Expérimentation animale et éthique

Expérimentation animale
Recherche Biomédicale et Vétérinaire :
- Animal
- Protocole Expérimental
- Unité Animale
Expérimentation
Animale
Résultats de qualité : Fiables,comparables et
Reproductibles
Harmonisation :
Protocole Expérimental
Animal
Unité Animale
Expérimentation Animale :
Animal
Harmonisation
Génétique
Sanitaire
(Elevage)
(Statut Sanitaire)
Génétique :
• Lignée non consanguine : (outbred strain): évite les animaux apparentés
( hétérogénéité ), ex: Souris SWISS, NMRI ; rats Wistar, S. Dawley, Long Evans
• Lignée consanguine : (inbred strain):animaux obtenus par des accouplements
entre F x S pendant un grand nombre de générations21 (homogénéité),Ex: souris:
C57BL/6,C3H,Balb,/c, FVB,CBA;DBA2; Rats Lewis, Dark agouti, Brown Norway;
• Lignée Hybride (F1) :première génération du croisement des 2 consanguines
Ex: souris B6D2F1, B6CBAF1, B6SJLF1; rats FBNF1 ,LBNF1
• Lignée congénique : croisement des 2 consanguines, suivi de croisement par un
backcross de l’une des 2 souches parentales.
Ex: lignée Tg sur fond génétique fixé
• Lignée Transgénique : animaux qui ont intégré un transgène au hasard dans
leurs génome
• Lignée Mutantes : animaux qui présentent spontanément un caractère
pathologique(mutation): souris obèses, diabétiques, nude, scid -beige
Statut Sanitaire :
Axénique : aucun germe présent (Germ Free ou Axenic)
( Gnotoxéniques : dérive de l’animal axénique avec une flore
microbienne définie et contrôlée )
Hétéroxéniques : flore microbienne non pathogène
- EOPS :Exempt d’Organismes Pathogènes Spécifiques =
- IOPS : Indemne d’Organisme Pathogènes Spécifiques
( SPF: Specific Pathogen Free)
Holoxénique ou Conventionnel : flore microbienne inconnue
pathogène et non pathogène (Conventional)
(Néo holoxénique :dérive de l’animal hétéroxénique avec une
flore non contrôlée )
Contrôle Sanitaire :
bilan trimestriel pour les rongeurs et lagomorphes
Objectifs:
• la recherche des microorganismes pathogènes en
bactériologie, sérologie , parasitologie et autopsie
( lésions macroscopiques) selon les recommandations
FELASA( Federation of European Laboratory Animal
Science Associations )
• de standardiser la qualité sanitaire des animaux de
laboratoire et d’éviter les interférences sur les
résultats expérimentaux
Expérimentation
Animale
Protocole Expérimental
Harmonisation
Bonnes Pratiques
Laboratoire
Démarche
Qualité
Expérimentation
Animale
Unité Animale
Harmonisation
Réglementaire
Scientifique
Expérimentation Animale
Harmonisation
Réglementaire :
Locaux
Personnel
Animal
Expérimentation Animale
Décret 87-848 du 19.10.1987modifié par le décret 2001- 464.
Arrêté du 19 avril 1988 fixant les conditions
d’agrément des établissements d’expérimentation
animale: délivré par le Ministère de l’Agriculture
après la visite de la DSV ( 5 ans).
Expérimentation Animale
Arrêté du 19 avril 1988 fixant les conditions
d’expérimenter sur les animaux :
• Chercheurs et ingénieurs :demande d’Autorisation
d’Expérimentation (nominative)après l’obtention du
diplôme de Biologie des Animaux de Laboratoire
niveau I - DSV ( 5 ans )
•Techniciens par l’obtention du Diplôme de Biologie
des Animaux de Laboratoire niveau II ou III
Expérimentation Animale
Arrêté du 19 avril 1988 fixant les conditions de
fourniture aux laboratoires agrées des animaux
utilisés à des fins de recherche scientifiques ou
expérimentales: les animaux doivent provenir d’
établissements d’élevages spécialisés déclarés à la
DSV.
