisé à l’animalerie du Laboratoire Nationale De Contrôle Des
Produits Pharmaceutiques ( L.N.C.P.P. à Dely brahim, Alger), Laboratoire de
pharmacologie et de toxicologie.
Principe :
L’indice d’irritation primaire cutanée de nos produits a été déterminé chez le lapin selon la
méthode de référence publiée au Journal Officiel de la République Française du 24 octobre
1984 .
La méthode est réalisée sur 6 (six) lapins de souche néozélandaise, le dos de chaque animal
est divisé en deux zones, après élimination des poils. Sur l’une des zones, le produit est
appliqué directement, sur l’autre zone, il est appliqué après scarification. Le produit est
maintenu en contact avec la peau par un pansement pendant 24 heures.
Des lectures sont faites une heure après enlèvement du pansement, et 24 à 72 heures après
l’application du produit.
Le système de cotation des phénomènes observés permet de dégager par un calcul un
indice d’irritation primaire cutanée ( IP ) pour classer le produits en 4 catégories.
L’essai est effectué dans un lieu tranquille ou aucune perturbation ne risque d’exciter les
animaux.
Protocole expérimental :
A). Préparation des animaux :
En premier lieu, la veille de jour d’application du produit, le dos et les flancs de 6 lapins
ont été tondus à l’aide d’une tendeuse électrique.
118 | P a g e
Partie pratique
Figure 58: Lapin tondu au niveau du dos et des flancs.
B). Application de la pommade :
Le jour de l’essai ( Vingt-quatre heures plus tard), on effectue sur le flanc droit de
chaque animal à l’aide d’une lame de scalpel stérile, trois scarifications parallèles de
l’épiderme de 3cm de long espacées d’environ 0,5 cm, le flanc gauche restant tel quel, les
scarifications doivent abraser la cornée sans provoquer de saignement.
Figure 59: Zone scarifiée .
Une quantité de produit ( pommade ) équivalente à 0,5 g a été appliquée sur chacun des
flancs ( scarifié et normale ) des animaux sous pansement semi-occlusif. La gaze ainsi
imbibée est recouverte par le para film et le para film est recouvert d’une bande adhésive.
Les lapins sont remis dans leurs cages. Chaque produit formulé a été laissé en contact avec
la peau durant 24 heures.
Figure 60 : Produit appliqué.
119 | P a g e
Partie pratique
+
=
Figure 61: Application du produit.
C). Observation :
Vingt quatre heures plus tard, les pansements sont ôtés , les résultats sont lus au bout
d’une demi heure par au moins deux personne distinctes, une seconde lecture est faite 72
heures après l’application du produit. L’irritation cutanée a été appréciée aux sites
d’application
( scarifié et non scarifié ) à l’aide d’une échelle d’évaluation numérique
permettant de coter les érythèmes et la formation d’œdème.
L’évaluation porte sur la formation de l’érythème et de l’œdème qui sont notés suivant une
échelle numérique :
Tableau 70: Evaluation de l’œdème.
Absence d’œdème
Œdème très léger ( à peine visible )
Léger œdème ( gonflement apparent )
Œdème moyen ( épaisseur 1mm )
Œdème grave ( épaisseur supérieur à 1mm )
0
1
2
3
4
Tableau 71: Echelle numérique de l’érythème et la formation d’escarres.
Absence d’érythème
Léger érythème ( à peine visible )
Erythème bien visible
Erythème modéré à important
Erythème grave ( rouge pourpre )
0
1
2
3
4
D). Expression des résultats :
Evaluation de l’indice d’irritation cutanée primaire :
L’indice d’irritation primaire cutanée ( IP ) a été déterminé en additionnant les chiffres
obtenus pour l’érythème et l’œdème, à chaque temps de lecture ( 24 et 72 heures après
l’application ), sur les 12 zones d’application ( 1 zone scarifiée + 1 zone intacte ) x 6
animaux puis en divisant le total par 24 :
120 | P a g e
Partie pratique
∑
,
∑
,
Ou
IP = ( Œdème + Erythèmes )Flanc traité + ( Œdème + Erythèmes )Flanc témoin / 24
Avec :
24 = nombre de lapin ( 6 ) x nombres de zones testés ( traité et témoin = 2) x nombre de
type d’irritation ( Œdème et érythème = 2 )
E : érythème
Œ: œdème
La moyenne ainsi obtenue représente l’IP, celui-ci permet de classer le produit (pommade)
en quatre types de réponses :
-
Action non irritante, IP inférieur à 0,5 : IP < 0,5 ;
-
Action légèrement irritante, IP compris entre 0,5 et 2 : 0,5< IP < 2 ;
-
Action moyennement irritante (irritante), IP compris entre 2 et 5 : 2< IP < 5 ;
-
Action sévèrement irritante, IP compris entre 5 et 8 : 5 < IP < 8.
Figure 62: Résultat de l’indice d’irritation primaire cutanée pour la pommade
décongestionnante.
Résultats :
1. Détermination de l’indice d’irritation primaire cutanée de la pommade antigrippe
( anti-rhume , décongestionnante) :
Les résultats de l’évaluation de l’irritation primaire chez les lapins traités par la
pommade sont dans le tableau suivant :
121 | P a g e
Partie pratique
Tableau 72: Evaluation de l’indice d’irritation cutanée primaire chez les lapins traités par
la pommade anti-rhume à base d’huile essentielle de laurus nobilis ( Essai I ) :
N° De Poids
Lapin De
Lapin
3,78
2,92
3,30
4,50
3,25
3,84
1
2
3
4
5
6
Flanc Traité
Œdème
Erythème
Flanc Témoin
Œdème
Erythème
J1(24
h)
J3(72h)
J1(24h) J3(72h)
J1(24h)
J3(72h)
J1(24h)
J3(72h)
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
D’après le tableau , il est noté une absence totale soit d’œdèmes ou d’érythème durant
toute la période de l’expérimentation.
Tableau 73 : Evaluation des réactions cutanées.
N° De Lapin
1
2
3
4
5
6
Valeurs cumulées
Œdème + Erythème
24 h + 72 h
Flanc Traité
0
0
0
0
0
0
0
Œdème + Erythème
24 h + 72 h
Flanc Témoin
0
0
0
0
0
0
0
Pour classer notre produit, il faut calculer l’indice d’irritation primaire à partir de
l’équation suivantes :
Avec :
Donc :
IP = 0 / 24 = 0
IP = 0
Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire ( IP = 0 ) est inférieur à 0,5 ce qui
nous amène à conclure que la pommade anti-rhume ( essai I ) à base de HE de laurus
nobilis est non irritante pour la peau.
122 | P a g e
Partie pratique
la pommade anti-rhume à base d’huile essentielle de laurus nobilis ( Essai II ) :
N° De Poids
Lapin De
Lapin
3,78
2,92
3,30
4,50
3,25
3,84
1
2
3
4
5
6
Flanc Traité
Œdème
Erythème
Flanc Témoin
Œdème
Erythème
J1(24h)
J3(72h) J1(24h)
J3(72h) J1(24h)
J3(72h)
J1(24h)
J3(72h)
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
D’après le tableau 74 , il est noté une absence totale d’œdèmes et quelques valeurs
d’érythème qui apparait chez certains lapin après les 72 heures de la période
d’expérimentation.
Tableau 75 : Evaluation des réactions cutanées.
N° De Lapin
1
2
3
4
5
6
Valeurs cumulées
Œdème + Erythème
24 h + 72 h
Flanc Traité
0
0
0
0
0
0
0
Œdème + Erythème
24 h + 72 h
Flanc Témoin
0
1
0
1
0
0
2
Avec :
Donc :
IP = 2 / 24 = 0,083
IP = 0,083
Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire ( IP = 0,083 ) est inférieur à 0,5 ce
qui nous amène à conclure que la pommade anti-rhume ( essai II ) à base de HE de laurus
123 | P a g e
Partie pratique
nobilis est non irritante pour la peau , donc la pommade n’est pas toxique pour l’utilisation
cutanée humaine.
la pommade anti-rhume à base d’huile essentielle de laurus nobilis ( Essai III ) :
N°
De
Lapin
Poids
Flanc Traité
De
Œdème
Erythème
Lapin J1(24 J3(72h) J1(24h) J3(72h)
J1(24h)
J3(72h)
J1(24h)
J3(72h)
3,78
2,92
3,30
4,50
3,25
3,84
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
1
1
2
1
0
0
1
0
1
0
0
h)
1
2
3
4
5
6
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
1
1
2
1
1
0
1
0
1
0
0
Flanc Témoin
Œdème
Erythème
D’après le tableau 76 ,les phénomènes observés sont uniquement les érythèmes avec un
degré variable . Il est noté une absence totale d’œdèmes d’érythème durant toute la
période de l’expérimentation.
Tableau 77: Evaluation des réactions cutanées.
N° De Lapin
1
2
3
4
5
6
Valeurs cumulées
Œdème + Erythème
24 h + 72 h
Flanc Traité
1
2
1
3
1
1
9
Œdème + Erythème
24 h + 72 h
Flanc Témoin
1
2
1
3
1
0
8
Avec : 24 = nombre de lapin ( 6 ) x nombres de zones testés ( traité et témoin = 2) x
nombre de type d’irritation ( Œdème et érythème = 2 )
Donc :
IP = 17 / 24 = 0,708
IP = 0,708
124 | P a g e
Partie pratique
Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire IP ( IP = 0,708 ) est compris entre 0,5
et 2 : 0,5 < IP < 2 ; ce qui nous amène à conclure que la pommade anti-rhume ( essai III )
à base de l’HE de laurus nobilis est légèrement irritante pour la peau a cause de la
concentration élevé de l’huile essentielle de laurus nobilis.
2. Détermination de l’indice d’irritation primaire cutanée de la pommade
antiseptique:
Les résultats de l’évaluation de l’irritation primaire chez les lapins traités par la
pommade sont dans le tableau suivant :
la pommade antiseptique à base d’huile essentielle de laurus nobilis :
N° De Poids
Lapin De
Lapin
(g)
3,78
1
2,92
2
3,30
3
4,50
4
3,25
5
3,84
6
Flanc Traité
Œdème
Erythème
J1(24h)
0
0
0
0
0
0
Flanc Témoin
Œdème
Erythème
J3(72h) J1(24h) J3(72h)
0
0
0
0
0
0
1
0
1
1
0
1
0
0
0
0
0
0
J1(24h)
0
0
0
0
0
0
J3(72h)
0
0
0
0
0
0
J1(24h)
J3(72h)
1
0
1
1
0
1
0
0
0
0
0
0
D’après le tableau 78, les phénomènes observés sont uniquement des érythèmes avec un
degré variable au cours de la 1ere observation et une diminution remarquable après 72
heures. Il est noté également une absence totale soit d’œdèmes durant toute la période de
l’expérimentation.
Tableau 79: Evaluation des réactions cutanées.
N° De Lapin
1
2
3
4
5
6
Valeurs cumulées
Œdème + Erythème
24 h + 72 h
Flanc Traité
1
0
1
1
0
1
4
Œdème + Erythème
24 h + 72 h
Flanc Témoin
1
0
1
1
0
1
4
125 | P a g e
Partie pratique
Avec :
Donc :
IP = 8 / 24 = 0,333
IP = 0,333
Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire ( IP = 0,333 ) est inférieur à 0,5 ce
qui nous amène à conclure que la pommade antiseptique à base de l’HE du laurus nobilis
est non irritante pour la peau, donc la pommade n’est pas toxique pour l’utilisation cutanée
humaine.
