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Compte rendu CQ virtuel HPN 2013/1
« Echange de données entre laboratoires : Détection et quantification de clone HPN »
I.
EXPLOITATION DES RESULTATS ET CORRECTIONS DU CANTO
1. CQ1 Canto : Clone HPN II+III
A. Analyses des résultats : CQ1 Canto
a) Recherche sur les leucocytes : CQ1 Canto
Les 21 centres ont fait l’analyse sur les leucocytes. Les valeurs sur les polynucléaires de 2 Centres ont du être rejetées pour l’analyse statistiques
(écart trop important par rapport à la moyenne). Tous les centres ont rendu la présence de type II sur les polynucléaires neutrophiles,1 centre n’a
pas rendu de clone HPN sur les monocytes et les autres centres ont rendu la présence de type II sur les monocytes.
N=19
MOYENNE
%
type III PNNS
%
clone HPN
(II+III)
PNNS
%
type II
PNNS
Nombre
de PNNS
analysés
%
type III
MO
%
clone HPN
(II+III)
Monos
%
type II
Monos
Nombre
de Monos
analysés
21,07
4,75
26,13
180806,58
17,20
4,46
20,65
11738,76
ET
1,16
0,83
1,27
29169,25
0,58
0,51
4,96
9926,33
CV (%)
5,52
17,56
4,85
16,13
3,40
11,45
24,01
84,56
Les CV sur les % sont plus faibles que sur le nombre d’événements analysés. Les CV sur les PNNs sont plus acceptables que sur les monocytes.
b) Recherche sur les hématies : CQ1 Canto
Les 21 centres ont fait l’analyse sur les hématies. A noter qu’un seul centre n’a pas rendu de type II sur les hématies
N=21
%
type III
GR
%
clone
HPN(II+III)
GR
%
type II
GR
Nombre
d'hématies
analysées
MOYENNE
0,99
0,09
1,08
518602,38
ET
0,01
0,01
0,04
117475,67
CV (%)
1,41
14,62
3,36
22,65
c) Interprétation: CQ1 Canto
16/ 21 ont rendu un chiffre total de clone HPN (II+III) de manière claire sur les 3 lignées.
16/21 ont bien mentionné la présence de type II.
16/21 ont commenté l’évolution croissante du clone.
2/21 ont commenté la différence de clone entre les leucocytes et les hématies et ont évoqué comme cause une éventuelle transfusion.
B. Correction et discussion : CQ1 Canto
a) Exemple de gating accepté :
i.
CQ1 Canto leucocytes
ii.
CQ1 Canto hématies
b) Exemple d’interprétation acceptée : CQ1 Canto
Présence d'un clone HPN estimé à 26.6% des polynucléaires neutrophiles avec présence de type II. Ce clone est confirmé sur
les monocytes (21%) et sur les hématies (1.1%). Clone en augmentation relative sur les 3 lignées cellulaires par rapport à
l'antériorité. Prévoir un suivi en particulier en cas d’évolution clinique.
c) Discussion
Il est important de donner les % de type II et type III pour chaque lignée afin que les ARCs (Attachés de Recherche
Clinique) puissent les retranscrire dans le registre international. Ces % doivent être suivis d’une conclusion claire pour le
clinicien qui mentionne :
-
La présence du clone avec le % total du clone (II+III) sur les polynucléaires neutrophiles
-
La confirmation sur au moins une autre lignée (Monocytes et/ou hématies)
-
L’évolution par rapport à l’antériorité : augmentation relative dans ce cas
-
Evoquer une transfusion ou une hémolyse pour la différence de clone entre les leucocytes et les hématies est
recommandé mais néanmoins discutable. Nous pouvions aussi discuter le fait que comme c’est un suivi, il n’est peut-être
pas nécessaire de faire l’examen des hématies. Nous ne sommes pas dans un cadre diagnostique et le suivi de la taille du
clone se fait essentiellement sur les GB
-
Le contrôle à distance est pour l’instant recommandé, une étude est cependant nécessaire pour en prouver l’intérêt. Le
contrôle à distance est ici un suivi (et non une confirmation). Aucun délai n’est opposable actuellement. Il est dans ce cas
usuel de proposer un suivi annuel et d’anticiper en cas d’évolution clinique. Pour le registre du suivi des petits clones, en
projet, des recommandations seront données sur le délai de suivi.
