Fiche Api 20E

Transcription

Fiche Api 20E

20 100 / 20 160
®
07584G - fr - 2007/06
20 E
IVD
Système d'identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux
INTRODUCTION ET OBJET DU TEST
API 20 E est un système standardisé pour l'identification
des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif
non fastidieux, comprenant 21 tests biochimiques
miniaturisés, ainsi qu'une base de données. La liste
complète des bactéries qu'il est possible d'identifier avec
ce système est présente dans le Tableau d'Identification
en fin de notice.
PRINCIPE
La galerie API 20 E comporte 20 microtubes contenant
des substrats déshydratés. Les microtubes sont inoculés
avec une suspension bactérienne qui reconstitue les
tests. Les réactions produites pendant la période
d'incubation se traduisent par des virages colorés
spontanés ou révélés par l'addition de réactifs.
La lecture de ces réactions se fait à l'aide du Tableau de
Lecture et l'identification est obtenue à l'aide du
Catalogue Analytique ou d'un logiciel d'identification.
PRESENTATION
Coffret de 25 tests (réf. 20 100)
- 25 galeries API 20 E
- 25 boîtes d'incubation
- 25 fiches de résultats
- 1 barrette de fermeture
- 1 notice
Coffret de 100 tests (réf. 20 160)
- 100 galeries API 20 E (4x25 galeries)
- 100 boîtes d'incubation
- 100 fiches de résultats
1 barrette de fermeture
1 notice
COMPOSITION DE LA GALERIE
La composition de la galerie API 20 E est reportée dans le
Tableau de Lecture de cette notice.
REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON
FOURNIS
Réactifs
- API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (Réf. 20 230) ou
API Suspension Medium, 5 ml (Réf. 20 150)
- API 20 E coffret de réactifs (Réf. 20 120) ou
réactifs individuels : TDA (Réf. 70 402)
JAMES (Réf. 70 542)
VP 1 + VP 2 (Réf. 70 422)
NIT 1 + NIT 2 (Réf. 70 442)
- Réactif Zn (Réf. 70 380)
- Oxydase (Réf. 55 635*)
* référence non commercialisée dans certains pays :
utiliser un réactif équivalent.
- Huile de paraffine (Réf. 70 100)
- Catalogue Analytique API 20 E (Réf. 20 190) ou
logiciel d'identification apiweb TM (Réf. 40 011)
(consulter bioMérieux)
bioMérieux® SA
Matériel
- Pipettes ou PSIpettes
- Protège-ampoule
- Portoir pour ampoules
- Equipement général de laboratoire de bactériologie
REACTIFS COMPLEMENTAIRES
- API OF Medium (Réf. 50 110) :
Test pour la détermination du métabolisme fermentatif
ou oxydatif du glucose.
- API M Medium (Réf. 50 120) :
Test pour la détermination de la mobilité des bactéries
aéro-anaérobies.
PRECAUTIONS D'UTILISATION
xPour diagnostic in vitro et pour contrôle microbiologique.
xPour usage professionnel uniquement.
xCe coffret contient des composants d'origine animale.
La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des
animaux ne pouvant garantir de façon absolue que ces
produits ne contiennent aucun agent pathogène
transmissible, il est recommandé de les manipuler avec
les précautions d'usage relatives aux produits
potentiellement infectieux (ne pas ingérer; ne pas
inhaler).
xLes prélèvements, cultures bactériennes et produits
ensemencés doivent être considérés comme potentiellement infectieux et doivent être manipulés de façon
appropriée. Les techniques aseptiques et les
précautions usuelles de manipulation pour le groupe
bactérien étudié doivent être respectées tout au long de
®
la manipulation ; se référer à "CLSI M29-A, Protection
of Laboratory Workers from Occupationally Acquired
Infections; Approved Guideline - Révision en vigueur".
Pour informations complémentaires sur les précautions
de manipulation, se référer à "Biosafety in
Microbiological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH
- Dernière édition", ou à la réglementation en vigueur
dans le pays d'utilisation.
xNe pas utiliser les réactifs après la date de péremption.
xAvant utilisation, s'assurer de l'intégrité de l'emballage
des différents composants.
xNe pas utiliser de galeries ayant subi une altération physique : cupule déformée, sachet déshydratant ouvert, …
xLes performances présentées sont obtenues avec la
méthodologie indiquée dans cette notice. Toute déviation de méthodologie peut altérer les résultats.
xL'interprétation des résultats du test doit être faite en
tenant compte du contexte clinique ou autre, de l'origine
du prélèvement, des aspects macro et microscopiques
de la souche et éventuellement des résultats d'autres
tests, en particulier de l'antibiogramme.
Français - 1
api® 20 E
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CONDITIONS DE STOCKAGE
Les galeries sont présentes dans une poche en
aluminium avec sachets déshydratants.
Après ouverture de celle-ci (*), conserver les galeries
restantes avec les déshydratants en refermant la poche à
l'aide de la barrette de fermeture (présente dans le
coffret) : placer l'extrémité de la poche entre les deux
pièces de la barrette et les clamper soigneusement, à
fond, sur toute leur longueur. Les galeries peuvent ainsi
être conservées 10 mois après ouverture de la poche,
à 2-8°C (ou jusqu'à la date limite d'utilisation indiquée sur
l'emballage, si celle-ci est antérieure).
(*) Recommandation pour l'ouverture de celle-ci : couper
juste en dessous de la soudure, en maintenant la poche
droite, pour éviter d'endommager les sachets déshydratants.
ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION)
API 20 E ne doit pas être utilisé directement à partir des
prélèvements d'origine clinique ou autres.
Les microorganismes à identifier doivent dans un premier
temps être isolés sur un milieu de culture adapté à la
culture des Enterobacteriaceae et/ou des bacilles à Gram
négatif non fastidieux selon les techniques usuelles de
bactériologie.
MODE OPERATOIRE
Test oxydase
Le test oxydase doit être réalisé selon les instructions du
ème
test d’identification à noter
fabricant, il constitue le 21
sur la fiche de résultats.
Préparation de la galerie
xRéunir fond et couvercle d'une boîte d'incubation et
répartir environ 5 ml d'eau distillée ou déminéralisée [ou
toute eau sans additif ou dérivés susceptibles de libérer
des gaz (Ex : Cl2, CO2 ...)] dans les alvéoles pour créer
une atmosphère humide.
xInscrire la référence de la souche sur la languette
latérale de la boîte. (Ne pas inscrire la référence sur le
couvercle, celui-ci pouvant être déplacé lors de la
manipulation).
xSortir la galerie de son emballage.
xPlacer la galerie dans la boîte d'incubation.
NOTE : API 20 E doit être utilisé avec des
Enterobacteriaceae et/ou des bacilles à Gram négatif non
fastidieux. Les microorganismes fastidieux, exigeants et
nécessitant des précautions de manipulation particulières
(ex. Brucella et Francisella) ne font pas partie de la base
de données API 20 E. Il convient d'utiliser d'autres
techniques pour exclure ou confirmer leur présence.
Préparation de l'inoculum
xOuvrir une ampoule d'API NaCl 0,85 % Medium (5 ml)
ou une ampoule d'API Suspension Medium (5 ml)
comme indiqué au paragraphe "Précautions" de la
notice du produit, ou utiliser un tube contenant 5 ml
d'eau physiologique stérile ou d'eau distillée stérile,
sans additif.
xA l'aide d'une pipette ou d'une PSIpette, prélever une
seule colonie bien isolée sur milieu gélosé. Utiliser
préférentiellement des cultures jeunes (18-24 heures).
xRéaliser une suspension bactérienne en homogénéisant soigneusement les bactéries dans le milieu.
Cette suspension doit être utilisée extemporanément.
NOTE : la plupart des espèces de Vibrio sont halophiles.
En cas de suspicion d'un Vibrio, réaliser la suspension
bactérienne dans API NaCl 0,85 % Medium.
bioMérieux® SA
Inoculation de la galerie
xIntroduire la suspension bactérienne dans les tubes de la
galerie à l'aide de la même pipette (pour éviter la
formation de bulles au fond des tubes, poser la pointe de
la pipette ou de la PSIpette sur le côté de la cupule, en
inclinant légèrement la boîte d'incubation vers l'avant) :
- pour les tests CIT , VP et GEL , remplir tube et
cupule,
- pour les autres tests, remplir uniquement les tubes (et
non les cupules),
- pour les tests : ADH, LDC, ODC, H2S, URE créer une
anaérobiose en remplissant leur cupule d'huile de
paraffine.
xRefermer la boîte d'incubation.
xIncuber à 36°C ± 2°C pendant 18-24 heures.
LECTURE ET INTERPRETATION
Lecture de la galerie
xAprès incubation, la lecture de la galerie doit se faire en
se référant au Tableau de Lecture.
xSi 3 tests ou plus (test GLU + ou –) sont positifs, noter
sur la fiche de résultats toutes les réactions spontanées
puis révéler les tests nécessitant l'addition de réactifs :
- Test TDA : ajouter 1 goutte de réactif TDA. Une
couleur marron-rougeâtre indique une réaction
positive à noter sur la fiche de résultats.
- Test IND : ajouter 1 goutte de réactif JAMES. Une
couleur rose diffusant dans toute la cupule indique
une réaction positive à noter sur la fiche de résultats.
- Test VP : ajouter 1 goutte des réactifs VP 1 et VP 2.
Attendre au minimum 10 minutes. Une couleur rose ou
rouge indique une réaction positive à noter sur la fiche
de résultats. Une faible coloration rose apparaissant
après 10 minutes doit être considérée négative.
NOTE : Le test de la recherche de production d’indole
doit être réalisé en dernier, car cette réaction libère des
gaz qui risquent d’altérer l’interprétation d’autres tests
de la galerie. Ne pas remettre le couvercle d’incubation
après l’ajout du réactif.
xSi le nombre de tests positifs avant ajout des réactifs (y
compris le test GLU) est inférieur à 3 :
- Réincuber la galerie 24 heures (± 2 heures) de plus
sans rajouter les réactifs.
- Révéler les tests nécessitant l'addition de réactifs (voir
paragraphe précédent).
- Pour compléter l'identification, il peut être utile de
réaliser des tests complémentaires (se reporter au
paragraphe Identification).
Interprétation
L'identification est obtenue à partir du profil numérique.
xDétermination du profil numérique :
Sur la fiche de résultats, les tests sont séparés par
groupes de trois et une valeur 1, 2 ou 4 est indiquée
pour chacun. La galerie API 20 E comportant 20 tests,
en additionnant à l'intérieur de chaque groupe les
valeurs correspondant à des réactions positives, on
obtient 7 chiffres ; la réaction de l'oxydase qui constitue
ème
test est affectée de la valeur 4 lorsqu'elle est
le 21
positive.
xIdentification :
Elle est réalisée à partir de la base de données (V4.1)
* à l'aide du Catalogue Analytique :
- Rechercher le profil numérique dans la liste des
profils.
* à l'aide du logiciel d'identification apiweb TM :
- Entrer manuellement au clavier le profil numérique à
7 chiffres.
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api® 20 E
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Par ailleurs dans certains cas, le profil à 7 chiffres étant
- Mobilité (MOB) : Inoculer une ampoule d'API M Medium
insuffisamment discriminant, les tests complémentaires
(cf notice).
suivants sont nécessaires :
- Culture sur gélose de MacConkey (McC) : Ensemencer
- Réduction des nitrates en nitrites (NO2) et en azote (N2) :
un milieu de Mac Conkey (cf notice).
ajouter 1 goutte des réactifs NIT 1 et NIT 2 dans le tube
- Oxydation du glucose (OF-O) : Inoculer une ampoule
GLU. Attendre 2 à 5 minutes. Une coloration rouge
d'API OF Medium (cf notice).
indique une réaction positive (NO2). Une réaction
- Fermentation du glucose (OF-F) : Inoculer une ampoule
négative (coloration jaune) peut être due à la production
d'API OF Medium (cf notice).
d'azote (éventuellement signalée par la présence de
Ces
tests
complémentaires,
mentionnés
dans
microbulles) : ajouter 2 à 3 mg de réactif Zn dans la
l'introduction (Codage des profils) du Catalogue
cupule GLU. Après 5 minutes, un tube resté jaune
Analytique, peuvent être utilisés pour constituer un profil à
indique une réaction positive (N2) à noter sur la fiche de
9 chiffres, identifiable avec le logiciel d'identification.
résultats. Si la cupule est orange-rouge, la réaction est
négative, les nitrates encore présents dans le tube ont
été réduits en nitrites par le Zinc.
Cette réaction est intéressante pour les bacilles à Gram
5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae
négatif oxydase positive.
D’autres
tests
supplémentaires peuvent être proposés en
NOTE : Pour les mêmes raisons que le test indole (se
cas de faible discrimination. Se référer au logiciel ou
référer à la note du paragraphe "Lecture de la galerie"), le
Catalogue Analytique.
test de réduction des nitrates doit être réalisé en dernier.
CONTROLE DE QUALITE
Les milieux, galeries et réactifs font l'objet de contrôles de qualité systématiques aux différentes étapes de leur
fabrication. Un contrôle bactériologique des tests de la galerie est de plus réalisable par l’utilisateur avec la souche
®
1. Escherichia coli ATCC 25922 de préférence ou l’une des souches suivantes :
2. Stenotrophomonas maltophilia
3. Enterobacter cloacae
ATCC 51331
ATCC 13047
4. Proteus mirabilis
ATCC 35659
5. Klebsiella pneumoniae ssp pneumoniae ATCC 35657
ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.
ONPG ADH LDC ODC
1.
2.
3.
4.
5.
+
+
+
–
+
–
–
+
–
–
+
V
–
–
+
+
–
V
+
–
CIT
–
V
+
V
+
H2S URE TDA IND VP
–
–
–
+
–
–
–
–
+
V
–
–
–
+
–
+
–
–
–
–
–
–
+
–
V
GEL
–
+
–
V
–
GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA NO2 N2*
+
–
+
+
+
+
–
+
–
+
–
–
V
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
–
+
–
–
+
V
+
+
–
+
–
+
–
–
+
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
+
+
–
–
–
–
V
* Le stade N2 (+) peut être observé pour la souche ATCC 13047 et la souche ATCC 25922.
x Profil obtenu après 24-48 H d'incubation pour la souche ATCC 51331, à partir de colonies cultivées sur gélose Trypcase Soja + sang.
x Profils obtenus après 18-24 H d'incubation pour les autres souches, à partir de colonies cultivées sur gélose Trypcase Soja + sang.
x Suspension bactérienne préparée en API NaCl 0,85 % Medium.
Il est de la responsabilité de l'utilisateur de s'assurer que le contrôle de qualité est mis en oeuvre conformément à la
législation locale en vigueur.
LIMITES DU TEST
xSeules des cultures pures contenant un seul type de
xLe système API 20 E est destiné à l'identification des
microorganisme doivent être utilisées.
Enterobacteriaceae et des bacilles à Gram négatif non
fastidieux présents dans la base de données (voir
RESULTATS ATTENDUS
Tableau d'Identification en fin de notice) et à eux seuls.
Il ne peut être utilisé pour identifier d'autres
Se référer au Tableau d'Identification en fin de cette
microorganismes ou exclure leur présence.
notice pour les résultats attendus des différentes
xDes discordances par rapport aux techniques
réactions biochimiques.
conventionnelles peuvent être observées. Elles sont
PERFORMANCES
dues aux différences de principe des réactions utilisées
en technique API. Des écarts de pourcentages peuvent
xEnterobacteriaceae :
également être observés et s'expliquent par des
5514 souches de diverses origines et souches de
variations de substrat.
collection appartenant aux espèces de la base de
xPour certaines espèces (ex. Klebsiella ou Proteus), des
données ont été testées :
réactions du test glucose initialement positives peuvent
- 92,80 % des souches ont été correctement identifiées
parfois devenir négatives (apparition d'une coloration
(avec ou sans tests complémentaires).
bleu-vert). Dans ce cas, cette réaction doit être
- 4,61 % des souches n'ont pas été identifiées.
considérée comme négative. Les pourcentages indiqués
- 2,59 % des souches ont été mal identifiées.
dans le Tableau d'Identification prennent en compte ce
xautres bacilles à Gram négatif non fastidieux :
genre de phénomène.
2386 souches de diverses origines et souches de
xDans le cas d’identification à Salmonella ou Shigella,
collection appartenant aux espèces de la base de
une identification sérologique doit être effectuée pour
données ont été testées :
confirmer l’identification bactérienne.
- 90,32 % des souches ont été correctement identifiées
xLes bacilles à Gram négatif non fermentants, isolés de
(avec ou sans tests complémentaires).
patients atteints de mucoviscidose, peuvent générer des
- 6,16 % des souches n'ont pas été identifiées.
profils biochimiques atypiques susceptibles d’altérer leur
- 3,52 % des souches ont été mal identifiées.
identification.
bioMérieux® SA
Français - 3
api® 20 E
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ELIMINATION DES DECHETS
Eliminer les réactifs utilisés ou non utilisés ainsi que les
matériels à usage unique contaminés en suivant les
procédures relatives aux produits infectieux ou
potentiellement infectieux.
Il incombe à chaque laboratoire de gérer les déchets et
les effluents qu'il produit selon leur nature et leur
dangerosité, et d'en assurer (ou faire assurer) le
traitement et l'élimination selon les réglementations
applicables.
TABLEAU DE LECTURE
TESTS
COMPOSANTS ACTIFS
QTE
(mg/cup.)
RESULTATS
REACTIONS/ENZYMES
ß-galactosidase
(Ortho NitroPhényl-ßDGalactopyranosidase)
NEGATIF
POSITIF
incolore
jaune (1)
ONPG
2-nitrophényl-ßDgalactopyranoside
0,223
ADH
L-arginine
1,9
Arginine DiHydrolase
jaune
rouge / orangé (2)
LDC
L-lysine
1,9
Lysine DéCarboxylase
jaune
rouge / orangé (2)
ODC
L-ornithine
1,9
Ornithine DéCarboxylase
jaune
rouge / orangé (2)
CIT
trisodium citrate
0,756
utilisation du CITrate
vert pâle / jaune
bleu-vert / bleu (3)
H2S
sodium thiosulfate
0,075
production d'H2S
incolore / grisâtre
dépot noir / fin liseré
URE
urée
0,76
UREase
jaune
rouge / orangé (2)
TDA
L-tryptophane
0,38
Tryptophane DésAminase
jaune
TDA / immédiat
marron-rougeâtre
IND
L-tryptophane
0,19
production d’INDole
VP
sodium pyruvate
1,9
production d'acétoïne
(Voges Proskauer)
incolore / rose pâle
rose / rouge (5)
GEL
gélatine
(origine bovine)
0,6
Gélatinase (GELatine)
non diffusion
diffusion du pigment noir
GLU
D-glucose
1,9
fermentation / oxydation
(GLUcose) (4)
bleu / bleu-vert
jaune / jaune gris
MAN
D-mannitol
1,9
(MANnitol) (4)
bleu / bleu-vert
jaune
INO
inositol
1,9
(INOsitol) (4)
bleu / bleu-vert
jaune
SOR
D-sorbitol
1,9
(SORbitol) (4)
bleu / bleu-vert
jaune
RHA
L-rhamnose
1,9
(RHAmnose) (4)
bleu / bleu-vert
jaune
SAC
D-saccharose
1,9
(SACcharose) (4)
bleu / bleu-vert
jaune
MEL
D-melibiose
1,9
(MELibiose) (4)
bleu / bleu-vert
jaune
AMY
amygdaline
0,57
(AMYgdaline) (4)
bleu / bleu-vert
jaune
ARA
L-arabinose
1,9
(ARAbinose) (4)
bleu / bleu-vert
jaune
JAMES / immédiat
incolore
vert pâle / jaune
rose
VP 1 + VP 2 / 10 min
OX
(voir notice du test oxydase)
cytochrome-OXydase
(voir notice du test oxydase)
(1) Une très légère couleur jaune est également positive.
(2) Une couleur orange apparaissant après 36-48 H d'incubation doit être considérée négative.
(3) Lecture dans la cupule (zone aérobie).
(4) La fermentation commence dans la partie inférieure des tubes, l'oxydation commence dans la cupule.
(5) Une légère coloration rose apparaissant après 10 minutes doit être lue négative.
xLes quantités indiquées peuvent être ajustées en fonction des titres des matières premières.
x Certaines cupules contiennent des composants d’origine animale, notamment des peptones.
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TESTS COMPLEMENTAIRES
TESTS
COMPOSANTS ACTIFS
QTE
(mg/cup.)
RESULTATS
REACTIONS/ENZYMES
POSITIF
NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min
Réduction
des
potassium nitrate
nitrates
tube GLU
0,076
production de NO2
jaune
rouge
Zn / 5 min
orange-rouge
jaune
mobilité
immobile
mobile
absence
présence
vert
vert
jaune
jaune
réduction au stade N2
MOB
API M Medium ou
microscope
McC
milieu de MacConkey
culture
glucose (API OF Medium)
fermentation : sous huile
oxydation : à l'air
OF-F
OF-O
NEGATIF
METHODOLOGIE
TABLEAU D'IDENTIFICATION
BIBLIOGRAPHIE
TABLE DES SYMBOLES
p. I
p. II
p. IV
p. V
CLSI est une marque utilisée, déposée et/ou enregistrée appartenant à Clinical and Laboratory Standards Institute Inc.
ATCC est une marque utilisée, déposée et/ou enregistrée appartenant à American Type Culture Collection.
bioMérieux® SA
au capital de 12 029 370 €
673 620 399 RCS LYON
69280 Marcy-l'Etoile / France
Tél. 33 (0)4 78 87 20 00
Fax 33 (0)4 78 87 20 90
bioMérieux, Inc
Box 15969,
Durham, NC 27704-0969 / USA
Tél. (1) 919 620 20 00
Fax (1) 919 620 22 11
http://www.biomerieux.com
Imprimé en France
bioMérieux, le logo bleu, API, API 20 E et apiweb sont des marques utilisées, déposées et/ou enregistrées appartenant
à bioMérieux SA ou à l’une de ses filiales.
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IVD
Identification system for Enterobacteriaceae and other non-fastidious Gram-negative rods
SUMMARY AND EXPLANATION
API 20 E is a standardized identification system for
Enterobacteriaceae and other non-fastidious, Gramnegative rods which uses 21 miniaturized biochemical
tests and a database. The complete list of those
organisms that it is possible to identify with this system is
given in the Identification Table at the end of this package
insert.
PRINCIPLE
The API 20 E strip consists of 20 microtubes containing
dehydrated substrates. These tests are inoculated with
a bacterial suspension that reconstitutes the media.
During incubation, metabolism produces color changes
that are either spontaneous or revealed by the addition of
reagents.
The reactions are read according to the Reading Table
and the identification is obtained by referring to the
Analytical Profile Index or using the identification software.
CONTENT OF THE KIT
Kit for 25 tests (ref. 20 100)
- 25 API 20 E strips
- 25 incubation boxes
- 25 result sheets
- 1 clip seal
- 1 package insert
Kit for 100 tests (ref. 20 160)
- 100 API 20 E strips (4x25 strips)
- 100 incubation boxes
- 100 result sheets
1 clip seal
1 package insert
COMPOSITION OF THE STRIP
The composition of the API 20 E strip is given in the
Reading Table of this package insert.
REAGENTS AND MATERIAL REQUIRED BUT NOT
PROVIDED
Reagents
- API NaCl 0.85 % Medium, 5 ml (Ref. 20 230) or
API Suspension Medium, 5 ml (Ref. 20 150)
- API 20 E reagent kit (Ref. 20 120) or
individual reagents : TDA (Ref. 70 402)
JAMES (Ref. 70 542)
VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422)
NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)
- Zn reagent (Ref. 70 380)
- Oxidase (Ref. 55 635*)
* reference not sold in certain countries : use an
equivalent reagent.
- Mineral oil (Ref. 70 100)
- API 20 E Analytical Profile Index (Ref. 20 190) or
apiweb TM identification software (Ref. 40 011)
(consult bioMérieux)
bioMérieux® SA
Material
- Pipettes or PSIpettes
- Ampule protector
- Ampule rack
- General microbiology laboratory equipment
POSSIBLE ADDITIONAL REAGENTS
- API OF Medium (Ref. 50 110) :
Test for the determination of fermentative or oxidative
metabolism.
- API M Medium (Ref. 50 120) :
Test for motility of facultative anaerobic bacteria.
WARNINGS AND PRECAUTIONS
xFor in vitro diagnostic use and microbiological
control.
xFor professional use only.
xThis kit contains products of animal origin. Certified
knowledge of the origin and/or sanitary state of the
animals does not totally guarantee the absence of
transmissible pathogenic agents. It is therefore
recommended that these products be treated as
potentially infectious, and handled observing the usual
safety precautions (do not ingest or inhale).
xAll specimens, microbial cultures and inoculated
products should be considered infectious and handled
appropriately. Aseptic technique and usual precautions
for handling the bacterial group studied should be
observed throughout this procedure. Refer to
®
"CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers from
Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline
- Current revision". For additional handling precautions,
refer to "Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories - CDC/NIH - Latest edition", or to the
regulations currently in use in each country.
xDo not use reagents past the expiry date.
xBefore use, check that the packaging of the various
components is intact.
xDo not use strips which have been damaged : cupules
deformed, desiccant sachet open, etc.
xThe performance data presented were obtained using
the procedure indicated in this package insert. Any
change or modification in the procedure may affect the
results.
xInterpretation of the test results should be made taking
into consideration the patient history, the source of the
specimen, colonial and microscopic morphology of the
strain and, if necessary, the results of any other tests
performed, particularly the antimicrobial susceptibility
patterns.
English - 1
api® 20 E
07584G - en - 2007/06
STORAGE CONDITIONS
The strips are supplied in an aluminum pouch with
desiccant sachets.
Once opened (*), the pouch should be re-sealed using the
clip seal (included in the kit) to preserve the remaining
strips with the desiccant sachets : place the open end of
the pouch along the seal and carefully clamp between
the two parts. The strips may then be kept for up to
10 months after the pouch has been opened, at 2-8°C
(or until the expiry date indicated on the packaging, if this
comes before).
(*) Recommended method for opening the pouches : cut
open the pouch just below the seal while holding the
pouch upright, in order to avoid damaging the desiccant
sachets.
SPECIMENS (COLLECTION AND PREPARATION)
API 20 E is not for use directly with clinical or other
specimens.
The microorganisms to be identified must first be isolated on a culture medium adapted to the culture of
Enterobacteriaceae and/or non-fastidious Gram-negative
rods, according to standard microbiological techniques.
INSTRUCTIONS FOR USE
Oxidase test
The oxidase test must be performed according to the
manufacturer's instructions for use. The result should be
recorded on the result sheet as it is an integral part of the
final profile (21st identification test).
Preparation of the strip
xPrepare an incubation box (tray and lid) and distribute
about 5 ml of distilled water or demineralized water
[or any water without additives or chemicals which may
release gases (e.g., Cl2, CO2, etc.)] into the honeycombed wells of the tray to create a humid atmosphere.
xRecord the strain reference on the elongated flap of the
tray. (Do not record the reference on the lid as it may be
misplaced during the procedure.)
xRemove the strip from its packaging.
xPlace the strip in the incubation box.
NOTE : API 20 E should only be used with
Enterobacteriaceae and/or non-fastidious Gram-negative
rods. Fastidious organisms having demanding nutritional
requirements and requiring appropriate handling
precautions (i.e., Brucella and Francisella) are not
included in the API 20 E database. Alternative procedures
must be used to exclude or confirm their presence.