Discussion :
Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire ( IP) des pommades
décongestionnantes des voies respiratoires ( essai I, essai II et essai III ) sont de 0 ; 0.083 et
0.708 respectivement. Les deux première valeur sont < 0.5 ce qui nous amène à conclure
que les deux pommades anti-rhumes ( essai I , essai II) à base de l’huile essentielle des
feuilles du laurus nobilis sont non irritantes pour la peau.
Le test de la toxicité locale de la pommade antirhume ( essai III ) a révélé l’application
d’érythème chez quelques lapins, après 24 heures de l’application, due à la pénétration de
ces derniers dans l’épiderme, à travers la couche cornée, les cellules basales ne restent pas
sensibles à ce passage. Ainsi, l’apparition d’érythèmes assez remarquables sur les flancs
traités peut être la conséquence de l’affrontement des lapins entre eux lors de leur
hébergement, la concentration de l’huile essentielle dans la pommade appliquée ou d’une
hypersensibilité de l’animal à la pommade ou à un de ses composants. Alors que,
l’apparition d’érythème assez remarquable sur les flancs témoins de quelques lapins peut
être due à la scarification qui a atteint de derme.
D’autre part, l’indice d’irritation primaire ( IP) de la pommade antiseptique est de
0,333 une valeur inférieur à 0,5 ce qui nous amène à conclure que cette pommade à base
de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis est non irritante pour la peau, donc la
pommade n’est pas toxique pour l’utilisation cutanée humaine.
126 | P a g e
Partie pratique
II.18. Réaction d’identification ( Dosage des pommades préparées):
Il est nécessaire de vérifier que dans la pommade préparée il y a bien les substance
annoncées ( analyse qualitative et quantitative ) et que cette dernière est bien pur et non
souillée par les interactions ou des produits de dégradation. Il faudra bien qu’elle soit
présente en qualité conforme à celle annoncée, il ne faudra pas qu’elle soit inférieur à
90%.
1. Anesthésine ( ou hydrochlorure de lidocaine ) : nitritométrie
2. Camphre : obtention de l’oxyme de camphre, neutralisation
O
NOH
-H2O
C(CH)2
+ NH2OH
Hydroxylamine
C(CH)2
Oxyme
3. Salicylate de méthyle : hydrolyse, neutralisation, gravimétrique.
4. Huile essentielle : CPG
5. Réaction d’identification du menthol : Réaction de condensation par de la
vanilline
On traite 1g de pommade par 10ml d’alcool, on le filtre, le filtrat obtenu est transféré dans
un creuset en porcelaine et on y ajoute 1ml de H2SO4 concentré et 1ml d’une solution
fraiche de vanilline dans l’acide sulfurique. On mélange en tournant le creuset et on le
dilue par 1ml d’eau ou d’alcool, il se forme une coloration.
Identification :
Changement de couleur jaune ( filtrat /1ml H2SO4 /1ml d’une solution fraiche de vanilline)
à une coloration rouge violette après ajout de 1ml d’alcool.
127 | P a g e
Partie pratique
II.19.Tests microbiologiques :
L’utilisation thérapeutique rationnelle des huiles essentielles nécessite une
détermination précise du pouvoir antibactérien ou antifongique de l’essence. En effet, la
connaissance de l’activité de l’essence est un élément indispensable pour l’établissement
de formulations et prescriptions efficaces.[154]
Les tests microbiologiques ont été réalisés au laboratoires de microbiologie de la faculté
des sciences ( BOUMERDES) :
1. Evaluation qualitative de l’activité antimicrobienne :
La technique que nous avons utilisée pour évaluer l’activité antimicrobienne de nos
produits ( HEs, pommade à base des HEs ) est l’aromatogramme ou la méthode de
diffusion en milieu gélosé en utilisant des disques stériles en cellulose.
Cette méthode utilisée par certains auteurs [155,156,157] est la technique que nous avons
utilisée pour évaluer l’activité inhibitrice de nos produits ( HEs du laurus nobilis , des
pommades a base d’huile essentielle).
Protocole expérimental :
L’évaluation qualitative de l’activité antimicrobienne de nos produits, consiste à
estimer l’inhibition de la croissance des microorganismes ( bactéries et levures ) en contact
de différents produits, et ceci par la méthode de diffusion sur plaque de gélose ( diffusion
sur milieu gélosé) en utilisant des disques de cellulose préalablement stérilisés par lumière
UV de 6mm de diamètre. En ce qui concerne les pommades formulées , un volume de 0.1
mm3 est déposé au centre de chaque boite à l’aide d’une seringue stérile. [158]
Préparation de l’inoculum :
La méthode de préparation des inoculums est celle préconisée par la SFM (
communiqué de 2005 ) qui consiste à préparer , à partir d’une culture de 18-24 h pour les
bactéries et de 48 h pour les levures sur le milieu gélosé, une suspension en solution saline
d’eau physiologique stérile ( 0.9% NaCl ) à une concentration de 107 à 108 germes/ml.
Cette suspension obtenue par la détermination de la transmittance allant de 22% à 32%
pour les bactéries et entre 2% et 3% pour les levures et cela à une longueur d’onde de
620mm ( standardisation de l’antibiogramme selon l’OMS, 1999).
Diffusion sur milieu gélosé :
La méthode de diffusion sur milieu gélosé a été réalisée sur le milieu Muller-Hinton(MH) ( pour les bactéries ) et Sabouraud ( pour les levures ). On fait fondre les deux milieux
dans un bain marie à 95°C, puis on verse simultanément et aseptiquement une première
couche de chaque milieu dans une boite de Pétri à raison de 15 ml par boite avec 3
répétitions par couche de chaque milieu dans une boite de Pétri à raison de 15 ml par boite.
128 | P a g e
Partie pratique
Figure 63: réalisation de l’activité antibactérienne.
Après refroidissement à température ambiante, on ensemence 200 μl de suspension de
chaque souche par la méthode du Râteaux et on laisse solidifier sur la paillasse. A l’aide
d’une pince stérile, on prélève un disque de cellulose préalablement stérilisé par lumière
UV de 6mm de diamètre, et on l’imbibe d’huile essentielle pure , on dépose le disque sur la
surface gélosé sèche des boites de pétri. En ce qui concerne les pommades formulées , un
volume de 0.1 mm3 est déposé au centre de chaque boite à l’aide d’une seringue stérile.
Puis nous laissons les boites durant 20minutes à la température ambiante pour permettre la
diffusion de l’échantillon. Elles sont ensuite mises à l’étuve à 37°C pendant 24 heures pour
les bactéries et à 25°C pendant 48 heures pour les levures.
Le pourcentage d’inhibition est calculé par la formule suivante : [159, 160]
% Inhibition = ( D test / D boite de pétri ) x 100
D test : diamètre de la zone d’inhibition.
D control : diamètre de la boite de pétri.
Figure 64: Résultat de l’activité antifongique de l’huile essentielle des feuilles du laurus
nobilis contre Candida albicans.
129 | P a g e
Partie pratique
Figure 65: Résultat de l’activité antibactérienne des huiles essentielles des feuilles du
laurus nobilis contre Escherichia coli.
Figure 66 : Résultat de l’activité antibactérienne des huiles essentielles des feuilles du
laurus nobilis contre staphylocoque aureus.
Figure 67: Résultats de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle des feuilles (4), des
fleurs (1), des tiges (2) et des fruits (3) du laurus nobilis contre Escherichia coli (bactérie
gram -)
Figure 68: Résultats de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle des feuilles (4) , des
fleurs (1), des tiges (2) et des fruits (3) du laurus nobilis contre Staphylococcus aureus
(bactérie gram +)
130 | P a g e
Partie pratique
Figure 69: Résultats de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle des feuilles (4), des
fleurs (1), des tiges(2) et des fruits(3) du laurus nobilis contre Pseudomonas aeruginosa
(bactérie gram -)
Figure 70: Résultats de l’activité antifongique de l’huile essentielle des feuilles (4), des
fleurs(1), des tiges(2) et des fruits (3) du laurus nobilis contre Candida albicans .
Tableau 80: Résultat de l’activité antimicrobienne de l’huile essentielle des feuilles du
laurus nobilis.
Huile
essentielle
Souches
Escherichia
coli
Huile essentielle
des feuilles du
laurus nobilis
Pseudomonas
aeruginosa
Staphylocoque
aureus
Bactérie
Gram -
Bactérie
Gram -
Diamètre
(mm)
D1= 17.55
Diamètre
moyen
I%
D2= 14.34
16.79
18.66
12
13.33
18.11
20.12
21
23.33
D3= 18.50
D1= 12
D2= 11.5
D3= 12.50
D1= 17.69
Bactérie
Gram +
D2= 18.91
D3= 17.75
D1= 21.5
Candida
albican
Levure
D2= 20.5
D3= 21
131 | P a g e
Partie pratique
I% : le pourcentage d’inhibition
D : diamètres d’inhibition
D1 : diamètre d’inhibition de l’essai 1
Candida
albican
Huile essentielle des
fruits du laurus nobilis
fleurs du laurus nobilis
Huile essentielle des tiges
du laurus nobilis
20
22.22
12
13.33
16
17.77
du laurus nobilis
du laurus nobilis
du laurus nobilis
12
13.33
15
16.66
12
13.33
20
22.22
18
20
22
24.44
18
20
20
22.22
16
17.77
Levure
Staphylocoque
aureus
Les huiles essentielles
Bactérie gram -
Pseudomonas
aeruginosa
Type
Bactérie gram +
Souche
microbienne
Escherichia
coli
Bactérie gram -
Tableau 81: Résultats de l’activité antimicrobienne des fruits, des fleurs, des tiges du
laurus nobilis.
Diamètre ( mm )
I%
Tableau 82 : Résultats de l’activité antimicrobienne des pommades à base de l’huile
essentielle des feuilles du laurus nobilis.
Produits
formulées
Souche
Pommade
1
Staphylococcus aureus Bactérie Gram +
Escherichia coli
Bactérie Gram Candida albicans
Levure
Diamètre
d’inhibition
D (mm )
14
17
15
I%
15.55
18.88
16.66
132 | P a g e
Partie pratique
Pommade
2
Témoin
(eau
distillée)
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
Candida albicans
Escherichia coli
Candida albicans
Bactérie Gram +
Bactérie Gram Levure
Bactérie Gram +
Bactérie Gram Levure
18
16
18
0
0
0
20
17.77
20
0
0
0
Pommade 1 : pommade décongestionnante à base de l’huile des feuilles du laurus nobilis
Pommade 2 : pommade antiseptique à base de l’huile des feuilles du laurus nobilis
Figure 71 : Résultats de l’activité antimicrobienne
essentielle des feuilles du laurus nobilis.
des pommades à base de l’huile
Discussion :
L’évaluation qualitative de l’activité antimicrobienne de l’huile essentielle des feuilles ,
des fruits, des fleurs, des tiges du laurus nobilis L. et des pommades formulées à été faite
sur 3 bactéries ( une à gram + et deux autres à gram - ) et une levure , par la méthode des
aromatogrammes. Le pouvoir antimicrobien de tous ces produits est obtenu par la mesure
des diamètres des zones d’inhibition ( mm ).
