ProClot 0008468310

HemosIL®
ProClot - 0008468310
ENGLISH - Insert revision 07/2012
Intended use
Reagent storage and stability
Limitations/interfering substances
Automated functional clotting Protein C assay for the quantitative determination of Protein C in human citrated
plasma on the IL Coagulation Systems.
Unopened reagents and plasmas are stable until the expiration date shown on the vial when stored at 2-8°C.
Protein C activator - Stability after reconstitution: 15 days at 2-8°C or 60 days at -20°C in the original vial.
Protein C deficient plasma - Stability after reconstitution: 4 hours at 15-25°C, 4 hours at 15°C on board the
ACL TOP® Family or 7 days at -20°C in the original vial.
Protein C control plasma - Stability after reconstitution: 4 hours at 15-25°C or 7 days at -20°C in the original vial.
Working diluent - Stability after preparation: 8 hours at 2-8°C.
Notes:
-- Frozen reagents and plasmas should be thawed at 37°C and gently mixed before use. Do not refreeze.
-- For optimal stability remove reagents from the system and store them at 2-8°C in the original vial.
The ProClot assay on the ACL Family and ACL Futura/ACL Advance Systems is insensitive to heparin
(UF) dosages up to 2 U/mL. Protein C results on the ACL Futura/ACL Advance Systems are not affected by
hemoglobin up to 150 mg/dL, bilirubin up to 20 mg/dL and triglycerides up to 500 mg/dL. Protein C results
on the ACL TOP Family are not affected by heparin (UF) up to 1.5 U/mL, heparin (LMW) up to 0.7 U/mL,
hemoglobin up to 200 mg/dL, bilirubin up to 25 mg/dL and triglycerides up to 600 mg/dL.
Protein C results may be affected by LAC (Lupus Anticoagulant), high concentration of factor VIII (>250%) and
by the presence of APC-R,13,14 particularly in patients homozygous for this genetic mutation. Suspected patient
samples should be diluted 1:2 and 1:4 using protein C deficient plasma.
Samples results must be corrected for appropriate dilutions.
Summary and principle
Protein C is a vitamin K dependent protein, which is present in plasma as a zymogen. Protein C is activated
in vivo by thrombin in the presence of thrombomodulin.1, 2 Activated Protein C exhibits an anticoagulant effect
through the inhibition of factors Va and VIIIa,3 in the presence of calcium ions, phospholipids and its cofactor,
Protein S. The anticoagulant effect is a prolongation of the clotting time. Deficiency of Protein C is associated
with recurrent venous thrombosis and pulmonary embolism, especially in young adults.2 Acquired deficiencies
of Protein C are associated with hepatic disorders, oral anticoagulant therapy, and Disseminated Intravascular
Coagulation.4, 5,6
The ProClot kit is a functional clotting Protein C test, based on the prolongation of an APTT assay in presence
of activated Protein C. The use of the APTT test to measure the anticoagulant effect of activated protein C is due
to its sensitivity to FV and FVIII levels. Activated Protein C in plasma samples is generated by Protac®, a rapid in
vitro Protein C activator derived from the venom of the copperhead snake Agkistrodom contortrix contortrix.7
Composition
The ProClot kit consists of:
A Protein C activator (Cat. No. 0008468324): 4 x 1.5 mL vials of a lyophilized protein fraction from the
venom of Agkistrodon contortrix contortrix (Protac®) with stabilizers.
D Protein C deficient plasma (Cat. No. 0008468322): 4 x 1 mL vials of lyophilized human plasma which
has been artificially depleted of Protein C.
P Protein C control plasma (Cat. No. 0008468320): 2 x 1 mL vials of a lyophilized human plasma
containing a low level of Protein C.
PRECAUTIONS AND WARNINGS:
The material in this product was tested with FDA cleared methods and found nonreactive for Hepatitis B surface
Antigen (HBsAg), Anti-HCV and HIV antibodies. Handle as if potentially infectious.8
Hazard class: None
Risk phrases: None
Safety phrases: None
This product is For in vitro Diagnostic Use.
Preparation
Protein C activator: Dissolve the contents of each vial with 1.5 mL of CLSI CLRW Type water or equivalent.9
Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of the product. Keep the reagent
at 15-25°C for 30 minutes and invert to mix before use. Do not shake.
THE PROTEIN C ACTIVATOR CONTAINED IN THIS KIT MUST ONLY BE USED FOR PROCLOT ASSAYS.
Protein C deficient plasma: Dissolve the contents of each vial with 1 mL of CLSI CLRW Type water or
equivalent.9 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of the product. Keep
the reagent at 15-25°C for 30 minutes and invert to mix before use. Do not shake.
Protein C control plasma: Dissolve the contents of each vial with 1 mL of CLSI CLRW Type water or
equivalent.9 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of the product. Keep
the reagent at 15-25°C for 30 minutes and invert to mix before use. Do not shake.
Working diluent: To 4.3 part of ProClot diluent add 1 part Protein C activator.
Instrument/test procedures
Refer to the appropriate IL instrument’s Operator’s Manual and/or Application Manual for the complete assay
procedure instructions.
Please Note: On the ACL TOP Family it is recommended to calibrate with every session.
Specimen collection and preparation
Nine parts of freshly drawn venous blood are collected into one part trisodium citrate. Refer to CLSI Document
H21-A5 for further instructions on specimen collection, handling and storage.10
Additional reagents and control plasmas
The following are not supplied with the kit and must be purchased separately.
Americas and Pacific Rim
Europe
Cat. No.
Cat. No.
ProClot diluent
0008468600
0008468600
Calibration plasma
0020003700
0020003700
Normal Control
0020003120
0020003110
Low Abnormal Control
0020003220
0020003210
High Abnormal Control
0020003320
0020003310
APTT Lyophilized silica
NA
0008468710
APTT-SP (liquid)
0020006300
0020006300
Cleaning solution
0009831700
0009831700
Quality control
Normal and abnormal controls are recommended for a complete quality control program.11 Normal Control,
Low Abnormal Control, High Abnormal Control and the Protein C control plasma in this kit are designed for this
program. Each laboratory should establish its own mean and standard deviation and should establish a quality
control program to monitor laboratory testing. Controls should be analyzed at least once every 8 hour shift in
accordance with good laboratory practice. Refer to the instrument’s Operator’s Manual for additional information.
Refer to Westgard et al for identification and resolution of out-of-control situtations.12
Traceability of calibrators and control materials
The reported values were determined over multiple runs on IL Coagulation Systems using a specific lot of
reagent and against a Calibration Plasma House Standard which is traceable to the current International Protein
C Standard, identified in the acceptance range table.
Results
Protein C results may be reported in seconds, activity (%) and ratio. Refer to the instrument’s Operator’s Manual
for additional information.
ProClot - 0008468310
Expected values
Protein C activity levels in healthy individuals are approximately in the range of 70 – 140%. Protein C levels are
low in neonates and infants and increase to adult levels during adolescence.15
Due to many variables which may affect results, each laboratory should verify its own normal range.
Performance characteristics
Precision:
Within run and total (run to run and day to day) precision was assessed over multiple runs using both normal
and abnormal samples.
ACL Family
Mean (% activity)
CV % (Within run)
CV % (Total)
Normal Control
109
2.72
4.57
Low Abnormal Control
32.0
2.56
7.34
High Abnormal Control
17.2
5.47
10.48
ACL Futura
ACL Advance
Mean (% activity)
CV % (Within run)
CV % (Total)
Normal Control
114
2.98
4.74
Low Abnormal Control
28.7
5.96
8.61
High Abnormal Control
14.4
6.11
9.24
ACL TOP Family
Mean (% activity)
CV % (Within run)
CV % (Total)
Normal Control
112
5.8
7.0
Low Abnormal Control
30.3
5.9
6.5
High Abnormal Control
16.3
6.2
8.3
Correlation:
System
slope
intercept
r
Reference method
ACL Family
0.9207
1.479
0.941
IL ProChrom
ACL Futura
ACL Advance
1.2
-8.89
0.987
IL ProClot on ACL
ACL TOP Family
1.035
0.941
0.975
IL ProClot on ACL Futura/
ACL Advance
The precision and correlation results were obtained using specific lots of reagents and controls.
Linearity:
System
IL Coagulation Systems
10 - 150 (% activity)
DEUTSCH - Packungsbeilage Version 07/2012
Verwendung
Zur automatisierten Bestimmung des funktionellen Protein C in humanem Citratplasma auf IL
Analysensystemen.