Preparation of the inoculum
xOpen an ampule of API NaCl 0.85 % Medium (5 ml) or
an ampule of API Suspension Medium (5 ml) as
indicated in the paragraph "Warnings and Precautions"
of the package insert for these products, or use any tube
containing 5 ml of sterile saline or sterile distilled water,
without additives.
xUsing a pipette or PSIpette, remove a single wellisolated colony from an isolation plate. It is
recommended to use young cultures (18-24 hours old).
xCarefully emulsify to achieve a homogeneous bacterial
suspension.
This suspension must be used immediately after
preparation.
NOTE : most Vibrio species are halophilous. If a Vibrio is
suspected, suspend the bacteria in API NaCl 0.85 %
Medium.
bioMérieux® SA
Inoculation of the strip
xWith the same pipette, distribute the bacterial
suspension into the tubes of the strip (to avoid the
formation of bubbles at the base of the tubes, tilt the
strip slightly forward and place the tip of the pipette or
PSIpette against the side of the cupule):
- For the CIT , VP and GEL tests, fill both tube and
cupule,
- For the other tests, fill only the tubes (and not the
cupules),
- for the tests ADH, LDC, ODC, H2S and URE, create
anaerobiosis by overlaying with mineral oil.
xClose the incubation box.
xIncubate at 36°C ± 2°C for 18-24 hours.
READING AND INTERPRETATION
Reading the strip
xAfter the incubation period, read the strip by referring to
the Reading Table.
xIf 3 or more tests (GLU test + or –) are positive, record
all the spontaneous reactions on the result sheet and
then reveal the tests which require the addition of
reagents :
- TDA Test : add 1 drop of TDA reagent. A reddish
brown color indicates a positive reaction to be
recorded on the result sheet.
- IND Test : add 1 drop of JAMES reagent. A pink color
developed in the whole cupule indicates a positive
reaction to be recorded on the result sheet.
- VP Test : add 1 drop each of VP 1 and VP 2 reagents.
Wait at least 10 minutes. A pink or red color indicates
a positive reaction to be recorded on the result sheet.
If a slightly pink color appears after 10 minutes, the
reaction should be considered negative.
NOTE : The indole production test must be performed
last since this reaction releases gaseous products which
interfere with the interpretation of other tests on the
strip. The plastic incubation lid should not be replaced
after the addition of the reagent.
xIf the number of positive tests (including the GLU test)
before adding the reagents is less than 3 :
- Reincubate the strip for a further 24 hours (± 2 hours)
without adding any reagents.
- Reveal the tests requiring the addition of reagents
(see previous paragraph).
- To complete the identification, it may be necessary to
perform supplementary tests (refer to Identification
paragraph).
Interpretation
Identification is obtained with the numerical profile.
xDetermination of the numerical profile :
On the result sheet, the tests are separated into groups
of 3 and a value 1, 2 or 4 is indicated for each. By
adding together the values corresponding to positive
reactions within each group, a 7-digit profile number is
obtained for the 20 tests of the API 20 E strip. The
oxidase reaction constitutes the 21st test and has a
value of 4 if it is positive.
xIdentification :
This is performed using the database (V4.1)
* with the Analytical Profile Index :
- Look up the numerical profile in the list of profiles.
* with the apiweb TM identification software :
- Enter the 7-digit numerical profile manually via the
keyboard.
English - 2
api® 20 E
07584G - en - 2007/06
In some cases, the 7-digit profile is not discriminatory
enough and the following supplementary tests need to be
carried out :
- Reduction of nitrates to nitrites (NO2) and N2 gas (N2) :
add 1 drop each of NIT 1 and NIT 2 reagents to the GLU
tube. Wait 2 to 5 minutes. A red color indicates a
positive reaction (NO2). A negative reaction (yellow)
may be due to the reduction to nitrogen (as sometimes
evidenced by gas bubbles) : add 2 to 3 mg of Zn
reagent to the GLU tube. After 5 minutes, if the tube
remains yellow this indicates a positive reaction (N2) to
be recorded on the result sheet. If the test turns orangered, this is a negative reaction : the nitrates still present
in the tube have been reduced by the Zinc.
This reaction is useful when testing Gram-negative,
oxidase positive rods.
NOTE : For the same reason as the indole test (see the
note in the paragraph "Reading the strip"), the nitrate
reduction test must be performed last.
- Motility (MOB) : Inoculate an ampule of API M Medium
(see package insert).
- Growth on MacConkey agar medium (McC) : Streak a
MacConkey agar plate (see package insert).
- Oxidation of glucose (OF-O) : Inoculate an ampule of
API OF Medium (see package insert).
- Fermentation of glucose (OF-F) : Inoculate an ampule of
API OF Medium (see package insert).
These supplementary tests, indicated in the introduction
section (Profile coding) of the Analytical Profile Index, may
be used to form a 9-digit profile. Identification is then
obtained using the identification software.
Further tests may be proposed in case of low
discrimination. Refer to the identification software or
Analytical Profile Index.
QUALITY CONTROL
The media, strips, and reagents are systematically quality controlled at various stages of their manufacture.
For those users who wish to perform their own quality control tests with the strip, it is preferable to use the strain
®
1. Escherichia coli ATCC 25922 or else one of the following strains :
ATCC 51331
ATCC 13047
ATCC 35659
ONPG ADH LDC ODC
1.
2.
3.
4.
5.
+
+
+
–
+
–
–
+
–
–
+
V
–
–
+
+
–
V
+
–
CIT
–
V
+
V
+
H2S URE TDA IND VP
–
–
–
+
–
–
–
–
+
V
–
–
–
+
–
+
–
–
–
–
–
–
+
–
V
GEL
–
+
–
V
–
+
–
+
+
+
+
–
+
–
+
–
–
V
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
–
+
–
–
+
V
+
+
–
+
–
+
–
–
+
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
+
+
–
–
–
–
V
* The N2 (+) state may be observed for the strain ATCC 13047 and the strain ATCC 25922.
x Profile obtained after 24-48 hours of incubation for the strain ATCC 51331, using colonies grown on Trypticase Soy agar + blood.
x Profiles obtained after 18-24 hours of incubation for the other strains, using colonies grown on Trypticase Soy agar + blood.
x Bacterial suspensions prepared in API NaCl 0.85 % Medium.
It is the responsibility of the user to perform Quality Control in accordance with any local applicable regulations.
LIMITATIONS OF THE METHOD
xThe API 20 E system is intended uniquely for the
identification of Enterobacteriaceae and those nonfastidious, Gram-negative rods included in the database
(see Identification Table at the end of this package
insert). It cannot be used to identify any other
microorganisms or to exclude their presence.
xDiscrepancies with respect to conventional methods
may be observed. They are due to the different
principles of the reactions used in the API technique. In
addition, substrate variations exist that also account for
percentage differences.
xOn rare occasions, the glucose reactions for organisms
such as Klebsiella or Proteus may revert from positive
to negative, in which instance a bluish-green color is
seen. This reaction will be recorded as a negative
reaction. Such occurrences are reflected in the
percentages indicated in the Identification Table.
xIf Salmonella or Shigella are identified, serological
identification must be performed to confirm the bacterial
identification.
xNonfermentative, Gram-negative rods, isolated from
patients with cystic fibrosis, may generate atypical
biochemical profiles, which may affect identification.
xOnly pure cultures of a single organism should be used.
bioMérieux® SA
RANGE OF EXPECTED RESULTS
Consult the Identification Table at the end of this package
insert for the range of expected results for the various
biochemical reactions.
PERFORMANCE
5514 collection strains and strains of various origins
belonging to species included in the database were
tested:
- 92.80 % of the strains were correctly identified
(with or without supplementary tests).
- 4.61 % of the strains were not identified.
- 2.59 % of the strains were misidentified.
xOther non-fastidious Gram-negative rods :
2386 collection strains and strains of various origins
belonging to species included in the database were
tested :
- 90.32 % of the strains were correctly identified
(with or without supplementary tests).
- 6.16 % of the strains were not identified.
- 3.52 % of the strains were misidentified.
English - 3
api® 20 E
07584G - en - 2007/06
WASTE DISPOSAL
Dispose of used or unused reagents as well as any other
contaminated disposable materials following procedures
for infectious or potentially infectious products.
It is the responsibility of each laboratory to handle waste
and effluents produced according to their type and degree
of hazardousness and to treat and dispose of them (or
have them treated and disposed of) in accordance with
any applicable regulations.
WARRANTY
bioMérieux disclaims all warranties, express or implied,
including any implied warranties of MERCHANTABILITY
AND FITNESS FOR A PARTICULAR USE. bioMérieux
shall not be liable for any incidental or consequential
damages. IN NO EVENT SHALL BIOMERIEUX’S
LIABLITY TO CUSTOMER UNDER ANY CLAIM
EXCEED A REFUND OF THE AMOUNT PAID TO
BIOMERIEUX FOR THE PRODUCT OR SERVICE
WHICH IS THE SUBJECT OF THE CLAIM.
READING TABLE
TESTS
ACTIVE INGREDIENTS
QTY
(mg/cup.)
REACTIONS/ENZYMES
ß-galactosidase
(Ortho NitroPhenyl-ßDGalactopyranosidase)
RESULTS
NEGATIVE
POSITIVE
colorless
yellow (1)
ONPG
2-nitrophenyl-ßDgalactopyranoside
ADH
L-arginine
1.9
Arginine DiHydrolase
yellow
red / orange (2)
LDC
L-lysine
1.9
Lysine DeCarboxylase
yellow
red / orange (2)
ODC
L-ornithine
1.9
Ornithine DeCarboxylase
yellow
red / orange (2)
CIT
trisodium citrate
0.756
CITrate utilization
pale green / yellow
blue-green / blue (3)
H2S
sodium thiosulfate
0.075
H2S production
colorless / greyish
black deposit / thin line
URE
urea
0.76
UREase
yellow
red / orange (2)
TDA
L-tryptophane
0.38
Tryptophane DeAminase
yellow
0.223
TDA / immediate
reddish brown
JAMES / immediate
IND
L-tryptophane
0.19
colorless
pale green / yellow
INDole production
pink
VP 1 + VP 2 / 10 min
VP
sodium pyruvate
1.9
acetoin production
(Voges Proskauer)
GEL
Gelatin
(bovine origin)
0.6
GELatinase
GLU
D-glucose
1.9
MAN
D-mannitol
INO
colorless / pale pink
pink / red (5)
no diffusion
diffusion of black pigment
fermentation / oxidation
(GLUcose) (4)
blue / blue-green
yellow / greyish yellow
1.9
(MANnitol) (4)
blue / blue-green
yellow
inositol
1.9
(INOsitol) (4)
blue / blue-green
yellow
SOR
D-sorbitol
1.9
(SORbitol) (4)
blue / blue-green
yellow
RHA
L-rhamnose
1.9
(RHAmnose) (4)
blue / blue-green
yellow
SAC
D-sucrose
1.9
(SACcharose) (4)
blue / blue-green
yellow
MEL
D-melibiose
1.9
(MELibiose) (4)
blue / blue-green
yellow
AMY
amygdalin
0.57
(AMYgdalin) (4)
blue / blue-green
yellow
ARA
L-arabinose
1.9
(ARAbinose) (4)
blue / blue-green
yellow
OX
(see oxidase test package insert)
cytochrome-OXidase
(see oxidase test package insert)
(1) A very pale yellow should also be considered positive.
(2) An orange color after 36-48 hours incubation must be considered negative.
(3) Reading made in the cupule (aerobic).
(4) Fermentation begins in the lower portion of the tubes, oxidation begins in the cupule.
(5) A slightly pink color after 10 minutes should be considered negative.
xThe quantities indicated may be adjusted depending on the titer of the raw materials used.
xCertain cupules contain products of animal origin, notably peptones.
bioMérieux® SA
English - 4
api® 20 E
07584G - en - 2007/06
SUPPLEMENTARY TESTS
RESULTS
TESTS
Nitrate
reduction
GLU tube
ACTIVE INGREDIENTS
QTY
(mg/cup.)
REACTIONS/ENZYMES
NEGATIVE
POSITIVE
NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min
potassium nitrate
0.076
NO2 production
yellow
red
Zn / 5 min
reduction to N2 gas
orange-red
yellow
MOB
API M Medium or
microscope
-
motility
non-motile
motile
McC
MacConkey medium
-
growth
absence
presence
-
fermentation : under
mineral oil
green
yellow
-
oxidation : exposed to the
air
green
yellow
OF-F
OF-O
PROCEDURE
IDENTIFICATION TABLE
LITERATURE REFERENCES
INDEX OF SYMBOLS
p. I
p. II
p. IV
p. V
CLSI is a used, pending and/or registered trademark belonging to Clinical Laboratory and Standards Institute, Inc.
ATCC is a used, pending and/or registered trademark belonging to American Type Culture Collection.
bioMérieux® SA
673 620 399 RCS LYON
Tel. 33 (0)4 78 87 20 00
Fax 33 (0)4 78 87 20 90
bioMérieux, Inc
Box 15969,
Tel. (1) 919 620 20 00
Fax (1) 919 620 22 11
Printed in France
bioMérieux, the blue logo, API, API 20 E and apiweb are used, pending and/or registered trademarks belonging to
bioMérieux SA or one of its subsidiaries.
20 100 / 20 160
®
07584G - de - 2007/06
20 E
IVD
System zur Identifizierung von Enterobacteriaceae und anderen gramnegativen, nicht anspruchsvollen Stäbchen
EINFÜHRUNG UND TESTERKLÄRUNG
API 20 E ist ein standardisiertes System zur
Identifizierung von Enterobacteriaceae und anderen
gramnegativen, nicht anspruchsvollen Stäbchen anhand
von 21 miniaturisierten biochemischen Reaktionen und
einer Datenbasis. Die komplette Liste der mit dem System
zu identifizierenden Mikroorganismen finden Sie in der
Prozenttabelle am Ende der Arbeitsanleitung.
PRINZIP
Der API 20 E Streifen besteht aus 20 Mikroröhrchen, die
dehydrierte Substrate enthalten. Die Röhrchen werden mit
einer Keimsuspension beimpft, welche die Substrate löst.
Die Stoffwechselprodukte, die während der Inkubation
entstehen, bewirken Farbumschläge, entweder direkt oder
nach Zugabe der Reagenzien.
Die Ablesung der Reaktionen erfolgt anhand der
Ablesetabelle, die Identifizierung mit dem Analytischen
Profil Index oder einer Identifizierungssoftware.
PACKUNGSGRÖSSE
Packung für 25 Tests (Best.Nr. 20 100)
- 25 API 20 E Streifen
- 25 Inkubationswannen
- 25 Ergebnisblätter
- 1 Verschlussleiste
- 1 Arbeitsanleitung
Packung für 100 Tests (Best.Nr. 20 160)
- 100 API 20 E Streifen (4x25 Streifen)
- 100 Inkubationswannen
- 100 Ergebnisblätter
1 Verschlussleiste
1 Arbeitsanleitung
ZUSAMMENSETZUNG DES STREIFENS
Die Zusammensetzung des API 20 E Streifens finden Sie
in der Ablesetabelle dieser Arbeitsanleitung.
ZUSÄTZLICH ERFORDERLICHE REAGENZIEN UND
MATERIALIEN
Reagenzien
- API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (Best.Nr. 20 230) oder
API Suspension Medium, 5 ml (Best.Nr. 20 150)
- API 20 E Reagenzienkit (Best.Nr. 20 120) oder
Einzelreagenzien:
TDA (Best.Nr. 70 402)
JAMES (Best.Nr. 70 542)
VP 1 + VP 2 (Best.Nr. 70 422)
NIT 1 + NIT 2 (Best.Nr. 70 442)
- Zn Reagenz (Best.Nr. 70 380)
- Oxidase (Best.Nr. 55 635*)
*Dieses Produkt wird in einigen Ländern nicht
vertrieben. Verwenden Sie ein gleichwertiges
Reagenz.
- Paraffinöl (Best.Nr. 70 100)
- Analytischer Profil Index API 20 E (Best.Nr. 20 190)
oder Identifizierungssoftware apiweb TM (Best.Nr.
40 011) (bei bioMérieux anfragen)
Materialien
- Pipetten oder PSIpetten
- Schutzhülle für Ampullen
- Ampullenständer
- Allgemeine mikrobiologische Laborausrüstung
bioMérieux® SA
ERGÄNZENDE REAGENZIEN
- API OF Medium (Best.Nr. 50 110): zur Untersuchung
des oxidativen oder fermentativen Glukoseabbaus.
- API M Medium (Best.Nr. 50 120): für die Beweglichkeitsprüfung von aeroben/anaeroben Bakterien.
VORSICHTSMASSNAHMEN
xFür die in vitro Diagnostik und die mikrobiologische
Kontrolle
xNur für die Verwendung durch Fachkundige bestimmt.
xDieser Kit enthält Bestandteile tierischen Ursprungs. Da
durch die Kontrolle der Herkunft und/oder des Gesundheitszustandes der Tiere nicht völlig gewährleistet
werden kann, dass diese Produkte keine übertragbaren
pathogenen Agenzien enthalten, ist es empfehlenswert,
diese als potenziell infektiös zu betrachten und unter
Beachtung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen zu
behandeln (nicht einnehmen, nicht einatmen).
xDie Proben, Mikroorganismen und beimpften Produkte
müssen als potenziell infektiös betrachtet und unter Beachtung geeigneter Vorsichtsmaßnahmen sachgemäß
behandelt werden. Während der gesamten Testdurchführung müssen aseptische Arbeitsbedingungen und
entsprechende Vorsichtsmaßnahmen für die zu untersuchende Keimgruppe eingehalten werden, siehe
®
„CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers from
Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline –
aktuelle
Revision“.
Weitere
diesbezügliche
Informationen finden Sie in „Biosafety in Microbiological
and Biomedical Laboratories, CDC/NIH – Letzte
Ausgabe“ oder in den jeweils gültigen Richtlinien.
xDie Reagenzien nach Ablauf des Verfallsdatums nicht
mehr verwenden.
x Vergewissern Sie sich vor Gebrauch, dass die Verpackung
der verschiedenen Bestandteile nicht beschädigt ist.
xStreifen mit äußeren Anzeichen einer Beschädigung
(deformierte Vertiefungen, geöffnete Trockenmittelbeutel etc.) nicht verwenden.
xDie angegebene Performance wurde gemäß dem
Verfahren der vorliegenden Arbeitsanleitung ermittelt.
Jede Abweichung von diesem Verfahren kann die
Ergebnisse beeinflussen.
xBei der Interpretation der Ergebnisse müssen der
klinische Hintergrund oder andere Zusammenhänge, die
Probenherkunft, Kolonie- und mikroskopische Morphologie des Stammes sowie gegebenenfalls die Ergebnisse anderer Tests, insbesondere das Antibiogramm,
berücksichtigt werden.
LAGERUNGSBEDINGUNGEN
Die Streifen sind in einem Aluminiumbeutel verpackt, der
Trockenmittel enthält. Legen Sie nach dem Öffnen des
Beutels (*) die nicht benötigten Streifen zusammen mit
dem Trockenmittel in den Aluminiumbeutel zurück und
verschließen Sie diesen mit der (mitgelieferten) Verschlussleiste: das offene Beutelende zwischen die beiden
Leisten legen und über die ganze Länge sorgfältig festklemmen. Die Streifen können auf diese Weise bis zu
10 Monate nach dem ersten Öffnen des Beutels (oder
bis zu dem auf der Packung angegebenen Verfallsdatum,
wenn dieses kürzer ist) bei 2-8°C gelagert werden.
(*) Empfehlungen zum Öffnen des Beutels: Halten Sie
den Beutel gerade und schneiden Sie ihn direkt unterhalb
der Schweißnaht auf, so dass das Trockenmittel nicht
beschädigt wird.
Deutsch - 1
api® 20 E
07584G - de - 2007/06
PROBEN (ENTNAHME UND VORBEREITUNG)
API 20 E darf nicht zur direkten Testung von klinischen oder
anderen Untersuchungsmaterialien verwendet werden.
Die zu identifizierenden Mikroorganismen müssen zuerst
gemäß den üblichen mikrobiologischen Verfahren auf
einem Kulturmedium isoliert werden, das für die Anzucht
von Enterobacteriaceae und/oder gramnegativer, nicht
anspruchsvoller Stäbchen geeignet ist.
TESTDURCHFÜHRUNG
Oxidase-Test
Der Oxidase-Test muss gemäß den Angaben des
Herstellers durchgeführt werden. Er stellt die 21.
Identifikationsreaktion dar, die auf dem Ergebnisblatt
notiert wird.
Vorbereitung des Streifens
xStellen Sie eine Inkubationswanne mit Deckel bereit und
geben Sie zur Herstellung einer feuchten Kammer ca.
5 ml destilliertes oder demineralisiertes Wasser [oder
anderes Wasser ohne Zusätze bzw. Derivate, die Gase
freisetzen können (z.B. Cl2, CO2...)] in die Wanne.
xNotieren Sie die Referenznummer des Stammes auf
dem dafür vorgesehenen seitlichen Abschnitt der
Inkubationswanne. (Die Referenznummer nicht auf dem
Deckel notieren, da er während des Arbeitsablaufes
verwechselt werden oder abhanden kommen kann).
xNehmen Sie den Streifen aus der Verpackung.
xLegen Sie den Streifen in die Wanne.
ANMERKUNG: API 20 E ist nur zur Identifizierung von
Enterobacteriaceae und gramnegativen, nicht anspruchsvollen Stäbchen bestimmt. Anspruchsvolle Keime, bei
deren Handhabung spezielle Vorsichtsmaßnahmen
erforderlich sind (z.B. Brucella und Francisella), sind nicht
in der API 20 E Datenbasis enthalten. Wir empfehlen, für
den Ausschluss oder die Identifizierung dieser Keime
andere Tests zu verwenden.
Vorbereitung des Inokulums
xEine Ampulle API NaCl 0,85% Medium (5 ml) oder eine
Ampulle API Suspension Medium (5 ml) öffnen, wie im
Abschnitt "Vorsichtsmaßnahmen" der Arbeitsanleitung
des Produktes beschrieben oder ein anderes Röhrchen
mit 5 ml steriler physiologischer Kochsalzlösung oder
sterilem Aqua dest. ohne Zusätze.
xNehmen Sie mit einer Pipette oder PSIpette eine gut
isolierte Einzelkolonie vom Agar ab. Verwenden Sie
vorzugsweise junge Kulturen (18-24 h).
xDie Keime im Suspensionsmedium sorgfältig homogenisieren. Diese Suspension muss sofort verwendet
werden.
ANMERKUNG: Die meisten Vibrio Spezies sind halophil.
Bei Verdacht auf Vibrio-Spezies stellen Sie die
Keimsuspension mit API NaCl 0,85% Medium her.
Beimpfung des Streifens
xPipettieren Sie die Keimsuspension mit derselben
Pipette, mit der Sie die Keime abgenommen haben, in
die Mikroröhrchen (um Blasenbildung am Boden des
Röhrchens
zu
vermeiden,
halten
Sie
die
Inkubationswanne leicht schräg nach vorne und legen
Sie die Spitze der Pipette bzw. PSIpette am Rand des
Bechers auf):
bioMérieux® SA
- Füllen Sie für die Reaktionen CIT , VP und GEL
Becher und Röhrchen,
- Füllen Sie für die anderen Reaktionen nur die
Röhrchen (und nicht die Becher),
- Überschichten
Sie
bei
den
unterstrichenen
Reaktionen: ADH, LDC, ODC, H2S, URE die Becher
mit Paraffinöl, so dass anaerobe Bedingungen
entstehen.
xDecken Sie die Inkubationswanne ab.
xInkubieren Sie für 18-24 h bei 36°C ± 2°C.
ABLESUNG UND INTERPRETATION
Ablesung des Streifens
xLesen Sie nach der Inkubation den Streifen mit Hilfe der
Ablesetabelle ab.
xWenn 3 oder mehr Tests (GLU + oder –) positiv sind,
notieren Sie auf dem Ergebnisblatt alle Spontanreaktionen und prüfen Sie anschließend die Tests, die
Reagenzzugaben erfordern:
- TDA: Geben Sie 1 Tropfen TDA Reagenz zu. Eine
rotbraune Farbe zeigt eine positive Reaktion an.
Notieren Sie das Resultat auf dem Ergebnisblatt.
- IND: Geben Sie 1 Tropfen JAMES Reagenz zu. Eine
rosa Farbe, die im ganzen Becher diffundiert, zeigt
eine positive Reaktion an. Notieren Sie das Resultat
auf dem Ergebnisblatt.
- VP: Geben Sie je 1 Tropfen VP 1 und VP 2 Reagenz
zu. Warten Sie mindestens 10 min. Eine rosa oder
rote Farbe ist als positiv zu bewerten. Notieren Sie
das Ergebnis auf dem Ergebnisblatt. Eine nach 10 min
auftretende schwache rosa Verfärbung wird als
negativ bewertet.
HINWEIS: Die Indolbildung muss zuletzt geprüft
werden, da diese Reaktion Gase freisetzt, welche die
Interpretation anderer Tests des Streifens beeinträchtigen können. Decken Sie nach Zugabe dieses
Reagenzes den Streifen nicht wieder ab.
xWenn die Anzahl der positiven Tests (einschließlich der
GLUKOSE) vor der Reagenzienzugabe kleiner als 3 ist:
- Inkubieren Sie den Streifen erneut für 24 h (± 2 h)
ohne Reagenzienzugabe.
- Lesen Sie anschließend die Reaktionen ab, für die
Reagenzien zugegeben werden müssen (siehe
vorheriger Abschnitt).
- Zur Ergänzung der Identifizierung kann es hilfreich
sein, weitere Tests durchzuführen (siehe Abschnitt
Identifizierung).
Interpretation
Die Identifizierung erhält man anhand des numerischen
Profils.
xErstellung des numerischen Profils:
Die biochemischen Reaktionen auf dem Ergebnisblatt
sind in 3-er Gruppen eingeteilt. Jede positive Reaktion
erhält den Wert 1, 2 oder 4 je nach Position des Tests
innerhalb der Gruppe (1., 2. oder 3. Test). Die
Zahlenwerte jeder Gruppe werden addiert (negative
Reaktion = 0), so erhält man 7 Ziffern, welche das
numerische Profil ergeben. Die Oxidasereaktion stellt
den 21. Test dar, ihr wird bei positiver Reaktion der
Zahlenwert 4 zugeordnet.
xIdentifizierung:
Die Identifizierung erfolgt anhand der Datenbasis (V4.1)
* mit dem Analytischen Profil Index:
- Schlagen Sie das numerische Profil in der Profilliste nach.
* mit der Identifizierungssoftware apiweb TM:
- Geben Sie das 7-stellige numerische Profil über die
Tastatur ein.
Deutsch - 2
api® 20 E
07584G - de - 2007/06
In den Fällen, in denen das 7-stellige Zahlenprofil keine
- Beweglichkeit (MOB): Beimpfen Sie eine Ampulle API M
ausreichende Selektivität ergibt, müssen folgende ZusatzMedium (siehe Arbeitsanleitung).
reaktionen durchgeführt werden:
- Anzucht auf MacConkey (McC) Agar: Beimpfen Sie
- Nitratreduktion zu Nitrit (NO2) und Stickstoff (N2):
einen MacConkey Agar (siehe Arbeitsanleitung).
Geben Sie je 1 Tropfen NIT 1 und NIT 2 Reagenz in das
- Glukoseoxidation (OF-O): Beimpfen Sie eine Ampulle
GLU-Röhrchen. Warten Sie 2 bis 5 min. Eine rote
API OF Medium (siehe Arbeitsanleitung).