L’échelle d’estimation de l’activité antimicrobienne est donnée par Mutai et al., (2009)
[161]. Ils ont classé les diamètres des zones d’inhibition ( D ) de la croissance microbienne
en 5 classes :
Très fortement inhibitrice : D ≥ 30 mm
Fortement inhibitrice : 21 mm ≤ D ≤ 29 mm
Modérément inhibitrice : 16 mm ≤ D ≤ 20 mm
Légèrement inhibitrice : 11 mm ≤ D ≤ 16 mm
Non inhibitrice : D < 10mm
Le diamètre moyen de la zone d’inhibition observée autour des disques imprégnés de
l’huile essentielle pure, des pommade formulées après 24 heures d’incubation à 37°C pour
les bactéries et après 48 heures à 25°C pour les levures, ainsi que leurs pourcentages
d’inhibitions sont résumés dans les tableaux 82,83 et 84.
133 | P a g e
Partie pratique
Selon l’échelle citée par Mutai et al., 2009 : [161]
Les huiles essentielles pures des feuilles, des fruits, des fleurs, des tiges du laurus nobilis
présentent des activités sur toutes les souches bactériennes testées .
Les diamètres d’inhibition varient de 12 à 22 mm. Le plus grand diamètre d’inhibition
obtenu avec les huiles des tiges du laurus nobilis contre Staphylococcus aureus, et le plus
petit avec les feuilles, les fruits et les tiges contre Pseudomonas aeruginosa et aussi on
peut cité que l’huile essentielle des fleurs présente aussi un faible diamètre d’inhibition
contre Eschirichia coli.
Les souches de Pseudomonas aeruginosa sont légèrement résistantes à l’égard des quatre
huiles essentielles.
Notre huile essentielle de laurier à savoir ( des feuilles et des tiges ) possède également une
activité fortement inhibitrice sur les souches de Staphylococcus aureus .
Les souches de (candida albicans) utilisées sont sensibles vis-à-vis les quatre huiles
essentielles et surtout les feuilles et les fleurs ( voir figure 70 ).
L’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis révélés très actif par rapport aux autres
huiles essentielles, pour cette raison et pour la disponibilité des feuilles ( durant toute
l’année ) on a pu réalisé la concentration minimale inhibitrice ( CMI ) de l’huile essentielle
des feuilles du laurier noble .
2. Evaluation quantitative de l’activité antimicrobienne de l’huile essentielle des
feuilles du laurus nobilis :
Détermination de la concentration minimale inhibitrice CMI et la concentration
minimale bactéricide CMB fongicide CMF.
L’évaluation quantitative de l’activité antimicrobienne de l’huile essentielle du laurus
nobilis , consiste à déterminer la concentration minimale inhibitrice CMI et la
concentration minimale bactéricide CMB et fongicide CMF sur des microorganismes (
bactéries et levures ) soumis aux contact des huiles essentielles de laurus nobilis, et ceci
par la méthode de dilution en milieu solide en utilisant des disques absorbants pour les
bactéries et les levures. La méthode utilisée est celle de la dilution en milieu solide. [ 136]
Préparation d’inoculum :
Par la même manière de diffusion sur milieu gélosé, on prépare l’inoculum pour cette
méthode . La suspension est reprise par dilutions successives dans le tampon phosphate
salin (PBS) pour l’obtention d’une densité initiale de l’inoculum entre 105 CFU ( unités
formant colonies ) / mL et 106 CFU/mL pour chacune des souches testées.
Préparation de l’émulsion d’HE :
134 | P a g e
Partie pratique
La solution d’huile essentielle doit être au 0.4/10 ( 4%). Elle a été préparée dans M-H
(pour les bactéries) et SAB ( pour les levures) additionnés de tween 80 et maintenu en
surfusion. Une série de dilution de chaque produit est préparée à des concentrations allant
de 4% à 0.03% pour l’HE . La réalisation des dilutions se fait comme suite :
2ml d’HE est dilué dans 50 ml de milieu M-H ( bactéries) ou SAB (levures ), maintenu en
surfusion, dans un premier flacon ce qui donne de 4% ( solution mère ) ; verser la moitié
du premier flacon dans un deuxième flacon et ajuster avec 25 ml de milieu pour la dilution
2% procéder de la même manière jusqu’à l’obtention de la dernière dilution de 0.03%. Les
mélanges de chaque dilution sont immédiatement repartis dans deux boites de pétri rondes
( 90 mm de diamètre ) à raison de 12.5 mm de milieu par boite. La gamme de
concentration
finales
obtenue
correspond
à4% ;2% ;1% ;0.5% ;0.25%;0.125% ;0.06% ;0.03%.
Figure 72: Réalisation de la CMI de l’huile essentielle des feuille du laurus nobilis .
Dépôt des disques :
Après solidification, les disques stériles en cellulose de 0.6 cm imbibés de la
suspension bactérienne ou fongique ( levures ) sont déposés à la surface du milieu gélosé
contenant ou pas l’HE. Chacune des boites a été ensemencée par deux à trois ( 2-3) espèces
différentes. Tous les essais sont réalisés deux fois les boites de pétri ( témoins et essais )
sont mises en incubation pendant 24 heures à 37°C pour les bactéries et pendant 72 heures
à 25°C pour les levures. La lecture des résultats se fait visuellement par l’observation de la
croissance ou de l’inhibition de la croissance du microorganisme antimicrobien testé par
rapport à la croissance sur une boite témoin sans extrait. La CMI est définie comme étant
la plus petite concentration du produit pour laquelle aucune croissance n’est visible à l’œil
nu. Pour les boites qui ne présentent pas de croissance, le disque de mycélium est transféré
sur un milieu gélosé M-H (bactérie ) et SAB ( levure ) neuf pour confirmer s’il s’agit d’un
effet fongistatique ou fongicide sur les levures et d’un effet bactériostatique ou bactéricide
sur les bactéries. La CMB et la CMF ont été définies comme étant les plus faibles
concentrations de l’agent pour lesquelles il y a absence totale de colonies en comparaison
avec les témoins après 24 H de culture à 37°C pour les bactéries et 72H d’incubation à
25°C pour les levures.
135 | P a g e
Partie pratique
Figure 73: Résultats de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis contre
Escherichia coli (bactérie gram –)
Figure 74: Résultats de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis contre
Escherichia coli, Pseudomonas aeroginosa et Staphylococcus aureus.
Figure 75 : Résultat négatif de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis
contre Escherichia coli, Pseudomonas aeroginosa et Staphylococcus aureus.
136 | P a g e
Partie pratique
Figure 76 : Résultats de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis contre
Candida albicans .
Figure 77: Résultat négatif de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis
contre Candida albicans .
Les résultats de l’activité antibactérienne et antifongique des huiles essentielles des feuilles
du laurus nobilis L. sont consignés dans le tableau :
Tableau 83: Aromatogramme de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis .
Souche
Témoin 0.03% 0.06% 0.125% 0.25% 0.5% 1% 2% 4%
Bactérie Gram+
Staphylococcus +++
++
++
++
+
+
+
aureus
Escherichia
coli
+++
++
+
Bactérie Gram +
+
+/-
-
-
-
Pseudomonas
aeruginosa
+++
++
++
++
+
+
+
+
Candida
albican
+++
+
+
+/-
-
-
-
-
++
Levure
-
+ : présence de germe
- : absence de germe
137 | P a g e
Partie pratique
Tableau 84: Concentrations minimales inhibitrices ( CMI ) et concentrations minimales
bactéricides ( CMB ) de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis relatives aux
bactéries testées.
Souche
CMI
CMB
Bactérie gram +
2%
4%
Escherichia coli
Bactérie gram 1%
2%
Pseudomonas aeruginosa
-
-
Tableau 85: Concentration minimales inhibitrices ( CMI ) et concentration minimale
fongicides ( CMF ) de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis relative à la levure
testée.
Souche
Candida albicans
CMI
0.25%
CMF
0.5%
L’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis a exercé une activité inhibitrice vis-à-vis
des bactéries et de levure testée , sauf les souches Pseudomonas aeruginosa qui se révèle
résistantes, et cela malgré l’utilisation d’une concentration de 4%.
Staphylococcus aureus a été inhibé à partir de la concentration minimale de 2% (v/v ).
Ainsi, Escherichia coli s’est montré le plus sensible, il a été inhibé à partir de la
concentration minimale 1% ( v/v ).
Les levures ont montré une grande sensibilité à l’huile essentielle des feuilles du laurus
nobilis. Une concentration de 0.25% ( v/v ) d’HE était suffisante pour inhiber la croissance
de Candida albicans.
Les subcultures réalisées suite à l’obtention des CMI, ont permis d’observer les
concentrations minimales bactéricides ( CMB ) sur les 2 bactéries et les concentrations
minimales fongicides ( CMF) sur la levure testée Candida albicans.
La concentration minimale bactéricide et/ou fongicide est souvent égale ou plus élevée que
la CMI.
Les CMB déterminés ont varié aussi de 1% à 4% (v/v ). Parmi les bactéries testées , la
souche Escherichia coli s’est montrée la plus sensible (CMB=2%), tandis que
Staphyloccocus aureus était la plus résistante ( CMB=4%).
Candida albicans
(CMF=0.5%) .
s’est montrée
la plus sensible par rapport aux bactéries testées,
138 | P a g e
Partie pratique
Malgré les variations des CMI et CMB et/ou CMF d’un microorganisme à un autre, dans
certains cas elles sont égales indiquant ainsi une forte action bactéricide et/ou fongicide. En
effet, lorsque le rapport CMB/CMI (CMF/CMI) est inférieur ou égal à 4, l’HE est
bactéricide et/ou fongicide. Quand ce rapport est supérieur à 4, l’HE est dite bactéricide
et/ou fongistatique .[162 ]
Le tableau présente les différents rapports CMB/CMI, CMF/CMI.
Tableau 86: Rapport CMB/CMI, CMF/CMI de différentes souches utilisées vis-à-vis
d’HE des feuilles du laurus nobilis.
Souches
Escherichia coli
Candida albicans
CMB/CMI (CMF/CMI)
2
2
2
Interprétation
Bactéricide
Bactéricide
Fongicide
D’après le tableau 86, nous pouvons dire que notre huile essentielle testée a un pouvoir
bactéricide et/ou fongicide sur la plus part des souches testées sauf Pseudomonas
aeruginosa. Donc, l’HE de laurus nobilis a révélé, à la fois, une activité bactéricide et
fongicide. Ce qui explique leur application aux produits pharmaceutiques.
Les résultats de l’analyse quantitative montrent que 0, 25% d’huile de laurier inhibe
complètement la croissance de candida albicans, alors que 0,5% est levuricide ou
fongicide. Concernant Escherichia coli et staphylococcus aureus l’huile de laurier noble,
révélé bactéricide à des concentration de 2%,4% ; respectivement.
139 | P a g e
[partie pratique]
Glossaire
140 | P a g e
Conclusion
Pendant longtemps, les remèdes naturels et surtout les plantes médicinales furent le
principal, voire l’unique recours du médecin et cet ensemble de soins thérapeutiques, qui
fait appel aux drogues ou aux principes actifs d’origine végétal , est appelé phytothérapie.
Grâce à l’industrie pharmaceutique, on a pu isoler, purifier ces principes actifs ce qui
nous a permis d’en connaitre leur constitution et par la suite déterminer leur intérêt.
Ce travail a porté sur l’étude comparative de la pharmacognosie des différentes parties
du laurus nobilis. Essai de formulation thérapeutique à base d’huile extraite. Bien que la
biomasse végétale soit une source très prometteuse pour l’avenir, très peu d’études ont
porté sur l’analyse chimique détaillée de la fraction aromatique du différents parties de la
plante du laurus nobilis cultivé en Algérie.