Testprinzip und Zusammenfassung
Protein C ist ein Vitamin K-abhängiges Protein, das in einer inaktiven Form im Plasma vorliegt. Protein C wird
durch Thrombin am endothelständigen Thrombomodulin in die gerinnungsphysiologisch aktive Form Protein
Ca überführt.1,2 Protein Ca besitzt im Komplex mit seinem Kofaktor Protein S eine antikoagulatorische Wirkung
durch die Hemmung der Faktoren Va und VIIIa3 in Gegenwart von Calciumionen und Phospholipiden. Daraus
resultiert die Verlängerung der Gerinnungszeit. Ein kongenitaler Protein C-Mangel kann bereits in jungen Jahren
zu rezidivierenden venösen Thrombosen und pulmonalen Embolien führen.2 Ein erworbener Protein C-Mangel
tritt unter der oralen Antikoagulantientherapie mit Vitamin K-Antagonisten und bei Verbrauchskoagulopathie
auf.4,5,6
Der ProClot Kit ist ein funktioneller Protein C Test. Die inhibitorische Wirkung des aktivierten Protein C wird über
eine APTT-Bestimmung erfasst, aufgrund der Faktor V- und VIII-Sensitivität. Der Protein C-Aktivator (Protac®),
der aus dem Gift der Kupferkopfschlange gewonnen wird, ist ein schneller Protein C- Aktivator.7
Inhalt
Die ProClot Packung enthält:
A Protein C activator (Art. Nr. 0008468324): 4 Flaschen x 1,5 mL lyophilisierte Proteinfraktion aus dem Gift
der Kupferkopfschlange (Protac®) und Stabilisatoren.
D Protein C deficient plasma (Art. Nr. 0008468322): 4 Flaschen x 1 mL lyophilisiertes Humanplasma,
hergestellt durch spezifische Immunabsorption.
P Protein C control plasma (Art. Nr. 0008468320): 2 Flaschen x 1 mL lyophilisiertes Humanplasma mit
einem niedrigen Protein C Gehalt.
WARNUNG:
Das verwendete Material wurde mit FDA anerkannten Testmethoden auf HIV 1/2-Antikörper, Hepatitis-BAntigen und HCV-Antigen geprüft. Bitte beachten Sie die Bestimmungen zum Umgang mit potentiell infektiösen
Materialien.8
Gefahrenklasse: keine
Risikoeinstufung: keine
Sicherheitseinstufung: keine
Dieses Produkt ist nur für die in vitro Diagnostik geeignet.
Herstellung
Protein C activator: Zum Inhalt einer Flasche wird 1,5 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B.
Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gelöst.9 Nach vollständiger Rekonstitution wird das
Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt. Nicht
schütteln.
DER IN DIESER PACKUNG ENTHALTENE PROTEIN C AKTIVATOR DARF NUR FÜR PROCLOT
BESTIMMUNGEN BENUTZT WERDEN.
Protein C deficient plasma: Zum Inhalt einer Flasche wird 1 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares
(z. B. Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gelöst.9 Nach vollständiger Rekonstitution wird das
Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt. Nicht
schütteln.
Protein C control plasma: Zum Inhalt einer Flasche wird 1 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z.
B. Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gelöst.9 Nach vollständiger Rekonstitution wird das
Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt. Nicht
schütteln.
Working diluent: Einen Teil Protein C-Aktivator mit 4,3 Teilen ProClot-Diluent verdünnen.
Lagerung und Haltbarkeit
Protein C deficient plasma - Haltbarkeit nach Rekonstitution:
-- bei 15-25°C in der Originalflasche: 4 Stunden
-- bei -15°C in Analysensystemen der ACL TOP® Familie: 4 Stunden
-- bei -20°C in der Originalflasche: 7 Tage
Protein C control plasma - Haltbarkeit nach Rekonstitution:
-- bei 15-25°C in der Originalflasche: 4 Stunden
-- bei -20°C in der Originalflasche: 7 Tage
Working diluent - Haltbarkeit nach Herstellung:
-- bei 2-8°C: 8 Stunden
Hinweis:
-- Tiefgefrorenes Reagenz und Plasma sollte bei 37°C aufgetaut und vor dem Gebrauch vorsichtig geschwenkt
werden. Alle Komponenten des Protein C Kits dürfen nur einmal eingefroren werden.
-- Für eine optimale Haltbarkeit sollten die Reagenzien nach dem Gebrauch aus dem Gerät entnommen und im
Kühlschrank bei 2-8°C in der Originalflasche aufbewahrt werden.
Bestimmungsansatz
Die ausführliche Beschreibung des Bestimmungsansatzes ist dem Geräte-Bedienerhandbuch und/oder dem
Applikationshandbuch zu entnehmen.
Bitte beachten: Auf Analysensystemen der ACL TOP Familie wird empfohlen mit
jedem Probenlauf zu kalibrieren.
Probenmaterial und -gewinnung
9 Teile frisches venöses Blut und 1 Teil Trinatriumcitratlösung werden sorgfältig in einem silikonisierten
Glasröhrchen gemischt. Hinweise zur Aufbereitung des Blutes sind den Empfehlungen des Deutschen Instituts
für Normung - DIN 58 905 - oder dem CLSI Document H21-A5 zu entnehmen.10
Zusätzliche Reagenzien und Kontrollplasmen
Die folgenden Reagenzien sind nicht in der Packung enthalten und müssen zusätzlich bestellt werden:
Amerikan. und Pazifischer Raum
Europa
Art. Nr.
Art. Nr.
ProClot diluent
0008468600
0008468600
Kalibrationsplasma
0020003700
0020003700
Normal-Kontroll-Plasma
0020003120
0020003110
Low Abnormal-Kontroll-Plasma
0020003220
0020003210
High Abnormal-Kontroll-Plasma
0020003320
0020003310
APTT Silica Lyophilisiert
NA
0008468710
APTT-SP (Flüssig)
0020006300
0020006300
Reinigungslösung
0009831700
0009831700
Qualitätskontrolle
Es ist gängige Laborpraxis, die Qualität der Analyse mit Kontrollmaterialien im normalen sowie im
pathologischen Bereich zu überprüfen.11 Es wird empfohlen, als Kontrollmaterial die oben angegebenen
Kontrollen zu verwenden. Die Bereiche sind der jeweiligen Packungsbeilage zu entnehmen. Jedes
Labor sollte seinen eigenen Kontrollbereich ermitteln. Spätestens nach jeweils 8 Stunden sollte eine
Qualitätskontrolle durchgeführt werden. Algorithmen zur Beurteilung der Qualitätskontrollergebnisse siehe
z.B Westgard et al.12 Siehe auch “Richtlinien der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung quantitativer
laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen” vom 24.8.2001.
Standardisierung des Kalibrators und der Kontrollmaterialien
Die angegebenen Referenzwerte wurden bei mehreren Läufen an IL Analysensystemen mit spezifischen
Reagenzienchargen und gegen ein “Haus-Standard-Kalibrationsplasma” ermittelt. Dieses ist auf den aktuellen
Internationalen Standard für Protein C abgeglichen, (siehe Abschnitt Referenzbereiche).
Ergebnisse
Die ungeöffneten Reagenzien sind bei Lagerung zwischen 2-8°C bis zu dem auf dem Etikett angegebenen
Verfallsdatum haltbar.
Protein C activator - Haltbarkeit nach Rekonstitution:
-- bei 2-8°C in der Originalflasche: 15 Tage
-- bei -20°C in der Originalflasche: 60 Tage
Die Ergebnisse der Patientenplasmen werden in den folgenden Einheiten angegeben:
-- Sekunden
-- Aktivität in % Protein C
-- Ratio
Zusätzliche Informationen sind dem Bedienerhandbuch zu entnehmen.
ProClot - 0008468310
Einschränkungen
Der ProClot Test ist auf Systemen der ACL Familie und ACL Futura/ACL Advance unempfindlich gegen Heparin
(UFH) bis 2 U/mL.
Protein C Ergebnisse auf ACL Futura/ACL Advance-Analysensystemen werden durch Konzentrationen an
Hämoglobin bis zu 150 mg/dL, Bilirubin bis zu 20 mg/dL und Triglyceriden bis zu 500 mg/dL nicht beeinflusst.
Protein C Ergebnisse
auf Systemen der ACL TOP Familie werden durch Konzentrationen an Heparin (UFH) bis zu 1,5 U/mL, Heparin
(LMWH) bis zu 0,7 U/mL, Hämoglobin bis zu 200 mg/dL, Bilirubin bis zu 25 mg/dL und Triglyceriden bis zu
600 mg/dL nicht beeinflusst.