Färbung zeigt eine positive Reaktion (NO2) an. Eine
- Glukosefermentation (OF-F): Beimpfen Sie eine
negative Reaktion (gelbe Farbe) kann auf eine
Ampulle OF Medium (siehe Arbeitsanleitung).
eventuelle Stickstoffproduktion (gelegentlich durch
Diese Zusatztests, die im Abschnitt Einführung
Bildung kleiner Bläschen angezeigt) zurückgeführt
(Codierung der Profile) des Analytischen Profil Index
werden: Geben Sie 2-3 mg Zn Reagenz in den GLUaufgeführt sind, können auch für die Erstellung eines mit
Becher. Bleibt das Röhrchen nach 5 min gelb, ist die
der Software identifizierbaren 9-stelligen Profils verwendet
Reaktion (N2) positiv, notieren Sie das Ergebnis auf
werden.
dem Ergebnisblatt. Wird es orangerot, ist die Reaktion
negativ, da die im Becher noch vorhandenen Nitrate
durch Zink zu Nitrit reduziert wurden.
Diese Reaktion ist für gramnegative, Oxidase positive
Stäbchen wichtig.
Bei schwacher Selektivität können Zusatztests zur
HINWEIS: Der Nitratnachweis muss aus denselben
Differenzierung vorgeschlagen werden. Siehe IdentifizieGründen wie die Indolbildung (siehe HINWEIS im
rungssoftware oder Analytischer-Profil-Index.
Abschnitt «Ablesung des Streifens») zuletzt durchgeführt
werden.
QUALITÄTSKONTROLLE
Die Medien, Streifen und Reagenzien unterliegen in den verschiedenen Stadien der Produktion systematisch
durchgeführten Qualitätskontrollen. Die mikrobiologische Qualitätskontrolle der API-Teststreifen im Labor kann
®
vorzugsweise mit dem 1. Stamm Escherichia coli ATCC 25922 oder einem der folgenden Stämme durchgeführt
werden:
ATCC 51331
ATCC 35659
ATCC 13047
ATCC: American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.
ONPG ADH LDC ODC
CIT
H2S URE TDA IND VP
GEL
1. +
–
+
+
–
–
–
–
+
–
–
+
+
–
+
+
–
+
–
2. +
–
V
–
V
–
–
–
–
–
+
–
–
–
–
–
–
–
–
3. +
+
–
V
+
–
–
–
–
+
–
+
+
V
+
+
+
+
+
4. –
–
–
+
V
+
+
+
–
–
V
+
–
–
–
–
V
–
–
5. +
–
+
–
+
–
V
–
–
V
–
+
+
+
+
+
+
+
+
* Die Reduktion zu N2 (+) kann mit dem Stamm ATCC 13047 und dem Stamm ATCC 25922 nachgewiesen werden.
x Profile nach 24-48 h Inkubation für den ATCC Stamm 51331, nach Anzucht auf Trypcase-Soja-Agar mit Hammelblut.
x Profile nach 18-24 h Inkubation für die anderen Stämme, nach Anzucht auf Trypcase-Soja-Agar mit Hammelblut.
x Mit API NaCl 0,85% Medium hergestellte Keimsuspension.
+
–
+
–
+
+
–
+
+
+
–
–
–
–
V
Es liegt in der Verantwortung des Anwenders, die Qualitätskontrolle in Übereinstimmung mit den jeweils gültigen
Vorschriften durchzuführen.
LIMITIERUNGEN
xAPI 20 E ist nur für die Identifizierung von
Enterobacteriaceae und in der Datenbasis enthaltener
gramnegativer,
nicht
anspruchsvoller
Stäbchen
bestimmt (siehe Prozenttabelle am Ende der
Arbeitsanleitung). Andere Mikroorganismen können
weder identifiziert noch ausgeschlossen werden.
xIm Vergleich zu konventionellen Methoden können diskrepante Ergebnisse einzelner Reaktionen beobachtet
werden. Dies ist durch Unterschiede im Reaktionsprinzip bedingt. Außerdem können durch Substratveränderungen abweichende Prozentwerte im Vergleich
zu konventionellen Methoden auftreten.
xBei einigen Spezies (z.B. Klebsiella oder Proteus) kann
eine zunächst positive Reaktionen des Glukose-Tests
negativ werden (Auftreten einer blau-grünen Färbung).
In diesem Fall wird diese Reaktion negativ bewertet.
Dieses
Phänomen
ist
in
der
Prozenttabelle
berücksichtigt.
xBei Erhalt des Identifizierungsergebnisses Salmonella
oder Shigella muss die biochemische Identifizierung
serologisch bestätigt werden.
bioMérieux® SA
xGramnegative, nicht fermentierende Stäbchen, die von
Patienten mit Mukoviszidose isoliert wurden, können zu
atypischen biochemischen Profilen führen, die die
Identifizierung beeinträchtigen können.
xEs dürfen nur Reinkulturen verwendet werden.
ERWARTETE ERGEBNISSE
Die
erwarteten
Ergebnisse
der
verschiedenen
biochemischen Reaktionen entnehmen Sie der Prozenttabelle am Ende dieser Arbeitsanleitung.
PERFORMANCE
xEnterobacteriaceae:
5514 Stämme unterschiedlicher Herkunft und Stämme
aus Stammsammlungen, die zu den Spezies der
Datenbasis gehören, wurden getestet:
- 92,80 % der Stämme wurden korrekt identifiziert (mit
oder ohne Zusatztests).
- 4,61 % der Stämme wurden nicht identifiziert.
- 2,59 % wurden falsch identifiziert.
Deutsch - 3
api® 20 E
07584G - de - 2007/06
BESEITIGUNG DER ABFÄLLE
Entsorgen Sie alle gebrauchten und nicht gebrauchten
Reagenzien sowie kontaminierte Einwegmaterialien
gemäß den für infektiöse oder potenziell infektiöse
Materialien geltenden Bestimmungen.
Es liegt in der Verantwortung jedes Labors, die
entstandenen Fest- und Flüssigabfälle gemäß der
jeweiligen Risikogruppe zu behandeln und deren
Entsorgung in Übereinstimmung mit den gültigen
gesetzlichen Bestimmungen sicherzustellen.
ABLESETABELLE
xAndere gramnegative, nicht anspruchsvolle Stäbchen:
2386 Stämme unterschiedlicher Herkunft und Stämme
aus Stammsammlungen, die zu den Spezies der
Datenbasis gehören, wurden getestet:
- 90,32 % der Stämme wurden korrekt identifiziert (mit
oder ohne Zusatztests).
- 6,16 % der Stämme wurden nicht identifiziert.
- 3,52 % wurden falsch identifiziert.
ERGEBNISSE
AKTIVE
BESTANDTEILE
MENGE
(mg/Vert.).
ONPG
2-Nitrophenyl-ßDGalaktopyranosid
0,223
ADH
L-Arginin
1,9
Arginin DiHydrolase
gelb
rot / orange (2)
LDC
L-Lysin
1,9
Lysin DeCarboxylase
gelb
rot / orange (2)
ODC
L-Ornithin
1,9
Ornithin DeCarboxylase
gelb
rot / orange (2)
CIT
Trinatriumcitrat
0,756
CITratverwertung
hellgrün / gelb
blau-grün / blau (3)
H2S
Natriumthiosulfat
0,075
H2S-Bildung
farblos / gräulich
schwarzer Niederschlag
URE
Harnstoff
0,76
UREase
gelb
rot / orange (2)
TDA
L-Tryptophan
0,38
Tryptophan DesAminase
gelb
TESTS
REAKTIONEN/ENZYME
ß-Galaktosidase
(Ortho-Nitrophenyl-ßDGalaktopyranosidase)
NEGATIV
POSITIV
farblos
gelb (1)
TDA / sofort
rotbraun
JAMES / sofort
IND
L-Tryptophan
0,19
INDol-Bildung
farblos
hellgrün / gelb
rosa
VP 1 + VP 2 / 10 min
VP
Natriumpyruvat
1,9
Acetoinbildung
(Voges Proskauer)
GEL
Gelatine
(bovinen Ursprungs)
0,6
GLU
D-Glukose
MAN
farblos / blassrosa
rosa / rot (5)
Gelatinase (GELatine)
keine Diffusion
Diffusion der schwarzen
Tusche
1,9
Fermentation / Oxidation
(GLUkose) (4)
blau / blau-grün
gelb / gelb grau
D-Mannit
1,9
(MANnit) (4)
blau / blau-grün
gelb
INO
Inosit
1,9
(INOsit) (4)
blau / blau-grün
gelb
SOR
D-Sorbit
1,9
(SORbit) (4)
blau / blau-grün
gelb
RHA
L-Rhamnose
1,9
(RHAmnose) (4)
blau / blau-grün
gelb
SAC
D-Saccharose
1,9
(SACcharose) (4)
blau / blau-grün
gelb
MEL
D-Melibiose
1,9
(MELibiose) (4)
blau / blau-grün
gelb
AMY
Amygdalin
0,57
(AMYgdalin) (4)
blau / blau-grün
gelb
ARA
L-Arabinose
1,9
(ARAbinose) (4)
blau / blau-grün
gelb
OX
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(siehe Arbeitsanleitung des Oxidase-Tests) Cytochrom OXidase
(siehe Arbeitsanleitung des Oxidase-Tests)
Auch eine nur ganz leichte Gelbfärbung ist als positiv zu bewerten.
Eine orange Verfärbung nach einer 36-48-stündigen Inkubation wird als negativ bewertet.
Ablesung im Becher (aerober Bereich)
Die Fermentation beginnt im unteren Teil der Röhrchens, die Oxidation im Becher.
Eine nach 10 min auftretende schwache rosa Verfärbung wird als negativ bewertet.
xDie angegebenen Mengen können je nach Konzentration der verwendeten Ausgangsmaterialien angeglichen werden.
x Einige Näpfchen enthalten Bestandteile tierischen Ursprungs, vor allem Peptone.
bioMérieux® SA
Deutsch - 4
api® 20 E
07584G - de - 2007/06
ZUSATZREAKTIONEN
TESTS
AKTIVE
BESTANDTEILE
MENGE
(mg/Vert.)
ERGEBNISSE
REAKTIONEN/ENZYME
NEGATIV
POSITIV
NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min
Nitratreduktion
Kaliumnitrat
GLU
Röhrchen
0,076
NO2 Bildung
gelb
Reduktion zu N2
MOB
API M Medium oder
Mikroskop
McC
MacConkey Agar
OF-F
OF-O
Glukose (API OF Medium)
rot
Zn / 5 min
Beweglichkeit
Wachstum auf McConkey
Agar
Fermentation: unter Öl
Oxidation: aerob
METHODIK
PROZENTTABELLE
LITERATUR
SYMBOLE
orange-rot
gelb
unbeweglich
beweglich
kein Wachstum
Wachstum
grün
grün
gelb
gelb
S. I
S. II
S. IV
S. V
CLSI ist eine verwendete, angemeldete und/oder eingetragene Marke von Clinical and Laboratory Standards Institute Inc.
ATCC ist eine verwendete, angemeldete und/oder eingetragene Marke von American Type Culture Collection.
bioMérieux® SA
673 620 399 RCS LYON
Tél. 33 (0)4 78 87 20 00
Fax 33 (0)4 78 87 20 90
bioMérieux, Inc
Box 15969,
Tel. (1) 919 620 20 00
Fax (1) 919 620 22 11
Gedruckt in Frankreich
bioMérieux, das blaue Logo, API, API 20 E und apiweb sind verwendete, angemeldete und/oder eingetragene Marken
von bioMérieux SA oder einer ihrer Niederlassungen.
20 100 / 20 160
®
07584G - es - 2007/06
20 E
IVD
Sistema de identificación de Enterobacteriaceae y otros bacilos Gram negativos no exigentes
INTRODUCCIÓN Y OBJETO DEL ENSAYO
API 20 E es un sistema estandarizado que permite la
identificación de Enterobacteriaceae y otros bacilos Gram
negativos no exigentes, que incluyen 21 tests bioquímicos
miniaturizados, así como una base de datos. La lista
completa de las bacterias posibles de identificar con este
sistema se presenta en la Tabla de Identificación al final
de la presente ficha técnica.
PRINCIPIO
La galería del sistema API 20 E se compone de
20
microtubos
que
contienen
los
substratos
deshidratados. Los microtubos se inoculan con una
suspensión bacteriana que reconstituye los tests. Las
reacciones producidas durante el periodo de incubación
se traducen en cambios de color espontáneos o
revelados mediante la adición de reactivos.
La lectura de estas reacciones se lleva a cabo utilizando
la Tabla de Lectura, y la identificación se obtiene con la
ayuda del Catálogo Analítico o del software de
identificación.
PRESENTACIÓN
Caja de 25 tests (ref. 20 100)
- 25 galerías API 20 E
- 25 cámaras de incubación
- 25 hojas de resultados
- 1 barra de cierre
- 1 ficha técnica
Caja de 100 tests (ref. 20 160)
- 100 galerías API 20 E
- 100 cámaras de incubación
- 100 hojas de resultados
1 barra de cierre
1 ficha técnica
COMPOSICIÓN DE LA GALERÍA
La composición de la galería API 20 E se puede consultar
en la Tabla de Lectura de la presente ficha técnica.
REACTIVOS Y MATERIAL NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Reactivos
- API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (ref. 20 230) o
API Suspension Medium, 5 ml (ref. 20 150)
- Caja de reactivos API 20 E (ref. 20 120) o
reactivos individuales: TDA (ref. 70 402)
JAMES (ref. 70 542)
VP 1 + VP 2 (ref. 70 422)
NIT 1 + NIT 2 (ref. 70 442)
- Reactivo Zn (ref. 70 380)
- Oxidasa (ref. 55 635*)
* referencia no comercializada en ciertos países:
utilizar un reactivo equivalente
- Aceite de parafina (ref. 70 100)
- Catálogo Analítico API 20 E (ref. 20 190) o
Software de Identificación apiweb TM (Réf. 40 011)
(consultar con bioMérieux)
Material
- Pipetas o PSIpettes
- Gradilla para ampollas
- Protege-ampollas
- Equipo general de laboratorio de bacteriología
REACTIVOS COMPLEMENTARIOS
- API OF Medium (ref. 50 110):
Ensayo para la determinación del metabolismo
fermentativo u oxidativo de la glucosa.
- API M Medium (ref. 50 120):
Ensayo para la determinación de la movilidad de las
bacterias aero-anaerobias.
PRECAUCIONES DE UTILIZACIÓN
xPara diagnóstico in vitro y control microbiológico.
xExclusivamente para uso profesional.
xEste envase contiene componentes de origen animal.
Dado que no se puede controlar el origen y/o el estado
sanitario de los animales, no es posible garantizar de
forma absoluta que estos productos no contengan
ningún agente patógeno transmisible, por lo que se
recomienda manipularlos con todas las precauciones de
uso relativas a los productos potencialmente
infecciosos, (no ingerir, no inhalar).
xTodas las muestras, cultivos bacterianos y productos
inoculados
deben
ser
considerados
como
potencialmente infecciosos y deben ser manipulados de
modo apropiado. Durante toda la manipulación, deben
respetarse las normas de asépsia y tomar las
precauciones habituales de manipulación para el grupo
®
de bacterias estudiadas; consultar "CLSI M29-A,
Protection of Laboratory Workers from Occupationally
Acquired Infection; Approved Guideline – Revisión en
vigor". Para información complementaria sobre las
precauciones de manipulación, consultar al "Biosafety in
Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH última edición", o la reglamentación vigente en el país
de utilización.
xNo utilizar los reactivos después de su fecha de
caducidad.
xAntes de su utilización, asegurarse de la integridad del
embalaje y sus componentes.
xNo utilizar galerías que hayan sufrido una alteración
física: cúpula deformada, bolsa deshidratante abierta, ...
xLos resultados presentados han sido obtenidos
mediante la metodología indicada en la presente ficha
técnica. Toda desviación de la metodología puede
alterar los resultados.
xLa interpretación de los resultados del test debe ser
realizada teniendo en cuenta un contexto clínico o de
otro tipo, el origen de las muestras, los aspectos macro
y microscópicos de la cepa y, eventualmente, los
resultados de otros tests, en particular
del
antibiograma.
CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO
Las galerías API 20 E se presentan en una bolsa de
aluminio con bolsitas deshidratantes.
Después de su apertura (*), conservar las galerías
restantes con los deshidratantes, volviendo a cerrar la
bolsa con la ayuda del Sistema de cierre (presente en la
caja): Colocar la extremidad de la bolsa entre las dos
piezas de la barra y cerrarlos cuidadosamente, a fondo,
en toda su longitud.
bioMérieux® SA Español - 1
api® 20 E
07584G - es - 2007/06
Las galerías pueden conservarse de este modo hasta
10 meses después de la apertura de la bolsa, a 2-8º C
(o hasta la fecha de caducidad indicada en el envase, si
ésta fuese anterior).
(*) Recomendación para su apertura: Cortar justo por debajo
de la soldadura, manteniendo la bolsa recta, para evitar que
las bolsitas deshidratantes puedan resultar dañadas.
MUESTRAS (RECOGIDA Y PREPARACIÓN)
La galería API 20 E no debe ser utilizada directamente a
partir de muestras de origen clínico o de otro tipo.
Los microorganismos a identificar deben aislarse en una
primera fase sobre un medio de cultivo adecuado según
las técnicas usuales de bacteriología.
MODO DE EMPLEO
Test de la Oxidasa
El test Oxidasa debe ser realizado según las instrucciones
de utilización del fabricante, y constituye el test de
identificación n°21 a anotar en la hoja de resultados.
Preparación de la galería
xReunir fondo y tapa de una cámara de incubación y
repartir aproximadamente 5 ml de agua destilada o
desmineralizada [o cualquier
agua sin aditivos o
derivados susceptibles de liberar gases (Ej.: Cl2, CO2...)]
en los alvéolos para crear la atmósfera húmeda.
xInscribir la referencia de la cepa en la lengüeta lateral
de la cámara (no inscribir la referencia sobre la tapa, ya
que ésta puede quedar desplazada durante la
manipulación).
xSacar la galería de su envase.
xColocar la galería en la cámara de incubación.
NOTA: La galería API 20 E debe ser utilizada con las
Enterobacteriaceae y/o los bacilos Gram negativos no
exigentes. Los microorganismos exigentes y que
necesiten precauciones de manipulación particulares (Ej.:
Brucella y Francisella) no forman parte de la base de
datos API 20 E. Conviene usar otras técnicas para excluir
o confirmar su presencia.
Preparación del inóculo
xAbrir una ampolla de API NaCl 0,85% Medium (5 ml) o
una ampolla de API Suspension Medium (5 ml), como
se indica en el párrafo “Precauciones de utilización” de
la presente ficha técnica o utilizar un tubo que contenga
5 ml de agua fisiológica estéril o de agua destilada
estéril, sin aditivos.
xCon una pipeta o una PSIpipete, extraer una sola
colonia bien aislada sobre medio agar. Utilizar
preferentemente cultivos jóvenes (18-24 horas).
xRealizar una suspensión bacteriana homogeneizando
cuidadosamente las bacterias en el medio. Esta
suspensión debe ser utilizada inmediatamente después
de su preparación.
NOTA: La mayoría de las especies de Vibrio son
halófilas. En caso de sospechar la presencia de un Vibrio,
realizar la suspensión bacteriana en el API NaCl 0,85%
Medium.
Inoculación de la galería
xIntroducir la suspensión bacteriana en los tubos de la
galería con la ayuda de la misma pipeta (para evitar la
formación de burbujas en el fondo de los tubos,colocar
la punta de la pipeta o de la PSIpette sobre la pared de
la cúpula, inclinando ligeramente la cámara de
incubación hácia delante) :
- Para las pruebas CIT , VP y GEL , llenar el tubo y
la cúpula,
- Para las otras pruebas, llenar únicamente los tubos
(no las cúpulas),
- Para las pruebas : ADH, LDC, ODC, H2S, URE crear
una atmósfera anaerobia llenando la cúpula con
aceite de parafina.
xCerrar la cámara de incubación.
xIncubar a 36ºC r 2ºC durante 18-24 horas.
LECTURA E INTERPRETACIÓN
Lectura de la galería
xDespués de la incubación, la lectura de la galería debe
hacerse remitiéndose a la Tabla de Lectura.
xCaso de que 3 o más ensayos (test GLU + o -),
resultasen positivos, anotar en la hoja de resultados
todas las reacciones espontáneas y después revelar los
ensayos que necesitan la adición de reactivos:
- Prueba TDA: agregar una gota del reactivo TDA.
Uncolor marrón-rojizo indica una reacción positiva
que se anotará en la hoja de resultados.
- Prueba IND: agregar 1 gota del reactivo JAMES. Un
color rosado que se difumina en toda la cúpula indica
una reacción positiva, que se debe anotar en la hoja
de resultados.
- Prueba VP: agregar una gota de los reactivos VP 1 y
VP 2. Esperar un mínimo de 10 minutos. Un color
rosa o rojo indica una reacción positiva que se
anotará en la hoja de resultados. Una débil coloración
rosa que aparece después de 10 minutos debe ser
considerada como negativa.
NOTA: La prueba de investigación sobre la producción
de Indól debe ser realizada en último lugar, pues esta
reacción libera gases que pueden alterar la
interpretación de las otras pruebas de la galería. No
volver a colocar la tapa de la incubadora después de
agregar el reactivo.
xSi el número de pruebas positivas antes de añadir los
reactivos (incluyendo el ensayo GLU) es inferior a 3:
- Reincubar la galería 24 horas (r 2 horas)
suplementarias sin volver a añadir los reactivos.
- Revelar los ensayos que precisan adición de reactivos
(ver párrafo precedente).
- Para completar la identificación, puede ser útil realizar
ensayos complementarios (consultar el párrafo
"Identificación").
Interpretación
La identificación se obtiene a partir del perfil numérico:
xDeterminación del perfil numérico:
En la hoja de resultados, los tests están separados en
grupos de tres y se indica para cada uno un valor de 1,
2 ó 4. Como la galería API 20 E comporta 20 ensayos,
sumando al interior de cada grupo los valores que
corresponden a reacciones positivas, se obtiene un
perfil numérico de 7 cifras. (A la reacción de la oxidasa,
que constituye el test n° 21 se le asigna el valor 4,
cuando resulte positiva).
xIdentificación:
Se realiza a partir de la base de datos (V4.1).
* Con la ayuda del Catálogo Analítico:
-Localizar el perfil numérico en la lista de los perfiles.
* Con la ayuda del software de identificación apiweb TM:
- Introducir manualmente mediante el teclado el perfil
numérico de 7 cifras.
api® 20 E
07584G - es - 2007/06
Como además, en ciertos casos, el perfil de 7 cifras
resulta insuficientemente discriminante, es necesario
realizar los siguientes ensayos complementarios:
- Reducción de los nitratos en nitritos (NO2) y en
nitrógeno (N2): añadir una gota de los reactivos NIT 1 y
NIT 2 en el tubo GLU. Esperar de 2 a 5 minutos. Una
coloración roja indica una reacción positiva (NO2).
Una reacción negativa (coloración amarilla) puede de
verse a la producción de nitrógeno (eventualmente
señalado por la presencia de micro-burbujas): agregar
de 2 a 3 mg de reactivo Zn en la cúpula GLU. Después
de 5 minutos, si el color sigue siendo amarillo, indica
una reacción positiva (N2), que anotaremos en la hoja
de resultados. Si el color de la cúpula cambia a
naranja-rojo, la reacción es negativa, ya que los
nitratos aún presentes en el tubo han sido reducidos a
nitritos por el Zinc.
Esta reacción es interesante para los bacilos Gram
negativos y oxidasa positivos.
- Movilidad (MOB): inocular una ampolla API M Medium
(ver ficha técnica).
- Cultivo sobre agar MacConkey (McC: inocular un medio
MacConkey (ver ficha técnica).
- Oxidación de la glucosa (OF-O): inocular una ampolla
API OF Medium (ver ficha técnica).
- Fermentación de la glucosa (OF-F): inocular una
ampolla API OF Medium (ver ficha técnica).
Estos ensayos complementarios mencionados en la
introducción (codificación de perfiles) del Catálogo
Analítico pueden ser utilizados para constituir un perfil de
9 cifras, identificable mediante el software de
identificación.
En casos de discriminación débil, pueden proponerse
otros ensayos suplementarios. Consultar el software o
Catálogo Analítico.
NOTA: Por las mismas razones que en el ensayo de Indól
(ver la nota del párrafo "Lectura de la galería"), el ensayo de
reducción de los nitratos debe realizarse en último lugar.
CONTROL DE CALIDAD
Los medios, galerías y reactivos son sometidos a controles de calidad sistemáticos en las diferentes etapas de su
fabricación. Puede además realizarse un control bacteriológico de las diferentes pruebas de la galería por el usuario con
®
la cepa: 1. Escherichia coli ATCC 25922 de preferencia o una de las cepas siguientes:
ATCC 51331
ATCC 35659
ATCC 13047
ATCC:
American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.
ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND
1.
2.
3.
4.
5.
VP
GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA NO2 N2*
+
+
-
+
V
+
-
V
-
-
-
+
-
-
+
+
-
+
-
-
+
-
+
-
-
+
-
-
+
-
+
-
-
+
–
+
+
–
–
–
–
+
V
+
–
+
V
+
–
+
–
–
+
V
–
+
–
–
–
–
+
–
V
–
V
–
+
+
+
+
–
+
V
–
+
+
–
+
+
–
+
+
V
+
+
–
+
+
–
+
+
–
+
+
+
+
–
–
V
* El estado N2 (+) puede observarse para la cepa ATCC 13047 y la cepa ATCC 25922.
x Perfil obtenido después de 24-48 horas de incubación para la cepa ATCC 51331 a partir de colonias cultivadas sobre agar Trypcase
Soja + sangre.
x Perfiles obtenidos después de 18-24 horas de incubación para otras cepas, a partir de las colonias cultivadas sobre agar Trypcase
Soja + sangre.
x Suspensión bacteriana preparada en API NaCl 0,85% Medium.
El usuario es responsable de asegurarse de que el control de calidad ha sido realizado conforme a la legislación local
vigente.
LIMITACIONES DEL ENSAYO
xLos bacilos Gram negativos no fermentadores, aislados
en pacientes afectados de mucoviscidosis, pueden
x El sistema API 20 E está destinado a la identificación de las
generar perfiles bioquímicos atípicos susceptibles de
Enterobacteriaceae y de los bacilos Gram negativos no
alterar su identificación.
exigentes presentes en la base de datos (ver Tabla de
xSólo se deberán emplear cultivos puros que contengan
Identificación al final de esta ficha técnica) y sólo y
un sólo tipo de microorganismo.
exclusivamente a estos gérmenes. No puede ser utilizado
para identificar otros microorganismos o excluir su presencia.
RESULTADOS ESPERADOS
xPuede observarse discordancias con respecto a las
Consultar la Tabla de Identificación que se incluye al final
técnicas convencionales. Esto se debe a los diferentes
de esta ficha técnica para aclarar los resultados
principios utilizados en la técnicas API. También puede
esperados en las diferentes reacciones bioquímicas.
observarse desviaciones en los porcentajes, hecho que
PRESTACIONES
se explica por las variaciones del substrato.
xEnterobacteriaceae
xPara algunas especies (Ej.: Klebsiella o Proteus),
Han sido ensayadas 5.514 cepas de diversos orígenes,
ciertas reacciones inicialmente positivas del ensayo de
así como cepas de colección pertenecientes a especies
glucosa pueden transformarse en negativas (aparición
de la base de datos:
de una coloración azul-verde). En estos casos esta
- 92,80% de las cepas han sido identificadas
reacción debe considerarse como negativa. Los
correctamente (con o sin ensayos suplementarios).
porcentajes indicados en la Tabla de Identificación,
- 4,61% de las cepas no han sido identificadas.
toman en cuenta este tipo de fenómeno.