Dans ce contexte, nous nous sommes proposé de réaliser :
§
§
§
§
§
§
Une analyse du matériel végétal ( laurus nobilis L. ) ;
Screening phytochimique des feuilles , des tiges, des fleurs, des fruits et des racines
du laurus nobilis L. ;
Une extraction des huiles essentielles de cette plante ;
Etude qualitative et quantitative des huiles essentielles obtenues ;
Formulation et analyse des pommades formulées ;
Et enfin une étude antimicrobienne des huiles essentielles et des pommades
formulées.
Dans la littérature le laurier est d’utilisations diverses ; il se caractérise par des feuilles,
des fruits, des fleurs , des tiges et des racines. Les travaux menés au cours de notre étude
auront permis de vérifier la conformité du matériel végétal. Le screening phytochimique a
révélé la richesse des feuilles de laurus nobilis en composants actifs ( polyphénol :
flavonoïdes, tanins, proanthocyanidols ) reconnus pour leurs propriétés biologiques et
thérapeutiques intéressantes. Par ailleurs, nous pouvons dire que la présence des
flavonoïdes ou les polyphénols en générale, pourrait intervenir selon les propriétés
physiologiques anti-oxydantes .
De même les tiges, les fleurs, les fruits et les racines du laurus nobilis sont riche en
polyphénols , en saponine et en coumarine. Les composés réducteurs ont été détecté dans
tous les parties du laurus nobilis sauf les fruits qui ont été donné une réaction négative.
L’étude réalisée a permis aussi de constater la présence de l’amidon seulement dans les
fleurs et les fruits du laurier noble. Ces résultats sont conformes avec ce qui est décrit dans
la littérature.
Les huiles volatiles ont été isolées par hydrodistillation à partir des feuilles , des tiges,
des fruits et des fleurs séchées du Laurus nobilis, les résultats des rendements en huile
essentielle sont différents ; 0.79%, 0.1%,1.15%, 0.82%, respectivement. Les racines du
laurus nobilis ne contenant plus d’huile essentielle .Les quatre huiles essentielles obtenus
ont été analysés qualitativement, ensuite ils ont été caractérisés par leur composition
141 | P a g e
Conclusion
chimique grâce à des analyses chromatographiques ; dans les tiges du laurier l’eugénol
méthyl ether, terpényl acetate, linalool et caryophyllene oxide apparaît comme les
constituants majoritaires de l'HE avec des pourcentages de (10.62%, 9.242%, 5.668% et
5.058%) respectivement .
Outre le 1,8-cinéole (10.655% ) , les principales composantes des feuilles étaient linalool et
terpényl acetate qui apparaît comme les constituants majoritaires de l'HE ( 11.072% ,
11.495%), suivi de l’eugénol méthyle éther ( 9.748 %).
Bien que dans les fruits les composants majeurs qui ont été trouvé sont le (E)-β-ocimene,
le Lauric anhydride , le cedren-13-ol , le β-élémène (21.83%, 16.424% ,15.057% et
11.462% ) . Les ocimenes étaient absents dans les feuilles et les tiges. Le 1,8-cinéol, le
composant majoritaire des feuilles été présent aussi dans les tiges et les fruits mais avec un
pourcentage faible. D’où la composition chimique des huiles essentielles des feuilles, des
tiges et des fleurs du laurier noble est différentes les une des autres.
L'objectif de cette étude a été atteint puisque nous avons contribué à caractériser l'huile
essentielle du laurus nobilis pour une éventuelle utilisation en phytothérapie.
Après avoir s’assurer de la bonne qualité de la matière première , il a été procédé à la
formulation des deux pommades à base de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis,
une décongestionnante des voies respiratoires et l’autre antiseptique. Les tests
macroscopiques, l’homogénéité et le pH des pommades ont été déterminés.
Les résultats de teste de tolérance des pommades préparés ont révélé non irritante.
Les extraits volatiles et les pommades formulées ont été également soumis à un
criblage pour leur activité antimicrobienne possible in vitro, contre trois souches de
bactéries pathogène et une seule espèce de levure, en employant la méthode de diffusion à
partir d’un disque solide. Tous les extraits volatiles ont réagi positivement au moins sur
une des souches microbiennes testées. Les extraits d'une même plante ont montré des
activités différentes et les CMI ont été déterminée à partir des extraits les plus actifs en
milieu gélosé, l’huile essentielle de la feuille de Laurus nobilis a témoigné d’une forte
activité antimicrobienne même vis à vis de souches multirésistantes aux certains
antibiotiques. Globalement l’activité antimicrobienne des feuilles est plus importante que
celle des fruits, des fleurs et des tiges du Laurus nobilis avec un spectre antimicrobien
large et à des doses plus faibles. Les résultats de l’analyse quantitative montrent que 0,
25% d’huile de laurier inhibe complètement la croissance de candida albicans, alors que
0,5% est levuricide ou fongicide. Concernant Escherichia coli et staphylococcus aureus
l’huile de laurier noble, révélé bactéricide à des concentration de 2%,4% ; respectivement.
Ce travail nous confirme qu’il est possible de substituer de façon au moins partielle, les
antibiotiques classiques par l’utilisation des huiles essentielles.
142 | P a g e
Conclusion
Dans la perspective de poursuivre et d’approfondir ce travail, il serait intéressant :
·
Du purifier les principes actifs du laurus nobilis ( polyphénol, alcaloïde, …..) et
d’évaluer leurs rôles antimicrobiens afin de pouvoir les utilisés en phytothérapie ;
·
Analyser l’extrait d’eucaluptol obtenus dans ce travail, par une méthode d’analyse
physique ( CPG/SM , IR, ………..) ;
·
Etudier l’effet pharmacologique des pommades formulées dans ce travail ;
·
Etudier l’activité antioxydante des extrais de laurus nobilis ;
·
Evaluer l’activité anti-inflammatoire des 4 huiles essentielles obtenus et de
comparer les résultats avec celle des produits synthétiques.
143 | P a g e
Glossaire
Glossaire
Glossaire
Agar : polymère de l’agarose qui rentre dans la composition des milieux de culture solide
en microbiologie. Aussi appelé gélose
Allelopathie : c’est un phénomène ou de nombreuses espèces végétales synthétisent des
molécules capables d’agir sur le développement des plantes avoisinantes
Analgésique : médication supprimant la douleur.
Antalgique : médicament qui atténue la douleur.
Antifongique : se dit d’un médicament qui agit contre les infections provoquées par les
champignons ou les levures parasites. SYN : antimycosique.
Anticonvulsivant (anticonvulsif) : efficace contre l’épilepsie, et les contractions
musculaires involontaires en série.
Antiseptique : se dit d’un agent, d’un médicament propre à prévenir les infections.
Anti-inflammatoire : qui fait dégonfler et diminuer l’irritation. La plupart des antiinflammatoires sont aussi des antidouleurs
Antispasmodique : se dit d’un médicament qui calme les spasmes
Arome : s’emploie pour caractériser :
-l’odeur des corps volatils issus des aliments ou boissons et perçue au cours de leur
dégustation ;
-la propriété odorante des aliments et boissons responsable de la flaveur.
Arthrite : toute inflammation aigue ou chronique frappant les articulations. On distingue
les arthrites rhumatismales, ou rhumatismes inflammatoires, et les arthrites infectieuses,
qui font suite à une infection articulaire.
Astringent : se dit d’une substance qui resserre les tissus ou diminue la sécrétion.
Camphre : substance aromatique extraite de diverses plantes.
Carminatif : qui résorbe les gaz intestinaux.
Cellules sécrétrices : les cellules sécrétrices se rencontrent dans l’épiderme et dans les
tissus plus profonds des végétaux. Ce sont certaines cellules épidermiques des tiges, de
feuilles, de pétales et d’écailles. Elles différent des autres cellules épidermiques par leur
taille plus petite et par l’absence fréquente de cutine dans leurs parois.
Cicatrisant : se dit d’une substance qui favorise la cicatrisation.
Colite : inflammation du colon.
Diurétique : qui favorise l’élimination de l’urine.
Emétique : qui provoque des vomissements.
Epicarpe : pellicule, peau qui recouvre un fruit.
Erythème : affection cutanée donnant lieu à des rougeurs disparaissant à la pression.
Glossaire
Escarre : nécrose cutanée dans la quelle les tissus mortifiés forment une croute noirâtre
qui se détache spontanément.
Expectorant : qui calme la taux, favorise l’expulsion des secrétions bronchiques.
Fongique : qui se rapporte aux champignons.
Flaveur : l’ensemble des sensations olfactives et gustatives perçues pendant la
consommation d’un produit.
Gastrite : inflammation de la muqueuse de l’estomac.
Glabre : se dit d’une culture ou d’une structure dépourvue de poils.
Glycémie : la glycémie ou taux de sucre dans le sang est mesurée sur un prélevement de
sang veineux, elle varie à l’état normal entre 0.70 et 1.10g par litre, à jeun. Au dessus de
1.30g, il y a diabète.
Hémorroïdes : varices des veines de l’anus et du rectum.
Hémostatique : propre à arrêter les hémorragies.
Hypertension : augmentation de la tension des parois d’une cavité lorsque la pression du
liquide qu’elle contient est supérieure à la normale. Cela s’applique aux artères, c’est ce
qu’on appelle l’hypertension artérielle.
Innocuité : absence de nocivité.
Membrane : structure biologique formée de feuilles comportant une bicouche lipidique ou
sont insérées diverses protéines.
Moisissure : terme d’usage courant désignant des champignons filamenteux issus du sol
ou ils vivent habituellement en saprophytes. Certains d’entre eux peuvent cependant se
comporter, chez l’homme ou l’animal, en pathogènes opportunistes.
Mycélium : ensemble des hyphes constitutifs de l’appareil végétatif des champignons.
Mycète : ce sont des organismes eucaryotes, hétérotrophes, constitués d’un thalle
unicellulaire ou filamenteux et vivant en saprophytes ou parfois en parasites.
Mycose : manifestation provoquée par la présence d’un champignons microscopique dans
l’organisme . On distingue les mycoses superficielles, et les mycoses profondes ou
systématiques.
Nucelle : tissu de réserve, diploïde, d’origine maternelle, il est en général transitoire et
disparait lors de la croissance de l’embryon. S’il persiste dans la graine , il est alors appelé
périsperme.
Ombelle : inflorescence indéfinie dont les fleurs, situées dans le même plan, sont portées
par des pédoncules partant du même point. L’ombelle ( et un involucelle à la base de
l’ombellule).
Œdème : accumulation anormale de liquide séreux dans les espaces intercellulaires du
tissu conjonctif.
Glossaire
Parasite : être vivant ( animal, végétal, champignon) qui vit aux dépens d’une autre espèce
vivante appelée hôte.
Parasitisme : comportement propre aux parasites vis-à-vis de leurs hôtes.
Péricarpe : enveloppe du fruit, provenant du développement des parois du carpelle.
Placentation : désigne la disposition des ovules à l’intérieur de l’ovaire. Une placentation
basilaire indique que les ovules sont fixés à la base des carpelles.
Poches sécrétrices : ce sont des formations anatomiques végétales qui reçoivent et
accumulent l’huile essentielle élaborée par les cellules sécrétrices qui les bordent. Les
poches sécrétrices se rencontrent généralement chez les MYRTACEES.