2. CQ2 Canto : Clone minoritaire HPN
A. Analyses des résultats : CQ2 Canto
a) Recherche sur les leucocytes : CQ2 Canto
Les 21 centres ont fait l’analyse des leucocytes. 19/21 ont donné un % de clone sur les polynucléaires neutrophiles. 16/21centres ont décrit la
présence de type II sur les polynucléaires neutrophiles.
6/21 centres ont décrit la présence de Type III sur les monocytes mais ont rendu un % en dessous de la sensibilité de la technique. 8/21 centres
ont décrit la présence de type II sur les monocytes donc 2 centres ont rendu du type II sur les monocytes sans type III.
%
type III
PNNS
N=
MOYENNE
ET
CV(%)
19
0,06
0,02
30,10
%
type II
PNNS
%
clone HPN(II+III)
PNNS
16
19
0,12
0,15
0,06
0,06
48,03
41,56
Nombre
de PNNS
analysés
21
111068,42
13134,34
11,82
%
type III
MO
6
0,04
0,02
56,14
%
type II
MO
%
clone HPN(II+III)
MO
8
8
0,11
0,13
0,06
0,07
60,58
52,40
Nombre
de Monos
analysés
21
13535,16
3823,33
28,25
La moyenne du clone HPN type III est de 0.06% sur les polynucléaires neutrophiles. Cette valeur est bien au-dessus de la limite de sensibilité de
la technique 0.01%(mentionnée dans le CD). Le % total est de 0.15%, il s’agit donc d’ un clone HPN minoritaire (0.1-1%).
La moyenne du clone HPN type III est de 0.04% sur les monocytes. Cette valeur est inférieure à la limite de sensibilité de la technique 0.1% et ne
doit donc pas être rendue même si en ajoutant les types II le % total est de 0.13%.
Pour rappel, la limite de sensibilité de la technique est effectuée en passant 20 témoins sains et base son calcul sur la zone HPN type III en
utilisant les lymphocytes et/ou polynucléaires basophiles comme standard interne. Il faut donc avoir un % HPN type III supérieur à la limite de
sensibilité de la technique ainsi qu’au moins 20 événements dans la zone type III pour rendre le % d’un clone dans une lignée.
b) Recherche sur les hématies : CQ2 Canto
20/21 centres ont fait l’analyse sur les hématies. 13/20 centres ont rendu un % de clone sur les hématies. 1 centre a rendu une valeur en dessous
du seuil de la technique (0.005%).
N=13
MOYENNE
ET
CV(%)
%
type III
GR
%
clone
HPN(II+III)
GR
%
type II
GR
0,011
0,01
69,71 16,34
0,029
0,005
Nombre
d'hématies
analysées
0,039
593577,2
0,014
165090,82
36.71
27,81
c) Interprétation: CQ2 Canto
19/21 centres ont décrit la présence d’un clone HPN minoritaire ou de rares cellules présentant un déficit en molécules GPI-liées sur les
polynucléaires neutrophiles. 13/21 centres ont bien demandé un contrôle.
B. Correction et discussion
a) Exemple de gating accepté :
i.
CQ2 Canto leucocytes
ii.
CQ2 Canto hématies
b) Exemple d’interprétation acceptée : CQ2 Canto
Présence d'un clone HPN minoritaire estimé à 0.15% sur les polynucléaires neutrophiles avec présence de type II. Ce clone
est confirmé sur les hématies (0.039%). Une confirmation sur un deuxième prélèvement est souhaitable. La signification des
clones minoritaires (<1%) reste cependant mal connu.
c) Discussion
Il est important de donner les % de type II et type III pour chaque lignée afin que les ARCs (Attachés de Recherche
Clinique) puissent les retranscrire dans le registre international. Ces % doivent obligatoirement être supérieur à la limite de
sensibilité de la technique mentionnée dans le CD (0.01% sur les polynucléaires neutrophiles, 0.1% sur les monocytes,
0.05% sur les hématies). Ils doivent être suivis d’une conclusion claire pour le clinicien qui mentionne :
-
La présence du clone avec le % total du clone (II+III) sur les polynucléaires neutrophiles
-
La confirmation ou non sur une autre lignée :
o Difficile sur les monocytes car des événements se situent dans la zone HPN type III mais il y en a moins de 20.