- 2,59% de las cepas se han identificado
xEn el caso de la identificación de Salmonella o Shigella,
incorrectamente.
debe realizarse una identificación serológica para
confirmar la identificación bacteriana.
api® 20 E
07584G - es - 2007/06
ELIMINACION DE LOS RESIDUOS
Eliminar los reactivos utilizados o no utilizados, así como
los materiales de un solo uso contaminados siguiendo los
procedimientos
relacionados
con
los
productos
infecciosos o potencialmente infecciosos.
Es responsabilidad de cada laboratorio la gestión de los
dresiduos y efluentes que produce, según la naturaleza y
peligrosidad, garantizando (o haciendo garantizar) su
tratamiento y eliminación según las reglamentaciones
aplicables.
TABLA DE LECTURA
xOtros bacilos Gram negativos no perniciosos:
Han sido ensayadas 2.386 cepas de diversos orígenes,
así como cepas de colección pertenecientes a especies
de la base de datos:
- 90,32% de las cepas han sido identificadas
correctamente (con o sin ensayos suplementarios).
- 6,16% de las cepas no han sido identificadas.
- 3,52% de las cepas se han identificado
incorrectamente.
TESTS
COMPONENTES
ACTIVOS
QTE
(mg/cúp)
ONPG
2-nitro-fenil-EDgalactopiranosida
0,223
ADH
L-arganina
LDC
RESULTADOS
REACCIONES/ENZIMAS
NEGATIVO
POSITIVO
E-galactosidasa (orto-nitrofenil-EDgalactoprianosidasa)
incoloro
amarillo (1)
1,9
Arginina-dihidrolasa
amarillo
rojo/anaranjado (2)
L-lisina
1,9
Lisina Decarboxilasa
amarillo
rojo/anaranjado (2)
ODC
L-ornitina
1,9
Ornitina Decarboxilasa
amarillo
rojo/anaranjado (2)
CIT
citrato trisódico
0,756
utilización del CITrato
verde pálido/amarillo
azul-verde/azul (3)
H2S
tiosulfato sódico
0,075
producción de H2S
incoloro/grisáceo
depósito negro/fin
liserado
URE
urea
0,76
UREasa
amarillo
rojo/anaranjado (2)
TDA / inmediato
TDA
L-triptófano
0,38
Triptofano DesAminasa
amarillo
marrón-rojizo
JAMES / inmediato
IND
L-triptófano
incoloro
verde pálido/ amarillo
0,19
producción de ÍNDole
rosa
Incoloro / rosa pálido
Rosa / rojo (5)
no difusión
difusión pigmento
negro
VP 1 + VP 2 / 10 min
VP
piruvato sódico
1,9
producción de acetoína
(Voges Proskauer)
GEL
Gelatina
(origen bovino)
0,6
Gelatinasa (GELatina)
GLU
D-glucosa
1,9
fermentación/oxidación (GLUcosa) (4)
azul/azul verdoso
amarillo/amarillo
grisáceo
MAN
D-manitol
1,9
fermentación/oxidación
(MANitol) (4)
azul/azul verdoso
amarillo
INO
inositol
1,9
(INOsitol) (4)
azul/azul verdoso
amarillo
SOR
D-sorbitol
1,9
(SORbitol) (4)
azul/azul verdoso
amarillo
RHA
L-ramnosa
1,9
(RHAmnosa) (4)
azul/azul verdoso
amarillo
SAC
D-sacarosa
1,9
(SACarosa) (4)
azul/azul verdoso
amarillo
MEL
D-melibiosa
1,9
(MELibiosa) (4)
azul/azul verdoso
amarillo
AMY
amigdalina
0,57
(AMYgdalina) (4)
azul/azul verdoso
amarillo
ARA
L-arabinosa
1,9
(ARAbinosa) (4)
azul/azul verdoso
amarillo
OX
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(ver ficha técnica
del test de oxidasa)
citocromo-OXidasa
(ver ficha técnica del test de oxidasa)
Un color amarillo muy ligero también implica resultado positivo.
La aparición de un color naranja tras 36-48 H de incubación debe considerarse negativa.
Lectura en la cúpula (zona aerobia).
La fermentación comienza en la parte inferior de los tubos, mientras que la oxidación empieza en la cúpula.
Una ligera coloración rosa, que aparece tras 10 minutos, debe ser leída como negativa.
xLas cantidades indicadas pueden ser ajustadas en función de los títulos de las materias primas.
xCiertas cúpulas contienen componentes de origen animal, notablemente peptonas.
api® 20 E
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ENSAYOS COMPLEMENTARIOS
TESTS
Reducción
de nitratos
tubo GLU
COMPONENTES
QTE
(mg/cúp)
nitrato potásico
0,076
RESULTADOS
REACCIONES/ENZIMAS
NEGATIVO
producción de NO2
amarillo
API M Medium o
microscopio
McC
Medio de
MacConkey
OF-F
OF-O
naranja-rojo
amarillo
inmóvil
móvil
ausencia
presencia
fermentación: bajo aceite
Verde
Amarillo
oxidación: al aire
verde
amarillo
movilidad
cultivo
Glucose
(API OF Medium)
rojo
Zn / 5 min
reducción al estado N2
MOB
POSITIVO
NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min
METODOLOGÍA
TABLA DE IDENTIFICACIÓN
BIBLIOGRAFÍA
TABLA DE SÍMBOLOS
p. I
p. II
p. IV
p. V
CLSI es una marca utilizada, depositada y/o registrada perteneciente a Clinical Laboratory and Standards Institute, Inc.
ATCC es una marca utilizada, depositada y/o registrada perteneciente a American Type Culture Collection.
bioMérieux® SA
673 620 399 RCS LYON
Tél. 33 (0)4 78 87 20 00
Fax 33 (0)4 78 87 20 90
bioMérieux, Inc
Box 15969,
Tél. (1) 919 620 20 00
Fax (1) 919 620 22 11
Impreso en Francia
bioMérieux, el logo azul, API, API 20 E y apiweb son marcas utilizadas, depositadas y/o registradas
pertenecientes a bioMérieux SA o a cada un ade sus filiales.
RE 20 100 / 20 160
®
07584G - it - 2007/06
20 E
IVD
Sistema di identificazione delle Enterobacteriaceae e di altri bacilli Gram negativi non esigenti
INTRODUZIONE E OBIETTIVO DEL TEST
API 20 E è un sistema standardizzato per l'identificazione
delle Enterobacteriaceae e di altri bacilli Gram negativi
non esigenti, che comprende 21 tests biochimici
miniaturizzati, oltre ad una base dati specifica. L'elenco
completo dei batteri che possono essere identificati con
questo sistema è riportato nella Tabella di Identificazione
alla fine di questa scheda tecnica.
PRINCIPIO
La galleria API 20 E è costituita da 20 microprovette
contenenti substrati disidratati. Le microprovette sono
inoculate con una sospensione batterica che ricostituisce i
terreni. Le reazioni prodotte durante il periodo di
incubazione si traducono in viraggi di colore spontanei o
rivelati dall'aggiunta di reattivi.
La lettura di queste reazioni si effettua servendosi della
Tabella di Lettura mentre l'identificazione si ottiene con
l'Indice Analitico o con il software di identificazione.
PRESENTAZIONE
Confezione da 25 test (cod. 20 100)
- 25 gallerie API 20 E
- 25 vaschette di incubazione
- 25 schede per la registrazione dei risultati
- 1 barretta di chiusura
- 1 scheda tecnica
Confezione da 100 test (cod. 20 160)
- 100 galeries API 20 E (4 x 25)
- 100 vaschette di incubazione
- 100 schede per la registrazione dei risultati
1 barretta di chiusura
1 scheda tecnica
COMPOSIZIONE DELLA GALLERIA
La composizione della galleria API 20 E è riportata nella
Tabella di Lettura di questa scheda tecnica.
REATTIVI E MATERIALE NECESSARI MA NON
FORNITI
Reattivi
- API NaCl 0,85% Medium, 5 ml (Cod. 20 230) o
API Suspension Medium, 5 ml (Cod. 20 150)
- Kit dei reattivi API 20 E (Cod. 20 120) o
reattivi: TDA (Cod. 70 402)
JAMES (Cod. 70 542)
VP 1 + VP 2 (Cod. 70 422)
NIT 1 + NIT 2 (Cod. 70 442)
- Reattivo Zn (Cod. 70 380)
- Ossidasi (Cod. 55 635*)
* Prodotto non commercializzato in alcuni Paesi :
utilizzare un reattivo equivalente
- Olio di paraffina (Cod. 70 100)
- Indice Analitico API 20 E (Cod. 20 190) o
Software di identificazione apiweb TM (Cod. 40 011)
(consultare bioMérieux)
bioMérieux® SA
Materiale
- Pipette o PSIpette
- Proteggi-fiala
- Porta-fiale
- Equipaggiamento generico
batteriologia
per
laboratorio
di
REATTIVI COMPLEMENTARI
- API OF Medium (cod. 50 110) :
Test per la determinazione del metabolismo fermentativo ed ossidativo del glucosio.
- API M Medium (cod. 50120) :
Test per la determinazione della motilità dei batteri aeroanaerobi.
AVVERTENZE E PRECAUZIONI
xPer diagnostica in vitro e per controllo microbiologico.
xEsclusivamente per uso professionale.
xQuesta confezione contiene dei componenti di origine
animale. Poiché i controlli sull’origine e/o sullo stato
sanitario degli animali non possono garantire in maniera
assoluta che questi prodotti non contengano nessun
agente patogeno trasmissibile, si raccomanda di
manipolarli con le precauzioni d’uso relative ai prodotti
potenzialmente infettivi (non ingerire, non inalare).
xI prelievi, le colture batteriche ed i prodotti seminati
devono essere considerati come potenzialmente infettivi
e devono essere manipolati in maniera appropriata. Le
tecniche di asepsi e le precauzioni d’uso per il gruppo
batterico studiato devono essere rispettate durante tutta
®
la manipolazione; fare riferimento a "CLSI M29-A,
Protection of Laboratory Workers From Occupationally
Acquired Infections; Approved Guideline - Revisione in
vigore". Per ulteriori informazioni sulle precauzioni di
manipolazione, consultare "Biosafety in Microbiological
and Biomedical Laboratories – CDC/NIH - Ultima
edizione", oppure fare riferimento alla normativa vigente
nel Paese.
xNon utilizzare i reattivi dopo la data di scadenza.
xPrima dell’uso assicurarsi che gli imballaggi dei differenti
componenti siano integri.
xNon utilizzare gallerie che abbiano subito una
alterazione fisica : cupole deformate, sacchetto del
disidratante aperto, …
xLe performance riportate di seguito sono state ottenute
seguendo il procedimento indicato nella scheda tecnica.
Qualsiasi deviazione dal procedimento indicato può
alterare i risultati.
xL’interpretazione dei risultati del test deve tener conto
del contesto clinico o di altra natura, dell’origine del
campione, degli aspetti macro e microscopici del ceppo
ed, eventualmente, dei risultati di altri esami, in
particolare dell’antibiogramma.
Italiano - 1
api® 20 E
07584G - it - 2007/06
CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE
Le gallerie sono contenute in una busta di alluminio
contenente dei sacchetti di disidratante.
Una volta aperta (*), la busta può essere richiusa,
utilizzando la barretta di chiusura contenuta nella
confezione, permettendo la conservazione delle gallerie
rimanenti insieme ai sacchetti del disidratante: inserire
l'estremità della busta tra le due parti della barretta e
bloccarla con cura per tutta la lunghezza. Le gallerie
possono essere conservate per 10 mesi, dopo l'apertura
della busta, a 2-8° C (o fino alla data di scadenza
indicata sulla confezione, se anteriore).
(*) Raccomandazione per l’apertura della busta di
alluminio: tagliare subito sotto la saldatura, mantenendo la
busta dritta, per evitare di danneggiare i sacchetti del
disidratante.
CAMPIONI (PRELIEVO E, PREPARAZIONE)
L’API 20 E non deve essere utilizzato direttamente su
campioni clinici o di altra natura.
I microrganismi da identificare devono dapprima essere
isolati su un terreno di coltura idoneo per la coltura delle
Enterobacteriaceae e/o dei bacilli Gram negativi non
esigenti con le normali tecniche batteriologiche.
PROCEDIMENTO
Test Ossidasi
Utilizzare il test secondo le istruzioni d’uso del
fabbricante. Costituisce il 21° test di identificazione :
annotare il risultato sulla scheda dei risultati.
Preparazione della galleria
xRiunire fondo e coperchio di una vaschetta di
incubazione e distribuire circa 5 ml di acqua distillata o
demineralizzata [o semplicemente dell'acqua senza
additivi o derivati che potrebbero liberare gas (ad es.
Cl2, CO2 ...)] nei pozzetti per creare un ambiente umido.
xAnnotare il riferimento del ceppo sulla linguetta laterale
della vaschetta. (Non annotare il riferimento sul
coperchio, in quanto potrebbe essere spostato al
momento della manipolazione).
xEstrarre la galleria dal suo involucro.
xMettere la galleria nella vaschetta di incubazione.
NOTA: l’API 20 E deve essere utilizzata con
Enterobacteriaceae e/o con bacilli Gram negativi non
esigenti. I microrganismi esigenti che necessitano di
particolari precauzioni di manipolazione (ad es. Brucella e
Francisella) non fanno parte della base dei dati dell’API
20 E. Si consiglia di utilizzare altre tecniche per
escluderne o confermarne la presenza.
Preparazione dell’inoculo
xAprire una fiala di API NaCl 0,85% Medium (5 ml) o una
fiala di API Suspension Medium (5 ml) come indicato al
paragrafo “Precauzioni” della scheda tecnica del
prodotto o utilizzare una provetta contenente 5 ml di
soluzione fisiologica sterile o di acqua distillata sterile,
senza additivi.
xServendosi di una pipetta o di una PSIpetta, prelevare
una sola colonia ben isolata su terreno agarizzato.
Utilizzare preferibilmente colonie giovani (18-24 ore).
xMescolare
accuratamente
per
realizzare
una
sospensione batterica omogenea. Questa sospensione
deve essere utilizzata immediatamente dopo la
preparazione.
NOTA: la maggior parte della specie di Vibrio sono alofile.
In caso si sospetti la presenza di Vibrio, eseguire la
sospensione batterica nell’API NaCl 0,85% Medium.
bioMérieux® SA
Inoculo della galleria
xIntrodurre la sospensione batterica nelle microprovette
della galleria con la stessa pipetta (per evitare la
formazione di bolle sul fondo delle microprovette
appoggiare la punta della pipetta o della PSIpetta sulla
parete laterale della cupola, inclinando leggermente in
avanti la vaschetta di incubazione) :
- per i test CIT , VP e GEL , riempire la
microprovetta e la cupola,
- per gli altri test, riempire unicamente le microprovette
(e non le cupole),
- per i test : ADH, LDC, ODC, H2S, URE creare
l’anaerobiosi riempiendo la loro cupola con olio di
paraffina.
xRichiudere la vaschetta di incubazione.
xIncubare a 36°C ± 2°C per 18-24 ore.
LETTURA E INTERPRETAZIONE
Lettura della galleria
xDopo l’incubazione, la lettura della galleria deve essere
effettuata servendosi della Tabella di Lettura.
xSe 3 o più test (test GLU + o –) sono positivi, annotare
sulla scheda di registrazione dei risultati tutte le reazioni
spontanee, quindi procedere con i tests che necessitano
dell'aggiunta di reattivi:
- Test TDA: aggiungere 1 goccia di reattivo TDA. Una
colorazione marrone-rossastro indica una reazione
positiva da annotare sulla scheda dei risultati.
- Test IND: aggiungere 1 goccia di reattivo JAMES. Una
colorazione rosa che si diffonde in tutta la cupola
indica una reazione positiva da annotare sulla scheda
dei risultati.
- Test VP: aggiungere 1 goccia dei reattivi VP 1 e VP 2.
Attendere almeno 10 minuti. Un colore rosa o rosso
indica una reazione positiva da annotare sulla scheda
dei risultati. Una debole colorazione rosa che appaia
dopo i 10 minuti deve essere considerata negativa.
NOTA: Il test della ricerca di produzione dell’indolo deve
essere eseguito alla fine, poiché questa reazione libera
gas che potrebbero alterare l’interpretazione di altri tests
della galleria. Non rimettere il coperchio dopo l’aggiunta
di questi reattivi.
xSe il numero di tests positivi (compreso il test GLU) è
inferiore a 3, non aggiungere i reattivi:
- Incubare nuovamente la galleria per altre 24 ore
(± 2 ore) senza aggiungere i reattivi.
- Rilevare i tests che necessitano dell'aggiunta di reattivi
(vedere il paragrafo precedente).
- Per completare l’identificazione può essere utile
eseguire dei test complementari (vedere il paragrafo
Identificazione).
Interpretazione
L'identificazione si ottiene partendo dal profilo numerico.
xDeterminazione del profilo numerico:
Sulla scheda dei risultati, i test sono separati in gruppi di
tre e ad ognuno viene attribuito un valore pari a
1, 2 o 4. Poichè la galleria API 20 E è costituita da 20
test, aggiungendo all'interno di ogni gruppo i valori
corrispondenti alle reazioni positive, si ottengono 7 cifre;
quando è positiva, alla reazione dell'ossidasi, che
costituisce il 21° test, si attribuisce il valore 4.
Italiano - 2
api® 20 E
07584G - it - 2007/06
NOTA : Il test di riduzione dei nitrati deve essere eseguito
alla fine per le stesse ragioni del test indolo (vedere la
nota del paragrafo "Lettura della galleria").
- Mobilità (MOB) : Inoculare una fiala di API M Medium
(vedere la scheda tecnica).
- Coltura su agar MacConkey (McC) : Seminare una
piastra di Mac Conkey (vedere la scheda tecnica).
- Ossidazione del glucosio (OF-O) : Inoculare una fiala di
API OF Medium (vedere la scheda tecnica).
- Fermentazione del glucosio (OF-F) : Inoculare una fiala
di API OF Medium (vedere la scheda tecnica).
xIdentificazione
Si ottiene partendo dalla base dei dati (V4.1)
* utilizzando l’Indice Analitico:
- Ricercare il profilo numerico nella lista dei profili.
* tramite il software di identificazione apiweb TM :
- Digitare sulla tastiera il profilo numerico a 7 cifre.
Tuttavia in alcuni casi il profilo a 7 cifre non è
sufficientemente discriminante e si rendono quindi
necessari i seguenti test :
- Riduzione dei nitrati in nitriti (NO2) ed in azoto (N2) :
aggiungere una goccia dei reattivi Nit 1 e NIT 2 nel
microtubo GLU. Attendere da 2 a 5 minuti. Una
colorazione rossa indica una reazione positiva (NO2).
Una reazione negativa (colorazione gialla) può essere
dovuta alla produzione di azoto (eventualmente
segnalata dalla presenza di microbolle) : aggiungere
2-3 mg di reattivo Zn nella cupola GLU. Se dopo
5 minuti un tubo rimane giallo indica una reazione
positiva (N2) da annotare sulle scheda dei risultati. Se
la cupola è arancio-rosso, la reazione è negativa: i
nitrati ancora presenti nel tubo sono stati ridotti a nitriti
dallo Zinco.
Questa reazione è interessante per i bacilli Gram
negativi ossdasi positivi.
Questi test complementari, indicati nell’introduzione
(Codifica dei profili) dell’Indice Analitico, possono essere
utilizzati per costituire unprofilo a 9 cifre, identificabile con
il software di identificazione.
In caso di debole discriminazione possono essere
proposti altri test supplementari. Far riferimento al
software di identificazione o all’Indice Analitico.
CONTROLLO DI QUALITA’
I terreni, le gallerie ed i reattivi sono sottoposti a controlli di qualità sistematici nelle diverse fasi del ciclo produttivo.
Inoltre l’utilizzatore può effettuare un controllo batteriologico dei test della galleria utilizzando il ceppo :
®
1. Escherichia coli ATCC 25922 di preferenza, oppure uno dei seguenti ceppi :
ATCC 51331
ATCC 13047
ATCC 35659
ONPG ADH LDC ODC
1.
2.
3.
4.
5.
+
+
+
–
+
–
–
+
–
–
+
V
–
–
+
+
–
V
+
–
CIT
–
V
+
V
+
H2S URE TDA IND VP
–
–
–
+
–
–
–
–
+
V
–
–
–
+
–
+
–
–
–
–
–
–
+
–
V
GEL
–
+
–
V
–
+
–
+
+
+
+
–
+
–
+
–
–
V
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
–
+
–
–
+
V
+
+
–
+
–
+
–
–
+
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
+
+
–
–
–
–
V
* Lo stadio N2 (+) può essere osservato per il ceppo ATCC 13047 e per il ceppo ATCC 25922.
x Profilo ottenuto dopo 24-48 ore di incubazione per il ceppo ATCC 51331, partendo da colonie isolate su agar Tripticasi Soia + sangue.
x Profili ottenuti dopo 18-24 ore di incubazione per gli altri ceppi, partendo da colonie isolate su agar Tripticasi Soia + sangue.
x Sospensione batterica preparata nell’API NaCl 0.85 % Medium.
E’ responsabilità dell’utilizzatore assicurarsi che il controllo di qualità corrisponda a quanto previsto dalla legislazione
vigente.
LIMITI DEL METODO
x Il sistema API 20 E è destinato all’identificazione delle
Enterobacteriaceae e dei bacilli Gram negativi non
esigenti inclusi nella base dei dati (vedere la Tabella di
Identificazione alla fine della scheda tecnica) e solo di
questi. Non può essere utilizzato per identificare altri
microrganismi o per escluderne la presenza.
xE’ possibile osservare delle discordanze rispetto alle
tecniche tradizionali a causa delle differenze di principio
delle reazioni utilizzate con la tecnica API. Possono
anche essere osservati degli scarti di percentuale che
dipendono da variazione di substrato.
xPer alcune specie (ad es. Klebsiella o Proteus), reazioni
del test glucosio inizialmente positive possono talvolta
diventare negative (comparsa di una colorazione bluverde). In questi casi la reazione deve essere
considerata negativa. Le percentuali indicate nella
Tabella di Identificazione tengono conto di questo tipo di
fenomeno.
xNel caso di identificazione di Salmonella o Shigella è
necessario effettuare un’identificazione sierologica per
confermare l’identificazione batterica.
bioMérieux® SA
xI bacilli Gram negativi non fermentanti, isolati da pazienti
affetti da mucoviscidosi, possono generare profili
biochimici atipici che possono alterare la loro
identificazione.
xDevono essere utilizzate unicamente colture pure
contenenti un solo tipo di microrganismo.
RISULTATI ATTESI
Per i valori attesi per le differenti reazioni biochimiche far
riferimento alla Tabella di Identificazione alla fine della
scheda tecnica.
PERFORMANCE
x Enterobacteriaceae :
Sono stati testati 5514 ceppi di diversa origine e ceppi di
collezione appartenenti a quelli inclusi nella base dei
dati:
- il 92,80 % dei ceppi è stato correttamente identificato
(con o senza test complementari).
- il 4,61 % dei ceppi non è stato identificato.
- il 2,59 % dei ceppi non è stato identificato correttamente.
Italiano - 3
api® 20 E
07584G - it - 2007/06
xaltri bacilli Gram negativi non esigenti :
Sono stati testati 2386 ceppi di diversa origine e ceppi
di collezione appartenenti a quelli inclusi nella base dei
dati:
- il 90,32 % dei ceppi è stato correttamente identificato
(con o senza test complementari).
- il 6,16 % dei ceppi non è stato identificato.
- il 3,52 % dei ceppi non è stato identificato correttamente.
SMALTIMENTO DEI RIFIUTI
Smaltire i reattivi utilizzati o non utilizzati ed i materiali
monouso contaminati seguendo le procedure relative ai
prodotti infettivi o potenzialmente infettivi.
E’ responsabilità di ogni laboratorio gestire i rifiuti e gli
effluenti prodotti a seconda della loro natura e della loro
pericolosità ed assicurarne (o farne assicurare) il
trattamento e lo smaltimento conformemente alla
legislazione vigente.
TABELLA DI LETTURA
TEST
SUBSTRATI
Q.TA’
(mg/cup.)
ONPG
2-nitrofenil-ßDgalattopiranoside
0,223
ADH
L-arginina
LDC
RISULTATI
REAZIONI/ENZIMI
NEGATIVO
POSITIVO
ß-galattosidasi
(Orto-NitroFenil-ßDGalattopiranoside)
incolore
giallo (1)
1,9
Arginina Deidrolasi
giallo
rosso / arancio (2)
L-lisina
1,9
Lisina DeCarbossilasi
giallo
rosso / arancio (2)
ODC
L-ornitina
1,9
Ornitina DeCcarbossilasi
giallo
rosso / arancio (2)
CIT
citrato trisodico
0,756
utilizzazione del CITrato
verde chiaro / giallo
blu-verde / blu (3)
H2S
tiosolfato di sodio
0,075
produzione di H2S
incolore / grigiastro
deposito nero / orlo sottile
URE
urea
0,76
UREasi
giallo
rosso / arancio (2)
TDA
L-triptofano
0,38
Triptofano DeAminasi
giallo
TDA / immediato
marrone-rossastro
JAMES / immediato
incolore
verde chiaro / giallo
IND
L-triptofano
0,19
produzione di INDolo
VP
piruvato di sodio
1,9
produzione di acetoina
(Voges Proskauer)
GEL
gelatina
(origine bovina)
0,6
GELatinasi
GLU
D-glucosio
1,9
fermentazione / ossidazione
(GLUcosio) (4)
MAN
D-mannitolo
1,9
INO
inositolo
SOR
rosa
VP 1 + VP 2 / 10 min.
Incolore / rosa chiaro
rosa / rosso (5)
nessuna diffusione
diffusione del
pigmento nero
blu / blu-verde
giallo / giallo grigio
(MANnitolo) (4)
blu / blu-verde
giallo
1,9
(INOsitolo) (4)
blu / blu-verde
giallo
D-sorbitolo
1,9
(SORbitolo) (4)
blu / blu-verde
giallo
RHA
L-ramnosio
1,9
(Ramnosio) (4)
blu / blu-verde
giallo
SAC
D-saccarosio
1,9
(SACcarosio) (4)
blu / blu-verde
giallo
MEL
D-melibioso
1,9
(MELibiosio) (4)
blu / blu-verde
giallo
AMY
amigdalina
0,57
(AMigdalina) (4)
blu / blu-verde
giallo
ARA
L-arabinosio
1,9
(ARAbinosio) (4)
blu / blu-verde
giallo
OX
(vedere scheda tecnica del test citocromo-Ossidasi
ossidasi)
(vedere scheda tecnica del test ossidasi)
(1) Una leggerissima colorazione gialla è comunque positiva.
(2) Se dopo 36-48 ore di incubazione appare una colorazione arancione, la reazione deve essere considerata negativa.
(3) Lettura nella cupola (zona aerobia).
(4) La fermentazione comincia nella parte inferiore delle microprovette, mentre l'ossidazione comincia nella cupola.
(5) Una debole colorazione rosa che appaia dopo oltre 10 minuti deve essere considerata negativa.
xLe quantità indicate possono essere aggiustate in funzione dei titoli delle materie prime.
xAlcune cupole contengono dei componenti di origine animale, in particolare dei peptoni.
bioMérieux® SA
Italiano - 4
api® 20 E
07584G - it - 2007/06
TEST COMPLEMENTARI
TESTS
SUBSTRATI
Q.TA’
(mg/cup
RISULTATI
NEGATIVO
POSITIVO
NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min.
