J1 : Galerie d`identification

Transcription

TP 8 Biotechnologies
Semaine 2 :
Bactériurie et Identification de
deux germes par Microméthode
Yves DABAT Ste-Anne ANGLET
Q1 : Bactériurie
Dénombrement des bactéries
dans une urine infectée
J1 : Bactériurie
On met en œuvre une technique en milieu solide :
Technique de en surface
On dilue l’urine jusqu’à la dilution 10-4 par la
technique des dilution en série.
On ensemence deux gélose lactosée au BCP :
Une avec la dilution 10-3, l’autre avec la dilution
10-4.
J1 : Bactériurie
On met en œuvre une technique en milieu solide :
Gélose lactosée au BCP vierge
J2 : Bactériurie
Lecture des résultats :
On compte le nombre de colonies sur chaque boîte.
Pour considérer comme significatif le nombre de
colonies dans une boîte, deux cas sont possibles :
1er cas : le milieu est un milieu sélectif et/ou il révèle
un caractère. On considère significatif une valeur
comprise entre 15 et 150 colonies.
2ème cas : le milieu est un milieu non sélectif et il ne
révèle aucun caractère. On considère significatif une
valeur comprise entre 15 et 300 colonies.
J2 : Bactériurie
10-4
10-5
J2 : Bactériurie
10-4
10-5
Dilution 10-4 : 23 colonies ==> nombre significatif.
Dilution 10-3 : 124 colonies ==> nombre significatif.
J2 : Bactériurie
Lecture des résultats, calculs :
Dilution 10-4 : 23 colonies ==> 23 UFC
Ces UFC ont été amenées par 0, 1 mL déposé à
la surface de la gélose en J1 ==>
23 UFC / 0, 1 mL d’urine à la dilution 10-4
==> (23 x (1/0,1)) UFC / 1 mL d’urine à la dilution 10-4
==> (23 x (1/0,1) x 10+4) UFC / mL d’urine
= (2, 3 . 10+6) UFC / mL d’urine.
J2 : Bactériurie
Lecture des résultats, calculs :
Dilution 10-3 : 124 colonies ==> 124 UFC
Ces UFC ont été amenées par 0, 1 mL déposé à
la surface de la gélose en J1 ==>
124 UFC / 0, 1 mL d’urine à la dilution 10-3
==> (124 x (1/0,1)) UFC / 1 mL d’urine à la dilution 10-3
==> (124 x (1/0,1) x 10+3) UFC / mL d’urine.
= (1, 24 . 10+6) UFC / mL d’urine.
J2 : Bactériurie
10-4
10-5
Moyenne des résultats :
((2, 3 . 10+6) + (1, 24 . 10+6)) / 2 = 1, 77. 10+6 UFC / mL d’urine
J2 : Bactériurie
Interprétation :
Résultat = 1, 77. 10+6 bactéries / mL d’urine
Par comparaison aux abaques de lecture, on trouve
un nombre de bactéries supérieur à 105 bactéries /
mL d’urine.
Il y a donc infection probable.
J2 : Bactériurie
Interprétation :
Bilan :
On peut utiliser la formule :
Bactériurie = N x 1/V x f
Bactériurie = nombre d’UFC / mL
N = nombre de colonies dans la boîte
V = volume de dilution déposé dans la boîte en mL
f = facteur de dilution (ou 1/d) sans unité
Q2 : Bactériologie
Identification de deux germes
Par Microméthode
J1 : Galerie d’identification
On ensemence une micro-galerie d’identification
plus 1 VF et 1 MEVAG à partir de la souche pure
présentée sur une gélose CLED.
A la macroscopie, on observe des colonies :
Colonies de type R, lactose plus postes impairs :
Colonies de type R, lactose moins postes pairs :
Au Gram, on observe des BGN polymorphes, en
amas irréguliers, asporulés, acapsulés.
A l’état frais, la bactérie est mobile.
On trouve une oxydase négative.
Orientation de l’identification :
BGN
Oxydase moins
Orientation vers la famille des
Enterobacteriaceae
On prend une galerie API 20E que l’on va remplir
avec 5 mL de suspension d’opacité McFarland 0,5 :
On distingue 2 parties dans chaque compartiment :
Cupule
Tubule
On distingue trois types de remplissages :
Caractères ni soulignés, ni encadrés :
Remplir seulement le tubule.
Caractères soulignés :
Remplir seulement le tubule et