Die Bestimmung des funktionellen Protein C kann durch die Anwe­senheit von Lupus-Anticoagulantien,
hohen Faktor VIII:C-Konzentrationen (>250%) und in Gegenwart von APC-R,13,14 vor allem bei homozygoten
Trägern dieser Gen-Mutation, beeinflusst werden. Wir empfehlen bei Verdacht auf das Vorliegen einer
der oben angeführten Beeinflussungsmöglichkeiten die Patientenplasmen zusätzlich 1:2, 1:4 mit Protein
C-Mangelplasma weiter zu verdünnen und anschließend die Ergebnisse mit dem entsprechenden Faktor zu
multiplizieren.
Referenzbereiche
Die Spiegel der Protein C-Aktivität in gesunden Personen liegen etwa im Bereich von 70 – 140%. Protein
C-Werte sind erniedrigt bei Neugeborenen/Säuglingen, sie steigen während des Heranwachsens auf die
Erwachsenenwerte an.15
Aufgrund verschiedener Variablen, die Testergebnisse beeinflussen können, wird empfohlen,
dass jedes Labor seinen eigenen Normalbereich überprüft.
Testcharakteristik
Präzision:
Die Präzision im Lauf und von Tag zu Tag wurde bei mehreren Läufen mit Normal- und Abnormal-Kontrollen
bestimmt.
Mittelwert
VK %
VK %
ACL Familie
(% Aktivität)
(im Lauf)
(Tag zu Tag)
Normal-Kontroll-Plasma
109
2,72
4,57
Low Abnormal-Kontroll-Plasma
32,0
2,56
7,34
High Abnormal-Kontroll-Plasma
17,2
5,47
10,48
Mittelwert
VK %
VK %
ACL Futura/ACL Advance
(% Aktivität)
(im Lauf)
(Tag zu Tag)
Normal-Kontroll-Plasma
114
2,98
4,74
Low Abnormal-Kontroll-Plasma
28,7
5,96
8,61
High Abnormal-Kontroll-Plasma
14,4
6,11
9,24
Mittelwert
VK %
VK %
ACL TOP Familie
(% Aktivität)
(im Lauf)
(Tag zu Tag)
Normal-Kontroll-Plasma
112
5,8
7,0
Low Abnormal-Kontroll-Plasma
30,3
5,9
6,5
High Abnormal-Kontroll-Plasma
16,3
6,2
8,3
Korrelation:
System
Steigung
Ordinatenabschnitt
r
Referenzmethode
ACL Familie
0,9207
1,479
0,941
IL ProChrom
ACL Futura
ACL Advance
1,2
-8,89
0,987
IL ProClot am ACL
ACL TOP Familie
1,035
0,941
0,975
IL ProClot am ACL
Futura/ACL Advance
Die Präzisions- und Korrelationsergebnisse sind mit spezifischen Reagenzien- und Kontrollchargen ermittelt
worden.
Linearität:
System
IL Gerinnungssysteme
10 - 150 (% Aktivität)
ESPAÑOL - Revisión folleto 07/2012
Aplicación
Conservación y estabilidad de los reactivos
Resultados
Técnica coagulativa automatizada para la determinación cuantitativa de la actividad funcional de la Proteína C
en plasma humano citratado en los Sistemas de Coagulación de IL.
Antes de ser reconstituidos, el reactivo y el control, son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el vial,
si se mantienen entre 2-8°C.
Protein C activator - Estabilidad después de la reconstitución: 15 días a 2-8°C o 60 días a -20°C en el vial
original.
Protein C deficient plasma - Estabilidad después de la reconstitución: 4 horas a 15-25°C, 4 horas a 15° en el
Familia ACL TOP® o 7 días a -20°C en el vial original.
Protein C control plasma - Estabilidad después de la reconstitución: 4 horas a 15-25°C o 7 días a -20°C en
el vial original.
Working diluent - Estabilidad después de la preparación: 8 horas a 2-8°C.
Notas:
-- Los plasmas y los reactivos congelados se deberán descongelar a 37°C. Homogeneizar suavemente antes
de su uso. No recongelar.
-- Para obtener una estabilidad óptima de los reactivos, sugerimos que acabado el trabajo, conserve los
reactivos en su vial original almacenado en nevera entre 2 y 8°C.
Los resultados del test de ProClot se informan en segundos, Actividad (%) y ratio. Referirse al Manual del
Operador para mas información.
Principio
La Proteína C es una glicoproteína vitamino-K dependiente que está presente en el plasma como un zimógeno.
Su activación fisiológica in vivo es llevada a cabo por la Trombina en presencia de Trombomodulina.1,2 La
Proteína C activada (PCa) desarrolla su acción anticoagulante por inactivación de los Factores Va y VIIIa,3 en
presencia de iones calcio, fosfolípidos y de su cofactor, la Proteína S. El efecto anticoagulante produce una
prolongación del tiempo de coagulación. El déficit congénito de Proteína C está asociado a trombosis venosa
de repetición y embolismo pulmonar, especialmente en gente joven.2 Déficits adquiridos de Proteína C se
observan en hepatopatías, terapia anticoagulante oral y en procesos de Coagulación Intravascular Diseminada
(CID).4,5,6
El Test ProClot es una técnica coagulativa que determina la actividad funcional de la Proteína C y que se basa
en la prolongación del Tiempo de Tromboplastina Parcial Activada (TTPA) en presencia de Proteína C activada.
La utilización del TTPA para medir el efecto anticoagulante de la Proteína C activada se debe a su sensibilidad
a los niveles de Factor V y Factor VIII. La Proteína C de la muestra es activada por el (Protac®), el cual es un
rápido activador in vitro de la Proteína C derivado del veneno de la culebra americana copperhead Agkistrodom
contortrix contortrix.7
Composición
Método de Ensayo
Seguir las instrucciones de la técnica de acuerdo al Manual del Operador de los instrumentos IL o bien al
Manual de Aplicaciones.
Note: Se recomienda calibrar el test en cada sesión analítica si se utiliza la Familia ACL TOP.
El kit ProClot consta de:
A Protein C activator (Cat. No. 0008468324): 4 x 1,5 mL viales de fracción proteica liofilizada derivada
del veneno de la culebra americana copperhead Agkistrodom contortrix contortrix (Protac®) con
estabilizantes.
D Protein C deficient plasma (Cat. No. 0008468322): 4 x 1 mL viales de plasma humano liofilizado al que
se le ha eliminado artificialmente la Proteína C.
P Protein C control plasma (Cat. No. 0008468320): 2 x 1 mL viales de plasma humano liofilizado que
contiene una concentración baja de Proteina C.
PRECAUCIÓN:
El material usado en este producto ha sido verificado por los métodos aprobados por la FDA y encontrado
no reactivo al Antígeno de Superficie de la Hepatitis B (HBsAg), Anti-HCV y anticuerpos HIV. Manejar con
precaución como si fuese potencialmente infeccioso.8
Indicaciones de Peligro: Ninguna
Frases de Riesgo: Ninguna
Frases de Seguridad: Ninguna
Este reactivo es para diagnóstico in vitro.
Recolección y Preparación de las muestras
Preparación
Control de Calidad
Protein C activator: Disolver el contenido de cada vial con 1,5 mL de agua destilada CLSI CLRW.9 Cerrar el
vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre
15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso. No agitar.
EL ACTIVADOR DE PROTEÍNA C QUE CONTIENE ESTE KIT DEBERA SER USADO SOLAMENTE PARA
ANALISIS DE PROCLOT.
Protein C deficient plasma: Disolver el contenido de cada vial con 1 mL de agua destilada CLSI CLRW.9
Cerrar el vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el
reactivo entre 15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso. No agitar.
Protein C control plasma: Disolver el contenido de cada vial con 1 mL de agua destilada CLSI CLRW.9 Cerrar
el vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo
entre 15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso. No agitar.
Working diluent: A 4,3 partes de diluyente ProClot añadir 1 parte de activador de Proteína C.
Recoger nueve partes de sangre recién extraída por punción venosa y una parte de anticoagulante citrato
trisódico. Para la recolección, manejo y conservación del plasma seguir las recomendaciones del documento
H21-A5 de la CLSI.10
Reactivos adicionales y plasmas de control
Los siguientes reactivos no se suministran con el kit y deberán pedirse por separado.
Americas y Pacific Rim
Europa
N° Cat.
N° Cat.