Riduzione
dei nitrati
nitrato di potassio
provetta
GLU
produzione di NO2
giallo
0,076
API M Medium o
microscopio
McC
Terreno di MacConkey
glucosio (API OF Medium)
rosso
Zn / 5 min.
riduzione allo stadio N2
MOB
OF-F
OF-O
REAZIONI/ENZIMI
-
MOBilità
-
coltura
--
fermentazione : sotto olio
ossidazione : all’aria
PROCEDIMENTO
TABELLA DI IDENTIFICAZIONE
BIBLIOGRAFIA
TABELLA DEI SIMBOLI
arancione-rosso
giallo
MOBilità
mobile
coltura
presenza
fermentazione : sotto olio
giallo
ossidazione : all’aria
giallo
p. I
p. II
p. IV
p. V
CLSI è un marchio utilizzato, depositato e/o registrato di proprietà di Clinical and Laboratory Standards Institute Inc.
ATCC è un marchio utilizzato, depositato e/o registrato di proprietà di American Type Culture Collection.
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SA o di una delle sue filiali.
20 100 / 20 160
®
07584G - pt - 2007/06
20 E
IVD
Sistema de identificação das Enterobacteriaceae e outros bacilos Gram negativos não fastidiosos
INTRODUÇÃO E OBJECTIVO DO TESTE
O API 20 E é um sistema padronizado para a
identificação das Enterobacteriaceae e outros bacilos
Gram negativos não fastidiosos, engloba 21 mini-testes
bioquímicos e uma base de dados. A lista completa das
bactérias possíveis de identificar com este sistema
encontra-se no Quadro de Identificação no final deste
folheto informativo.
PRINCÍPIO
A galeria API 20 E engloba 20 microtubos que contêm os
substratos desidratados. Os microtubos são inoculados
com uma suspensão bacteriana que reconstitui os testes.
As reacções produzidas durante o período de incubação
traduzem-se por viragens espontâneas de cor ou
reveladas através da adição de reagentes.
A leitura destas reacções efectua-se consultando o
Quadro de Leitura e a identificação obtém-se com o
Catálogo Analítico ou com um programa de identificação.
APRESENTAÇÃO
Embalagem de 25 testes (ref. 20 100)
- 25 galerias API 20 E
- 25 caixas de incubação
- 25 fichas de resultados
- 1 barra para fechar
- 1 folheto informativo
Embalagem de 100 testes (ref. 20 160)
- 100 galerias API 20 E (4x25 galerias)
- 100 caixas de incubação
- 100 fichas de resultados
1 barra para fechar
1 folheto informativo
COMPOSIÇÃO DA GALERIA
A composição da galeria API 20 E está indicada no
Quadro de Leitura deste folheto informativo.
REAGENTES E MATERIAIS NECESSÁRIOS MAS NÃO
FORNECIDOS
Reagentes
- API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (Ref. 20 230) ou
- API 20 E embalagem de reagentes (Ref. 20 120) ou
reagentes individuais: TDA (Ref. 70 402)
JAMES (Ref. 70 542)
VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422)
NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)
- Reagente Zn (Ref. 70 380)
* referência não comercializada em alguns países:
utilizar um reagente equivalente.
- Óleo de parafina (Ref. 70 100)
- Catálogo Analítico API 20 E (Ref. 20 190) ou
TM
programa de identificação apiweb (Refª 40 011)
(consultar a bioMérieux)
bioMérieux® SA
Materiais
- Pipetas ou PSIpetas
- Protector de ampola
- Suporte para ampolas
- Equipamento geral de laboratório de bacteriologia
REAGENTES COMPLEMENTARES:
- API OF Medium (Ref. 50 110):
Teste para a determinação do metabolismo
fermentativo ou oxidativo da glucose.
Teste para a determinação da mobilidade das
bactérias aero-anaeróbias.
PRECAUÇÕES DE UTILIZAÇÃO
xPara diagnóstico in vitro e para controlo
microbiológico.
xUnicamente para uso profissional.
xEste dispositivo contém componentes de origem animal.
O controlo da origem e/ou estado sanitário dos animais
não podem garantir de maneira absoluta que estes
produtos não contenham nenhum agente patogénico
transmissível, é recomendado manipulá-los com as
precauções de utilização relativas aos produtos
potencialmente infecciosos (não ingerir; não inalar).
xAs amostras, culturas bacterianas e produtos semeados
devem ser considerados potencialmente infecciosos e
manipulados de maneira apropriada. As técnicas
assépticas e as precauções habituais de manipulação
para o grupo bacteriano estudado devem ser
respeitadas durante toda a manipulação; consultar o
"CLSI M29A, Protection of Laboratory Workers from
Occupationally Aqcuired Infections; Approved Guideline
– Revisão em vigor". Para informações complementares
sobre as precauções de manipulação, consultar o
"Biosafety
in
Microbiological
and
Biomedical
Laboratories, CDC/NIH – Última edição" ou a
regulamentação em vigor no país de utilização.
xNão utilizar os reagentes após a data de validade.
xAntes da utilização, assegurar-se de que a embalagem
dos diferentes componentes não está danificada.
xNão utilizar galerias que tenham sofrido uma alteração
física: cúpula deformada, saqueta/sachet desidratante
aberta, …
xO comportamento funcional apresentado foi obtido com
o procedimento indicado neste folheto informativo.
Qualquer desvio ao procedimento pode alterar os
resultados.
xA interpretação dos resultados do teste deve ser
efectuada tendo em conta o contexto clínico ou outro, a
origem da amostra, os aspectos macro e microscópicos
e, eventualmente, os resultados de outros testes, em
especial, do antibiograma.
Português - 1
api® 20 E
07584G - pt - 2007/06
CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO
As galerias apresentam-se numa bolsa de alumínio com
saquetas/sachets desidratantes.
Depois da abertura da bolsa (*), conservar as galerias
com os desidratantes fechando-a com a barra para fechar
(junta na embalagem) : colocar a extremidade da bolsa
entre as duas peças da barra e pressioná-las
cuidadosamente, em todo o seu comprimento. As galerias
podem ser assim conservadas durante 10 meses após a
abertura da bolsa, a 2º - 8° C (ou até à data de validade
indicada na embalagem, se esta for anterior).
(*) Recomendação para abrir a bolsa: cortar mesmo por
baixo da soldadura, mantendo a bolsa direita para evitar a
danificação das saquetas/sachets desidratantes.
Inoculação da galeria
xIntroduzir a suspensão bacteriana nos tubos da galeria
utilizando a mesma pipeta (para evitar a formação de
bolhas no fundo dos tubos, colocar a ponta da pipeta ou
da PSIpeta no lado da cúpula, inclinando ligeiramente a
caixa de incubação para a frente):
- Para os testes CIT , VP e GEL , encher o tubo e
a cúpula,
- Para os outros testes, encher apenas os tubos (e não
as cúpulas),
- Para os testes : ADH, LDC, ODC, H2S, URE criar uma
anerobiose enchendo a cúpula com óleo de parafina.
xFechar a caixa de incubação.
xIncubar a 36° C ± 2° C durante 18-24 horas.
AMOSTRAS (COLHEITA/COLETA E PREPARAÇÃO)
LEITURA E INTERPRETAÇÃO
Leitura da galeria
xApós incubação, a leitura da galeria deve efectuar-se
consultando o Quadro de Leitura.
xSe 3 ou mais testes (teste GLU + ou –) forem positivos,
anotar na ficha de resultados todas as reacções
espontâneas e em seguida revelar os testes que
necessitam da adição de reagentes:
- Teste TDA : adicionar 1 gota de reagente TDA. Uma
cor castanha-avermelhada indica uma reacção
positiva a anotar na ficha de resultados.
- Teste IND : adicionar 1 gota de reagente JAMES.
Uma cor rosa difundida em toda a cúpula indica uma
reacção positiva a anotar na ficha de resultados.
- Teste VP : adicionar 1 gota dos reagentes VP 1 e
VP 2. Esperar, no mínimo, 10 minutos. Uma cor rosa
ou vermelha indica uma reacção positiva a anotar na
ficha de resultados. Uma fraca coloração rosa depois
de 10 minutos deve ser considerada negativa.
NOTA: O teste para detectar a produção de indol deve
ser efectuado por último, visto que esta reacção liberta
gases que podem alterar a interpretação de outros
testes da galeria. Não colocar novamente a tampa de
incubação depois da adição do reagente.
xSe o número de testes positivos aos quais foram
adicionados reagentes (incluindo o teste GLU) for
inferior a 3 :
- Reincubar a galeria durante mais 24 horas (± 2 horas)
sem adicionar os reagentes.
- Revelar os testes que necessitem da adição de
reagentes (consultar o parágrafo anterior).
- Para completar a identificação, pode ser útil efectuar
testes complementares (consultar o parágrafo
Identificação).
O API 20 E não deve ser utilizado directamente a partir
de amostras de origem clínica ou outras.
Os microrganismos a identificar devem primeiro ser
isolados num meio de cultura adaptado à cultura das
Enterobacteriaceae e/ou dos bacilos Gram negativos não
fastidiosos segundo as técnicas habituais de
bacteriologia.
PROCEDIMENTO
Teste oxidase
O teste oxidase deve ser efectuado segundo as
instruções do fabricante, constitui o 21º teste de
identificação a anotar na ficha de resultados.
Preparação da galeria
xJuntar fundo e tampa de uma caixa de incubação e
distribuir cerca de 5 ml de água destilada estéril ou
desmineralizada [ou qualquer água sem aditivos ou
derivados susceptíveis de libertarem gases (Ex : Cl2,
CO2 ...)] nos alvéolos para criar uma atmosfera húmida.
xInscrever a referência da estirpe/cepa na lingueta lateral
da caixa. (Não inscrever a referência na tampa, esta
pode ser deslocada durante a manipulação).
xTirar a galeria da embalagem.
xColocar a galeria na caixa de incubação.
NOTA : O API 20 E deve ser utilizado com as
Enterobacteriaceae e/ou os bacilos Gram negativos não
fastidiosos. Os microrganismos fastidiosos, exigentes e
que necessitam das precauções de manipulação
especiais (ex. Brucella e Francisella) não fazem parte da
base de dados API 20 E. Convém utilizar outras técnicas
para excluir ou confirmar a sua presença.
Preparação do inóculo
xAbrir uma ampola de API NaCl 0,85 % Medium (5 ml)
ou uma ampola de API Suspension Medium (5 ml)
como indicado no parágrafo "Precauções" do folheto
informativo do produto, ou utilizar um tubo contendo
5 ml de soro fisiológico estéril ou água destilada estéril,
sem aditivos.
xCom uma pipeta ou um PSIpeta, colher/coletar uma
única colónia bem isolada no meio gelosado. Utilizar
preferencialmente culturas recentes (18-24 horas).
xEfectuar uma suspensão bacteriana homogeneizando
cuidadosamente as bactérias no meio.
Esta suspensão deve ser utilizada extemporaneamente.
NOTA: a maioria das espécies de Vibrio são halófilas. Se
se suspeitar de um Vibrio, efectuar a suspensão
bacteriana em API NaCl 0,85 % Medium.
bioMérieux® SA
Interpretação
A identificação obtém-se a partir do perfil numérico.
xDeterminação do perfil numérico:
Na ficha de resultados, os testes são separados por
grupos de três e um valor 1, 2 ou 4 é indicado para
cada um. A galeria API 20 E engloba 20 testes,
adicionando no interior de cada grupo os valores que
correspondem às reacções positivas, obtém-se 7
algarismos; a reacção da oxidase que constitui o 21º
teste é assinalada com o valor 4 se for positiva.
xIdentificação:
É efectuada a partir da base de dados (V4.1)
* com o Catálogo Analítico:
- Procurar o perfil numérico na lista dos perfis.
TM
* com o programa de identificação apiweb :
- Introduzir manualmente no teclado o perfil numérico
com 7 algarismos.
Português - 2
api® 20 E
07584G - pt - 2007/06
Nalguns casos, pode haver necessidade de efectuar
testes complementares por o perfil de 7 algarismos não
ser iuficientemente discriminativo:
- Redução dos nitratos em nitritos (NO2) e em azoto (N2) :
adicionar 1 gota dos reagentes NIT 1 e NIT 2 no tubo
GLU. Esperar 2 a 5 minutos. Uma cor vermelha indica
uma reacção positiva (NO2). Uma reacção negativa
(coloração amarela) pode ser devida à produção de
azoto (eventualmente assinalada pela presença de
bolhas mínimas): adicionar 2 a 3 mg de reagente Zn na
cúpula GLU. Após 5 minutos, se um tubo permanecer
amarelo indica uma reacção positiva (N2) a anotar na
ficha de resultados. Se a cúpula estiver laranjavermelha, a reacção é negativa, os nitratos ainda
presentes no tubo foram reduzidos a nitritos pelo Zinco.
Esta reacção é especialmente interessante para os
bacilos Gram negativos oxidase positiva.
NOTA: Pelas mesmas razões que as do teste indol
(consultar a nota do parágrafo "Leitura da galeria"), o
teste de redução dos nitratos deve efectuar-se por último.
- Mobilidade (MOB) : Inocular uma ampola de API M
Medium (cfr folheto informativo).
- Cultura em gelose MacConkey (McC): Semear um meio
de Mac Conkey (cfr folheto informativo).
- Oxidação da glucose (OF-O) : Inocular uma ampola de
API OF Medium (cfr folheto informativo).
- Fermentação da glucose (OF-F) : Inocular uma ampola
de API OF Medium (cfr folheto informativo).
Estes testes complementares, mencionados na
introdução (Código dos perfis) do Catálogo Analítico,
podem ser utilizados para constituir um perfil de 9
algarismos, identificável com o programa de identificação.
Podem ser propostos testes suplementares se houver
fraca discriminação. Consultar o programa ou o Catálogo
Analítico.
CONTROLO DE QUALIDADE
Os meios, galerias e reagentes são objecto de controlos de qualidade sistemáticos nas diferentes etapas do seu fabrico.
Além disso, o utilizador pode efectuar um controlo bacteriológico dos testes da galeria, preferencialmente com a
estirpe/cepa 1. Escherichia coli ATCC 25922 ou com uma das estirpes/cepas seguintes:
ATCC 51331
ATCC 13047
ATCC 35659
ONPG ADH LDC ODC
1.
2.
3.
4.
5.
+
+
+
–
+
–
–
+
–
–
+
V
–
–
+
+
–
+
+
–
CIT
–
V
+
V
+
H2S URE TDA IND VP
–
–
–
+
–
–
–
–
+
V
–
–
–
+
–
+
–
–
–
–
GEL
–
–
+
–
V
–
+
–
V
–
+
–
+
+
+
+
–
+
–
+
–
–
–
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
–
+
–
–
+
V
+
+
–
+
–
+
–
–
+
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
+
+
–
–
–
–
–
* O estado N2 (+) pode ser observado para a estirpe/cepa ATCC 13047 e a estirpe/cepa ATCC 25922.
x Perfil obtido após 24-48 H de incubação para a estirpe/cepa ATCC 51331, a partir de colónias cultivadas em gelose Trypcase Soja +
sangue.
x Perfis obtidos após 18-24 H de incubação para as outras estirpes/cepas, a partir de colónias cultivadas em gelose Trypcase Soja +
sangue.
x Suspensão bacteriana preparada em API NaCl 0,85 % Medium.
É da responsabilidade do utilizador assegurar que o controlo de qualidade é efectuado em conformidade com a
legislação local em vigor.
LIMITES DO TESTE
xO sistema API 20 E destina-se à identificação das
Enterobacteriaceae e dos bacilos Gram negativos não
fastidiosos presentes na base de dados (consultar o
Quadro de Identificação no final do folheto informativo)
e apenas a estes. Não pode ser utilizado para identificar
outros microrganismos ou excluir a sua presença.
xPodem observar-se discordâncias em relação às
técnicas convencionais devidas às diferenças de
princípio das reacções utilizadas em técnica API.
Podem também observar-se desvios de percentagens
causados pelas variações de substrato.
xPara algumas espécies (ex. Klebsiella ou Proteus), as
reacções do teste glucose inicialmente positivas podem
tornar-se negativas (aparecimento de uma coloração
azul-esverdeada). Neste caso, esta reacção deve ser
considerada negativa. As percentagens indicadas no
Quadro de Identificação têm em consideração este
género de fenómeno.
xNo caso de identificação de Salmonella ou Shigella,
deve efectuar-se uma identificação serológica para
confirmar a identificação bacteriana.
bioMérieux® SA
xOs bacilos Gram negativos não fermentadores, isolados
de doentes com mucoviscidose, podem criar perfis
bioquímicos atípicos susceptíveis de alterar a sua
identificação.
xDevem apenas ser utilizadas as culturas puras que
contenham um único tipo de microrganismo.
RESULTADOS ESPERADOS
Consultar o Quadro de Identificação no final deste folheto
informativo para saber os resultados esperados para as
diferentes reacções bioquímicas.
COMPORTAMENTO FUNCIONAL
Foram testadas 5514 estirpes/cepas de diversas
origens e estirpes/cepas de colecção pertencentes às
espécies da base de dados:
- 92,80 % das estirpes/cepas foram correctamente
identificadas (com ou sem testes complementares).
- 4,61 % das estirpes/cepas não foram identificadas.
- 2,59 % das estirpes/cepas foram mal identificadas.
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api® 20 E
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xOutros bacilos Gram negativos não fastidiosos:
Foram testadas 2386 estirpes/cepas de diversas
origens e estirpes/cepas de colecção perctencentes às
espécies da base de dados:
- 90,32 % das estirpes/cepas foram correctamente
identificadas (com ou sem testes complementares).
- 6,16 % das estirpes/cepas não foram identificadas.
- 3,52 % das estirpes/cepas foram mal identificadas.
ELIMINAÇÃO DE RESÍDUOS
Eliminar os reagentes utilizados ou não utilizados bem
como os materiais descartáveis contaminados em
conformidade com os procedimentos relativos aos
produtos infecciosos ou potencialmente infecciosos.
É da responsabilidade de cada laboratório gerir os
resíduos e os efluentes que este produz consoante a sua
natureza e o seu perigo, e assegurar (ou fazer assegurar)
o tratamento e a eliminação em conformidade com as
regulamentações aplicáveis.
QUADRO DE LEITURA
RESULTADOS
TESTES
COMPONENTES
ACTIVOS
QTD
(mg/cúp.)
ONPG
2-nitrofenil-ßDgalactopiranosida
0,223
ADH
L-arginina
1,9
Arginina DiHidrolase
amarelo
vermelho / alaranjado (2)
LDC
L-lisina
1,9
Lisina DesCarboxilase
amarelo
ODC
CIT
REACÇÕES/ENZIMAS
ß-galactosidase
(Orto Nitrofenil-ßDGalactopiranosidase)
L-ornitina
1,9
Citrato de sódio
0,756
Utilização do CITrato
Ornitina DesCarboxilase
NEGATIVO
POSITIVO
incolor
amarelo (1)
amarelo
verde pálido / amarelo
azul-esverdeado / azul (3)
H2S
Tiosulfato de sódio
0,075
Produção de H2S
incolor / acinzentado
depósito negro / orla fina
URE
Ureia
0,76
UREase
amarelo
TDA
L-triptofano
0,38
Triptofano DesAminase
amarelo
TDA / imediato
castanho-avermelhado
JAMES / imediato
IND
L-triptofano
incolor
verde pálido / amarelo
rosa
0,19
Produção de INDol
Incolor / rosa pálido
rosa / vermelho (5)
difusão do pigmento
negro
VP 1 + VP 2 / 10 min
VP
Piruvato de sódio
1,9
Produção de acetoína
(Voges Proskauer)
GEL
Gelatina
(origem bovina)
0,6
Gelatinase (GELatina)
não difusão
GLU
D-glucose
1,9
fermentação / oxidação
(GLUcose) (4)
azul / azul-esverdeado
amarelo / amarelo
acinzentado
MAN
D-manitol
1,9
(MANitol) (4)
amarelo
INO
Inositol
1,9
(INOsitol) (4)
amarelo
SOR
D-sorbitol
1,9
(SORbitol) (4)
amarelo
RHA
L-ramnose
1,9
(RAmnose) (4)
Azul / azul-esverdeado
amarelo
SAC
D-sacarose
1,9
(SACarose) (4)
amarelo
MEL
D-melibiose
1,9
(MELibiose) (4)
azul / azul esverdeado
amarelo
AMY
Amigdalina
0,57
Fermentação / oxidação
(AMIgdalina) (4)
amarelo
ARA
L-arabinose
1,9
(ARAbinose) (4)
Azul / azul-esverdeado
amarelo
OX
(consultar o folheto informativo do
teste oxidase)
Citocromo-Oxidase
(consultar o folheto informativo do teste oxidase)
(1) Uma cor amarela muito ligeira é também positiva.
(2) Uma cor laranja após 36-48 H de incubação deve ser considerada negativa.
(3) Leitura na cúpula (zona aeróbia).
(4) A fermentação começa na parte inferior dos tubos, a oxidação começa na cúpula.
(5) Uma ligeira coloração rosa depois de 10 minutos deve ser considerada negativa.
xAs quantidades indicadas podem ser ajustadas em função dos títulos das matérias-primas.
x Algumas cúpulas contêm componentes de origem animal, nomeadamente, peptonas.
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TESTES COMPLEMENTARES
TESTES
COMPONENTES
ACTIVOS
QTD
(mg/cúp.)
RESULTADOS
REACÇÕES/ENZIMAS
POSITIVO
NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min
Redução
dos
nitrato de potássio
nitratos
tubo GLU
0,076
produção de NO2
amarelo
vermelho
Zn / 5 min
redução ao estado N2
MOB
API M Medium ou
microscópio
McC
Meio de MacConkey
cultura
fermentação: em óleo
oxidação: no ar
OF-F
OF-O
NEGATIVO
laranja-vermelho
amarelo
imóvel
móvel
ausência
presença
verde
verde
amarelo
amarelo
mobilidade
PROCEDIMENTO
QUADRO DE IDENTIFICAÇÃO
BIBLIOGRAFIA
QUADRO DOS SÍMBOLOS
p. I
p. II
p. IV
p. V
CLSI é uma marca utilizada, depositada e/ou registada, propriedade exclusiva da Clinical and Laboratory Standards Institute Inc.
ATCC é uma marca utilizada, depositada e/ou registada, propriedade exclusiva da American Type Culture Collection.
Brasil: Distribuído por bioMérieux Brasil, S.A. - Estrada do Mapuá, 491 - Jacarepaguá - R.J. - CEP 22710-261
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Atendimento ao Consumidor Tel.: 0800-264848
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VIDE EMBALAGEM
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Ǿ ĲĮȚȞȓĮ API 20 E ĮʌȠĲİȜİȓĲĮȚ Įʌȩ 20 µȚțȡȠıȦȜȒȞİȢ ʌȠȣ
ʌİȡȚȑȤȠȣȞ ĮĳȣįĮĲȦµȑȞĮ ȣʌȠıĲȡȫµĮĲĮ. ǹȣĲȑȢ ȠȚ
İȟİĲȐıİȚȢ İȞȠĳșĮȜµȓȗȠȞĲĮȚ µİ ȕĮțĲȘȡȚĮțȩ İȞĮȚȫȡȘµĮ ʌȠȣ
ʌȡȠțĮȜİȓ ĮȞĮıȪıĲĮıȘ ĲȦȞ ȣȜȚțȫȞ. ȀĮĲȐ ĲȘ įȚȐȡțİȚĮ ĲȘȢ
İʌȫĮıȘȢ, Ƞ µİĲĮȕȠȜȚıµȩȢ ʌȡȠțĮȜİȓ ȤȡȦµĮĲȚțȑȢ
µİĲĮȕȠȜȑȢ ʌȠȣ İȓĲİ İȓȞĮȚ ĮȣĲȩµĮĲİȢ Ȓ ĮʌȠțĮȜȪʌĲȠȞĲĮȚ µİ
ĲȘȞ ʌȡȠıșȒțȘ ĲȦȞ ĮȞĲȚįȡĮıĲȘȡȓȦȞ.
ȅȚ ĮȞĲȚįȡȐıİȚȢ įȚĮȕȐȗȠȞĲĮȚ ıȪµĳȦȞĮ µİ ĲȠȞ ȆȓȞĮțĮ
ǹȞȐȖȞȦıȘȢ țĮȚ Ș ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘ ȖȓȞİĲĮȚ µİ ĮȞĮĳȠȡȐ ıĲȠȞ
ǹȞĮȜȣĲȚțȩ ȀĮĲȐȜȠȖȠ ȆȡȠĳȓȜ Ȓ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȫȞĲĮȢ ĲȠ
ȜȠȖȚıµȚțȩ ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘȢ.
ȆǼȇǿǼȋȅȂǼȃȅ ȉǾȈ ȈȊȈȀǼȊǹȈǿǹȈ
ȈȣıțİȣĮıȓĮ ȖȚĮ 25 İȟİĲȐıİȚȢ (ref. 20 100)
- 25 ĲĮȚȞȓİȢ API 20 E
- 25 țȣĲȓĮ İʌȫĮıȘȢ
- 25 ĳȪȜȜĮ ĮʌȠĲİȜİıµȐĲȦȞ
- 1 ıĳȡȐȖȚıµĮ ĲȪʌȠȣ țȜȚʌ
- 1 İıȫțȜİȚıĲȠ ȠįȘȖȚȫȞ
ȈȣıțİȣĮıȓĮ ȖȚĮ 100 İȟİĲȐıİȚȢ (ref. 20 160)
- 100 ĲĮȚȞȓİȢ API 20 E (4x25 ĲĮȚȞȓİȢ)
- 100 țȣĲȓĮ İʌȫĮıȘȢ
- 100 ĳȪȜȜĮ ĮʌȠĲİȜİıµȐĲȦȞ
1 ıĳȡȐȖȚıµĮ ĲȪʌȠȣ țȜȚʌ
1 İıȫțȜİȚıĲȠ ȠįȘȖȚȫȞ
ȈȊȃĬǼȈǾ ȉǾȈ ȉǹǿȃǿǹȈ
Ǿ ıȪȞșİıȘ ĲȘȢ ĲĮȚȞȓĮȢ API 20 E įȓȞİĲĮȚ ıĲȠȞ ȆȓȞĮțĮ
ǹȞȐȖȞȦıȘȢ ĮȣĲȠȪ ĲȠȣ İıȫțȜİȚıĲȠȣ ȠįȘȖȚȫȞ.
ǹȆǹǿȉȅȊȂǼȃǹ ȂǾ ȆǹȇǼȋȅȂǼȃǹ ǹȃȉǿǻȇǹȈȉǾȇǿǹ
Ȁǹǿ ȊȁǿȀǹ
ǹȞĲȚįȡĮıĲȒȡȚĮ
- API NaCl 0.85 % Medium, 5 ml (Ref. 20 230) Ȓ
- API 20 E reagent kit (Ref. 20 120) Ȓ
µİµȠȞȦµȑȞĮ ĮȞĲȚįȡĮıĲȒȡȚĮ:
TDA (Ref. 70 402)
JAMES (Ref. 70 542)
VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422)
NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)
- Zn reagent (Ref. 70 380)
* țȦįȚțȩȢ İȓįȠȣȢ ʌȠȣ įİȞ ʌȦȜİȓĲĮȚ ıİ ȠȡȚıµȑȞİȢ
ȤȫȡİȢ: ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȒıĲİ ȑȞĮ ĮȞĲȓıĲȠȚȤȠ ĮȞĲȚįȡĮıĲȒȡȚȠ.