Expérimentation Animale
- Arrêté du 13 août 1996:
Mesures techniques de prévention et de confinement
- Commission Génétique (Janvier 2000) :évaluation du
risque biologique et niveau de confinement
• laboratoires : L1, L2 L3 et L4;
• animaux abritant un gène étranger: classe 1,2 3 et 4 et
• animaleries A1, A2, A3 et A4
-Haut Conseil des Biotechnologies (juin 2008):
comité scientifique et comité éthique
-Classification niveau de biosécurité:
Groupe de risque 1 : ne provoque pas de maladies humaines ,
risque faible pour l'individu et la collectivité;
Groupe de risque 2 : provoque de maladies bénignes, risque
modéré pour l'individu, risque limité pour la collectivité;
Groupe de risque 3: provoque de maladies graves ( fatales ) et qui
possèdent une thérapeutique , risque élevé pour l'individu, risque
faible pour la collectivité;
Groupe de risque 4: : provoque de maladies graves fatales et qui
possèdent une thérapeutique , risque élevé pour l'individu, risque
élevé pour la collectivité.
Expérimentation Animale
Décret n° 95-1285 du 13 décembre 1995,modifié
par le décret n° 99-661 du 24 novembre 1999,ainsi
que les 5 arrêtés de 1996 et du novembre 1999:
Définissent les conditions applicables à tout
transport d’animaux vertébrés vivants sur le
territoire national(soins, alimentation , abreuvement
et confinement).
Expérimentation
Animale
Harmonisation Scientifique :
Type d’expérimentation,
Espèce animale,
Statut Sanitaire d’animaux
Type d’expérimentation:
Fondamentale ou appliquée
Aiguë ou chronique
Cancérologie ,immunologie , pharmacologie,
comportement…
Unité Animale adaptée
Espèce Animale : Modèle Animal
espèce de référence pour le domaine d’étude
et le modèle a priori le plus prédictif
Rongeurs,
Lagomorphes,
Carnivores,
Primates…
•
Unité Animale et Statut sanitaire adaptés
Statut Sanitaire d’animaux:
• Axénique et Gnotoxéniques : Isolateurs ( Barrière Totale)
• EOPS : Zone Protégée (Barrière Partielle ou Salle Blanche)
• Conventionnel et Néo holoxénique:
Unité Animal Conventionnelle ( Animalerie)
Unité Animale adaptée
•
Isolateur :
1 = Expérimentation:
- Animaux Axéniques ou
- Protection d’animaux IOPS immunodéprimés ou
- Animaux infectés volontairement (Infectiologie)ou
- Animaux statut sanitaire inconnu: Quarantaine
(bilan sanitaire en cours)
- Animaux Contaminés : à décontaminer
( hystérectomie aseptique ou transfert d’embryons ou FIV
•
Isolateur
2 - Élevage :
- Maintien des noyaux des colonies d’animaux IOPS ou
axéniques
- Expansion du noyau préalable à une production
(macro isolateur)
3 - Décontamination :
- Animaux décontaminés par hystérectomie aseptique
ou
- Transfert d’embryons ou FIV (Fécondation in vitro)
• Unité Animale Protégée EOPS
Animal EOPS
Matériel
Personnel
et Locaux
Habilité
« contrôlés »
et
Spécialisé
Unité Animale Protégée EOPS
Statut Sanitaire EOPS :
Exempt d’Organisme Pathogène Spécifique
Barrières Sanitaires
1. Animal
2. Environnement : Matériel et Locaux
3. Personnel
Barrières sanitaires :
1 - Animal EOPS
Contrôle d’origine et du
statut sanitaire:
Fournisseur Agrée
et Bilan Sanitaire
EOPS
Transport:
Emballage filtre
Accès à l’unité protégée:
SAS avec
décontamination
chimique préalable
Barrières sanitaires:
2.a - Environnement : Locaux
Confiné : SAS (contrôle d-’accès),
Étanche(animaux sauvages ,bruit , écarts de °C )
Contrôle Microbiologique : hygiène, désinfection
et stérilisation (eau, aliments et litière)
Contrôle de paramètres physiques : hygrométrie,
lumière(contrôle de la photopériode,) air :
climatisation(température), renouvellement d’air,
filtration d’air HEPA et gradient de
pression(contamination aéroporté).
Barrières sanitaires :
2.b - Environnement : Matériel / Équipement
•Autoclave double porte
cages , biberons ,couvercles , litière,
aliments…)
• SAS décontamination chimique (Formol
interdit
Peroxyde d’Hydrogène , etc.)