Diluyente ProClot
0008468600
0008468600
Plasma de Calibración
0020003700
0020003700
Plasma Control Normal
0020003120
0020003110
Control Anormal Bajo
0020003220
0020003210
Control Anormal Alto
0020003320
0020003310
TTPA Sílica liofilizada
N/A
0008468710
APTT-SP (líquida)
0020006300
0020006300
Agente de Limpieza
0009831700
0009831700
Se recomienda el uso de los controles de plasma normales y anormales de IL para realizar un completo
programa de Control de Calidad.11 Tanto el Control Normal, como el Control Anormal Bajo, Control Anormal
Alto y el Control de proteína C, están diseñados específicamente para este programa. Cada laboratorio debe
establecer su propia media y desviación estándar, asimismo establecer un programa de Control de Calidad
para monitorizar los resultados de su laboratorio. Los controles deben ser usados como mínimo una vez dentro
del turno de 8 horas, de acuerdo a la normativa de Buenas Prácticas en el Laboratorio. Referirse al Manual
del Operador para información adicional. Consultar la publicación de Westgard y col. para una identificación y
resolución de situaciones anormales del Control de Calidad.12
Trazabilidad de los calibradores y controles
Los valores informados fueron determinados después de realizar múltiples series en los sistemas de
Coagulación de IL usando un lote específico de reactivo y un Estándar Interno de Plasma Calibrador. Dicho
Estándar está valorado respecto al estándar de proteína C Internacional actual, indicado en la ficha técnica.
Limitaciones/interferencias
No existe interferencia en los resultados de ProClot en los sistemas ACL Centrífugos y ACL Futura/ACL
Advance, por niveles de heparina (UF) hasta 2 U/mL. No existe interferencia en los resultados de ProClot en los
sistemas ACL Futura/ACL Advance, por niveles de hemoglobina hasta 150 mg/dL, bilirrubina hasta 20 mg/dL
o triglicéridos hasta 500 mg/dL. Los resultados de Proteína C en la Familia ACL TOP no son alterados por la
heparina (UF) hasta 1.5 U/mL, heparina (LMW) hasta 0.7 U/mL, hemoglobina hasta 200 mg/dL, bilirubina hasta
25 mg/dL y triglicéridos hasta 600 mg/dL.
Los resultados del test ProClot pueden verse afectados por la presencia en la muestra del paciente del
Anticoagulante Lúpico (AL), concentraciones altas de Factor VIII (> 250%) y por la presencia de una
Resistencia a la Proteína C Activada (APC-R/Factor V Leiden),13,14 sobretodo en pacientes homozigóticos
para esta mutación genética. Si se sospecha que una muestra puede estar afectada por alguno de los puntos
anteriormente mencionados, sugerimos practicar diluciones 1:2, 1:4 con Plasma deficiente en proteína C.
Después de su análisis los valores obtenidos se multiplicarán por 2 ó 4 según la dilución realizada.
Valores esperados
Los niveles de actividad Proteína C en individuos sanos están aproximadamente entre el rango 70 – 140%.
Los niveles de Proteína C son bajos en neonatos y durante la infancia e incrementan hasta niveles propios de
adultos durante la adolescencia.15
Debido a las variables que pueden afectar los resultados, cada laboratorio debe verificar su propio rango de
normalidad.
Características técnicas
Precisión:
La precisión intraserie y total (serie a serie y día a día) fue realizada en diferentes series y utilizando muestras
normales y anormales.
Familia ACL
Media (Actividad %)
CV % (Intraserie)
CV % (Total)
Control Normal
109
2,72
4,57
Control Anormal Bajo
32,0
2,56
7,34
Control Anormal Alto
17,2
5,47
10,48
ACL Futura
ACL Advance
Media (Actividad %)
CV % (Intraserie)
CV % (Total)
Control Normal
114
2,98
4,74
Control Anormal Bajo
28,7
5,96
8,61
Control Anormal Alto
14,4
6,11
9,24
Familia ACL TOP
Media (Actividad %)
CV % (Intraserie)
CV % (Total)
Control Normal
112
5,8
7,0
Control Anormal Bajo
30,3
5,9
6,5
Control Anormal Alto
16,3
6,2
8,3
Correlación:
Sistema
Pendiente
Intersección
r
Método de Referencia
Familia ACL
0,9207
1,479
0,941
IL ProChrom
ACL Futura
ACL Advance
1,2
-8,89
0,987
IL ProClot en ACL
Familia ACL TOP
1,035
0,941
0,975
IL ProClot en ACL Futura/
ACL Advance
Estos resultados de precisión y correlación se obtuvieron utilizando lotes específicos de reactivos y controles.
Linealidad:
Sistema
Sistemas de Coagulación de IL
10 - 150 (Actividad %)
Symbols used / Verwendete Symbole / Símbolos utilizados / Symboles utilisés / Simboli impiegati / Símbolos utilizados
ACCEPTANCE RANGE
WHO STD
Acceptance range / Referenzbereich / Rango esperado / Valeur usuelles / Intervallo di accettabilità / Intervalo de aceitação
WHO Standard Code / WHO Standard Code / Código del Estándar OMS / Code standard OMS / Codice OMS / Código Padrão WHO
In vitro diagnostic medical device
In-vitro Diagnostikum
De uso diagnóstico in vitro
Dispositif mèdical de diagnostic in vitro
Per uso diagnostico in vitro
Dispositivo médico para utilização em diagnóstico in vitro
Batch code
Chargen-Bezeichnung
Identificación número de lote
Désignation du lot
Numero del lotto
Número de lote
Use by
Verwendbar bis
Caducidad
Utilisable jusqu’à
Da utilizzare prima del
Data límite de utilização
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
Temperature limitation
Festgelegte Temperatur
Temperatura de Almacenamiento
Températures limites de conservation
Limiti di temperatura
Límite de temperatura
Consult instructions for use
Beilage beachten
Consultar la metódica
Lire le mode d’emploi
Vedere istruzioni per l’uso
Consultar as instruções de utilização
Control
Kontrollen
Control
Contrôle
Controllo
Controlo
Biological risks
Biologisches Risiko
Riesgo biológico
Risque biologique
Rischio biologico
Risco biológico
Manufacturer
Hergestellt von
Fabricado por
Fabricant
Prodotto da
Fabricado por
Authorised representative
Bevollmächtigter
Representante autorizado
Mandataire
Rappresentanza autorizzata
Representante autorizado
8468305 R18 07/2012
HemosIL®
ProClot - 0008468310
FRANÇAIS - Révision de la notice 07/2012
Utilisation
Conservation et stabilité du réactif
Limites de la méthode et substances interférant avec celle-ci
Dosage automatisé quantitatif de la Protéine C fonctionnelle par méthode chronométrique dans les plasmas
humains sur les analyseurs de coagulation IL.
Conservés à 2-8°C, les réactifs sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur les flacons.
Protein C activator - Stabilité après reconstitution: 15 jours à 2-8°C ou 60 jours à -20°C dans le flacon
d’origine.
Protein C deficient plasma - Stabilité après reconstitution: 4 heures à 15-25°C, 4 heures à 15°C sur ACL
TOP® ou 7 jours à -20°C dans le flacon d’origine.
Protein C control plasma - Stabilité après reconstitution: 4 heures à 15-25°C ou 7 jours à -20°C dans le flacon
d’origine.
Working diluent - Stabilité après préparation: 8 heures à 2-8°C.
Notes:
-- Les réactifs et plasmas congelés pourront être décongelés à 37°C. Mélanger doucement avant utilisation. Ne
pas recongeler.
-- Pour une stabilité optimale, conserver les réactifs à 2-8°C dans les flacons d’origine entre chaque utilisation.
Les résultats du ProClot sur les analyseurs de coagulation de la famille ACL et ACL Futura / ACL Advance ne
sont pas affectés par l’héparine jusqu’à 2 U/ml.
Les résultats de Protéine C sur les analyseurs ACL Futura et ACL Advance ne sont pas affectés par
l’hémoglobine jusqu’à 150 mg/dl, la bilirubine jusqu’à 20 mg/dl (200 mg/l) et les triglycérides jusqu’à 500 mg/dl
(5 g/l).
Les résultats de Protéine C sur les analyseurs de la famille ACL TOP ne sont pas affectés par l’héparine non
fractionnée jusqu’à 1,5 U/ml, les HBPM jusqu’à 0,7 U/ml, l’hémoglobine jusqu’à 200 mg/dl, la bilirubine jusqu’à
25 mg/dl (250 mg/l) et les triglycérides jusqu’à 600 mg/dl (6 g/l).
Les résultats de Protéine C peuvent être affectés par les LA (Lupus Anticoagulant), par de fortes concentrations
en Facteur VIII (> 250 %) et par la présence d’une RPCA,13,14 surtout chez les patients homozygotes pour cette
mutation génétique.