- Mineral oil (Ref. 70 100)
- API 20 E Analytical Profile Index (Ref. 20 190) Ȓ
ȜȠȖȚıµȚțȩ ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘȢ apiweb TM (Ref. 40 011)
(ıȣµȕȠȣȜİȣĲİȓĲİ ĲȘȞ bioMérieux)
bioMérieux® SA
ȊȜȚțȐ
-
ȆȚʌȑĲĲİȢ Ȓ PSIpettes
ȆȡȠıĲĮĲİȣĲȚțȒ ıȣıțİȣĮıȓĮ ĳȣıȓȖȖȦȞ
ǼıȤȐȡĮ ȖȚĮ ĳȪıȚȖȖİȢ
īİȞȚțȩȢ µȚțȡȠȕȚȠȜȠȖȚțȩȢ İȡȖĮıĲȘȡȚĮțȩȢ İȟȠʌȜȚıµȩȢ
ȆǿĬǹȃǹ ȈȊȂȆȁǾȇȍȂǹȉǿȀǹ ǹȃȉǿǻȇǹȈȉǾȇǿǹ
ǼȟȑĲĮıȘ ȖȚĮ ĲȠȞ țĮșȠȡȚıµȩ ĲȠȣ ȗȣµȦĲȚțȠȪ Ȓ
ȠȟİȚįȦĲȚțȠȪ µİĲĮȕȠȜȚıµȠȪ.
ǼȟȑĲĮıȘ ĲȘȢ țȚȞȘĲȚțȩĲȘĲĮȢ ʌȡȠĮȚȡİĲȚțȐ ĮȞĮİȡȩȕȚȦȞ
ȕĮțĲȘȡȓȦȞ.
ȆȇȅǼǿǻȅȆȅǿǾȈǼǿȈ Ȁǹǿ ȆȇȅĭȊȁǹȄǼǿȈ
xīȚĮ in vitrȠ įȚĮȖȞȦıĲȚțȒ ȤȡȒıȘ țĮȚ µȚțȡȠȕȚȠȜȠȖȚțȩ
ȑȜİȖȤȠ.
xǹʌȠțȜİȚıĲȚțȐ ȖȚĮ İʌĮȖȖİȜµĮĲȚțȒ ȤȡȒıȘ.
xǹȣĲȒ Ș ıȣıțİȣĮıȓĮ ʌİȡȚȑȤİȚ ʌȡȠȧȩȞĲĮ ȗȦȚțȒȢ
ʌȡȠȑȜİȣıȘȢ. ȆȚıĲȠʌȠȚȘµȑȞȘ ȖȞȫıȘ ĲȘȢ ʌȡȠȑȜİȣıȘȢ
Ȓ/țĮȚ ĲȘȢ ȣȖİȚȠȞȠµȚțȒȢ țĮĲȐıĲĮıȘȢ ĲȦȞ ȗȫȦȞ įİȞ
İȖȖȣȐĲĮȚ ʌȜȒȡȦȢ ĲȘȞ ĮʌȠȣıȓĮ µİĲĮįȚįȩµİȞȦȞ
ʌĮșȠȖȩȞȦȞ ʌĮȡĮȖȩȞĲȦȞ. īȚ’ ĮȣĲȩ ıȣȞȚıĲȐĲĮȚ ĮȣĲȐ ĲĮ
ʌȡȠȧȩȞĲĮ
ȞĮ
ĮȞĲȚµİĲȦʌȓȗȠȞĲĮȚ
ȦȢ
įȣȞȘĲȚțȫȢ
µȠȜȣıµĮĲȚțȐ țĮȚ µİ ĲȒȡȘıȘ ĲȦȞ ıȣȞȒșȦȞ µȑĲȡȦȞ
ĮıĳĮȜİȓĮȢ (ȞĮ µȘȞ ȜĮµȕȐȞȠȞĲĮȚ Įʌȩ ĲȘȞ ʌİʌĲȚțȒ Ȓ ĲȘȞ
ĮȞĮʌȞİȣıĲȚțȒ Ƞįȩ).
xǵȜĮ ĲĮ įİȓȖµĮĲĮ, ȠȚ µȚțȡȠȕȚĮțȑȢ țĮȜȜȚȑȡȖİȚİȢ țĮȚ ĲĮ
İȞȠĳșĮȜµȚıµȑȞĮ ʌȡȠȧȩȞĲĮ șĮ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ șİȦȡȠȪȞĲĮȚ
µȠȜȣıµĮĲȚțȐ țĮȚ ȞĮ ĮȞĲȚµİĲȦʌȓȗȠȞĲĮȚ țĮĲĮȜȜȒȜȦȢ.
ǱıȘʌĲİȢ ĲİȤȞȚțȑȢ țĮȚ ȠȚ ıȣȞȒșİȚȢ ʌȡȠĳȣȜȐȟİȚȢ ȤİȚȡȚıµȠȪ
ȖȚĮ ĲȘ µİȜİĲȫµİȞȘ ȕĮțĲȘȡȚĮțȒ ȠµȐįĮ șĮ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ
ĲȘȡȠȪȞĲĮȚ
ıİ ȩȜȘ ĲȘȞ įȚȐȡțİȚĮ ĲȘȢ įȚĮįȚțĮıȓĮȢ.
®
ǹȞĮĳİȡșİȓĲİ ıĲȠ ȑȖȖȡĮĳȠ "CLSI M29-A, Protection of
Laboratory Worker from Occupationally Acquired
Infections;
Approved
Guideline
–
ȉȡȑȤȠȣıĮ
ĮȞĮșİȫȡȘıȘ". īȚĮ ʌȡȩıșİĲİȢ ʌȡȠĳȣȜȐȟİȚȢ țĮĲȐ ĲȠ
ȤİȚȡȚıµȩ, ĮȞĮĳİȡșİȓĲİ ıĲȠ "Biosafety in Microbiological
and Biomedical Laboratories – CDC/NIH – ȉİȜİȣĲĮȓĮ
ȑțįȠıȘ" Ȓ ıĲȠȣȢ ȚıȤȪȠȞĲİȢ țĮȞȠȞȚıµȠȪȢ țȐșİ ȤȫȡĮȢ.
xȂȘȞ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚİȓĲİ ĮȞĲȚįȡĮıĲȒȡȚĮ µİĲȐ ĲȘȞ ȘµİȡȠµȘȞȓĮ
ȜȒȟȘȢ.
xȆȡȚȞ Įʌȩ ĲȘ ȤȡȒıȘ, ȕİȕĮȚȦșİȓĲİ ȩĲȚ Ș ıȣıțİȣĮıȓĮ ĲȦȞ
įȚĮĳȩȡȦȞ ʌİȡȚİȤȠµȑȞȦȞ İȓȞĮȚ ȐșȚțĲȘ.
xȂȘȞ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚİȓĲİ ĲĮȚȞȓİȢ ȠȚ ȠʌȠȓİȢ ʌĮȡȠȣıȚȐȗȠȣȞ
ĳșȠȡȑȢ: ʌĮȡĮµȠȡĳȦµȑȞĮ țȣʌȑȜȚĮ, ĮȞȠȚțĲȩȢ ĳĮțİȜȓıțȠȢ
ĮĳȣȖȡĮȞĲȒ, țȜʌ.
xȉĮ įİįȠµȑȞĮ ĲȘȢ ĮʌȩįȠıȘȢ ĲȘȢ µİșȩįȠȣ ʌȠȣ
ʌĮȡȠȣıȚȐȗȠȞĲĮȚ
İȜȒĳșȘıĮȞ
ĮțȠȜȠȣșȫȞĲĮȢ
ĲȘ
įȚĮįȚțĮıȓĮ Ș ȠʌȠȓĮ ʌİȡȚȖȡȐĳİĲĮȚ ıİ ĮȣĲȩ ĲȠ İıȫțȜİȚıĲȠ
ȠįȘȖȚȫȞ. ȅʌȠȚĮįȒʌȠĲİ ĮȜȜĮȖȒ Ȓ ĲȡȠʌȠʌȠȓȘıȘ ĲȘȢ
įȚĮįȚțĮıȓĮȢ µʌȠȡİȓ ȞĮ İʌȘȡİȐıİȚ ĲĮ ĮʌȠĲİȜȑıµĮĲĮ.
xǾ İȡµȘȞİȓĮ ĲȦȞ ĮʌȠĲİȜİıµȐĲȦȞ ĲȘȢ İȟȑĲĮıȘȢ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ
ȖȓȞİĲĮȚ ȜĮµȕȐȞȠȞĲĮȢ ȣʌȩȥȘ ĲȠ ȚıĲȠȡȚțȩ ĲȠȣ ĮıșİȞȒ, ĲȘȞ
ʌȡȠȑȜİȣıȘ ĲȠȣ įİȓȖµĮĲȠȢ, ĲȘ µȠȡĳȠȜȠȖȓĮ ĲȦȞ ĮʌȠȚțȚȫȞ
țĮȚ ĲȘ µȚțȡȠıțȠʌȚțȒ İȚțȩȞĮ ĲȠȣ ıĲİȜȑȤȠȣȢ țĮȚ, ĮȞ
ȤȡİȚȐȗİĲĮȚ, ĲĮ ĮʌȠĲİȜȑıµĮĲĮ Įʌȩ ȩʌȠȚİȢ ȐȜȜİȢ
İȟİĲȐıİȚȢ ȑȤȠȣȞ ʌȡĮȖµĮĲȠʌȠȚȘșİȓ, ȚįȚĮȓĲİȡĮ ĲȚȢ İȟİĲȐıİȚȢ
İȣĮȚıșȘıȓĮȢ ıĲĮ ĮȞĲȚµȚțȡȠȕȚĮțȐ.
ǼȜȜȘȞȚțȐ - 1
api® 20 E
07584G - el - 2007/06
ȈȊȃĬǾȀǼȈ ĭȊȁǹȄǾȈ
ȅȚ ĲĮȚȞȓİȢ ʌĮȡȑȤȠȞĲĮȚ ıİ ĮȜȠȣµȚȞȑȞȚȠ ıĮțȠȣȜȐțȚ µİ
ĳĮțİȜȓıțȠȣȢ ĮĳȣȖȡĮȞĲȒ.
ǼĳȩıȠȞ ĮȞȠȚȤșİȓ (*), ĲȠ ıĮțȠȣȜȐțȚ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ
ȟĮȞĮıĳȡĮȖȚıșİȓ µİ ĲȠ ıĳȡȐȖȚıµĮ ĲȪʌȠȣ țȜȚʌ
(ıȣµʌİȡȚȜĮµȕȐȞİĲĮȚ ıĲȘ ıȣıțİȣĮıȓĮ) ȖȚĮ ȞĮ įȚĮĲȘȡȘșȠȪȞ
ȠȚ İȞĮʌȠµȑȞȠȣıİȢ ĲĮȚȞȓİȢ µİ ĲȠȣȢ ĳĮțİȜȓıțȠȣȢ
ĮĳȣȖȡĮȞĲȒ: ĲȠʌȠșİĲȒıĲİ ĲȘȞ ĮȞȠȚȤĲȒ ʌȜİȣȡȐ Įʌȩ ĲȠ
ıĮțȠȣȜȐțȚ țĮĲȐ µȒțȠȢ ĲȠȣ ıĳȡĮȖȓıµĮĲȠȢ țĮȚ ıĳȓȟĲİ
ʌȡȠıİțĲȚțȐ ĲĮ įȪȠ µȑȡȘ. ȅȚ ĲĮȚȞȓİȢ µʌȠȡȠȪȞ ĲȩĲİ ȞĮ
įȚĮĲȘȡȘșȠȪȞ µȑȤȡȚ țĮȚ 10 µȒȞİȢ ĮĳȠȪ ĮȞȠȚȤĲİȓ ĲȠ
ıĮțȠȣȜȐțȚ, ıĲȠȣȢ 2-8°C (Ȓ µȑȤȡȚ ĲȘȞ ȘµİȡȠµȘȞȓĮ ȜȒȟȘȢ
ʌȠȣ ĮȞĮȖȡȐĳİĲĮȚ ıĲȘȞ ıȣıțİȣĮıȓĮ, ĮȞ ĮȣĲȒ İțʌȞİȪıİȚ
ʌȡȫĲȘ).
(*) ȈȣȞȚıĲȫµİȞȘ µȑșȠįȠȢ ȖȚĮ ȞĮ ĮȞȠȓȖİĲİ ĲĮ ıĮțȠȣȜȐțȚĮ :
ĮȞȠȓȟĲİ țȩȕȠȞĲĮȢ ĲȠ ıĮțȠȣȜȐțȚ ĮțȡȚȕȫȢ țȐĲȦ Įʌȩ ĲȠ
ıĳȡȐȖȚıµĮ țȡĮĲȫȞĲĮȢ ĲȠ ȩȡșȚȠ ȖȚĮ ȞĮ ĮʌȠĳİȣȤșİȓ ȗȘµȚȐ
ıĲȠȣȢ ĳĮțİȜȓıțȠȣȢ ĮĳȣȖȡĮȞĲȒ.
ǻǼǿīȂǹȉǹ (ȈȊȁȁȅīǾ Ȁǹǿ ȆȇȅǼȉȅǿȂǹȈǿǹ)
ȉȠ API 20 E įİȞ ʌȡȠȠȡȓȗİĲĮȚ ȖȚĮ ĮʌİȣșİȓĮȢ ȤȡȒıȘ µİ
țȜȚȞȚțȐ Ȓ ȐȜȜĮ įİȓȖµĮĲĮ.
ȅȚ µȚțȡȠȠȡȖĮȞȚıµȠȓ ʌȡȠȢ ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘ ʌȡȑʌİȚ ʌȡȫĲĮ ȞĮ
ĮʌȠµȠȞȦșȠȪȞ ıİ țĮĲȐȜȜȘȜȠ țĮȜȜȚİȡȖȘĲȚțȩ ȣȜȚțȩ
ʌȡȠıĮȡµȠıµȑȞȠ
ıĲȘȞ
țĮȜȜȚȑȡȖİȚĮ
ĲȦȞ
Enterobacteriaceae Ȓ/țĮȚ µȘ ĮʌĮȚĲȘĲȚțȫȞ GramĮȡȞȘĲȚțȫȞ ȕĮțĲȘȡȚįȓȦȞ, ıȪµĳȦȞĮ µİ ʌȡȩĲȣʌİȢ
µȚțȡȠȕȚȠȜȠȖȚțȑȢ ĲİȤȞȚțȑȢ.
ȅǻǾīǿǼȈ ȋȇǾȈǾȈ
ǼȟȑĲĮıȘ ȠȟİȚįȐıȘȢ
Ǿ İȟȑĲĮıȘ ȠȟİȚįȐıȘȢ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ įȚİȟȐȖİĲĮȚ ıȪµĳȦȞĮ µİ ĲȚȢ
ȠįȘȖȓİȢ ȤȡȒıȘȢ ĲȠȣ țĮĲĮıțİȣĮıĲȒ. ȉȠ ĮʌȠĲȑȜİıµĮ
ʌȡȑʌİȚ ȞĮ țĮĲĮȖȡȐĳİĲĮȚ ıĲȠ ĳȪȜȜȠ ĮʌȠĲİȜİıµȐĲȦȞ
țĮșȫȢ ĮʌȠĲİȜİȓ ĮȞĮʌȩıʌĮıĲȠ ĲµȒµĮ ĲȠȣ ĲİȜȚțȠȪ ʌȡȠĳȓȜ
(21Ș İȟȑĲĮıȘ ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘȢ).
ȆȡȠİĲȠȚµĮıȓĮ ĲȘȢ ĲĮȚȞȓĮȢ
xȆȡȠİĲȠȚµȐıĲİ ȑȞĮ țȣĲȓȠ İʌȫĮıȘȢ (įȓıțȠȢ țĮȚ țȐȜȣµµĮ)
țĮȚ įȚĮȞİȓµİĲİ ʌİȡȓʌȠȣ 5 ml ĮʌİıĲĮȖµȑȞȠȣ Ȓ
ĮʌȚȠȞȚıµȑȞȠȣ ȪįĮĲȠȢ [Ȓ ȠʌȠȚȠȣįȒʌȠĲİ ȪįĮĲȠȢ ȤȦȡȓȢ
ʌȡȩıșİĲĮ Ȓ ȤȘµȚțȐ ʌȠȣ µʌȠȡİȓ ȞĮ ĮʌİȜİȣșİȡȫıȠȣȞ
ĮȑȡȚĮ (ʌ.Ȥ. Cl2, CO2, țĲȜ.)] ıĲȚȢ țȣȥȑȜİȢ ĲȠȣ įȓıțȠȣ ȖȚĮ
ȞĮ įȘµȚȠȣȡȖȘșİȓ µȚĮ ȣȖȡȒ ĮĲµȩıĳĮȚȡĮ.
xȀĮĲĮȖȡȐȥĲİ ĲȠȞ țȦįȚțȩ ĲȠȣ ıĲİȜȑȤȠȣȢ ıĲȠ İʌȓµȘțİȢ
ʌĲİȡȪȖȚȠ ĲȠȣ įȓıțȠȣ. (ȂȘȞ țĮĲĮȖȡȐĳİĲİ ĲȠȞ țȦįȚțȩ ıĲȠ
țȐȜȣµµĮ, įȚȩĲȚ µʌȠȡİȓ ȞĮ ĲȠʌȠșİĲȘșİȓ ȜĮȞșĮıµȑȞĮ țĮĲȐ
ĲȘ įȚȐȡțİȚĮ ĲȘȢ įȚĮįȚțĮıȓĮȢ.)
xǹĳĮȚȡȑıĲİ ĲȘȞ ĲĮȚȞȓĮ Įʌȩ ĲȘ ıȣıțİȣĮıȓĮ ĲȘȢ.
xȉȠʌȠșİĲȒıĲİ ĲȘȞ ĲĮȚȞȓĮ ıĲȠ țȣĲȓȠ İʌȫĮıȘȢ.
ȈǾȂǼǿȍȈǾ : ȉȠ API 20 E ʌȡȑʌİȚ ȞĮ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚİȓĲĮȚ
µȩȞȠȞ µİ Enterobacteriaceae Ȓ/țĮȚ µȘ ĮʌĮȚĲȘĲȚțȐ GramĮȡȞȘĲȚțȐ ȕĮțĲȘȡȓįȚĮ. ǹʌĮȚĲȘĲȚțȠȓ ȠȡȖĮȞȚıµȠȓ ʌȠȣ ȑȤȠȣȞ
ȣȥȘȜȑȢ șȡİʌĲȚțȑȢ ĮʌĮȚĲȒıİȚȢ țĮȚ ĮʌĮȚĲȠȪȞ țĮĲȐȜȜȘȜİȢ
ʌȡȠĳȣȜȐȟİȚȢ ȤİȚȡȚıµȫȞ (įȘȜ., Brucella țĮȚ Francisella)
įİȞ ʌİȡȚȜĮµȕȐȞȠȞĲĮȚ ıĲȘ ȕȐıȘ įİįȠµȑȞȦȞ ĲȠȣ API 20 E.
ȆȡȑʌİȚ ȞĮ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȠȪȞĲĮȚ İȞĮȜȜĮțĲȚțȑȢ įȚĮįȚțĮıȓİȢ ȖȚĮ
ȞĮ ĮʌȠțȜİȚıĲİȓ Ȓ ȞĮ İʌȚȕİȕĮȚȦșİȓ Ș ʌĮȡȠȣıȓĮ ĲȠȣȢ.
ȆȡȠİĲȠȚµĮıȓĮ ĲȠȣ İȞĮȚȦȡȒµĮĲȠȢ
xǹȞȠȓȟĲİ µȚĮ ĳȪıȚȖȖĮ API NaCl 0.85 % Medium (5 ml) Ȓ
µȚĮ ĳȪıȚȖȖĮ API Suspension Medium (5 ml) ȩʌȦȢ
ĮȞĮȖȡȐĳİĲĮȚ ıĲȘȞ ʌĮȡȐȖȡĮĳȠ «ȆȡȠİȚįȠʌȠȚȒıİȚȢ țĮȚ
ȆȡȠĳȣȜȐȟİȚȢ» ĲȠȣ İıȫțȜİȚıĲȠȣ ȠįȘȖȚȫȞ ȖȚĮ ĮȣĲȐ ĲĮ
ʌȡȠȧȩȞĲĮ, Ȓ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȒıĲİ ȠʌȠȚȠįȒʌȠĲİ ıȦȜȘȞȐȡȚȠ
ʌȠȣ ʌİȡȚȑȤİȚ 5 ml ıĲİȓȡȠȣ ĳȣıȚȠȜȠȖȚțȠȪ ȠȡȠȪ Ȓ ıĲİȓȡȠȣ
ĮʌİıĲĮȖµȑȞȠȣ ȪįĮĲȠȢ, ȤȦȡȓȢ ʌȡȩıșİĲĮ.
bioMérieux® SA
xǵĲĮȞ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚİȓĲİ ʌȚʌȑĲĲĮ Ȓ PSIpette, ȜȐȕİĲİ µȓĮ
µȩȞȠȞ țĮȜȐ ĮʌȠµȠȞȦµȑȞȘ ĮʌȠȚțȓĮ Įʌȩ ȑȞĮ ĲȡȣȕȜȓȠ
ĮʌȠµȩȞȦıȘȢ. ȈȣȞȚıĲȐĲĮȚ ȞĮ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚİȓĲİ ȞȑİȢ
țĮȜȜȚȑȡȖİȚİȢ (18-24 ȦȡȫȞ).
xǹȞĮµȓȟĲİ ʌȡȠıİțĲȚțȐ ȖȚĮ ȞĮ İʌȚĲȪȤİĲİ ȑȞĮ ȠµȠȚȠȖİȞȑȢ
İȞĮȚȫȡȘµĮ.
ǹȣĲȩ ĲȠ İȞĮȚȫȡȘµĮ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȘșİȓ ĮµȑıȦȢ
µİĲȐ Įʌȩ ĲȘȞ ʌȡȠİĲȠȚµĮıȓĮ.
ȈǾȂǼǿȍȈǾ : ĲĮ ʌİȡȚııȩĲİȡĮ İȓįȘ Vibrio İȓȞĮȚ ĮȜȩĳȚȜĮ. ǹȞ
ȣʌȐȡȤİȚ ȣʌȠȥȓĮ ȖȚĮ Vibrio, İȞĮȚȦȡȒıĲİ ĲĮ ȕĮțĲȒȡȚĮ ıİ
API NaCl 0.85 % Medium.
ǼȞȠĳșĮȜµȚıµȩȢ ĲȘȢ ĲĮȚȞȓĮȢ
xȋȡȘıȚµȠʌȠȚȫȞĲĮȢ ĲȘȞ ȓįȚĮ ʌȚʌȑĲĲĮ, įȚĮȞİȓµİĲİ ĲȠ
ȕĮțĲȘȡȚĮțȩ İȞĮȚȫȡȘµĮ ıĲĮ ıȦȜȘȞȐȡȚĮ ĲȘȢ ĲĮȚȞȓĮȢ (ȖȚĮ
ĲȘ ĮʌȠĳȣȖȒ įȘµȚȠȣȡȖȓĮȢ ĳȣıĮȜȓįȦȞ ıĲȘ ȕȐıȘ ĲȦȞ
ıȦȜȘȞĮȡȓȦȞ ȖİȓȡİĲİ ĲȘȞ ĲĮȚȞȓĮ İȜĮĳȡȐ ʌȡȠȢ ĲĮ İµʌȡȩȢ
țĮȚ ĲȠʌȠșİĲİȓıĲİ ĲȠ ȡȪȖȤȠȢ ĲȘȢ ʌȚʌȑĲĲĮȢ Ȓ ĲȘȢ
PSIʌȑĲĲĮȢ, țȩȞĲȡĮ ıĲȘȞ ʌȜİȣȡȐ ĲȠȣ țȣʌİȜȓȠȣ.
- īȚĮ ĲȚȢ İȟİĲȐıİȚȢ CIT , VP țĮȚ GEL ȖİµȓıĲİ țĮȚ ĲȠ
ıȦȜȘȞȐȡȚȠ țĮȚ ĲȠ țȣʌȑȜȚȠ,
- īȚĮ ĲȚȢ ȣʌȩȜȠȚʌİȢ İȟİĲȐıİȚȢ, ȖİµȓıĲİ µȩȞȠ ĲĮ
ıȦȜȘȞȐȡȚĮ (țĮȚ ȩȤȚ ĲĮ țȣʌȑȜȚĮ),
- īȚĮ ĲȚȢ İȟİĲȐıİȚȢ ADH, LDC, ODC, H2S țĮȚ URE,
įȘµȚȠȣȡȖȒıĲİ ĮȞĮİȡȠȕȓȦıȘ İʌȚțĮȜȪʌĲȠȞĲȐȢ ĲȚȢ µİ
ʌĮȡĮĳȚȞȑȜĮȚȠ.
xȀȜİȓıĲİ ĲȠ țȣĲȓȠ İʌȫĮıȘȢ.
xǼʌȦȐıĲİ ıĲȠȣȢ 36°C ± 2°C ȖȚĮ 18-24 ȫȡİȢ.
ǹȃǹīȃȍȈǾ Ȁǹǿ ǼȇȂǾȃǼǿǹ
ǹȞȐȖȞȦıȘ ĲȘȢ ĲĮȚȞȓĮȢ
xȂİĲȐ ĲȘȞ ʌİȡȓȠįȠ İʌȫĮıȘȢ, įȚĮȕȐıĲİ ĲȘȞ ĲĮȚȞȓĮ µİ
ȕȐıȘ ĲȠȞ ȆȓȞĮțĮ ǹȞȐȖȞȦıȘȢ.
xǹȞ 3 Ȓ ʌİȡȚııȩĲİȡİȢ İȟİĲȐıİȚȢ (İȟȑĲĮıȘ GLU + Ȓ -) İȓȞĮȚ
șİĲȚțȑȢ, țĮĲĮȖȡȐȥĲİ ȩȜİȢ ĲȚȢ ĮȣĲȩµĮĲİȢ ĮȞĲȚįȡȐıİȚȢ ıĲȠ
ĳȪȜȜȠ ĮʌȠĲİȜİıµȐĲȦȞ țĮȚ ıĲȘ ıȣȞȑȤİȚĮ ĮʌȠțĮȜȪȥĲİ ĲȚȢ
İȟİĲȐıİȚȢ ʌȠȣ ĮʌĮȚĲȠȪȞ ĲȘȞ ʌȡȠıșȒțȘ ĮȞĲȚįȡĮıĲȘȡȓȦȞ :
- ǼȟȑĲĮıȘ TDA : ʌȡȠıșȑıĲİ 1 ıĲĮȖȩȞĮ ĮȞĲȚįȡĮıĲȘȡȓȠȣ
TDA. Ǿ İµĳȐȞȚıȘ țȠțțȚȞȦʌȠȪ țĮĳȑ ȤȡȫµĮĲȠȢ
ȣʌȠįİȚțȞȪİȚ µȚĮ șİĲȚțȒ ĮȞĲȓįȡĮıȘ ʌȡȠȢ țĮĲĮȖȡĮĳȒ
ıĲȠ ĳȪȜȜȠ ĮʌȠĲİȜİıµȐĲȦȞ.
- ǼȟȑĲĮıȘ IND : ʌȡȠıșȑıĲİ 1 ıĲĮȖȩȞĮ ĮȞĲȚįȡĮıĲȘȡȓȠȣ
JAMES. Ǿ İµĳȐȞȚıȘ ȡȩįȚȞȠȣ ȤȡȫµĮĲȠȢ ʌȠȣ
ĮȞĮʌĲȪııİĲĮȚ ıİ ȠȜȩțȜȘȡȠ ĲȠ țȣʌȑȜȚȠ ȣʌȠįİȚțȞȪİȚ µȚĮ
șİĲȚțȒ ĮȞĲȓįȡĮıȘ ʌȡȠȢ țĮĲĮȖȡĮĳȒ ıĲȠ ĳȪȜȜȠ
ĮʌȠĲİȜİıµȐĲȦȞ.