Poils sécréteurs : les poils sécréteurs ont une forme très variable. L’essence exsudée du
cytoplasme s’accumule dans la paroi externe de la cellule sous la cuticule qu’elle distend.
Les poils sécréteurs se rencontrent le plus souvent chez la famille des LABIEES.
Sédatif : se dit de toute substance qui agit contre la douleur, l’anxiété, l’insomnie ou qui
modère l’activité d’un organe.
Spore : élément ovoïde produit par les bactéries ou les champignons.
Sous-cutanée : sous la peau.
Stimulant : se dit de substances capables de faciliter le fonctionnement de certains
organes.
Stomachique : se dit d’une substance qui stimule et améliore la fonction gastrique.
Sessile : qualifie une fleur, un fruit ou une feuille sans pédoncule ou pétiole.
Spore : élément issu de la reproduction sexuée ou asexuée des champignons et destiné à
assurer la survie du champignon et sa propagation.
Teinture : solution obtenue en laissant une certaine quantité de drogue desséchée au
contact d’un solvant pour un temps plus ou moins long.
Taxon : unité systématique de rang quelconque. Les taxons courants sont le genre, le sousgenre, l’espèce, la sous-espèce, la variété.
Ulcération : formation d’ulcère, l’ulcère lui-même.
Vermifuge : se dit d’un remède propre à faire évacuer les vers intestinaux.
Verticille : ensemble d’organes ( rameaux, feuilles, pièce florales) disposés en cercle
autour d’un axe, au même niveau.
Bibliographie
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Annexes
Annexe I
Dosage de l’eau par entrainement azéotropique :
L’eau est entrainée par distillation d’un solvant qui ne lui est pas miscible, mais donne
avec elle un mélange azéotropique à température d’ébullition constante ; après
condensation par réfrigération des vapeurs de l’azéotrope, l’eau se sépare et est mesurée en
volume. Les solvants utilisés sont : le benzène (P.E.80°) qui n’entraine l’eau que
lentement, le toluène (P.E.110°) et le xylène ( mélange de trois isomères P.E.136°-140°)
qui donne l’entrainement le plus rapide et le plus complet mais qui présente des
inconvénients ( caramélisation possible des produits sensibles à la température,
condensation des gouttes d’eau au niveau supérieur du réfrigérant). La pharmacopée
française ( 9e édition, 1972) utilise le toluène.
L’appareil ( figure. ) est constitué par un ballon en verre de 500 ml, relié par un tube de
raccordement à un tube cylindrique de condensation surmonté d’un réfrigérant et prolongé
par un tube collecteur gradué en 0,1 ml [127]
Figure A 1 : Appareil de dean stark .
Perte a la dessiccation :
C’est la détermination de la perte de poids par dessiccation à l’étuve [127]
Dosage des cendres :
Dosage des cendres totales :
Elle caractérise la quantité de substances résiduelles non volatilisées lorsque l’échantillon
de drogue et complètement calciné. [127]
Dosage des cendres sulfuriques :
Ce sont des substances résiduelles non volatilisées recueillies lorsque l’échantillon de
drogue est calciner avec de l’acide sulfurique concentré, ces cendres déterminent la
quantité de substances inorganiques contenues dans la drogue. [127]
Annexe I
Dosage des cendres chlorhydriques (cendres non solubles dans l’acide chlorhydrique) :
Les cendres chlorhydriques ou cendres insoluble dans l’acide chlorhydrique consistent en
un résidu obtenu en faisant bouillir les cendres totales dans l’acide chlorhydrique à 10%.
Leur détermination permet de mesurer la quantité de matières siliceuses, spécialement de
sable qui peut souiller les drogues mal lavées ou mal triées. [127]
Principe de l’indice de gonflement :
L’indice de gonflement est le volume, en millilitres, qu’occupe 1g de drogue gonflée dans
l’eau, y compris le mucilage qui y adhère. Ce paramètre confirme la présence de
polysaccharides ( mucilages, gommes) dans la drogue végétale. [127]
Méthodes diverses de recuperation de 1,8-cinéole :
Parmi les différentes méthodes de récupération du cinéol, on distingue :
1. Méthode de l’acide bromhydrique : Cette méthode consiste à faire passer un
courant d’acide bromhydrique gazeux rigoureusement sec, dans un mélange
réfrigéré composé de dix (10) ml d’essence et quarante ( 40 )ml d’éther de pétrole
léger. Une fois que le bromhydrate de cinéol se forme ( C10H18OHBr ), il est essoré
à la trompe et lavé à l’éther de pétrole froid. Après avoir éliminé l’éther de pétrole,
le produit est traité enfin par un certain volume d’eau, ce qui a pour effet de libérer
le cinéol qui se dépose au dessus de la phase aqueuse, qui est récupérée par
décantation.
2. Méthode à l’orthocrésol : Le principe de cette méthode est basé sur la
détermination de la température de cristallisation d’un mélange formé d’huile
essentielle et d’orthocrésol. Elle détermine la teneur en 1,8-cinéol des huiles
essentielles qui ne renferment comme constituants principaux que du 1,8-cinéol et
des hydrocarbures térpeniques.
3. Extraction du cinéol par solvant : Il s’agit de la mise en contact intime de
l’échantillon d’huile essentielle à séparer avec un autre liquide appelé solvant qui
extrait préférentiellement un ou plusieurs des solutés de l’échantillon. On obtient
ainsi un extrait et un raffinat. En réalité cette extraction se résume en deux étapes.
La mise en contact de deux liquides durant un temps suffisant pour l’obtention de
l’équilibre pendant lequel le ou les solutés sont transférés de la phase
d’alimentation vers le solvant.
Le rapport des concentrations du soluté dans l’extrait et dans le raffinat, appelé
coefficient de distribution qui donne une mesure de l’affinité relative du soluté pour
les deux phases.
Le solvant joue un rôle important, il doit posséder une grande capacité de
dissolution, une faible viscosité, un point d’ébullition peu élevé, être
ininflammable, non explosif, sélectif et volatil.
Annexe I
Le choix d’un solvant de faible viscosité et de faible densité est à recommander en
vue de faciliter la diffusion du solvant, l’agitation et la séparation mécanique.
Les principaux solvants utilisés sont l’eau, les alcools, l’acétone, les hydrocarbures
( essence, benzène) et les solvants halogènes ( CCl4, CHCl3, etc…..).
4. Réparation du cinéol par cristallisation :cette méthode consiste à mettre une
quantité d’huile essentielle dans une enceinte à très basse température ( minimum 50°C ) jusqu’à formation de deux phases.
La phase solide est récupérée par filtration et liquéfiée à la température ambiante.
Le rendement massique trouvé est de 76%. L’analyse par chromatographie en
phase gazeuse a permis de connaitre la pureté en eucalyptol qui est de 90%.
5. Récupération par distillation fractionnée : Cette méthode consiste à distiller une
quantité bien déterminée d’huile essentielle.
Une charge d’huile essentielle est introduite dans un ballon qui est chauffé par
l’intermédiaire d’une plaque chauffante pour éviter toute altération thermique des
produits.
Il est préférable de travailler sous un vide de l’ordre de 40 mm de mercure, entre la
pompe à vide et la sortie de la colonne, doit être disposé un piège à azote liquide,
permettant la condensation de tous les composés aussi légers qu’ils soient et évitant
ainsi leur passage dans la pompe à vide.
Le réfrigérant se termine par un dispositif qui permet la récupération des différentes
fractions au cours de la distillation.
Lorsque la température atteint 45°C, elle est maintenue pendant toute l’opération
grâce au régulateur de chauffe.
6. La chromatographie d’adsorption : C’est l’une des méthodes de fractionnement,
qui s’applique à la séparation des composés présentant des groupements
fonctionnels différents et de certains isomères.
Elle met en œuvre des phases stationnaires adsorbantes, telles que les gels de silice
poreuse et les gels d’alumine.
La chromatographie d’adsorption liquide-solide permet la séparation des solutés
qui sont des bases amine aliphatiques et aromatiques.
L’expérience montre que la silice convient le mieux, par contre l’alumine
conviendrait pour la séparation des solutés acides comme les phénols et les acides
carboxyliques. Notre étude s’est basée sur la récupération du cinéol par adsorption
sur le gel de silice qui n’est autre que la chromatographie d’adsorption solideliquide.
7. Eucalyptol donne un produit d’addition avec un exemple : 50% (p/v) solution alcoolique ;
C10H18O. C6H6O2 (mp 82-85oC),à partir de laquelle la première peut être généré.
Note : Cette méthode est surtout applicable à ces huiles volatiles qui ont une teneur plus
élevée en cinéol. [138]
Propriétés physiques et chimiques d’eucalyptol:
Point de fusion : 1.5°C
Température d'ébullition : 176 - 177°C
Densité : 0.895 - 0.92(g/ml)
Annexe I
Point d'éclair : 49 à 50°C
Indice de réfraction à 20°C : 1.450 - 1.456
Indice de péroxyde (mgOXA/I) : 160
Informations toxicologiques :
- En cas d'inhalation : Peut causer une irritation.
- En cas de contact avec la peau : Peut causer une irritation.
- En cas de contact avec les yeux : manifestations locales d'irritation
-en cas d'ingestion de quantités élevées : Peut être dangereux. effets possibles :chute de
tension, troubles du système nerveux Central
Autres données :
LD50 2480 mg/kg voie orale, rat.
Informations écologiques :
Aucun danger n'est anticipé pour l'environnement dans la mesure où cette matière est
manipulée et éliminée conformément aux normes de sécurité en place.
Caractéristiques physico-chimiques des huiles essentielles :
caractéristiques physiques de l’huile essentielle :
1.pouvoir rotatoire à 20°C : (NF T 75-113 Juin 1982)
Définition :
Angle, exprimé en milliradians et/ou degré d’angle, qui tourne le plan de polarisation
d’une radiation lumineuse de longueur d’onde ( 589,3 nm + 0,3 nm ), correspondant aux
raies D du sodium, lorsque celle-ci traverse une épaisseur de 100 mm de l’HE dans des
conditions déterminées de température.
2.indice de réfraction à 20°C : ( NF T 75-112 Aout 1977 )
Définition :
Rapport entre le sinus de l’angle d’incidence et le sinus de l’angle de réfraction d’un rayon
lumineux de longueur d’onde déterminée, passant de l’air dans l’HE maintenue à une
température constante. La longueur d’onde spécifiée est ( 589,3 + 0,3 ) nm, correspondant
aux radiations D1 et D2 du sodium = + 0,0004 ( t’– t ) : valeur lue, à la température t’, à
laquelle a été effectuée la détermination. T : température de référence.
Principe:
Suivant le type d’appareil utilisé , soit mesurage direct de l’angle de réfraction, soit
observation de la limite de réfraction totale, l’huile étant maintenue dans des conditions
d’isotropisme et de transparence.
Annexe I
3. Densité à 20°C : ( NF T 75-111 juin 1982)
Définition :
La densité d’une HE est le rapport de la masse d’un volume d’HE à 20°C à celle du même
volume d’eau distillée à 20°C.
Principe :
A l’aide d’un pycnomètre, pesées successives de volumes égaux d’huile essentielle et
d’eau, à la température de 20°C.
4. Evaluation de la miscibilité à l’éthanol :
Définition :
Une huile essentielle est dite miscible à V volumes et plus d’éthanol de titre alcoométrique
déterminé, à la température de 20 °C, lorsque le mélange de 1 volume de l’huile essentielle
considérée avec V volumes de cet éthanol est limpide et le reste après addition graduelle
d’éthanol de même titre, jusqu’à un total de 20 volumes.