Les spécimens des patients susceptibles d’être atteints par ces types d’affections, pourront être dilués au 1:2 et
au 1:4 dans le plasma déficient en Protéine C. Les résultats devront être corrigés en fonction de la dilution.
Principe
La Protéine C est une protéine vitamine K dépendante, présente dans le plasma sous forme de proenzyme.
La Protéine C est activée in vivo par la thrombine en présence de thrombomoduline.1,2 La Protéine C
activée exerce son action anticoagulante en inhibant les facteurs Va et VIIIa,3 en présence de calcium, de
phospholipides et de son cofacteur la Protéine S. Cette action se traduit par un allongement du TCA. Le déficit
en Protéine C est associé à un risque élevé de thromboses veineuses récidivantes et d’embolies pulmonaires,
particulièrement chez l’adulte jeune.2 Les déficits acquis en Protéine C sont associés aux désordres hépatiques,
aux traitements anticoagulants oraux et à la coagulation intravasculaire disséminée.4,5,6
La trousse ProClot est un test de coagulation pour le dosage fonctionnel de la Protéine C, basé sur
l’allongement d’un TCA en présence de Protéine C activée. L’utilisation d’un test TCA pour mesurer l’action
anticoagulante de la Protéine C activée est due à sa sensibilité aux taux de facteurs V et VIII. La Protéine C
activée dans les plasmas échantillons est générée par le Protac®, un activateur rapide de la Protéine C in vitro,
dérivé d’un venin de serpent Agkistrodom contortrix contortrix.7
Composition
Le coffret ProClot contient:
A Protein C activator (Réf. 0008468324): 4 flacons de 1,5 ml d’une fraction protéique lyophilisée extraite du
venin d’Agkistrodon contortrix contortrix (Protac®) et des stabilisants.
D Protein C deficient plasma (Réf. 0008468322): 4 flacons de 1 ml de plasma humain lyophilisé
artificiellement déplété en Protéine C.
P Protein C control plasma (Réf. 0008468320): 2 flacons de 1 ml de plasma humain lyophilisé contenant
un faible taux de Protéine C.
PRECAUTIONS:
Ces réactifs contiennent des produits d’origine humaine. Ils ont été trouvés négatifs pour les anticorps anti VIH
1/2, anti VHC et l’antigène de surface de l’hépatite B (AgHBs), en utilisant des trousses de dépistage de 3ème
génération. Cependant, aucune technique ne permettant d’assurer l’absence totale du virus HIV ou de l’hépatite
B ou de tout autre agent infectieux, ces réactifs sont à manipuler avec les précautions d’usage.8
Classification risque: Aucune
Phrases risque: Aucune
Phrases sécurité: Aucune
Ce produit est à usage diagnostique in vitro.
Préparation
Protein C activator: Dissoudre le contenu de chaque flacon avec 1,5 ml d’eau de type CLR selon les normes
CLSI ou équivalent.9 Replacer le capuchon et agiter doucement. Assurez-vous de la complète reconstitution
du produit. Conserver le réactif à 15-25°C pendant au moins 30 minutes et retourner le flacon pour mélanger le
contenu avant utilisation. Ne pas agiter violemment.
L’ ACTIVATEUR DE LA PROTÉINE C CONTENU DANS CETTE TROUSSE NE DOIT ETRE UTILISE QUE
POUR LE TEST PROCLOT.
Protein C deficient plasma: Dissoudre le contenu de chaque flacon avec 1 ml d’eau de type CLR selon
les normes CLSI ou équivalent.9 Replacer le capuchon et agiter doucement. Assurez-vous de la complète
reconstitution du produit. Conserver le réactif à 15-25°C pendant au moins 30 minutes et retourner le flacon
pour mélanger le contenu avant utilisation. Ne pas agiter violemment.
Protein C control plasma: Dissoudre le contenu de chaque flacon avec 1 ml d’eau de type CLR selon
les normes CLSI ou équivalent.9 Replacer le capuchon et agiter doucement. Assurez-vous de la complète
reconstitution du produit. Conserver le réactif à 15-25°C pendant au moins 30 minutes et retourner le flacon
pour mélanger le contenu avant utilisation. Ne pas agiter violemment.
Working diluent: Ajouter à 4,3 parts de Diluant ProClot, 1 part d’activateur de la Protéine C.
Procédures de test/Instrument
Se référer au mode d’emploi de l’instrument IL approprié et/ou au manuel d’application pour des informations
complémentaires sur les procédures de dosage.
Note : sur ACL TOP, nous vous recommandons de calibrer le test à chaque série.
Recueil des spécimens et préparation
9 parts de sang fraîchement prélevé sont collectées avec 1 part de citrate trisodique. Se référer au document
CLSI H21-A5 ou au document GEHT (STV, numéro spécial, 1-40, 1998 et ses modifications parues sur le
site du GEHT en 2007) pour plus d’informations sur le prélèvement des échantillons, leur manipulation et leur
stockage.10
Réactifs auxiliares et plasma de contrôle
Non fournis avec la trousse, ils doivent faire l’objet d’une commande séparée:
Amérique et Pacifique
Europe
Réf.
Réf.
Diluant ProClot
0008468600
0008468600
Plasma de calibration
0020003700
0020003700
Contrôle normal
0020003120
0020003110
Contrôle anormal bas
0020003220
0020003210
Contrôle anormal haut
0020003320
0020003310
TCA Silice lyophilisée
NA
0008468710
TCA-SP (Liquide)
0020006300
0020006300
Solution de nettoyage
0009831700
0009831700
Contrôle de qualité
Les contrôles normaux et anormaux sont recommandés pour un programme de contrôle de qualité complet.11
Les plasmas de Contrôle normal, Contrôle anormal bas, Contrôle anormal haut et Contrôle en Protéine C de
la trousse sont spécifiques à ce programme. Chaque laboratoire doit établir sa propre moyenne et déviation
standard et son programme de contrôle de qualité afin de vérifier l’état de fonctionnement de son système
analytique. A titre d’exemple, les contrôles pourraient être analysés une fois toutes les 8 heures en regard
des bonnes pratiques de laboratoire. Se référer au mode d’emploi de l’instrument pour des informations
complémentaires. Se reporter à Westgard et al pour l’identification et la résolution des contrôles hors limites.12
Détermination des valeurs des calibrateurs et contrôles
Les valeurs reportées dans les notices sont déterminées à partir d’essais multiples réalisés sur les systèmes
de coagulation IL, en utilisant des lots spécifiques de réactif IL, et ce, par rapport à un Standard interne (Etalon
Secondaire). Ce dernier est étalonné en regard du standard international Protéine C actuel, et validé à l’aide de
la table de valeurs limites usuelles correspondantes.
Résultats
Les résultats de Protéine C sont reportés en secondes, en activité (%), et en ratio. Se référer au mode d’emploi
de l’instrument pour des informations complémentaires.
ProClot - 0008468310
Valeurs attendues
Les taux d’activité en Protéine C chez les adultes normaux sont compris entre 70 et 140%. Ces taux sont plus
bas chez les nouveaux nés et les enfants, et augmentent au cours de l’adolescence15 pour atteindre ceux de
l’adulte.
Du fait qu’un grand nombre de variables peuvent affecter les résultats, nous recommandons à chaque
laboratoire de vérifier ses propres valeurs normales.
Caractéristiques et performances
Fidélité:
La répétabilité (CV% intra séries) et la reproductibilité (CV% total, inter séries et de jour à jour) ont été évaluées
au cours d’essais multiples, en utilisant des échantillons, normaux et anormaux.
Famille ACL Moyenne (% activité)
CV % (Intra séries)
CV % (Total)
Contrôle normal
109
2,72
4,57
Contrôle anormal bas
32,0
2,56
7,34
Contrôle anormal haut
17,2
5,47
10,48
ACL Futura
ACL Advance
Moyenne (% activité)
CV % (Intra séries)
CV % (Total)
Contrôle normal
114
2,98
4,74
Contrôle anormal bas
28,7
5,96
8,61
Contrôle anormal haut
14,4
6,11
9,24
Famille ACL TOP
Moyenne (% activité)
CV % (Intra séries)
CV % (Total)
Contrôle normal
112
5,8
7,0
Contrôle anormal bas
30,3
5,9
6,5
Contrôle anormal haut
16,3
6,2
8,3
Corrélation:
Analyseur
Pente
Ordonnées à l’origine
r
Méthode de référence
Famille ACL
0,9207
1,479
0,941
IL ProChrom
ACL Futura/
1,2
-8,89
0,987
IL ProClot sur ACL
ACL Advance
Famille ACL TOP
1,035
0,941
0,975
IL ProClot sur
ACL Futura/ADvance
Les résultats de fidélité et de corrélation ont été obtenus en utilisant un lot spécifique de réactifs et de contrôles.