- ǼȟȑĲĮıȘ VP : ʌȡȠıșȑıĲİ 1 ıĲĮȖȩȞĮ ĮȞĲȚįȡĮıĲȘȡȓȠȣ
VP 1 țĮȚ 1 ıĲĮȖȩȞĮ ĮȞĲȚįȡĮıĲȘȡȓȠȣ VP 2. ȆİȡȚµȑȞİĲİ
ĲȠȣȜȐȤȚıĲȠȞ 10 ȜİʌĲȐ. Ǿ İµĳȐȞȚıȘ ȡȩįȚȞȠȣ Ȓ
İȡȣșȡȠȪ ȤȡȫµĮĲȠȢ ȣʌȠįİȚțȞȪİȚ µȚĮ șİĲȚțȒ ĮȞĲȓįȡĮıȘ
ʌȡȠȢ țĮĲĮȖȡĮĳȒ ıĲȠ ĳȪȜȜȠ ĮʌȠĲİȜİıµȐĲȦȞ. ǹȞ
ȑʌİȚĲĮ Įʌȩ 10 ȜİʌĲȐ İµĳĮȞȚıĲİȓ ȑȞĮ İȜĮĳȡȫȢ ȡȩįȚȞȠ
ȤȡȫµĮ, Ș ĮȞĲȓįȡĮıȘ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ șİȦȡȘșİȓ ĮȡȞȘĲȚțȒ.
ȈǾȂǼǿȍȈǾ : Ǿ İȟȑĲĮıȘ ʌĮȡĮȖȦȖȒȢ ȚȞįȩȜȘȢ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ
įȚİȟĮȤșİȓ ĲİȜİȣĲĮȓĮ, İĳȩıȠȞ Ș ĮȞĲȓįȡĮıȘ ĮȣĲȒ
ĮʌİȜİȣșİȡȫȞİȚ ĮİȡȚȠȪȤĮ ʌȡȠȧȩȞĲĮ ʌȠȣ ʌĮȡİµȕȐȜȜȠȞĲĮȚ
ıĲȘȞ İȡµȘȞİȓĮ ȐȜȜȦȞ İȟİĲȐıİȦȞ ıĲȘȞ ĲĮȚȞȓĮ. ȉȠ
ʌȜĮıĲȚțȩ țȐȜȣµµĮ İʌȫĮıȘȢ įİȞ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ
ĮȞĲȚțĮĲĮıĲĮșİȓ µİĲȐ Įʌȩ ĲȘȞ ʌȡȠıșȒțȘ ĲȠȣ
ĮȞĲȚįȡĮıĲȘȡȓȠȣ.
xǹȞ
Ƞ
ĮȡȚșµȩȢ
ĲȦȞ
șİĲȚțȫȞ
İȟİĲȐıİȦȞ
(ıȣµʌİȡȚȜĮµȕĮȞȠµȑȞȘȢ ĲȘȢ İȟȑĲĮıȘȢ GLU) ʌȡȚȞ Įʌȩ
ĲȘȞ ʌȡȠıșȒțȘ ĲȦȞ ĮȞĲȚįȡĮıĲȘȡȓȦȞ İȓȞĮȚ µȚțȡȩĲİȡȠȢ
Įʌȩ 3 :
- ǼʌĮȞİʌȦȐıĲİ ĲȘȞ ĲĮȚȞȓĮ ȖȚĮ ȐȜȜİȢ 24 ȫȡİȢ (± 2 ȫȡİȢ)
ȤȦȡȓȢ ȞĮ ʌȡȠıșȑıİĲİ ĮȞĲȚįȡĮıĲȒȡȚĮ.
- ǹʌȠțĮȜȪȥĲİ ĲȚȢ İȟİĲȐıİȚȢ ʌȠȣ ĮʌĮȚĲȠȪȞ ĲȘȞ
ʌȡȠıșȒțȘ ĮȞĲȚįȡĮıĲȘȡȓȦȞ (ȕȜȑʌİ ʌȡȠȘȖȠȪµİȞȘ
ʌĮȡȐȖȡĮĳȠ).
api® 20 E
07584G - el - 2007/06
- īȚĮ ȞĮ ȠȜȠțȜȘȡȫıİĲİ ĲȘȞ ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘ, µʌȠȡİȓ ȞĮ
ȤȡİȚĮıĲİȓ ȞĮ įȚİȟȐȖİĲİ ıȣµʌȜȘȡȦµĮĲȚțȑȢ İȟİĲȐıİȚȢ
(ĮȞĮĳİȡșİȓĲİ ıĲȘȞ ʌĮȡȐȖȡĮĳȠ ȉĮȣĲȠʌȠȓȘıȘ).
ǹȞ ĲȠ ȤȡȫµĮ ĲȘȢ İȟȑĲĮıȘȢ ĮȜȜȐȟİȚ ıİ ʌȠȡĲȠțĮȜȓİȡȣșȡȩ, ĲȩĲİ ĮȣĲȩ ȣʌȠįİȚțȞȪİȚ ĮȡȞȘĲȚțȒ ĮȞĲȓįȡĮıȘ :
ĲĮ ȞȚĲȡȚțȐ ʌȠȣ ȣʌȐȡȤȠȣȞ ĮțȩµȘ ıĲȠȞ ıȦȜȒȞĮ ȑȤȠȣȞ
ĮȞĮȤșİȓ Įʌȩ ĲȠȞ ȌİȣįȐȡȖȣȡȠ.
ǹȣĲȒ Ș ĮȞĲȓįȡĮıȘ İȓȞĮȚ ȤȡȒıȚµȘ ȩĲĮȞ İȟİĲȐȗȠȞĲĮȚ
Gram-ĮȡȞȘĲȚțȐ, șİĲȚțȐ ıĲȘȞ ȠȟİȚįȐıȘ ȕĮțĲȘȡȓįȚĮ.
ǼȡµȘȞİȓĮ
Ǿ ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘ ʌȡȠțȪʌĲİȚ µİ ĲȠ ĮȡȚșµȘĲȚțȩ ʌȡȠĳȓȜ.
xȀĮșȠȡȚıµȩȢ ĲȠȣ ĮȡȚșµȘĲȚțȠȪ ʌȡȠĳȓȜ :
ȈĲĮ ĳȪȜȜĮ ĮʌȠĲİȜİıµȐĲȦȞ, ȠȚ İȟİĲȐıİȚȢ ȤȦȡȓȗȠȞĲĮȚ ıİ
ȠµȐįİȢ ĲȦȞ 3 țĮȚ ȖȚĮ țȐșİ µȓĮ įȓȞİĲĮȚ ĲȚµȒ 1, 2 Ȓ 4.
ȆȡȠıșȑĲȠȞĲĮȢ ĲȚȢ ĲȚµȑȢ ʌȠȣ ĮȞĲȚıĲȠȚȤȠȪȞ ıİ șİĲȚțȑȢ
ĮȞĲȚįȡȐıİȚȢ µȑıĮ ıİ țȐșİ ȠµȐįĮ, ʌȡȠțȪʌĲİȚ ȑȞĮȢ
7ȥȒĳȚȠȢ ĮȡȚșµȩȢ ʌȡȠĳȓȜ ȖȚĮ ĲȚȢ 20 İȟİĲȐıİȚȢ ĲȘȢ ĲĮȚȞȓĮȢ
API 20 E. Ǿ ĮȞĲȓįȡĮıȘ ȠȟİȚįȐıȘȢ ĮʌȠĲİȜİȓ ĲȘȞ 21Ș
İȟȑĲĮıȘ țĮȚ ȑȤİȚ ĲȘȞ ĲȚµȒ 4 İȐȞ İȓȞĮȚ șİĲȚțȒ.
xȉĮȣĲȠʌȠȓȘıȘ :
ǼțĲİȜİȓĲĮȚ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȫȞĲĮȢ ĲȘ ȕȐıȘ įİįȠµȑȞȦȞ (V4.1)
* µİ ĲȠȞ ǹȞĮȜȣĲȚțȩ ȀĮĲȐȜȠȖȠ ȆȡȠĳȓȜ :
- ǹȞĮȗȘĲȒıĲİ ĲȠ ĮȡȚșµȘĲȚțȩ ʌȡȠĳȓȜ ıĲȠȞ țĮĲȐȜȠȖȠ
ĲȦȞ ʌȡȠĳȓȜ.
* µİ ĲȠ ȜȠȖȚıµȚțȩ ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘȢ apiweb TM :
- ǼȚıȐȖİĲİ ĲȠ 7ȥȒĳȚȠ ĮȡȚșµȘĲȚțȩ ʌȡȠĳȓȜ ȤİȚȡȠțȓȞȘĲĮ
ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȫȞĲĮȢ ĲȠ ʌȜȘțĲȡȠȜȩȖȚȠ.
Ȉİ țȐʌȠȚİȢ ʌİȡȚʌĲȫıİȚȢ, ĲȠ 7ȥȒĳȚȠ ʌȡȠĳȓȜ įİȞ İȓȞĮȚ
ĮȡțİĲȐ įȚİȣțȡȚȞȚıĲȚțȩ țĮȚ ȤȡİȚȐȗİĲĮȚ ȞĮ įȚİȟĮȤșȠȪȞ ȠȚ
ʌĮȡĮțȐĲȦ ıȣµʌȜȘȡȦµĮĲȚțȑȢ İȟİĲȐıİȚȢ :
- ǹȞĮȖȦȖȒ ȞȚĲȡȚțȫȞ ıİ ȞȚĲȡȫįȘ (NO2) țĮȚ ĮȑȡȚȠ (N2) :
ʌȡȠıșȑıĲİ 1 ıĲĮȖȩȞĮ ĮȞĲȚįȡĮıĲȘȡȓȠȣ ȃǿȉ 1 țĮȚ
1 ıĲĮȖȩȞĮ ĮȞĲȚįȡĮıĲȘȡȓȠȣ ȃǿȉ 2 ıĲȠ µȚțȡȠıȦȜȒȞĮ
GLU. ȆİȡȚµȑȞİĲİ 2 ȑȦȢ 5 ȜİʌĲȐ. ȉȠ İȡȣșȡȩ ȤȡȫµĮ
ȣʌȠįİȚțȞȪİȚ șİĲȚțȒ ĮȞĲȓįȡĮıȘ (NO2). Ǿ ĮȡȞȘĲȚțȒ
ĮȞĲȓįȡĮıȘ (țȓĲȡȚȞȠ) İȞįȑȤİĲĮȚ ȞĮ ȠĳİȓȜİĲĮȚ ıĲȘȞ
ĮȞĮȖȦȖȒ ĲȠȣ ĮȗȫĲȠȣ (ȩʌȦȢ ĳĮȓȞİĲĮȚ µİȡȚțȑȢ ĳȠȡȑȢ Įʌȩ
ĲȚȢ ĳȣıĮȜȓįİȢ ĮİȡȓȠȣ) : ʌȡȠıșȑıĲİ 2 ȑȦȢ 3 mg
ĮȞĲȚįȡĮıĲȘȡȓȠȣ Zn ıĲȠ µȚțȡȠıȦȜȒȞĮ GLU. ǲʌİȚĲĮ Įʌȩ
5 ȜİʌĲȐ, ĮȞ Ƞ ıȦȜȒȞĮȢ ʌĮȡĮµİȓȞİȚ țȓĲȡȚȞȠȢ ĮȣĲȩ
ȣʌȠįİȚțȞȪİȚ șİĲȚțȒ ĮȞĲȓįȡĮıȘ (N2) ʌȡȠȢ țĮĲĮȖȡĮĳȒ ıĲȠ
ĳȪȜȜȠ ĮʌȠĲİȜİıµȐĲȦȞ.
ȈǾȂǼǿȍȈǾ : īȚĮ ĲȠȞ ȓįȚȠ ȜȩȖȠ ȩʌȦȢ țĮȚ ıĲȘȞ İȟȑĲĮıȘ
ȚȞįȩȜȘȢ (ȕȜȑʌİ ĲȘȞ ıȘµİȓȦıȘ ıĲȘȞ ʌĮȡȐȖȡĮĳȠ
«ǹȞȐȖȞȦıȘ ĲȘȢ ĲĮȚȞȓĮȢ»), Ș İȟȑĲĮıȘ ĮȞĮȖȦȖȒȢ ĲȦȞ
ȞȚĲȡȚțȫȞ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ įȚİȟȐȖİĲĮȚ ĲİȜİȣĲĮȓĮ.
- ȀȚȞȘĲȚțȩĲȘĲĮ (MOB) : ǼȞȠĳșĮȜµȓıĲİ µȓĮ ĳȪıȚȖȖĮ API M
Medium (ȕȜȑʌİ İıȫțȜİȚıĲȠ ȠįȘȖȚȫȞ).
- ǹȞȐʌĲȣȟȘ ıĲȠ ȣȜȚțȩ MacConkey agar (McC) :
ǼµȕȠȜȚȐıĲİ ȑȞĮ ĲȡȣȕȜȓȠ MacConkey agar (ȕȜȑʌİ
İıȫțȜİȚıĲȠ ȠįȘȖȚȫȞ).
- ȅȟİȓįȦıȘ ȖȜȣțȩȗȘȢ (OF-O) : ǼȞȠĳșĮȜµȓıĲİ µȓĮ ĳȪıȚȖȖĮ
API OF Medium (ȕȜȑʌİ İıȫțȜİȚıĲȠ ȠįȘȖȚȫȞ).
- ǽȪµȦıȘ ȖȜȣțȩȗȘȢ (OF-F) : ǼȞȠĳșĮȜµȓıĲİ µȓĮ ĳȪıȚȖȖĮ
API OF Medium (ȕȜȑʌİ İıȫțȜİȚıĲȠ ȠįȘȖȚȫȞ).
ǹȣĲȑȢ ȠȚ ıȣµʌȜȘȡȦµĮĲȚțȑȢ İȟİĲȐıİȚȢ, ʌȠȣ ȣʌȠįİȚțȞȪȠȞĲĮȚ
ıĲȠ İȚıĮȖȦȖȚțȩ ĲµȒµĮ (ȀȦįȚțȠʌȠȓȘıȘ ʌȡȠĳȓȜ) ĲȠȣ
ǹȞĮȜȣĲȚțȠȪ
ȀĮĲĮȜȩȖȠȣ
ȆȡȠĳȓȜ,
µʌȠȡȠȪȞ
ȞĮ
ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȘșȠȪȞ ȖȚĮ ĲȠȞ ıȤȘµĮĲȚıµȩ İȞȩȢ 9ȥȒĳȚȠȣ
ʌȡȠĳȓȜ. ȈĲȘ ıȣȞȑȤİȚĮ Ș ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘ ʌȡȠțȪʌĲİȚ Įʌȩ ĲȠ
ȜȠȖȚıµȚțȩ ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘȢ.
ǼȞįȑȤİĲĮȚ ȞĮ ʌȡȠĲĮșİȓ Ș įȚİȟĮȖȦȖȒ ʌİȡĮȚĲȑȡȦ İȟİĲȐıİȦȞ
ıİ ʌİȡȓʌĲȦıȘ ȤĮµȘȜȒȢ įȚĮțȡȚĲȩĲȘĲĮȢ. ǹȞĮĳİȡșİȓĲİ ıĲȠ
ȜȠȖȚıµȚțȩ ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘȢ Ȓ ıĲȠȞ ǹȞĮȜȣĲȚțȩ ȀĮĲȐȜȠȖȠ
ȆȡȠĳȓȜ.
ȆȅǿȅȉǿȀȅȈ ǼȁǼīȋȅȈ
ȉĮ ȣȜȚțȐ, ȠȚ ĲĮȚȞȓİȢ țĮȚ ĲĮ ĮȞĲȚįȡĮıĲȒȡȚĮ ȣʌȠȕȐȜȜȠȞĲĮȚ ıȣıĲȘµĮĲȚțȐ ıİ ʌȠȚȠĲȚțȩ ȑȜİȖȤȠ ıİ įȚȐĳȠȡĮ ıĲȐįȚĮ ĲȘȢ
ʌĮȡĮȖȦȖȒȢ ĲȠȣȢ. īȚĮ İțİȓȞȠȣȢ ĲȠȣȢ ȤȡȒıĲİȢ ʌȠȣ İʌȚșȣµȠȪȞ ȞĮ įȚİȟȐȖȠȣȞ ĲȚȢ įȚțȑȢ ĲȠȣȢ İȟİĲȐıİȚȢ ʌȠȚȠĲȚțȠȪ İȜȑȖȤȠȣ µİ
®
ĲȘȞ ĲĮȚȞȓĮ, İȓȞĮȚ ʌȡȠĲȚµȩĲİȡȠ ȞĮ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȒıȠȣȞ ĲȠ ıĲȑȜİȤȠȢ 1. Escherichia coli ATCC 25922 Ȓ ĮȜȜȚȫȢ ȑȞĮ Įʌȩ ĲĮ
ĮțȩȜȠȣșĮ ıĲİȜȑȤȘ:
ATCC 51331
ATCC 35659
ATCC 13047
ONPG ADH LDC ODC
1.
2.
3.
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* Ǿ țĮĲȐıĲĮıȘ N2 (+) µʌȠȡİȓ ȞĮ ʌĮȡĮĲȘȡȘșİȓ ȖȚĮ ĲȠ ıĲȑȜİȤȠȢ ATCC 13047 țĮȚ ĲȠ ıĲȑȜİȤȠȢ ATCC 25922.
x ȆȡȠĳȓȜ ʌȠȣ ʌȡȠȑțȣȥİ µİĲȐ Įʌȩ 24-48 ȫȡİȢ İʌȫĮıȘȢ ȖȚĮ ĲȠ ıĲȑȜİȤȠȢ ATCC 51331, ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȫȞĲĮȢ ĮʌȠȚțȓİȢ ʌȠȣ ĮȞĮʌĲȪȤșȘțĮȞ
ıİ Trypticase Soy agar + ĮȓµĮ.
x ȆȡȠĳȓȜ ʌȠȣ ʌȡȠȑțȣȥĮȞ µİĲȐ Įʌȩ 18-24 ȫȡİȢ İʌȫĮıȘȢ ȖȚĮ ĲĮ ȐȜȜĮ ıĲİȜȑȤȘ, ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȫȞĲĮȢ ĮʌȠȚțȓİȢ ʌȠȣ ĮȞĮʌĲȪȤșȘțĮȞ ıİ
Trypticase Soy agar + ĮȓµĮ.
x ǺĮțĲȘȡȚĮțȐ İȞĮȚȦȡȒµĮĲĮ ʌĮȡĮıțİȣĮıµȑȞĮ ıİ API NaCl 0.85 % Medium.
ǹʌȠĲİȜİȓ İȣșȪȞȘ ĲȠȣ ȤȡȒıĲȘ ȞĮ įȚİȟȐȖİȚ ĲȠȞ ȆȠȚȠĲȚțȩ ǲȜİȖȤȠ ıȪµĳȦȞĮ µİ ĲȠȣȢ İțȐıĲȠĲİ ĲȠʌȚțȠȪȢ ȚıȤȪȠȞĲİȢ
țĮȞȠȞȚıµȠȪȢ.
bioMérieux® SA
api® 20 E
07584G - el - 2007/06
ȆǼȇǿȅȇǿȈȂȅǿ ȂǼĬȅǻȅȊ
xȉȠ ıȪıĲȘµĮ API 20 E ʌȡȠȠȡȓȗİĲĮȚ µȩȞȠȞ ȖȚĮ ĲȘȞ
ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘ ĲȦȞ Enterobacteriaceae țĮȚ ĲȦȞ µȘ
ĮʌĮȚĲȘĲȚțȫȞ,
Gram-ĮȡȞȘĲȚțȫȞ
ȕĮțĲȘȡȚįȓȦȞ
ʌȠȣ
ʌİȡȚȜĮµȕȐȞȠȞĲĮȚ ıĲȘ ȕȐıȘ įİįȠµȑȞȦȞ (ȕȜȑʌİ ȆȓȞĮțĮ
ȉĮȣĲȠʌȠȓȘıȘȢ ıĲȠ ĲȑȜȠȢ ĮȣĲȠȪ ĲȠȣ İıȫțȜİȚıĲȠȣ
ȠįȘȖȚȫȞ). ǻİȞ µʌȠȡİȓ ȞĮ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȘșİȓ ȖȚĮ ĲȘȞ
ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘ ȠʌȠȚȦȞįȒʌȠĲİ ȐȜȜȦȞ µȚțȡȠȠȡȖĮȞȚıµȫȞ Ȓ
ȖȚĮ ȞĮ ĮʌȠțȜİȓıİȚ ĲȘȞ ʌĮȡȠȣıȓĮ ĲȠȣȢ.
xȂʌȠȡİȓ ȞĮ ʌĮȡĮĲȘȡȘșȠȪȞ ĮıȣµĳȦȞȓİȢ µİ ĲȚȢ
ıȣµȕĮĲȚțȑȢ
µİșȩįȠȣȢ.
ǹȣĲȑȢ
ȠĳİȓȜȠȞĲĮȚ
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įȚĮĳȠȡİĲȚțȑȢ ĮȡȤȑȢ µİșȩįȠȣ ĲȦȞ ĮȞĲȚįȡȐıİȦȞ ʌȠȣ
ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȠȪȞĲĮȚ ıĲȘȞ ĲİȤȞȚțȒ API.ǼʌȚʌȜȑȠȞ,ȣʌȐȡȤȠȣȞ
įȚĮĳȠȡȑȢ ȣʌȠıĲȡȦµȐĲȦȞ ʌȠȣ İʌȓıȘȢ ȣʌȠȜȠȖȓȗȠȞĲĮȚ ȦȢ
ʌȠıȠıĲȚĮȓİȢ įȚĮĳȠȡȑȢ.
xȈʌĮȞȓȦȢ, ȠȚ ĮȞĲȚįȡȐıİȚȢ ĲȘȢ ȖȜȣțȩȗȘȢ ȖȚĮ ȠȡȖĮȞȚıµȠȪȢ
ȩʌȦȢ Ș Klebsiella Ȓ o Proteus µʌȠȡİȓ ȞĮ ĮȞĮıĲȡĮĳȠȪȞ
Įʌȩ șİĲȚțȑȢ ıİ ĮȡȞȘĲȚțȑȢ, ʌİȡȓʌĲȦıȘ ıĲȘȞ ȠʌȠȓĮ
ʌĮȡȠȣıȚȐȗİĲĮȚ ȖĮȜĮȗȦʌȩ-ʌȡȐıȚȞȠ ȤȡȫµĮ. ǹȣĲȒ Ș
ĮȞĲȓįȡĮıȘ șĮ țĮĲĮȖȡĮĳİȓ ȦȢ ĮȡȞȘĲȚțȒ ĮȞĲȓįȡĮıȘ.
ȉȑĲȠȚİȢ ʌİȡȚʌĲȫıİȚȢ ĮʌİȚțȠȞȓȗȠȞĲĮȚ ıĲĮ ʌȠıȠıĲȐ ʌȠȣ
ʌĮȡĮĲȓșİȞĲĮȚ ıĲȠȞ ȆȓȞĮțĮ ȉĮȣĲȠʌȠȓȘıȘȢ.
xǹȞ ĲĮȣĲȠʌȠȚȘșİȓ Salmonella Ȓ Shigella, ʌȡȑʌİȚ ȞĮ
įȚİȟĮȤșİȓ ȠȡȠȜȠȖȚțȒ ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘ ȖȚĮ ȞĮ İʌȚȕİȕĮȚȦșİȓ Ș
ȕĮțĲȘȡȚĮțȒ ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘ.
xȉĮ µȘ ȗȣµȦĲȚțȐ Gram-ĮȡȞȘĲȚțȐ ȕĮțĲȘȡȓįȚĮ, ʌȠȣ ȑȤȠȣȞ
ĮʌȠµȠȞȦșİȓ Įʌȩ ĮıșİȞİȓȢ µİ țȣıĲȚțȒ ȓȞȦıȘ µʌȠȡİȓ ȞĮ
įȘµȚȠȣȡȖȒıȠȣȞ µȘ ĲȣʌȚțȐ ȕȚȠȤȘµȚțȐ ʌȡȠĳȓȜ, ĲĮ ȠʌȠȓĮ
µʌȠȡİȓ ȞĮ İʌȘȡİȐıȠȣȞ ĲȘȞ ĲĮȣĲȠʌȠȓȘıȘ.
xȂȩȞȠȞ țĮșĮȡȑȢ țĮȜȜȚȑȡȖİȚİȢ ĮʌȠțȜİȚıĲȚțȐ İȞȩȢ
ȠȡȖĮȞȚıµȠȪ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȘșȠȪȞ.
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ȈȣµȕȠȣȜİȣĲİȓĲİ ĲȠȞ ȆȓȞĮțĮ ȉĮȣĲȠʌȠȓȘıȘȢ ıĲȠ ĲȑȜȠȢ
ĮȣĲȠȪ ĲȠȣ İıȫțȜİȚıĲȠȣ ȠįȘȖȚȫȞ ȖȚĮ ĲȠ İȪȡȠȢ ĲȦȞ
ĮȞĮµİȞȩµİȞȦȞ ĮʌȠĲİȜİıµȐĲȦȞ ȖȚĮ ĲȚȢ įȚȐĳȠȡİȢ
ȕȚȠȤȘµȚțȑȢ ĮȞĲȚįȡȐıİȚȢ.
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ǼȟİĲȐıșȘțĮȞ 5514 ıĲİȜȑȤȘ ıȣȜȜȠȖȒȢ țĮȚ ıĲİȜȑȤȘ
įȚĮĳȩȡȦȞ ʌȡȠİȜİȪıİȦȞ ʌȠȣ ĮȞȒțȠȣȞ ıİ İȓįȘ ʌȠȣ
ıȣµʌİȡȚȜĮµȕȐȞȠȞĲĮȚ ıĲȘ ȕȐıȘ įİįȠµȑȞȦȞ:
- 92.80 % ĲȦȞ ıĲİȜİȤȫȞ ĲĮȣĲȠʌȠȚȒșȘțĮȞ ıȦıĲȐ (µİ Ȓ
ȤȦȡȓȢ ıȣµʌȜȘȡȦµĮĲȚțȑȢ İȟİĲȐıİȚȢ).
- 4.61 % ĲȦȞ ıĲİȜİȤȫȞ įİȞ ĲĮȣĲȠʌȠȚȒșȘțĮȞ.
- 2.59 % ĲȦȞ ıĲİȜİȤȫȞ ĲĮȣĲȠʌȠȚȒșȘțĮȞ ȜĮȞșĮıµȑȞĮ.
xǱȜȜĮ µȘ ĮʌĮȚĲȘĲȚțȐ Gram-ĮȡȞȘĲȚțȐ ȕĮțĲȘȡȓįȚĮ :
ǼȟİĲȐıșȘțĮȞ 2386 ıĲİȜȑȤȘ ıȣȜȜȠȖȒȢ țĮȚ ıĲİȜȑȤȘ
įȚĮĳȩȡȦȞ ʌȡȠİȜİȪıİȦȞ ʌȠȣ ĮȞȒțȠȣȞ ıİ İȓįȘ ʌȠȣ
ıȣµʌİȡȚȜĮµȕȐȞȠȞĲĮȚ ıĲȘ ȕȐıȘ įİįȠµȑȞȦȞ :
- 90.32 % ĲȦȞ ıĲİȜİȤȫȞ ĲĮȣĲȠʌȠȚȒșȘțĮȞ ıȦıĲȐ (µİ Ȓ
ȤȦȡȓȢ ıȣµʌȜȘȡȦµĮĲȚțȑȢ İȟİĲȐıİȚȢ).