Unité Animale Protégée EOPS
Barrières sanitaires :
3 - Personnel
•Vestiaire avec SAS: vestimentaire stérile
Gants, surchaussures ,masques ,charlottes et
combinaisons (jetables ou autoclavables)
•
Unité Animale Conventionnelle
1. Animal Néo holoxénique
Matériel et
Locaux
décontaminés
Personnel
Habilité
Unité Animale Conventionnelle ou Animalerie
2 . a -Environnement : Locaux
Confiné : SAS (contrôle d’accès),
Étanche : animaux sauvages ,bruit,°C
Contrôle Microbiologique: hygiène, désinfection
et stérilisation facultative (eau, aliments et
litière)
Contrôle de paramètres physiques: hygrométrie,
lumière(contrôle de la photopériode,) air :
climatisation(température), renouvellement
d’air, filtration d’air non absolue et gradient
de pression (contamination aéroporté
Unité Animale Conventionnelle
2 .b - Environnement : Matériel / Équipement
•Absence d’autoclave double porte :
décontamination par tunnel de lavage
cages ,biberons ,couvercles ,litière ,aliments…
• SAS décontamination chimique (Formol
interdit
Peroxyde d’Hydrogène, etc.)
Unité Animale Conventionnelle
3 . Personnel
Vestiaire avec SAS: vestimentaire stérile ou
non
Gants, surchaussures et blouses
(jetables ou autoclavables)
Unité Animale Conventionnelle
Barrière Sanitaire :
Animal Conventionnel avec suivi sanitaire
Matériel
et Locaux
Agrées
Personnel
Habilité
Unité Animale
Contraintes :
•Réglementaires
• Techniques / Méthodologies
• Ethique
• Contraintes Réglementaires
Environnement : établissement classé
Expérimentation animale :
animaux classiques et OGM
Risque Biologique :
personnel et environnement
Risque Biologique :
Niveau de confinement microbiologique:
Niveau 1
Niveau 2
Niveau 3
Niveau 4
-
sans danger
maladie non grave
maladie fatale / thérapeutique
maladie fatale sans thérapeutique
• Contraintes Techniques/Méthodologiques :
Matériel /Equipements : cages avec couvercle
filtrants, portoirs ventilés isolateurs , échographe,
anesthésie,appareil de mesure de tension artérielle ,
stéréotaxie …
Personnel :
qualitatif ( formation et qualité humaines)
quantitatif ( nombre )
• Contraintes Ethiques :
Principe de 3 R :
Remplacer
Réduire
Raffiner
Responsabilité
Bien Etre Animal :
Respecter Animal « Etre vivant »
• Contraintes Ethiques :
Bien être :
« l’état d’un individu faisant face à son
environnement » (Broom ,1988)
« Stabilité physiologique et psychologique »
SANTE PHYSIQUE et PSYCHOLOGIQUE
• Contraintes Ethiques :
Bien être Animal
Physique
Stress
Souffrance
Psychologique
Stress
L’effet d’un stimulus ou plusieurs stimuli
tendant à perturber l’homéostasie de
l’organisme.
Il se traduit par des modifications
physiologiques , comme la libération
d’hormones , accompagnés parfois des
modifications morphologiques
Syndrome général d’adaptation - SGA
Modifications physiologiques : « 3 phases »
- « réaction d’urgence »système nerveux sympathique
- « état de résistance » l’hypophyse
- « phase d’épuisement » - mécanismes adaptatifs:
croissance ralentie, hyperplasie thyroïdienne,
avortements, baisse d’activité sexuelle,
altérations de la formule sanguine,
ulcérations gastriques, baisse d’immunité …
Agents de Stress
- Nutritionnels: niveau protéique…
- Physique: immobilisation, densité d’animaux/cage
- Physiologique: chirurgies, maladies..
- Sociaux: changements de groupe ou isolement..
- Environnementaux: lumière, température, bruit,
hygrométrie, odeur, litière, transport…
- Psychologiques : peur, frustration, ennui...
Souffrance
C’est un état émotionnel traduit par des
sensations désagréables :
la douleur, la peur, la frustration , l’anxiété ,
l’ennui…
Elle doit être mesurée par: signes cliniques et
comportementaux
éviter la souffrance
Comité d’éthique
• Contraintes Ethiques :
Eviter la souffrance :
physique : analgésique et ou anesthésique
psychologique :
Approche /contention
Manipulation
Conditions d’hébergement:
surface
nombre d’animaux
éthologie
Bien être
Réduit le risque des blessures du
personnel et/ou de l’animal pendant
la manipulation expérimentale
Sécurité
Diminue la variabilité des résultats
expérimentaux
Qualité
Le respect des spécificités physiologiques de
l’espèce,
Le respect de l’animal en tant que être vivant :
la Souffrance et le Bien être animal,
Une recherche constante d’amélioration des
connaissances scientifiques et de la maîtrise
technique par les expérimentateurs
La reconnaissance de l’ Expérimentation Animale