Linéarité:
Analyseurs
Analyseurs de coagulation IL
10 - 150 (% activité)
ITALIANO - Revisione dell’inserto 07/2012
Utilizzo
Conservazione e stabilità dei reagenti
Limitazioni/sostanze interferenti
Kit per la determinazione automatica della Proteina C funzionale con metodo coagulativo nel plasma umano
citratato sui sistemi di coagulazione ACL.
I reagenti sigillati sono stabili a 2-8°C fino alla data di scadenza stampata sull’etichetta del flacone.
Protein C activator - Stabilità dopo la ricostituzione: 15 giorni a 2-8°C o 60 giorni a -20°C nel flacone originale.
Protein C deficient plasma - Stabilità dopo la ricostituzione: 4 ore a 15-25°C, 4 ore a 15°C su ACL TOP® o 7
giorni a -20°C nel flacone originale.
Protein C control plasma - Stabilità dopo la ricostituzione: 4 ore a 15-25°C o 7 giorni a -20°C nel flacone
originale.
Working diluent - Stabilità dopo la preparazione: 8 ore a 2-8°C.
Nota:
-- I reagenti e i plasmi congelati possono essere scongelati a 37°C e miscelati delicatamente prima dell’uso.
Non ricongelare.
-- Al termine dei cicli lavorativi si consiglia di conservare il reagente a 2-8°C nel flacone originale per una
migliore stabilità.
I risultati del test ProClot sui sistemi ACL Classici e ACL Futura/ACL Advance non sono influenzati in presenza
di livelli di eparina non frazionata fino a 2 U/mL.
I risultati del test ProClot su strumenti ACL Futura/ACL Advance non sono influenzati in presenza di livelli di
Emoglobina fino a 150 mg/dL, Bilirubina fino a 20 mg/dL e Trigliceridi fino a 500 mg/dL.
I risultati di Proteina C su ACL TOP non sono influenzati in presenza di livelli di eparina non frazionata fino a
1,5 U/mL, eparina a basso peso molecolare fino a 0,7 U/mL, emoglobina fino a 200 mg/gL, biliubina fino a
25 mg/dL e Trigliceridi fino a 600 mg/dL.
I risultati determinati con il kit ProClot possono essere influenzati dalla presenza di LAC (Lupus Anticoagulant),
da alte concentrazioni di Fattore VIII (> 250%) e dalla presenza di APC-R,13,14 soprattutto in pazienti omozigoti
per questa mutazione genetica. Campioni di pazienti sospetti possono essere diluiti 1:2 e 1:4 con Plasma
Carente di Proteina C. I risultati ottenuti devono essere poi moltiplicati per il fattore di diluizione.
Metodo
In individui sani i livelli di attività della proteina C sono approssimativamente nell’intervallo di 70 – 140%. Livelli
di proteina C bassi si individuano nei bambini e nei neonati mentre livelli più alti della normalità in adulti in età
adolescenziale.15
A causa delle numerose variabili che possono influenzare i risultati, ogni laboratorio dovrebbe verificare il
proprio intervallo di riferimento.
Principio del metodo
La Proteina C è una proteina vitamina K dipendente, presente nel plasma sotto forma di zimogeno.
L’attivazione della Proteina C in vivo è svolta dalla trombina, in presenza di trombomodulina.1,2 La Proteina C in
forma attivata ha un effetto anticoagulante attraverso l’inibizione dei fattori Va e VIIIa,3 in presenza di ioni calcio,
fosfolipidi e del suo co-fattore Proteina S. L’effetto anticoagulante è proporzionale all’allungamento del tempo di
coagulazione. Le carenze di Proteina C sono generalmente associate a ricorrenti fenomeni di trombosi venosa
ed embolia polmonare, specialmente in soggetti giovani.2 Carenze acquisite di Proteina C sono associate a
malattie epatiche, terapia anticoagulante orale e a Coagulazione Intravascolare Disseminata.4,5,6 Il kit ProClot
è utilizzato per la determinazione funzionale della Proteina C coagulativa, mediante il test APTT in presenza
di Proteina C attivata. L’utilizzo del test APTT per misurare l’effetto anticoagulante della Proteina C attivata è
indicato per la sua sensibilità ai fattori V e VIII. L’attivazione della Proteina C nei campioni di plasma è svolta
dal Protac®, un rapido attivatore per le reazioni in vitro estratto dal veleno di serpente Agkistrodom contortrix
contortrix.7
Composizione
Per le metodiche e le procedure di lavoro fare riferimento al Manuale dell’Operatore e/o al Manuale Applicativo
degli strumenti IL.
Nota importante: su ACL TOP, si raccomanda di eseguire una nuova calibrazione ad ogni sessione
Il kit ProClot è composto da:
A Protein C activator (Nr. Cat. 0008468324): 4 flaconi da 1,5 mL di una frazione proteica liofilizzata di
veleno di Agkistrodon contortrix contortrix (Protac®) con stabilizzanti.
D Protein C deficient plasma (Nr. Cat. 0008468322): 4 flaconi da 1 mL di plasma umano liofilizzato
depletato artificialmente di Proteina C.
P Protein C control plasma (Nr. Cat. 0008468320): 2 flaconi da 1 mL di plasma umano liofilizzato con livelli
ridotti di Proteina C.
ATTENZIONE:
Questo prodotto contiene materiale di cui è stata verificata all’origine, con metodi raccomandati dalla FDA,
l’assenza dell’antigene di superficie dell’epatite B (HBsAg) e degli anticorpi anti-HCV e anti-HIV 1/2. Trattare
come potenzialmente infetto.8
Simbolo di pericolo: nessuno
Frasi di rischio: nessuno
Consigli di prudenza: nessuno
Per uso diagnostico in vitro.
Preparazione dei campioni
Preparazione
Per un programma di controllo di qualità completo si raccomanda l’uso di plasmi normali e patologici.11 Il
Controllo normale, i Plasmi di controllo Anormale Basso e Anormale Alto e il Plasma di controllo proteina C
sono indicati per questo programma. Ogni laboratorio dovrebbe stabilire i propri valori medi e le deviazioni
standard per ogni controllo e definire le corrette procedure di analisi. I controlli dovrebbero essere analizzati
almeno una volta ogni 8 ore in accordo con le esigenze del laboratorio. Consultare il Manuale dell’Operatore
dello strumento per ulteriori informazioni. Per l’identificazione e la risoluzione di situazioni particolari, fare
riferimento all’articolo di Westgard et al.12
Protein C activator: Sciogliere il contenuto di ciascun flacone con 1,5 mL di acqua distillata Tipo CLR (CLSI)
o equivalente.9 Chiudere con il tappo e miscelare delicatamente. Assicurarsi della completa ricostituzione del
prodotto. Mantenere il reagente a 15-25°C per 30 minuti e miscelare nuovamente prima dell’uso. Non agitare.
L’ATTIVATORE DELLA PROTEINA C CONTENUTO IN QUESTO KIT DEVE ESSERE USATO SOLO PER IL
TEST PROCLOT.
Protein C deficient plasma: Sciogliere il contenuto di ciascun flacone con 1 mL di acqua distillata Tipo CLR
(CLSI) o equivalente.9 Chiudere con il tappo e miscelare delicatamente. Assicurarsi della completa ricostituzione
del prodotto. Mantenere il reagente a 15-25°C per 30 minuti e miscelare nuovamente prima dell’uso. Non
agitare.
Protein C control plasma: Sciogliere il contenuto di ciascun flacone con 1 mL di acqua distillata Tipo CLR
(CLSI) o equivalente.9 Chiudere con il tappo e miscelare delicatamente. Assicurarsi della completa ricostituzione
del prodotto. Mantenere il reagente a 15-25°C per 30 minuti e miscelare nuovamente prima dell’uso. Non
agitare.
Working diluent: A 4,3 parti di Diluente ProClot aggiungere 1 parte di attivatore della Proteina C.
Aggiungere a nove parti di sangue fresco venoso una parte di trisodio citrato. Per informazioni aggiuntive sulla
preparazione, il trattamento e la conservazione dei campioni fare riferimento al documento CLSI H21-A5.10
Reagenti ausiliari e plasmi di controllo
I seguenti prodotti non sono forniti insieme al kit e devono essere ordinati separatamente.