La confirmation sur les monocytes ne peut donc être rendue.
o Sur les hématies confirmation du clone car le clone type III (0.011%) est supérieur à la limite de sensibilité de la
technique (0.005%). Il faut rendre le % du clone totale (II+III) sur les hématies mais il faut veiller à ne pas
prendre en compte les faux type II qui sont GPA (CD235a) low.
- Dans le cas des clones minoritaires (1%), il est de bon sens de demander une confirmation sur un deuxième prélèvement.
3. CQ3 Canto : Absence de clone HPN et myélémie
A. Analyse des résultats : CQ3 Canto
a) Recherche sur les leucocytes : CQ3 Canto
5/21 centres ont rendu un % de type II sur les polynucléaires neutrophiles et 3/21 centres ont rendu un % de type II sur les monocytes
b) Recherche sur les hématies : CQ3 Canto
Bien que 16 centres ont répondu absence de clone HPN sur les leucocytes, 13/21 centres ont effectué l’analyse sur les hématies.
c) Interprétation: CQ3 Canto
16/21 centres ont clairement écrit « absence de clone HPN ».
5 centres (1/4) ont décrit la présence de rares cellules présentant un déficit en molécules GPI-liées ou ont écrit clone minoritaire alors qu’il
s’agissait d’un faux clone de type II généré par la myélémie.
13/21 centres ont rendu une limite de sensibilité mais la plupart ont rendu la limite de sensibilité de la technique au lieu de la limite de sensibilité
du test.
B. Correction et discussion
a) Exemple de gating accepté :
i.
CQ3 Canto leucocytes
ii.
CQ3 Canto hématies
L’analyse des hématies n’était pas à réaliser
Présence de moins de 20
événements dans la zone
HPN type III : absence
de clone HPN à une
limite de sensibilité de
0.005%
Calcul de la sensibilité :
Sensibilité du test :
20/991061*100=0.002
donc supérieure à
0.005% qui est la limite
de sensibilité de la
technique que l’on doit
retenir
A noter la présence de
faux type II liée à des
interférences de
marquages, à ne pas
retenir.
b) Exemple d’interprétation acceptée : CQ3 Canto
Absence de clone HPN:
- sur les polynucléaires neutrophiles avec une limite de sensibilité de 0.012%
- sur les monocytes avec une limite de sensibilité de 0.1%
c) Discussion
Il s’agissait d’un cas démontrant la présence de faux type II sur les polynucléaires neutrophiles en cas de myélémie. Il
s’agit d’un piège qu’il faut connaître pour éviter de rendre des faux clones. Cette myélémie est identifiable (se référer
au gating ci-dessus en rose) et ne génère pas de type III si la zone HPN type III est correctement placée à l’aide des
standards internes. Il n’y avait pas de clone HPN monocytes et l’analyse des hématies n’était donc pas à réaliser.
Pour la conclusion, il est important de :
-
Ecrire clairement « absence de clone HPN »
-
Donner la limite de sensibilité du test et non de la technique sur au moins les polynucléaires neutrophiles.
Celle-ci doit être calculée en divisant le clone minimal (20 événements) divisé par le nombre de polynucléaires analysés
Exemple 1: si après gating les polynucléaires sont inférieurs à 200 000
20/171 697 * 100=0.012
La limite de sensibilité du test égale à 0.012% est inférieure à la limite de sensibilité de la technique (=0.01%). Il
faut donc rendre 0.012%.
Exemple 2:
si après gating les polynucléaires sont supérieurs à 200 000
20/204 000 * 100=0.0098
La limite de sensibilité du test égale à 0.0098% est supérieure à la limite de sensibilité de la technique (=0.01%).
On doit donc rendre 0.01%.