Principe :
Addition graduelle à une prise d’essai de l’huile essentielle, à la température de 20 °C ,
d’éthanol de titre alcoométrique convenable.
Evaluation de la miscibilité et , éventuellement, de l’opalescence.
caractéristiques chimiques de l’huile essentielle :
1.Indice d’acide ( IA ) :
Définition :
Le nombre de milligrammes d’hydroxyde de potassium nécessaire à la neutralisation des
acides libres contenus dans 1 gramme d’HE. La neutralisation des acides libres se fait par
une solution éthanolique d’hydroxyde de potassium titré.
2.Indice d’ester ( IE ) :
Définition :
Le nombre de milligrammes d’hydroxyde de potassium nécessaire à la neutralisation des
acides libérés par hydrolyse des esters contenus dans 1 gramme d’huile essentielle.
3.Mesure du pH :
Cette mesure a été effectuée à l’aide d’un pH-mètre.
Annexe I
4.Mesure de l’indice d’iode :
L’indice d’iode exprime le degré d’insaturation du corps gras.
Définition :
L’indice d’iode est le nombre de grammes d’iode fixé sur les doubles liaisons de 100
grammes de corps gras. Il est habituellement désigné par II.
Principe :
On fait agir une solution halogénante sur le produit préalablement dissous dans du
tetrachlorure de carbone ( ou du chloroforme ). On ajoute de l’iodure de potassium et on
titre en retour avec une solution de thiosulfate de sodium.
La solution halogénante est une solution de monobromure d’iode dans l’acide acétique.
[142,144]
R-CH=CH-R +I2
R-CH-CH-R
I
I2 + 2Na2S2O3
I
2NaI + Na2S4O6
Annexe II
Area Percent Report
Data File : C:\MSDCHEM\1\DATA\LAURIER3.D
Vial: 1
Acq On : 10 May 2011 9:39
Operator: FATY
Sample : Huile essentielle du Laurier noble tige Inst : Instrumen
Misc
: Etudiante Guedouari de l'Université d'IN Multiplr: 1.00
Sample Amount: 0.00
MS Integration Params: EVENTS.E
Method : C:\MSDCHEM\1\METHODS\TEST-1.M (Chemstation Integrator)
Title :
Signal
: TIC
peak R.T. first max last PK peak
corr. corr. % of
# min scan scan scan TY height area % max. total
--- ----- ----- ---- ---- --- ------- ------- ------ ------1 0.167 3 9 87 PH 55364 7022234 4.52% 0.480%
2 1.551 141 147 200 PV 1940681 46661244 30.03% 3.192%
3 11.732 1156 1162 1176 PB
3026 89823 0.06% 0.006%
4 12.243 1204 1213 1227 VV
7177 200275 0.13% 0.014%
5 13.106 1280 1299 1304 PV 11111 290159 0.19% 0.020%
6 13.196 1304 1308 1317 VV
8571 234643 0.15% 0.016%
7 13.658 1338 1354 1355 BV
3942 107595 0.07% 0.007%
8 13.688 1355 1357 1376 VV 2 4068 173404 0.11% 0.012%
9 14.510 1432 1439 1451 PV
5866 173357 0.11% 0.012%
10 14.681 1451 1456 1460 PV
1751 49047 0.03% 0.003%
11
12
13
14
15
14.781
14.971
15.493
15.834
16.065
1460 1466 1473 VV
5695 214968 0.14% 0.015%
1473 1485 1532 VV 1024872 31985235 20.59% 2.188%
1532 1537 1547 VV 3 3240 171188 0.11% 0.012%
1565 1571 1587 VV 19027 657017 0.42% 0.045%
1587 1594 1603 VV 18528 581932 0.37% 0.040%
16
17
18
19
20
16.205
16.677
16.707
17.108
17.479
1603 1608 1631 VV 15380
1648 1655 1657 VV 2 13071
1657 1658 1680 VV 4 13223
1680 1698 1733 VV 1410553
1733 1735 1746 VV 8 9493
538315 0.35% 0.037%
298041 0.19% 0.020%
650985 0.42% 0.045%
82863475 53.33% 5.668%
585221 0.38% 0.040%
21
22
23
24
25
17.700
17.800
18.201
18.342
18.472
1746 1757 1765 VV 2
1765 1767 1773 VV 2
1797 1807 1816 VV
1816 1821 1830 VV
1830 1834 1842 VV 2
21091
5543
34375
33082
10500
1061370 0.68% 0.073%
219432 0.14% 0.015%
1383877 0.89% 0.095%
1163355 0.75% 0.080%
389493 0.25% 0.027%
26
27
28
29
30
18.703
18.843
18.974
19.294
19.495
1842 1857 1868 VV
1868 1871 1876 VV
1876 1884 1907 VV 2
1907 1916 1933 VV
1933 1936 1944 VV 2
121208 4314891 2.78% 0.295%
10017 352314 0.23% 0.024%
187472 9063529 5.83% 0.620%
458933 16167929 10.41% 1.106%
15406 861207 0.55% 0.059%
31
32
33
34
35
19.676
19.776
19.826
20.077
20.298
1944 1954 1962 VV
1962 1964 1968 VV 2
1968 1969 1977 VV 2
1989 1994 1997 VV 2
2010 2016 2020 VV 8
819408
61865
55111
15894
6769
36
37
38
39
40
20.388
20.538
20.899
21.050
21.110
2020 2025 2034 VV 7 9107 600900 0.39% 0.041%
2034 2040 2071 VV 44027 3069674 1.98% 0.210%
2071 2076 2081 VV 4 5577 271517 0.17% 0.019%
2084 2091 2094 VV 8 5727 295493 0.19% 0.020%
2094 2097 2099 VV 3 6441 173861 0.11% 0.012%
41
42
43
44
45
21.180
21.521
21.732
21.882
22.063
2099 2104 2130 VV 2 45876 2436070 1.57% 0.167%
2130 2138 2142 VV 7 4862 286800 0.18% 0.020%
2142 2159 2171 VV 44281 2249481 1.45% 0.154%
2171 2174 2179 VV 7 7011 337278 0.22% 0.023%
2179 2192 2212 VV 2 294117 11102238 7.15% 0.759%
46
47
48
49
50
22.284
22.394
22.815
23.176
23.397
2212 2214 2222 VV 6
2222 2225 2259 VV 7
2259 2267 2296 VV
2296 2303 2318 VV 2
2318 2325 2335 VV 3
51
52
53
54
55
23.708
23.878
24.300
24.410
24.560
2335 2356 2365 VV 2472819 135099648 86.95% 9.242%
2365 2373 2402 VV 845418 39607036 25.49% 2.709%
2407 2415 2421 VV 2 68340 2957584 1.90% 0.202%
2421 2426 2435 VV 85407 3302098 2.13% 0.226%
2435 2441 2447 VV 3 31316 1371085 0.88% 0.094%
56
57
58
59
24.741
25.002
25.222
25.513
2447 2459 2467 VV 2 372755 14178878 9.13% 0.970%
2467 2485 2502 VV 2521193 155375406 100.00% 10.629%
2502 2507 2520 VV 97767 4901432 3.15% 0.335%
2526 2536 2551 VV 1297354 51588852 33.20% 3.529%
12026
12506
202568
43771
34067
31395455 20.21% 2.148%
1803890 1.16% 0.123%
2410028 1.55% 0.165%
719271 0.46% 0.049%
359750 0.23% 0.025%
666261
1207089
7025446
2061359
1657242
0.43%
0.78%
4.52%
1.33%
1.07%
0.046%
0.083%
0.481%
0.141%
0.113%
Annexe II
60 25.684 2551 2553 2561 VV 2 48279 2058446 1.32% 0.141%
61
62
63
64
65
25.824
25.945
26.115
26.276
26.426
2561 2567 2575 VV
2575 2579 2588 VV
2588 2596 2605 VV 2
2605 2612 2619 VV
2619 2627 2642 VV 4
168876 6342752 4.08% 0.434%
66125 3211727 2.07% 0.220%
78633 5356770 3.45% 0.366%
273076 10637934 6.85% 0.728%
104036 8581494 5.52% 0.587%
66
67
68
69
70
26.657
26.717
26.907
27.028
27.138
2642 2650 2652 VV
2652 2656 2666 VV 2
2666 2675 2681 VV 3
2681 2687 2693 VV
2693 2698 2701 VV
87137 3299421 2.12% 0.226%
114460 5846145 3.76% 0.400%
306394 15116016 9.73% 1.034%
301818 12321075 7.93% 0.843%
343323 12282383 7.90% 0.840%
71
72
73
74
75
27.208
27.379
27.600
27.740
27.900
2701 2705 2712 VV 2
2712 2722 2736 VV 5
2736 2744 2751 VV
2751 2758 2772 VV 2
2772 2774 2777 VV 3
375776 16513426 10.63% 1.130%
381898 25606176 16.48% 1.752%
593999 23695456 15.25% 1.621%
794797 39890210 25.67% 2.729%
76968 2140209 1.38% 0.146%
76
77
78
79
80
27.971
28.041
28.131
28.241
28.432
2777 2781 2784 VV
2784 2788 2791 VV
2791 2797 2802 VV 3
2802 2808 2823 VV
2823 2827 2838 VV
107045 3866153 2.49% 0.264%
117747 4318426 2.78% 0.295%
298207 12212089 7.86% 0.835%
732105 38515434 24.79% 2.635%
139397 7478556 4.81% 0.512%
81
82
83
84
85
28.623
28.823
28.934
29.044
29.174
2838 2846 2858 VV 5 46548
2858 2866 2870 VV 5 41891
2870 2877 2879 VV 3 93215
2879 2888 2892 VV 2 795899
2892 2901 2912 VV 1441192
4263804 2.74% 0.292%
2548612 1.64% 0.174%
3681154 2.37% 0.252%
36429269 23.45% 2.492%
73947223 47.59% 5.058%
86
87
88
89
90
29.335
29.565
29.676
29.746
29.836
2912 2917 2932 VV 2
2932 2940 2944 VV 3
2944 2951 2955 VV 4
2955 2958 2965 VV 3
2965 2967 2970 VV 2
351781
226776
222099
175178
87092
20019209 12.88% 1.369%
10873617 7.00% 0.744%
12478362 8.03% 0.854%
7461331 4.80% 0.510%
2773146 1.78% 0.190%
91
92
93
94
95
29.896
30.007
30.077
30.207
30.308
2970 2973 2977 VV 4
2977 2984 2987 VV
2987 2991 3000 VV 5
3000 3004 3007 VV
3007 3014 3030 VV 5
87021 3150604 2.03% 0.216%
293459 12460967 8.02% 0.852%
305317 18126582 11.67% 1.240%
311147 11711394 7.54% 0.801%
423724 40672596 26.18% 2.782%
96 30.579 3030 3041 3053 VV 7 829038 62674935 40.34% 4.287%
97 30.729 3053 3056 3065 VV 3 211276 11394312 7.33% 0.779%
98 30.899 3065 3073 3085 VV 668442 33972176 21.86% 2.324%
99 31.030 3085 3086 3096 VV 6 114807 6866566 4.42% 0.470%