Codice
Diluente ProClot
0008468600
Plasma Calibrante
0020003700
Plasma di Controllo Normale
0020003110
Plasma di Controllo Anormale Basso
0020003210
Plasma di Controllo Anormale Alto
0020003310
APTT-SP
0020006300
Soluzione detergente (Clean A)
0009831700
Controllo di qualità
Materiali di controllo
I valori indicati sono stati assegnati eseguendo repliche successive sui sistemi di coagulazione IL con l’impiego
di un lotto specifico di reagente rispetto a uno Standard Interno (Aziendale) di Plasma calibrante. Tale Standard
Interno è riconducibile all’attuale Standard Internazionale di proteina C, identificabile nella tabella degli intervalli
di accettabilità.
Risultati
I risultati dei pazienti possono essere riportati in secondi, attività (%) e Ratio. Riferirsi al Manuale dell’Operatore
per ulteriori informazioni.
ProClot - 0008468310
Valori attesi
Prestazioni
Precisione:
La precisione nella serie e totale (tra ciclo e ciclo e tra giorno e giorno) è stata verificata eseguendo numerosi
test con l’impiego di plasmi di controllo normali e patologici.
ACL 100 - 10000
Media (attività %)
CV % (nella serie)
CV % (Totale)
Plasma di Controllo Normale
109
2,72
4,57
Plasma di Controllo Anormale Basso
32,0
2,56
7,34
Plasma di Controllo Anormale Alto
17,2
5,47
10,48
ACL Futura
ACL Advance
Media (attività %)
CV % (nella serie)
CV % (Totale)
Plasma di Controllo Normale
114
2,98
4,74
Plasma di Controllo Anormale Basso
28,7
5,96
8,61
Plasma di Controllo Anormale Alto
14,4
6,11
9,24
ACL TOP
Media (attività %)
CV % (nella serie)
CV % (Totale)
Plasma di Controllo Normale
112
5,8
7,0
Plasma di Controllo Anormale Basso
30,3
5,9
6,5
Plasma di Controllo Anormale Alto
16,3
6,2
8,3
Correlazione:
Sistema
pendenza
intercetta
r
Metodo di riferimento
ACL 100 - 10000
0,9207
1,479
0,941
ProChrom IL
ACL Futura/ACL Advance
1,2
-8,89
0,987
ProClot IL su ACL
ACL TOP
1,035
0,941
0,975
ProClot IL su
ACL Futura/ACL Advance
I risultati dei test di precisione e di correlazione sono stati ottenuti usando uno specifico lotto di reagenti e
controlli.
Linearità:
Sistema
Sistemi di Coagulazione IL
10 - 150 (attività %)
PORTUGUÊS - Revisão do folheto 07/2012
Aplicação Prevista
Conservação e estabilidade do reagente
Resultados
Técnica de coagulação automática para a determinação quantitativa da actividade funcional da Proteína C em
plasma humano citratado nos Sistemas de Coagulação da IL.
Os reagentes fechados, que ainda não foram utilizados, são estáveis até ao final do prazo de validade, que
consta no rótulo, desde que conservados entre 2-8°C.
Protein C activator - Estabilidade depois da reconstituição: 15 dias entre 2-8°C ou 60 dias a -20°C dentro do
recipiente original.
Protein C deficient plasma - Estabilidade depois da reconstituição: 4 horas entre 15-25°C, 4 horas a 15°Cno
Familia ACL TOP® ou 7 dias a -20°C dentro do recipiente original.
Protein C control plasma - Estabilidade depois da reconstituição: 4 horas entre 15-25°C ou 7 dias a -20°C
dentro do recipiente original.
Working diluent - Estabilidade depois da sua preparação: 8 horas entre 2-8°C.
Notas:
-- Os plasmas e os reagentes congelados devem descongelar-se a 37°C. Homogeneizar suavemente antes de
utilizar. Não recongelar.
-- Para obter uma estabilidade óptima retire os reagentes do aparelho econserve-os entre 2-8°C, nos
recipientes originais.
Os resultados do doente são expressos em segundos, Actividade (%) e rácio. Para mais informações consultar
o Manual do Operador dos Aparelhos.
Resumo e Príncipio
A Proteína C é uma proteína vitamina-K dependente que está presente no plasma como um zimogénio. A
sua activação fisiológica in vivo é efectuada pela Trombina em presença da Trombomodulina.1,2 A Proteína C
activada (PCa) desenvolve a sua acção anticoagulante por inactivação dos Factores Va e VIIIa,3 na presença
de iões de cálcio, fosfolípidos e do seu cofactor, a Proteína S. O efeito anticoagulante é uma prolongação
do tempo de coagulação. O défice congénito da Proteína C está associado à trombose venosa de repetição
e embolia pulmonar, especialmente em jovens.2 Défices adquiridos de Proteína C estão associados em
hepatopatías, terapêutica anticoagulante oral e em processos de Coagulação Intravascular Disseminada
(CID).4,5,6
O kit de ProClot é uma técnica coagulimétrica que determina a actividade funcional da Proteína C e que se
baseia no prolongamento do Tempo de Tromboplastina Parcial Activada (TTPA) em presença da Proteína
C activada. A utilização do TTPA para medir o efeito anticoagulante da Proteína C activada deve-se à sua
sensibilidade aos níveis de Factor V e Factor VIII. A Proteína C da amostra é activada pelo (Protac®), o qual
é um rápido activador in vitro da Proteína C derivado do veneno da víbora sul-americana “copperhead”
Agkistrodon contortrix contortrix.7
Composição
Método de ensaio
Seguir as instruções da técnica de acordo com o Manual do Operador dos aparelhos IL ou com o Manual de
Aplicações dos Aparelhos IL.
Note que: No Família ACL TOP recomenda-se a calibração em cada sessão.
O kit ProClot é composto por:
A Protein C activator (Núm. Cat. 0008468324): recipientes 4 x 1,5 mL de fracção proteíca liofilizada
derivada do veneno da víbora sul-americana Agkistrodon contortrix contortrix (Protac®) com
estabilizadores.
D Protein C deficient plasma (Núm. Cat. 0008468322): recipientes 4 x 1 de plasma humano liofilizado, ao
qual foi retirado artificialmente a Proteína C.
P Protein C control plasma (Núm. Cat. 0008468320): recipientes 2 x 1 mL de plasma humano liofilizado
que contém uma concentração baixa de Proteína C.
AVISOS E PRECAUÇÕES:
O material utilizado neste produto foi analisado com testes aprovados pela FDA e verificou-se a ausência de
reacção ao Antigénio de Superfície da Hepatite B (HBsAg), aos anticorpos anti-HCV e anti-HIV. No entanto,
deve-se manipular com precaução, como potencialmente infeccioso.8
Classe de risco: nenhuma
Frases de risco: nenhuma
Frases de segurança: nenhuma
Para uso em diagnóstico in vitro.
Recolha e preparação da amostra
Preparação
Controlo de Qualidade
Protein C activator: Dissolver o conteúdo de cada recipiente em 1,5 mL de água destilada CLSI CLRW.9
Fechar o recipiente e homogeneizar suavemente. Verificar se o produto fica completamente dissolvido.
Conservar o reagente entre 15 e 25°C durante 30 minutos. Misturar invertendo o recipiente, antes de utilizar.
Não agitar.
O ACTIVADOR DA PROTEÍNA C QUE ESTE KIT CONTÉM, DEVERÁ SER USADO SOMENTE PARA
ANÁLISES DE PROCLOT.
Protein C deficient plasma: Dissolver o conteúdo de cada recipiente com 1 mL de água destilada CLSI
CLRW.9 Fechar o recipiente e homogeneizar suavemente. Verificar se o produto fica completamente dissolvido.
Conservar o reagente entre 15 e 25°C durante 30 minutos. Misturar invertendo o recipiente, antes de utilizar.
Não agitar.
Protein C control plasma: Dissolver o conteúdo de cada recipiente com 1 mL de água destilada CLSI
CLRW.9 Fechar o recipiente e homogeneizar suavemente. Verificar se o produto fica completamente dissolvido.
Conservar o reagente entre 15 e 25°C durante 30 minutos. Misturar invertendo o recipiente, antes de utilizar.
Não agitar.
Working diluent: A 4,3 partes de diluente ProClot juntar 1 parte de activador da Proteína C.
Adicionar nove partes de sangue extraído recentemente por punção venosa a uma parte de citrato trissódico.
Para efectuar a recolha, o manuseamento e a conservação da amostra devem seguir-se as recomendações
referidas no documento H21-A5 da CLSI.10
Reagentes adicionais e plasmas de controlo
Este kit não inclui os produtos abaixo mencionados, pelo que deverão ser pedidos em separado:
Américas e Pacífico
Europa
Núm Cat.
Núm Cat.
