Especificidades

Creatinina Plus
Jaffé
TÉCNICA
Ensayo cinético-colorimétrico.
Estándar
Conservar de 2 a 8 °C.
Sólo para uso "in vitro".
INTRODUCCIÓN
La creatinina es un producto final del metabolismo muscular. Se origina a partir
de la creatina por pérdida de una molécula de agua. A su vez, la creatina se
produce por hidrólisis del fosfato de creatina, por acción de la creatin-fosfokinasa (CPK), apareciendo como metabolitos de dicha reacción el fosfato
energético y la creatina. El radical fosfato puede aportar energía directamente
por dicha reacción o a través de su acoplamiento a una molécula de ADP para
formar ATP y posterior hidrólisis por acción de ATPasa.
La eliminación de creatinina en la especie humana tiene lugar casi
exclusivamente a través de la filtración glomerular, siendo un importante índice
del funcionamiento renal. A diferencia de la urea, la eliminación de creatinina
por la orina no viene afectada por la diuresis, al mismo tiempo que para una
persona es muy constante su eliminación diaria casi independientemente de la
dieta alimenticia, siendo la masa muscular el factor condicionante más directo
de su excreción total por día. En resumen, se puede afirmar que la eliminación
de creatinina en un intervalo de 24 horas es un valor muy constante, dependiente
principalmente de la masa muscular del individuo, y que el cálculo del
aclaramiento de la creatinina es un parámetro directo del funcionamiento renal.
APLICACIÓN PROPUESTA
El método es válido para determinar creatinina en suero humano.
MATERIAL NECESARIO
Micropipetas.
Equipo fotométrico con posibilidad de lectura a 492 nm (490-510) o de superior
calidad (programable o automático).
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
La reacción química aplicable para fotometría es la descrita por Jaffé, basada en
el color anaranjado que se produce al reaccionar la creatinina con el picrato
alcalino. Hay varias sustancias en el suero y orina que actúan como cromógenos
inespecíficos, lo que es un problema principalmente para el cálculo del
aclaramiento. Por este motivo tiene una gran importancia la adecuación de todas
las variables de la reacción, muy especialmente el pH, con el fin de obtener la
máxima sensibilidad para la creatinina y la mínima interferencia de cromógenos.
Adaptando la reacción a una medida cinética, se logra una gran especificidad
debido a que la creatinina reacciona con el picrato alcalino con más rapidez que
los cromógenos (metilguanidina, picramato,...), por lo que la medida del
incremento de color en un breve período de tiempo inicial de la reacción
valorarán principalmente creatinina, con poca influencia de los cromógenos
inespecíficos, por esto es recomendable, a ser posible, la determinación cinética.
CONTENIDO
R1 Ac. Pícrico
Creatinina
R2 Hidróxido de sodio
Creatinina
R3 Estándar
Creatinina
Ac. pícrico
Hidróxido de sodio
Creatinina
CALIBRACIÓN: El estándar ha sido evaluado contra el
Referencia BCR-574 de IVMM/BCR
17,5 mmol/L
0,29 mol/L
176,8 µmol/L
Muestra
Muestra
--100 µL
Estándar
100 µL
--Mezcla reactiva
1,0 mL
1,0 mL
Mezclar y poner en marcha el cronómetro.
Anotar la Abs. a los 30 segundos (A1) y a los 90 segundos (A2).
Lectura a 492 nm (490-510).
CÁLCULOS
(A2-A1) Muestra
µmol/L Creatinina = ________________________ x Conc. Estándar
(A2-A1) Estándar
µmol/L x 0,0113 = mg/dL
CARACTERÍSTICAS FUNCIONALES
Las características funcionales más relevantes del producto son las siguientes:
1- Linealidad: 2200 µmol/L
2- Imprecisión: Repetibilidad intra-ensayo:
Coeficiente de variación < 5%
Reproducibilidad inter-ensayo: Coeficiente de variación < 5%
3- Recuperación (Exactitud): 80 – 120 %
4- Paralelismo: La prueba fue satisfactoria y permite concluir la ausencia de
error sistemático en el análisis (0,988x – 11,76).
Estos reactivos no muestran diferencias significativas cuando se comparan con
otros reactivos comerciales.
Los resultados obtenidos con 42 muestras fueron los siguientes:
Ecuación de la recta de regresión: y = 0,94x + 4,16
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
VALORES DE REFERENCIA
61,8 - 132,6 µmol/L
NOTAS
El ácido úrico, ácido ascórbico, la glucosa, cetonas y antibióticos de
cefalosporinas, si están presentes en altas concentraciones, puede interferir en el
ensayo causando valores falsamente altos.
No utilizar sueros lipémicos.
PRECAUCIONES
Contiene pequeñas cantidades de azida sódica. Evítese el contacto con la piel
dañada y las mucosas.
BIBLIOGRAFÍA
Hare R.S. Endogenous creatinine in serum and urine Pro.Soc. Exp. Biol. Med.
74, 148 (1950)
Kostir JV. and Sonka J.A. new method Biochim Biophys. Acta (Amst) 8, 86
1952.
Slot, C. Plasma creatinine determination Scand J.Clin. Lab.Invest.17,381.1965
Young DS., Pestaner LC, Gibberman V. Clin. Chem. 1975; 21:1D-423D.
Estándar de
PREPARACIÓN Y ESTABILIDAD
Los reactivos están listos para su uso.
Son estables hasta la fecha de vencimiento indicada en el envase.
Mezclar ambos reactivos, R1 y R2, a partes iguales según necesidades. Esta
mezcla es estable 10 días a temperatura ambiente.
MUESTRA
Suero humano.
La creatinina en suero tiene una estabilidad de al menos de 24 horas de 2 a 8 ºC.
CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y patológico. Sueros control valorados.
PRESENTACIÓN
Cód.: 1001111
Cód.: 1001112
2 x 150 mL
2 x 1000 mL
300 Det. mínimas
2000 Det. mínimas
Emisión No 4/ Noviembre 2004
CENTIS DIAGNOSTICOS. Ave. Monumental y Carretera La Rada, km 3 1/2, Guanabacoa, C. Habana, Cuba
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NP 7152