100 31.230 3096 3106 3113 VV 2 258690 16434733 10.58% 1.124%
101
102
103
104
105
31.341
31.602
31.812
31.923
32.173
3113 3117 3136 VV
3136 3143 3156 VV 4
3156 3164 3166 VV 3
3166 3175 3193 VV 7
3193 3200 3205 VV 7
177304
90376
60927
88726
33954
13019130
6626399
2740553
9295844
2142786
8.38%
4.26%
1.76%
5.98%
1.38%
0.891%
0.453%
0.187%
0.636%
0.147%
106
107
108
109
110
32.294
32.444
32.514
32.715
32.795
3205 3212 3223 VV 8
3223 3227 3231 VV 7
3231 3234 3250 VV 7
3250 3254 3255 VV 4
3255 3262 3268 VV 6
37973
33835
32289
18513
33839
3497416
1543677
2686634
575508
1987632
2.25%
0.99%
1.73%
0.37%
1.28%
0.239%
0.106%
0.184%
0.039%
0.136%
111
112
113
114
115
32.916
33.066
33.247
33.407
33.788
3268 3274 3283 VV 9
3283 3289 3303 VV 2
3303 3307 3312 VV
3312 3323 3335 VV 6
3354 3361 3363 VV 5
30895
39617
17968
31503
13834
2358585 1.52% 0.161%
2919487 1.88% 0.200%
831780 0.54% 0.057%
2810438 1.81% 0.192%
614128 0.40% 0.042%
116
117
118
119
120
33.878
34.119
34.240
34.360
34.540
3363 3370 3381 VV 6
3381 3394 3403 VV 6
3403 3406 3413 VV 9
3413 3418 3429 VV 2
3429 3436 3444 VV 2
18786 1378442 0.89% 0.094%
11554 1203150 0.77% 0.082%
9536 507059 0.33% 0.035%
14242 866102 0.56% 0.059%
12143 793380 0.51% 0.054%
121
122
123
124
125
34.721
34.942
35.243
35.283
35.624
3450 3454 3463 VV 9 7090 426725 0.27% 0.029%
3469 3476 3494 VV 4 12606 885814 0.57% 0.061%
3494 3506 3507 VV 8 3855 188634 0.12% 0.013%
3507 3510 3519 VV 8 4171 222968 0.14% 0.015%
3529 3544 3548 VV 8 6932 497622 0.32% 0.034%
126
127
128
129
130
35.704
36.015
36.466
36.587
36.657
3548 3552 3563 VV 4 7383 409059 0.26% 0.028%
3563 3583 3624 VV 2 565363 38235784 24.61% 2.616%
3624 3628 3637 VV 5 11070 712622 0.46% 0.049%
3637 3640 3644 VV 6 7486 317237 0.20% 0.022%
3644 3647 3652 VV 7 6749 295542 0.19% 0.020%
Annexe II
131
132
133
134
135
36.747
37.018
37.239
37.650
38.101
3652 3656 3668 VV 4 6976 510719 0.33% 0.035%
3668 3683 3694 VV 6 12093 1195779 0.77% 0.082%
3700 3705 3718 VV 6 6128 477113 0.31% 0.033%
3733 3746 3780 VV 6 3562 515776 0.33% 0.035%
3783 3791 3802 VV 6 2855 217597 0.14% 0.015%
136
137
138
139
140
38.522
38.823
38.914
39.245
39.375
3821 3833 3851 PV 3 11653 731783 0.47% 0.050%
3851 3863 3869 PV 140481 7226885 4.65% 0.494%
3869 3872 3899 VV 4 98059 7094181 4.57% 0.485%
3899 3905 3913 VV 10 14022 1005499 0.65% 0.069%
3913 3918 3947 VV 6 16910 1317115 0.85% 0.090%
141
142
143
144
145
41.361
43.859
44.230
44.942
45.584
4106 4116 4129 VV 4 2068 98246 0.06% 0.007%
4356 4365 4378 PV 10155 587239 0.38% 0.040%
4396 4402 4415 VV
1818 100630 0.06% 0.007%
4465 4473 4495 PV 2 38761 1849040 1.19% 0.126%
4531 4537 4540 PV 8 740 19387 0.01% 0.001%
146 47.008 4670 4679 4689 PV 8
1368
68316 0.04% 0.005%
Sum of corrected areas: 1461873006
Abundance
TIC: LAURIER3.D
23.71
25.00
2400000
2200000
2000000
1800000
1600000
17.11
29.18
1400000
25.52
1200000
14.98
1000000
800000
600000
19.68
23.87
30.57
27.74
29.04
28.25
30.90
27.60
19.29
400000
200000
12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 32.00 34.00
Time-->
Figure A 2 :Chromatogramme de l'huile essentielle de la tige du laurier noble
Annexe II
Area Percent Report
Vial: 1
Acq On : 10 May 2011 14:24
Operator: FATY
Sample : Huile essentielle du Laurier noble feuilles Inst : Instrumen
Misc
: Etudiante Guedouari de l'Université d'IN Multiplr: 1.00
Sample Amount: 0.00
Method : C:\MSDCHEM\1\METHODS\TEST-1.M (Chemstation Integrator)
Title :
Signal : TIC
corr. corr. % of
# min scan scan scan TY height area % max. total
--- ----- ----- ---- ---- --- ------- ------- ------ ------1 1.401 126 132 142 BV 390696 4382791 1.50% 0.172%
2 1.581 142 150 199 PB 1659103 46139556 15.74% 1.810%
3 11.712 1151 1160 1174 BV 42611 1153955 0.39% 0.045%
4 11.932 1174 1182 1197 PV 424835 11233792 3.83% 0.441%
5 12.424 1223 1231 1246 VV 83797 2301458 0.79% 0.090%
6 13.316 1300 1320 1324 BV 1013770 32091818 10.95% 1.259%
7 13.407 1324 1329 1348 VV 534652 16050467 5.48% 0.630%
8 13.878 1360 1376 1400 VV 2 102370 5556782 1.90% 0.218%
9 14.309 1400 1419 1431 VV 3 19904 1405205 0.48% 0.055%
10 14.490 1431 1437 1449 VV 50989 1722294 0.59% 0.068%
11
12
13
14
15
14.711
15.302
15.684
16.025
16.255
1449 1459 1472 PV
1472 1518 1551 VV 3
1551 1556 1566 VV
1584 1590 1606 VV
1606 1613 1622 VV
72329 3074383 1.05% 0.121%
2605146 271657758 92.69% 10.655%
46556 2423553 0.83% 0.095%
229033 7181105 2.45% 0.282%
202946 6804634 2.32% 0.267%
16
17
18
19
20
16.386
16.897
17.449
17.940
18.422
1622 1626 1641 VB
1665 1677 1699 PV 4
1699 1732 1771 VV 2
1771 1781 1792 VV 3
1821 1829 1837 VV 3
36765 1196582 0.41% 0.047%
109532 4901467 1.67% 0.192%
2224241 282299751 96.32% 11.072%
54970 3012566 1.03% 0.118%
72719 2960480 1.01% 0.116%
21
22
23
24
25
18.552
18.873
19.184
19.515
19.726
1837 1842 1861 VV 4
1861 1874 1886 VV
1896 1905 1927 VV 3
1927 1938 1956 VV
1956 1959 1963 VV 2
37560 1781642 0.61% 0.070%
54586 2404006 0.82% 0.094%
486910 24942443 8.51% 0.978%
965333 39093748 13.34% 1.533%
27457 1128543 0.39% 0.044%
26
27
28
29
30
19.926
20.007
20.117
20.729
21.371
1963 1979 1985 VV 1572377 82790730 28.25% 3.247%
1985 1987 1994 VV 3 164000 6542832 2.23% 0.257%
1994 1998 2011 VV 87300 4974817 1.70% 0.195%
2050 2059 2079 VV 198518 9107495 3.11% 0.357%
2113 2123 2151 VV 393290 14217302 4.85% 0.558%
31
32
33
34
35
21.912
22.253
22.344
23.006
23.347
2166 2177 2195 VV
2195 2211 2219 VV
2219 2220 2232 VV 3
2276 2286 2314 PV
2314 2320 2327 VV 3
36
37
38
39
40
23.567
23.969
24.129
24.500
24.611
2335 2342 2357 VV 5 109799 7248170 2.47% 0.284%
2357 2382 2388 VV 3 2962801 293078772 100.00% 11.495%
2388 2398 2426 VV 1814080 98526942 33.62% 3.864%
2426 2435 2441 VV 3 98525 4731327 1.61% 0.186%
2441 2446 2453 VV 3 91689 3879005 1.32% 0.152%
41
42
43
44
45
24.751
24.962
25.242
25.413
25.764
2453 2460 2465 VV 110465 4096862 1.40% 0.161%
2465 2481 2488 VV 1312905 50799818 17.33% 1.992%
2488 2509 2521 VV 2916315 248545198 84.80% 9.748%
2521 2526 2543 VV 322315 15264438 5.21% 0.599%
2543 2561 2580 VV 2548661 149754511 51.10% 5.874%
46
47
48
49
50
26.025
26.135
26.306
26.466
26.566
2580 2587 2595 VV
2595 2598 2607 VV 3
2607 2615 2622 VV 8
2622 2631 2637 VV
2637 2641 2643 VV
661780 24358381
123517 6508707
106116 7349941
546181 21570130
209553 6815659
8.31%
2.22%
2.51%
7.36%
2.33%
51
52
53
54
55
26.627
26.897
27.098
27.218
27.409
2643 2647 2659 VV 3
2659 2674 2680 VV 3
2680 2694 2700 VV 2
2700 2706 2713 VV
2713 2725 2731 VV 2
245629 11368056
119921 8899988
908305 43156881
659010 27691957
901575 46156171
3.88% 0.446%
3.04% 0.349%
14.73% 1.693%
9.45% 1.086%
15.75% 1.810%
56
57
58
59
60
27.559
27.770
27.910
28.141
28.211
2731 2740 2755 VV 4
2755 2761 2767 VV 2
2767 2775 2794 VV 2
2794 2798 2801 VV
2801 2805 2808 VV 2
549762 36571915 12.48% 1.434%
296221 12094247 4.13% 0.474%
712340 37679882 12.86% 1.478%
75071 2567991 0.88% 0.101%
93742 3517460 1.20% 0.138%
113412
831319
50366
593372
27468
4658758
25498186
2359793
20106832
1186065
1.59%
8.70%
0.81%
6.86%
0.40%
0.183%
1.000%
0.093%
0.789%
0.047%
0.955%
0.255%
0.288%
0.846%
0.267%
61 28.302 2808 2814 2819 VV 3 245443 10395506 3.55% 0.408%
Annexe II
62
63
64
65
28.422
28.613
29.204
29.335
2819 2826 2839 VV 924024 43120045 14.71% 1.691%
2839 2845 2860 VV 207958 10686994 3.65% 0.419%
2875 2904 2909 VV 2 812871 46792162 15.97% 1.835%
2909 2917 2928 VV 1112488 56543304 19.29% 2.218%
66
67
68
69
70
29.505
29.736
29.836
29.917
30.248
2928 2934 2941 VV 2
2949 2957 2966 VV 4
2966 2967 2972 VV 2
2972 2975 2986 VV 5
2993 3008 3016 VV 6
347250
277216
161962
140723
323522
71
72
73
74
75
30.378
30.448
30.498
30.589
30.739
3016 3021 3025 VV
3025 3028 3030 VV 3
3030 3033 3038 VV
3038 3042 3047 VV 4
3047 3057 3069 VV 6
272100 11696741
258808 7368915
283127 12587159
245727 11764009
720188 55827167