Fermer avec 3 gouttes de paraffine.
Caractères encadrés :
Remplir le tubule et
La cupule.
Aspect de la micro-galerie après remplissage :
Aspect de la micro-galerie après remplissage :
Résultats obtenus avec la souche impaire
Résultats obtenus avec la souche paire
Résultats obtenus avec la souche impaire
+
-
+
+
+
+
+
-
-
+
-
-
+
-
+
-
+
Résultats obtenus avec la souche impaire, avec réactifs
+
+
- Nit+ +
+
+
-
-
+
-
+
-
-
-
+
+
-
-
+
Résultats obtenus avec la souche paire
+
+
-
+
-
+
-
-
-
-
+
-
+
+
-
+
-
Résultats obtenus avec la souche paire, avec réactifs
-
-
+ Nit+ -
-
-
-
-
-
+
-
+
+
+
+
-
+
-
-
CONCLUSION
Conclusion à la semaine 2
Conclusion Semaine 2
Identification du germe responsable de l’infection :
Caractères de famille
BGN
Oxydase moins
Nitratase plus
Aéro-anaérobie facultatif
Oxydo-fermentatif du glucose
Famille des
Enterobacteriaceae
Même résultat pour les deux souches, paire et
impaire.
Caractères de Genre et
d’espèce
Voir diapositives 27 et 29
?
Revoir la démarche avec utilisation des clés
d’identification dans le cahier de TP (fiche CTP15)
Il existe plusieurs moyens d’arriver à l’identification
d’une souche :
Soit on utilise des clés d’identification.
Soit on utilise un annuaire APi20E après avoir
compléter une petite feuille APi20E.
Soit on utilise la fiche de lecture APi20E.
Soit on utilise un logiciel en ligne dans lequel on
rentre les résultats obtenus.
1- Clés d’identification
2- Feuille APi20E + annuaire
3- Fiche APi20E
4- Résultats en ligne
Identification de la souche impaire en utilisant un
tableau regroupant des clé d’identification :
d’espèce
Postes impairs :
Escherichia coli
d’identification dans le cahier de TP
3- Fiche APi20E
Identification de la souche paire en utilisant un
tableau regroupant des clé d’identification :
d’espèce
Postes pairs :
Proteus vulgaris
d’identification dans le cahier de TP
3- Fiche APi20E
Identification de la souche impaire en utilisant une
feuille et l’annuaire bioMérieux :
On complète une feuille API20E :
Résultat obtenu avec la souche impaire :
+ + + + - - - - + - - + + - + + - + - + -
7
1
4
4
5
Code = 7 144 552 57
5
2
+ - + + + +
5
7
On obtient le nombre 7 144 552 57 que l’on
cherche dans un annuaire APi20E.
On trouve alors la souche identifiée :
Résultat obtenu avec la souche impaire :
+ + + + - - - - + - - + + - + + - + - + -
7
1
4
4
5
Code = 7 144 552 57
5
2
+ - + + + +
5
Escherichia coli
7
3- Fiche APi20E
Identification de la souche paire en utilisant une
feuille et l’annuaire bioMérieux :
Résultat obtenu avec la souche paire :
- - - - - + + + + - + + - - - - + - + - -
0
4
7
6
0
Code = 0 476 021 57
2
1
+ - + + + +
5
7
On obtient le nombre 0 476 021 57 que l’on
cherche dans un annuaire APi20E.
On trouve alors la souche identifiée :
Résultat obtenu avec la souche paire :
- - - - - + + + + - + + - - - - + - + - -
0
4
7
6
0
Code = 0 476 021 57
2
1
+ - + + + +
5
Proteus vulgaris
7
3- Fiche APi20E
Identification des souches impaire et paire en
utilisant le tableau couleur APi20E bioMérieux :
3- Fiche APi20E
Identification des souches impaire et paire en
utilisant un logiciel en ligne :
Il existe d’autre moyen d’arriver à l’identification
d’une souche :
Soit on utilise un logiciel en ligne :
http://bioeluard.lyceepauleluard.fr/index.php?opti
on=com_wrapper&view=wrapper&Itemid=113
Galerie d’identification
Semaine 2 : Bactériurie (suite)
FIN
Yves DABAT Ste-Anne ANGLET

J1 : Galerie d`identification

Transcription

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