Diluente ProClot
0008468600
0008468600
Plasma de Calibração
0020003700
0020003700
Controlo Normal
0020003120
0020003110
Controlo Anormal Baixo
0020003220
0020003210
Controlo Anormal Alto
0020003320
0020003310
TTPA Sílica liofilizada
N/A
0008468710
APTT-SP (líquido)
0020006300
0020006300
Solução de limpeza
0009831700
0009831700
Para realizar um programa completo de Controlo de Qualidade, recomenda-se a utilização dos controlos
normais e anormais.11 Os controlos adequados para este programa são o Controlo Normal, o Controlo Anormal
Baixo, o Controlo Anormal Alto e o Plasma Controlo de Proteína C. Cada laboratório deve estabelecer a sua
própria média e desvio padrão e deve efectuar um programa de controlo de qualidade para monitorizar os seus
resultados. Os controlos devem ser analisados uma vez em cada turno de 8 horas, de acordo com a norma
vigente no Laboratório. Ver Manual do Operador para mais informações. Consultar a publicação de Westgard e
col. para identificar e solucionar situações anormais do Controlo de Qualidade.12
Rastreabilidade dos valores dos calibradores e materiais de controlo
Os valores referidos foram determinados através de diversas análises efectuadas nos Sistemas de Coagulação
da IL, utilizando um lote específico de reagente IL e comparando com um Padrão interno da IL de acordo
com os Padrões Internacionais de Proteína C actualmente utilizados, identificados na tabela do intervalo de
aceitação
Limitações/interferências
Não existe interferência nos resultados do teste ProClot na Família ACL e ACL Futura/ACL Advance por níveis
de heparina até 2 U/mL.
Não existe interferência nos resultados do teste ProClot nos Sistemas ACL Futura/ACL Advance por níveis de
hemoglobina até 150 mg/dL, bilirrubina até 20 g/dL ou glicéridos até 500 mg/dL.
Os resultados da Proteína C no Família ACL TOP não são afectados pela heparina (NF) até 1.5 U/mL, heparina
(BPM) até 0.7 U/mL, hemoglobina até 200 mg/dL, bilirubina até 25 mg/dL e triglicéridos até 600 mg/dL.
Os resultados da Proteína C podem ser afectados pela presença do Anticoagulante Lúpico (AL) na amostra
do doente, concentrações altas do Factor VIII (> 250%) e pela presença de uma Resistência à Proteína C
Activada (APC-R/Factor V Leiden),13,14 sobretudo em doentes homozigóticos para esta mutação genética.
Se suspeitamos que uma amostra pode estar afectada por algum dos pontos anteriormente mencionados,
sugerimos que sejam executadas diluições 1:2, 1:4 com Plasma deficitário em proteína C. Depois das análises,
os valores obtidos devem ser corrigidos de acordo com a diluição adequada.
Valores Esperados
Os níveis de actividade da Proteína C em indivíduos saudáveis estão aproximadamente no intervalo de 70
– 140%. Os níveis de Proteína C são baixos em recém-nascidos e crianças pequenas e aumentam para os
níveis dos adultos durante a adolescência.15
Devido a muitas variáveis que podem afectar os resultados, cada laboratório deve verificar o seu intervalo
normal.
Características de desempenho
Precisão:
A precisão foi avaliada, intra e na totalidade (de análise para análise e de dia para dia), ao longo de vários
ensaios, com amostras normais e anormais.
Familia ACL
Média (Actividade %)
CV% (Intra-série)
CV% (Total)
Controlo Normal
109
2,72
4,57
Controlo Anormal Baixo
32,0
2,56
7,34
Controlo Anormal Alto
17,2
5,47
10,48
ACL Futura
ACL Advance
Média (Actividade %)
CV% (Intra-série)
CV% (Total)
Controlo Normal
114
2,98
4,74
Controlo Anormal Baixo
28,7
5,96
8,61
Controlo Anormal Alto
14,4
6,11
9,24
Familia ACL TOP
Média (Actividade %)
CV% (Intra-série)
CV% (Total)
Controlo Normal
112
5,8
7,0
Controlo Anormal Baixo
30,3
5,9
6,5
Controlo Anormal Alto
16,3
6,2
8,3
Correlação:
Sistema
declive
intersecção
r
Método de referência
Familia ACL
0,9207
1,479
0,941
IL ProChrom
ACL Futura/ACL Advance
1,2
-8,89
0,987
IL ProClot em ACL
Familia ACL
1,035
0,941
0,975
IL ProClot em
ACL Futura/ACL Advance
Estes resultados de precisão e de correlação foram obtidos utilizando lotes específicos, de reagente e de
controlo.
Lineariedade:
Sistema
IL Coagulation Systems
10 - 150 (Actividade %)
Bibliography / Literatur / Bibliografía / Bibliographie / Bibliografia /Bibliografia
1. Kisiel W. Human Plasma Protein C - Isolation, Characterization and Mechanism of Activation
by Alpha Thrombin, J. Clin. Invest. 1979; 64: 761-769.
2. Stenflo J. Structure and Function of Protein C, Thrombosis and Haemostasis. 1984;10 (2):
109-121.
3. Esmon CT, Esmon NL. Protein C Activation, Thrombosis and Haemostasis. 1984;10 (2):
122-130.
4. Griffin JH, et al. Protein C, an Antithrombotic Protein, is Reduced in Hospitalized Patients with
Intravascular Coagulation, Blood 1982; 60: 261-264.
5. Mannucci PM, Viganò S. Deficiency of Protein C and Inhibitor of Blood Coagulation, Lancet.
1982; 2: 463-467.
6. Comp PC, Nixon R, and Esmon CT. Determinations of Functional Levels of Protein C, an
Antithrombotic Protein, using Thrombin/Thrombomodulin Complex, Blood. 1984;63: 16-21.
7. Martinoli JL, Stocker K. Fast Functional Protein C Assay using Protac, A Novel Protein C
Activator, Thrombosis Research. 1986; 43: 253-264.
8. Richmond JY, McKinney RW eds. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories,
U.S. Dept. of Health and Human Services, Public Health Service, 4th Edition, 1999.
9. Clinical and Laboratory Standards Institute. Preparation and Testing of Reagent Water in
the Clinical Laboratory; Approved Guideline. Fourth, Edition, CLSI Document C3-A4; Vol. 26
No.22
10.Clinical and Laboratory Standards Institute. Collection, Transport, and Processing of Blood
Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation and Molecular Hemostasis Assays;
Approved Guideline - Fifth Edition, CLSI Document H21-A5; Vol. 28 No. 5.
11.Zucker S, Cathey MH, West B. Preparation of Quality Control Specimens for Coagulation, Am.
J. Clin. Pathol. 1970; 53: 924-927.
12.Westgard JO, and Barry PL. Cost-Effective Quality Control: Managing the Quality and
Productivity of Analytical Process, AACC Press 1986.
13.Ireland H, Bayston T, Thompson E, et al. Apparent Heterozygous Type II Protein C Deficiency
Caused by the Factor V 506 Arg to Gln mutation, Thrombosis and Haemostasis. 1995; 73:
731-732.
14.Faioni EM, Franchi F, Asti D, Mannucci PM. Resistance to Activated Protein C Mimicking
Dysfunctional Protein C: Diagnostic Approach, Blood Coagulation and Fibrinolysis. 1996; 7:
349-352.
15.Kottke-Marchant K, Comp P. Laboratory Issues in Diagnosing Abnormalities of Protein C,
Thrombomodulin, and Endothelial Cell Protein C Receptor, Arch Pathol Lab med 2002;
126:1337-1348.
The Instrumentation Laboratory logo, HemosIL, ACL, ACL Futura, ACL Advance, ACL ELITE
and ACL TOP are trademarks of Instrumentation Laboratory Company and/or one of its
subsidiaries or parent companies, and may be registered in the United States Patent and
Trademark Office and in other jurisdictions.
Protac® is a registered trademark of Pentapharm Ltd.
Issued July 2012
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
ACCEPTANCE RANGE
ACL Family
ACL Futura/ACL Advance
ACL TOP Family
WHO STD
P
8468305 R18 07/2012
ProClot 0008468310
Printed Insert Sheet:
Revision: Issued:
C.O.:
8468305
R18
07/2012
430121
LANGUAGES
ENGLISH
GERMAN SPANISH
FRENCH
ITALIAN
PORTUGUESE
TECHNICAL SPECS
PAPER: SIZE: PRINT:
PRINT COLOR:
White paper, 50-60 g/m2 weight.
11 x 17" (280 x 432 mm.).
Front/Back.
Front - Top band Green Pantone 382, all remaining type in black.
Back - All type in black.
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
8468305 R18 07/2012