3.99% 0.459%
2.51% 0.289%
4.29% 0.494%
4.01% 0.461%
19.05% 2.190%
76
77
78
79
80
30.900
31.050
31.160
31.241
31.391
3069 3073 3082 VV 4
3082 3088 3096 VV
3096 3099 3101 VV 4
3101 3107 3115 VV 8
3115 3122 3128 VV 2
216697 12610157
251913 13663075
115369 3618938
120708 8271149
172777 9984548
4.30%
4.66%
1.23%
2.82%
3.41%
81
82
83
84
85
31.511
31.782
31.983
32.083
33.237
3128 3134 3152 VV 2
3152 3161 3173 VV 4
3173 3181 3187 VV 3
3187 3191 3213 VV 8
3297 3306 3320 VV 3
181890
67799
57787
51836
53636
13116559 4.48% 0.514%
5406209 1.84% 0.212%
3579460 1.22% 0.140%
5090298 1.74% 0.200%
3611200 1.23% 0.142%
86
87
88
89
90
33.537
34.039
34.701
36.075
36.206
3329 3336 3352 VV 3
3365 3386 3399 BV 4
3445 3452 3466 PV 3
3577 3589 3600 PV 2
3600 3602 3625 VB
37255
23759
14744
79501
19310
1875287
1344020
801163
3994560
1158349
91 38.683 3839 3849 3871 BV
15501188
17068946
5370529
8450034
25592879
5.29%
5.82%
1.83%
2.88%
8.73%
0.64%
0.46%
0.27%
1.36%
0.40%
0.608%
0.669%
0.211%
0.331%
1.004%
0.495%
0.536%
0.142%
0.324%
0.392%
0.074%
0.053%
0.031%
0.157%
0.045%
34440 2144621 0.73% 0.084%
Annexe II
Abu n da nce
TIC:
L AURI ER4 .D
2 3. 97
2 5. 24
2 80 0 00 0
1 5 .3 0
2 60 0 00 0
2 5. 76
2 40 0 00 0
17 .4 4
2 20 0 00 0
2 00 0 00 0
2 4 .1 3
1 80 0 00 0
1 60 0 00 0
1 9. 92
1 40 0 00 0
24 .9 6
1 20 0 00 0
1 00 0 00 0
29 .3 3
1 3 .3 2
1 9. 51
2 2. 26
80 0 00 0
60 0 00 0
40 0 00 0
2 3. 01
1 3. 41
1 9. 19
1 1 .9 3
2
8. 43
27
.1
01
27
.4
29 .2 1
3 0. 74
7 .9 1
26 .0
3 2
27
.2 2
2
7 .5 6
26 .4
7
20 0 00 0
1 2 .0 0
1 4 .0 0
16 .0 0
18 .0 0
20 .0 0
22 .0 0
2 4.0 0
2 6.0 0
2 8. 00
3 0. 00
3 2. 00
Time- ->
Figure A 3 : Chromatogramme de l'huile essentielle de la feuille du laurier noble
Figure A 4 : Spectre de masse d’eucalyptol
Figure A 5 : Spectre de masse de trans ocimene
Annexe II
Figure A 6 : Spectre de masse de linalool
Figure A 7 : Spectre de masse de 4-terpineol
Figure A 8 : Spectre de masse linalyl acetate
Annexe II
Area Percent Report
Acq On
: 8 Mars 2012 09:38
Sample
: Laurier noble
Misc
Vial: 1
Operator: faty
Inst
: Etudiante Guedouari de INH
: Instrumen
Multiplr: 1.00
Sample Amount: 0.00
Method : C:\MSDCHEM\1\METHODS\DEFAULT.M (Chemstation Integrator)
Title
Signal
:
: TIC
# min scan scan scan TY height
corr. corr.
% of
area % max. total
--- ----- ----- ---- ---- --- ------- ------- ------ ------1 16.209 2804 2822 2844 BB
639797 17739399 3.28% 0.717%
2 18.227 3155 3175 3194 BV 2 434576 13157023 2.43% 0.531%
3 20.536 3562 3579 3606 BB
211438 7294291 1.35% 0.295%
4 20.907 3626 3644 3687 BB 2 629842 25476842 4.71% 1.029%
5 23.336 4048 4069 4079 BV 401612 10820957 2.00% 0.437%
6 24.885 4325 4340 4349 BV 2 458712 14465914 2.68% 0.584%
7 24.988 4349 4358 4375 VV 380162 13701824 2.53% 0.554%
8 25.285 4375 4410 4447 VB 3 117942 10599934 1.96% 0.428%
9 25.691 4469 4481 4497 BV 2 167011 5866671 1.09% 0.237%
10 26.091 4523 4551 4635 VB 6867800 283733596 52.49% 11.462%
11 26.800 4655 4675 4701 BV
586834 21000765 3.88% 0.848%
12 27.114 4717 4730 4747 BV 2 257049 8377679 1.55% 0.338%
Annexe II
13 27.583 4801 4812 4835 VV 2 229857 8685488 1.61% 0.351%
14 28.011 4857 4887 4907 BV 9 183654 13034835 2.41% 0.527%
15 28.354 4933 4947 4958 VV 2 707911 27688179 5.12% 1.118%
16 28.468 4958 4967 4970 VV 4 384330 12508873 2.31% 0.505%
17 28.531 4970 4978 4990 VV 2 704498 29202303 5.40% 1.180%
18 28.663 4990 5001 5032 VV 9 281724 19337558 3.58% 0.781%
19 28.914 5032 5045 5055 VV 4 178643 7597521 1.41% 0.307%
20 29.120 5055 5081 5104 VV 4 3066790 157560753 29.15% 6.365%
21 29.497 5131 5147 5154 VV 9 131181 6819610 1.26% 0.275%
22 29.589 5154 5163 5168 VV 3 186109 7035513 1.30% 0.284%
23 30.240 5168 5277 5291 VV 2 3573138 406565731 75.21% 16.424%
24 30.343 5291 5295 5310 VV 8 365916 17859858 3.30% 0.721%
25 30.486 5310 5320 5347 VV 3 353856 20954650 3.88% 0.846%
26 30.846 5367 5383 5400 VV 4 319844 16685230 3.09% 0.674%
27 31.360 5447 5473 5499 VV 3 338941 24275812 4.49% 0.981%
28 31.566 5499 5509 5515 VV 7 211065 9167387 1.70% 0.370%
29 31.663 5515 5526 5539 VV 5 342236 21815172 4.04% 0.881%
30 31.755 5539 5542 5557 VV 8 264241 10929443 2.02% 0.442%
31 32.092 5557 5601 5633 VV 2 5749181 372727110 68.95% 15.057%
32 32.338 5633 5644 5648 VV 6 356216 14485746 2.68% 0.585%
33 32.566 5648 5684 5721 VV 8376439 540594084 100.00% 21.838%
34 32.852 5721 5734 5750 VV 2 742094 35529777 6.57% 1.435%
35 33.732 5852 5888 5890 VV 10 393452 23535826 4.35% 0.951%
Annexe II
36 33.812 5890 5902 5945 VV 2 1231207 65955966 12.20% 2.664%
37 34.201 5945 5970 5977 VV 4 536961 25970616 4.80% 1.049%
38 34.281 5977 5984 6015 VV 4 554073 31936821 5.91% 1.290%
39 34.515 6015 6025 6048 VV 6 161187 7331146 1.36% 0.296%
40 35.447 6174 6188 6206 PV 5 113486 6355520 1.18% 0.257%
41 35.778 6206 6246 6278 VV 5 575541 45122049 8.35% 1.823%
42 36.053 6278 6294 6297 PV 6 76528 2274399 0.42% 0.092%
43 36.104 6297 6303 6313 VV 9 87495 3627928 0.67% 0.147%
44 36.224 6313 6324 6337 VV 5 206134 7658124 1.42% 0.309%
45 37.299 6474 6512 6552 BV 3 504782 29569102 5.47% 1.194%
46 40.236 6999 7026 7074 BB 6 142931 12846680 2.38% 0.519%
Abundance
TIC: LAURIER1.D
8000000
7500000
7000000
6500000
6000000
5500000
5000000
4500000
4000000
3500000
3000000
2500000
2000000
1500000
1000000
500000
16.00
18.00
20.00
22.00
24.00
26.00
28.00
30.00
32.00
34.00
36.00
38.00
40.00
42.00
Time-->
Figure A 9 : Chromatogramme de l’huile essentielle des fruits du laurus nobilis
Annexe II
Abundance
81
450000
Scan 4549 (26.079 min): LAURIER1.D
93
67
400000
350000
300000
107
53
250000
121
200000
150000
147
133
161
189
100000
50000
175
0
204
60
50
60
70
80
90
100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210
m/z-->
Figure A 10 : Spectre de masse de cyclohexane,1-ethenyl-1-methyl-2,4-bis (β-élémène )
Annexe III
Fiches techniques des réactifs et des colorants :
Chlorure de fer a 5% :
10 g de FeCl3 + 200 ml d’eau distillée.
L’ammoniaque ½ :
30ml d’ammoniaque + 60 ml d’eau distillée.
Acétate de plomb :
9,5 g de poudre d’acétate de plomb + 10 ml eau désoxydée (bouillir puis refroidir).
Réactif de Dragen droff :
-solution a : 0,85g de nitrate de bismuth + 40 ml d’eau distillée + 10 ml d’acide
acétique.
-solution b : 8 g d’iode de potassium + 2ml d’eau distillée.
On mélange a + b.
15 ml de mélange + 20 ml d’acide acétique puis compléter a 100ml de l’eau
distillée.
Réactif de stiasny :
Mélanger 10 ml de formaldéhyde a 40% avec 5 ml d’HCl concentré.
Préparation de la solution de KOH :
·
Pour une concentration de 0.1 N de KOH : on fait dissoudre 1.4 g de KOH dans
l’alcool méthylique, puis on titre avec une solution d’HCl à 0.1N.
·
Pour une concentration de 0.5 N de KOH : on fait dissoudre 7 g de KOH dans
l’alcool éthylique ou méthylique, puis on titre avec une solution d’HCl à 0.42 N.
Réactif de carr-Price :
Solution à 20% de trichlorure d’antimoine dans le chloroforme.
Glossaire
Milieux de culture
MUELLER-HINTON gélosé ( M-H ) : ( g/l )
Infusion de viande de bœuf …………………02.0g
Hydrolysat acide de caséine ………………...17.5g
Amidon ………………………………………01.5g
Agar ……………………………………………10g
pH : 7.4
Autoclaver pendant 15 min à 115°C.
GELOSE NUTRITIF ( G N ) : ( g/l )
Peptone …………………………………………5g
Extrait de levure ………………………………..2g
Extrait de viande ……………………………….1g
NaCl ……………………………………………5g
Eau……………………………………………...1l
pH : 7.5
Autoclaver pendant 15 min à 115°C.
EAU PHYSIOLOGIQUE 9% ( NaCl )
Sodium chloride ( Fluka )………………………9g
Eau déminéralisée ………………………...1000ml
SABOURAUD GELOSE SIMPLE ( SAB ) : (g/l )
Néopeptone ……………………………………10g
Glucose ………………………………………..20g
Agar …………………………………………...20g
pH : 5 - 5.6
Autoclaver pendant 15 min à 115°.

ETUDE COMPARATIVE DE LA PHARMACOGNOSIE DES

Transcription

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