- 6.16 % ĲȦȞ ıĲİȜİȤȫȞ įİȞ ĲĮȣĲȠʌȠȚȒșȘțĮȞ.
- 3.52 % ĲȦȞ ıĲİȜİȤȫȞ ĲĮȣĲȠʌȠȚȒșȘțĮȞ ȜĮȞșĮıµȑȞĮ.
ǹȆȅȇȇǿȌǾ ǹȆȅǺȁǾȉȍȃ
ǹʌȠȡȡȓȥĲİ ĲĮ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȘµȑȞĮ Ȓ µȘ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȘµȑȞĮ
ĮȞĲȚįȡĮıĲȒȡȚĮ țĮșȫȢ țĮȚ ȠʌȠȚĮįȒʌȠĲİ ȐȜȜĮ İʌȚµȠȜȣıµȑȞĮ
ĮȞĮȜȫıȚµĮ ȣȜȚțȐ ĮțȠȜȠȣșȫȞĲĮȢ ĲȚȢ įȚĮįȚțĮıȓİȢ ȖȚĮ
µȠȜȣıµĮĲȚțȐ Ȓ įȣȞȘĲȚțȫȢ µȠȜȣıµĮĲȚțȐ ʌȡȠȧȩȞĲĮ.
ǹʌȠĲİȜİȓ İȣșȪȞȘ țȐșİ İȡȖĮıĲȘȡȓȠȣ ȞĮ ĮȞĲȚµİĲȦʌȓȗİȚ ĲĮ
ȐȤȡȘıĲĮ ȣȜȚțȐ țĮȚ ĲĮ ȣȖȡȐ İțȡȠȒȢ ʌȠȣ ʌĮȡȐȖȠȞĲĮȚ,
ıȪµĳȦȞĮ µİ ĲȠȞ ĲȪʌȠ țĮȚ ĲȠȞ ȕĮșµȩ İʌȚțȚȞįȣȞȩĲȘĲȐȢ
ĲȠȣȢ țĮȚ ȞĮ ĲĮ įȚĮȤİȚȡȓȗİĲĮȚ țĮȚ ȞĮ ĲĮ ĮʌȠȡȡȓʌĲİȚ (Ȓ ȞĮ
ĮȞĮșȑĲİȚ ĲȘ įȚĮȤİȓȡȚıȘ țĮȚ ĮʌȩȡȡȚȥȒ ĲȠȣȢ) ıȪµĳȦȞĮ µİ
ĲȠȣȢ İțȐıĲȠĲİ ȚıȤȪȠȞĲİȢ țĮȞȠȞȚıµȠȪȢ
api® 20 E
07584G - el - 2007/06
ȆǿȃǹȀǹȈ ǹȃǹīȃȍȈǾȈ
ǼȄǼȉǹ
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ǻȇǹȈȉǿȀǹ ȈȊȈȉǹȉǿȀǹ
ȆȅȈ.
(mg/țȣʌ.)
ONPG
2-ȞȚĲȡȠĳİȞȣȜ-ßDȖĮȜĮțĲȠʌȣȡĮȞȠıȓįȘ
0.223
ADH
L-ĮȡȖȚȞȓȞȘ
1.9
LDC
L-ȜȣıȓȞȘ
ODC
ǹȆȅȉǼȁǼȈȂǹȉǹ
ǹȃȉǿǻȇǹȈǼǿȈ/ǼȃǽȊȂǹ
ǹȇȃǾȉǿȀȅ
ĬǼȉǿȀȅ
ȐȤȡȦµȠ
țȓĲȡȚȞȠ (1)
ǻȚȣįȡȠȜȐįȘ ĲȘȢ ǹȡȖȚȞȓȞȘȢ
țȓĲȡȚȞȠ
İȡȣșȡȩ / ʌȠȡĲȠțĮȜȓ (2)
1.9
ǻİțĮȡȕȠȟȣȜȐıȘ ĲȘȢ ȁȣıȓȞȘȢ
țȓĲȡȚȞȠ
L-ȠȡȞȚșȓȞȘ
1.9
ǻİțĮȡȕȠȟȣȜȐıȘ ĲȘȢ ȅȡȞȚșȓȞȘȢ
țȓĲȡȚȞȠ
CIT
țȚĲȡȚțȩ ĲȡȚȞȐĲȡȚȠ
0.756
ȋȡȒıȘ țȚĲȡȚțȠȪ
ĮȞȠȚȤĲȩ ʌȡȐıȚȞȠ / țȓĲȡȚȞȠ
țȣĮȞȠʌȡȐıȚȞȠ / țȣĮȞȩ (3)
H2S
șİȚȠșİȚȚțȩ ȞȐĲȡȚȠ
0.075
ʌĮȡĮȖȦȖȒ H2S
ȐȤȡȦµȠ / ȖțȡȚȗȦʌȩ
µĮȪȡȠ ȣʌȩȜİȚµµĮ / ȜİʌĲȒ
ȖȡĮµµȒ
URE
ȠȣȡȓĮ
0.76
ȠȣȡİȐıȘ
țȓĲȡȚȞȠ
TDA
L-ĲȡȣʌĲȠĳȐȞȘ
0.38
ǻİĮµȚȞȐıȘ ĲȘȢ ȉȡȣʌĲȠĳȐȞȘȢ
țȓĲȡȚȞȠ
ß-ȖĮȜĮțĲȠıȚįȐıȘ
(ȅȡșȠ ȃȚĲȡȠĭİȞȣȜ-ßDīĮȜĮțĲȠʌȣȡĮȞȠıȚįȐıȘ)
TDA / ȐµİıȠ
IND
L-ĲȡȣʌĲȠĳȐȞȘ
0.19
țȠțțȚȞȦʌȩ țĮĳȑ
JAMES / ȐµİıȠ
ȐȤȡȦµȠ
ȡȩįȚȞȠ
ĮȞȠȚȤĲȩ ʌȡȐıȚȞȠ / țȓĲȡȚȞȠ
ȆĮȡĮȖȦȖȒ ȚȞįȩȜȘȢ
VP 1 + VP 2 / 10 ȜİʌĲȐ
VP
ʌȣȡȠȣȕȚțȩ ȞȐĲȡȚȠ
1.9
ʌĮȡĮȖȦȖȒ ĮțİĲȠǸȞȘȢ
(Voges Proskauer)
GEL
ǽİȜĮĲȓȞȘ
(ȕȠİȓȠȣ ʌȡȠȑȜİȣıȘȢ)
0.6
ǽİȜĮĲȚȞȐıȘ
GLU
D-ȖȜȣțȩȗȘ
1.9
MAN
D-µĮȞȚĲȩȜȘ
INO
ǱȤȡȦµȠ / ĮȞȠȚȤĲȩ ȡȩįȚȞȠ
ȡȩįȚȞȠ / İȡȣșȡȩ (5)
µȘ įȚȐȤȣıȘ
įȚȐȤȣıȘ µİȜĮȞȒȢ
ȤȡȦıĲȚțȒȢ
ȗȪµȦıȘ / ȠȟİȓįȦıȘ
(ȖȜȣțȩȗȘȢ) (4)
țȣĮȞȩ / țȣĮȞȠʌȡȐıȚȞȠ
țȓĲȡȚȞȠ / ȖțȡȚȗȦʌȩ țȓĲȡȚȞȠ
1.9
(µĮȞȚĲȩȜȘȢ) (4)
țȓĲȡȚȞȠ
ȚȞȠıȚĲȩȜȘ
1.9
(ȚȞȠıȚĲȩȜȘȢ) (4)
țȓĲȡȚȞȠ
SOR
D-ıȠȡȕȚĲȩȜȘ
1.9
(ıȠȡȕȚĲȩȜȘȢ) (4)
țȓĲȡȚȞȠ
RHA
L-ȡĮµȞȩȗȘ
1.9
(ȡĮµȞȩȗȘȢ) (4)
țȓĲȡȚȞȠ
SAC
D-ıȠȣțȡȩȗȘ
1.9
(ıĮțȤĮȡȩȗȘȢ) (4)
țȓĲȡȚȞȠ
MEL
D-µİȜȚȕȚȩȗȘ
1.9
(µİȜȚȕȚȩȗȘȢ) (4)
țȓĲȡȚȞȠ
AMY
ĮµȣȖįĮȜȓȞȘ
0.57
(ĮµȣȖįĮȜȓȞȘȢ) (4)
țȓĲȡȚȞȠ
ARA
L-ĮȡĮȕȚȞȩȗȘ
1.9
(ĮȡĮȕȚȞȩȗȘȢ) (4)
țȓĲȡȚȞȠ
ȠȟİȚįȐıȘ ĲȠȣ țȣĲȠȤȡȫµĮĲȠȢ
(ȕȜȑʌİ İıȫțȜİȚıĲȠ ȠįȘȖȚȫȞ ĲȘȢ İȟȑĲĮıȘȢ ȠȟİȚįȐıȘȢ)
OX
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(ȕȜȑʌİ İıȫțȜİȚıĲȠ ȠįȘȖȚȫȞ ĲȘȢ
İȟȑĲĮıȘȢ ȠȟİȚįȐıȘȢ)
ǲȞĮ ʌȠȜȪ ĮȞȠȚȤĲȩȤȡȦµȠ țȓĲȡȚȞȠ șĮ ʌȡȑʌİȚ İʌȓıȘȢ ȞĮ șİȦȡİȓĲĮȚ șİĲȚțȩ.
ǲȞĮ ʌȠȡĲȠțĮȜȓ ȤȡȫµĮ µİĲȐ Įʌȩ 36-48 ȫȡİȢ İʌȫĮıȘȢ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ șİȦȡİȓĲĮȚ ĮȡȞȘĲȚțȩ.
Ǿ ĮȞȐȖȞȦıȘ ȑȖȚȞİ ıĲȠ țȣʌȑȜȚȠ (ĮİȡȩȕȚĮ).
Ǿ ȗȪµȦıȘ ȟİțȚȞȐİȚ ıĲȠ țĮĲȫĲİȡȠ ĲµȒµĮ ĲȦȞ ıȦȜȒȞȦȞ, Ș ȠȟİȓįȦıȘ ĮȡȤȓȗİȚ ıĲȠ țȣʌȑȜȚȠ.
ǲȞĮ İȜĮĳȡȫȢ ȡȩįȚȞȠ ȤȡȫµĮ µİĲȐ Įʌȩ 10 ȜİʌĲȐ șĮ ʌȡȑʌİȚ ȞĮ șİȦȡİȓĲĮȚ ĮȡȞȘĲȚțȩ.
xȅȚ ĮȞĮȖȡĮĳȩµİȞİȢ ʌȠıȩĲȘĲİȢ µʌȠȡȠȪȞ ȞĮ ȡȣșµȓȗȠȞĲĮȚ ĮȞȐȜȠȖĮ µİ ĲȠȞ ĲȓĲȜȠ ĲȦȞ ʌȡȫĲȦȞ ȣȜȫȞ ʌȠȣ
ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȠȪȞĲĮȚ.
xȅȡȚıµȑȞĮ țȣʌȑȜȚĮ ʌİȡȚȑȤȠȣȞ ʌȡȠȧȩȞĲĮ ȗȦȚțȒȢ ʌȡȠȑȜİȣıȘȢ, İȚįȚțȐ ʌİʌĲȩȞİȢ.
bioMérieux® SA
api® 20 E
07584G - el - 2007/06
ȈȊȂȆȁǾȇȍȂǹȉǿȀǼȈ ǼȄǼȉǹȈǼǿȈ
ǼȄǼȉǹ
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ǹȞĮȖȦȖȒ
ȞȚĲȡȚțȫȞ
ȂȚțȡȠıȦȜȒȞĮȢ
GLU
ǻȇǹȈȉǿȀǹ ȈȊȈȉǹȉǿȀǹ
ȆȅȈ.
(mg/țȣʌ.)
0.076
ȞȚĲȡȚțȩ țȐȜȚȠ
ǹȇȃǾȉǿȀȅ
ĮȞĮȖȦȖȒ ıİ ĮȑȡȚȠ N2
API M Medium Ȓ
µȚțȡȠıțȩʌȚȠ
-
țȚȞȘĲȚțȩĲȘĲĮ
McC
ȊȜȚțȩ MacConkey
-
OF-F
ȖȜȣțȩȗȘ (API OF Medium)
ĬǼȉǿȀȅ
NIT 1 + NIT 2 / 2-5 ȜİʌĲȐ
țȓĲȡȚȞȠ
İȡȣșȡȩ
ȆĮȡĮȖȦȖȒ NO2
MOB
OF-O
ǹȆȅȉǼȁǼȈȂǹȉǹ
ǹȃȉǿǻȇǹȈǼǿȈ/ǼȃǽȊȂǹ
Zn / 5 ȜİʌĲȐ
ʌȠȡĲȠțĮȜȓ-İȡȣșȡȩ
țȓĲȡȚȞȠ
µȘ țȚȞȘĲȚțȩ
țȚȞȘĲȚțȩ
ĮȞȐʌĲȣȟȘ
ĮʌȠȣıȓĮ
ʌĮȡȠȣıȓĮ
-
ȗȪµȦıȘ : ıİ ʌĮȡĮĳȚȞȑȜĮȚȠ
ʌȡȐıȚȞȠ
țȓĲȡȚȞȠ
-
ȠȟİȓįȦıȘ : ȑțșİıȘ ıĲȠȞ ĮȑȡĮ
ʌȡȐıȚȞȠ
țȓĲȡȚȞȠ
ǻǿǹǻǿȀǹȈǿǹ
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ǺǿǺȁǿȅīȇǹĭǿǹ
ȆǿȃǹȀǹȈ ȈȊȂǺȅȁȍȃ
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I
II
IV
V
Ǿ ȠȞȠµĮıȓĮ CLSI ĮʌȠĲİȜİȓ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȘµȑȞȠ, țĮĲĮĲİșİȚµȑȞȠ Ȓ/ țĮȚ țĮĲĮȤȦȡȘµȑȞȠ İµʌȠȡȚțȩ ıȒµĮ ʌȠȣ ĮȞȒțİȚ ıĲȘȞ Clinical Laboratory and Standards Institute, Inc.
Ǿ ȠȞȠµĮıȓĮ ATCC ĮʌȠĲİȜİȓ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȘµȑȞȠ, țĮĲĮĲİșİȚµȑȞȠ Ȓ/ țĮȚ țĮĲĮȤȦȡȘµȑȞȠ İµʌȠȡȚțȩ ıȒµĮ ʌȠȣ ĮȞȒțİȚ ıĲȘȞ American Type Culture Collection.
bioMérieux® SA
673 620 399 RCS LYON
ȉȘȜ. 33 (0)4 78 87 20 00
Fax 33 (0)4 78 87 20 90
bioMérieux, Inc
Box 15969,
ȉȘȜ. (1) 919 620 20 00
Fax (1) 919 620 22 11
ǼțĲȣʌȫșȘțİ ıĲȘ īĮȜȜȓĮ
Ǿ ȠȞȠµĮıȓĮ bioMérieux, Ƞ țȣĮȞȩȢ ȜȠȖȩĲȣʌȠȢ, țĮȚ ȠȚ ȠȞȠµĮıȓİȢ API, API 20 E țĮȚ apiweb ĮʌȠĲİȜȠȪȞ ȤȡȘıȚµȠʌȠȚȘµȑȞĮ,
țĮĲĮĲİșİȚµȑȞĮ Ȓ/țĮȚ țĮĲĮȤȦȡȘµȑȞĮ İµʌȠȡȚțȐ ıȒµĮĲĮ ʌȠȣ ĮȞȒțȠȣȞ ıĲȘ bioMérieux SA Ȓ µȚĮ İț ĲȦȞ șȣȖĮĲȡȚțȫȞ ĲȘȢ.
20 100 / 20 160
®
07584G - sv - 2007/06
20 E
IVD
Identifieringssystem för Enterobacteriaceae och andra icke-krävande gramnegativa stavar
SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING
API 20 E är ett standardiserat identifieringssystem för
Enterobacteriaceae och andra icke-krävande gramnegativa stavar. Testet består av 21 biokemiska tester i
miniatyr och en databas. En fullständig lista över de
organismer som är möjliga att identifiera med hjälp av
detta system återfinns i Identifieringstabellen, sist i denna
bipacksedel.
METOD
API 20 E strips består av 20 mikrobrunnar innehållande
dehydrerade substrat. Dessa tester inokuleras med en
bakteriesuspension som rekonstituerar mediet. Under
inkubationen frambringar metabolismen färgförändringar
som antingen uppträder spontant eller framkallas genom
att reagenser tillsätts.
Reaktionerna avläses enligt Avläsningstabellen och
identifieringen sker med hjälp av ett index över analytiska
profiler eller med hjälp av identifieringsprogrammet.
KITETS INNEHÅLL
Kit för 25 tester (Art.nr. 20 100)
- 25 inkubationsboxar
- 25 rapportblad
- 1 tätningsklips
- 1 bipacksedel
Kit för 100 tester (Art.nr. 20 160)
- 100 inkubationsboxar
- 100 rapportblad
1 tätningsklips
1 bipacksedel
STRIPSETS SAMMANSÄTTNING
API 20 E-stripsets sammansättning anges i avläsningstabellen i denna bipacksedel.
REAGENSER OCH NÖDVÄNDIGT MATERIAL (SOM
INTE MEDFÖLJER)
Reagenser
- API NaCl 0,85% Medium, 5 ml (Art.nr. 20 230) eller
API Suspensionsmedium, 5 ml (Art.nr. 20 150)
- API 20 E reagenskit (Art.nr. 20 120) eller
enskilda reagenser: TDA (Art.nr. 70 402)
JAMES (Art.nr. 70 542)
VP 1 + VP 2 (Art.nr. 70 422)
NIT 1 + NIT 2 (Art.nr. 70 442)
- Zn-reagens (Art.nr. 70 380)
- Oxidas (Art.nr. 55 635*)
* säljs inte i vissa länder: använd ett
motsvarande reagens.
- Mineralolja (Art.nr. 70 100)
- API 20 E Analytical Profile Index (Art.nr. 20 190) eller
apiweb TM identifieringsprogram (Art.nr. 40 011)
(kontakta bioMérieux)
bioMérieux® SA
Material
- Pipetter eller PSIpetter
- Ampullskydd
- Ampullställ
- Allmän utrustning för mikrobiologiskt laboratorium
YTTERLIGARE TÄNKBARA REAGENSER
- API OF Medium (Art.nr. 50 110):
Test för bestämning av fermentativ eller oxidativ
metabolism.
- API M Medium (Art.nr. 50 120):
Motitlitetstest för fakultativt anaeroba bakterier.
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER
xAnvänds för in vitro-diagnostik och mikrobiologisk
kontroll.
xEndast för professionell användning.
xDetta kit innehåller produkter av animaliskt ursprung.
Certifierade data angående ursprunget och/eller
hälsotillståndet hos djuren garanterar inte total frånvaro
av överförbara patogena agens. Vi rekommenderar
därför att dessa produkter behandlas som potentiellt
infektiösa
och
handhas
enligt
sedvanliga
försiktighetsåtgärder (ska inte förtäras eller inandas).
xAlla prover, odlingar av mikroorganismer och
inokulerade produkter skall anses infektiösa och
behandlas på ett lämpligt sätt. Sterilteknik och vanliga
försiktighetsåtgärder för att handha den speciella
gruppen av bakterier skall iakttas under hela
®
proceduren. Se "CLSI M29-A, Protection of Laboratory
Workers from Occupationally Acquired Infections;
Approved Guideline – Aktuell revidering". För ytterligare
information
angående
försiktighetsåtgärder
vid
hantering, se “Biosafety in Microbiological and
Biomedical Laboratories - CDC/NIH – Senaste
upplagan", eller de f.n. gällande reglerna i det aktuella
landet.
xAnvänd inte reagenser efter sista förbrukningsdatum.
xKontrollera
före
användning
att
de
olika
komponenternas förpackningar är intakta.
xAnvänd inte strips som har blivit skadade: med
deformerade kupoler, påsen med torkmedel öppen, etc.
xData angående prestanda som presenteras har
uppnåtts med hjälp av den metod som anges i denna
bipacksedel. Varje ändring i utförandet kan påverka
resultaten.
xTolkningen av testresultaten skall göras med hänsyn till
patientens
anamnes,
provkälla,
kolonial
och
mikroskopisk morfologi hos stammen och, om
nödvändigt, resultaten av andra utförda tester, speciellt
antibiotikakänslighet.
Svenska - 1
api® 20 E
07584G - sv - 2007/06
FÖRVARING
Stripsen levereras i en aluminiumpåse innehållande påsar
med torkmedel.
Påsen bör, när den en gång har öppnats (*), återförslutas
med tätningsklipset (medföljer kitet). För att bevara de
kvarvarande stripsen med torkmedelspåsarna: placera
den öppna änden av påsen längs med tätningsklipset och
kläm försiktigt samman de båda delarna. Stripsen kan
sedan förvaras vid 2-8°C i upp till 10 månader efter det
att påsen öppnats (eller fram till det utgångsdatum som
är angivet på förpackningen, om detta inträffar tidigare).
(*) Rekommenderad metod för att öppna påsarna: klipp
upp påsen precis under förseglingen medan påsen hålls
upprätt, så att påsarna med torkmedel inte skadas.
PROVER (INSAMLING OCH PREPARERING)
API 20 E är inte avsett för användning direkt med kliniska
eller andra prover.
Mikroorganismerna som ska identifieras måste först
isoleras på ett lämpligt medium, anpassat till odling av
Enterobacteriaceae och/eller icke-krävande gramnegativa
stavar i enlighet med mikrobiologiska standardtekniker.
BRUKSANVISNING
Oxidastest
Oxidastestet
måste
utföras
enligt
tillverkarens
bruksanvisningar.
Resultatet
ska
antecknas
på
rapportbladet eftersom det utgör en väsentlig del av den
slutliga profilen (21:a identifieringssteget).
Preparering av stripset
xGör i ordning en inkubationsbox (platta och lock) och
tillsätt ca 5 ml destillerat vatten eller avmineraliserat
vatten [eller vatten utan tillsatser eller kemikalier, vilka
skulle kunna utveckla gaser (t.ex. Cl2, CO2, etc.)] till
håligheterna i plattan för att skapa en fuktig atmosfär.
xAnteckna stammens referens på den förlängda fliken på
plattan. (Skriv inte referensen på locket eftersom det
kan komma att förläggas under arbetet.)
xTa ut stripset ur dess förpackning.
xPlacera stripset i inkubationsboxen.
OBS: API 20 E bör enbart användas med
Enterobacteriaceae och/eller icke-krävande gramnegativa
stavar. Krävande organismer som har speciella krav på
näring och som ska handhas på speciellt sätt (t.ex.
Brucella och Francisella) är inte inkluderade i API 20 Edatabasen. För att utesluta eller bekräfta deras närvaro
behövs andra metoder.
Preparering av inokulatet
xÖppna en ampull med API NaCl 0,85 % Medium (5 ml)
eller en ampull med API Suspensionsmedium (5 ml),
som
beskrivet
under
"Försiktighetsåtgärder"
i
bipacksedeln för dessa produkter, eller använd ett rör
med 5 ml steril saltlösning eller sterilt destillerat vatten,
utan tillsatser.
xPlocka en enskild och välisolerad koloni från en
isoleringsplatta med hjälp av en pipett eller PSIpett. Det
rekommenderas att använda unga kulturer (18 – 24
timmar gamla).
xEmulgera försiktigt för att få en homogen
bakteriesuspension.
Denna suspension måste användas genast efter
beredning.
Inokulering av stripset
xAnvänd
samma
pipett
för
att
fördela
bakteriesuspensionen till stripsets brunnar (för att
undvika bildning av bubblor, luta stripset något framåt
och sätt spetsen av pipetten eller PSIpetten mot sidan
av kupolen):
- För CIT , VP och GEL , fyll både brunn och kupol,
- För övriga tester, fyll bara brunnarna (och inte
kupolerna),
- Skapa en anaerob miljö för testerna ADH, LDC, ODC,
H2S och URE genom att täcka över med mineralolja.
xStäng inkubationslådan.
xInkubera vid 36°C ± 2°C under 18-24 timmar.
AVLÄSNING OCH TOLKNING
Avläsning av stripset
xEfter inkubationstiden avläses stripset mot Avläsningstabellen.
xOm 3 eller flera tester (GLU test + eller –) är positiva,
anteckna alla spontana reaktioner på rapportbladet.
Bestäm sedan vilka tester som kräver en tillsats av
reagens:
- TDA Test: tillsätt 1 droppe TDA-reagens. En rödbrun
färg indikerar en positiv reaktion som ska antecknas
på rapportbladet.
- IND Test: tillsätt 1 droppe JAMES-reagens. En rosa
färg som utvecklats i hela kupolen indikerar en positiv
reaktion som ska antecknas på rapportbladet.
- VP Test: tillsätt 1 droppe av vardera VP 1 och VP 2reagens. Avvakta i minst 10 minuter. En rosa eller röd
färg indikerar en positiv reaktion som ska antecknas
på rapportbladet. Om en svagt rosa färg uppträder
efter 10 minuter, ska reaktionen anses som negativ.
OBS: Indolproduktionstestet ska utföras sist, eftersom
denna reaktion utlöser gasproduktion, vilket interfererar
med tolkningen av andra tester på stripset.
Inkubationslocket av plast ska inte sättas tillbaka sedan
detta reagens tillsatts.
xOm antalet positiva tester (inkl. GLU-testet) innan tillsats
av reagens är färre än 3:
- Återinkubera stripset under ytterligare 24 timmar
(± 2 timmar) utan tillsats av reagens.
- Fastställ vilka tester som kräver tillsats av reagens (se
föregående stycke).
- För att få en fullständig identifiering, kan det vara
nödvändigt att utföra kompletterande tester (se stycket
om identifiering).
Tolkning
Identifieringen görs med hjälp av den numeriska
profilen.
xBestämning av den numeriska profilen:
På rapportbladet delas testerna upp i grupper om 3,
varpå varje grupp tilldelas ett värde: 1, 2 eller 4. Genom
att addera de värden som motsvarar positiva reaktioner
inom varje grupp, erhålls en 7-siffrig numerisk profil för
de 20 testerna på API 20 E-stripset. Oxidasreaktionen
utgör det 21:a testet och har värdet 4 om det är positivt.
xIdentifiering:
Denna utförs med hjälp av databasen (V4.1)
* med Analytical Profile Index:
- Sök den numeriska profilen i listan över profiler.
* med apiweb TM identifieringsprogram:
- Skriv in den 7-siffriga numeriska profilen via
tangentbordet.
OBS: de flesta Vibrio-arter är halofila. Vid misstanke om
Vibrio suspenderas bakterierna i API NaCl 0,85%
Medium.
bioMérieux® SA
Svenska - 2
api® 20 E
07584G - sv - 2007/06
I vissa fall är den 7-siffriga profilen inte tillräckligt
särskiljande och följande kompletterande tester kan bli
nödvändiga att utföra:
- Reduktion av nitrater till nitriter (NO2) och N2-gas (N2):
tillsätt 1 droppe vardera av NIT 1- och NIT 2reagenserna till GLU-brunnen. Avvakta 2 till 5 minuter.
En röd färg indikerar en positiv reaktion (NO2). En
negativ reaktion (gul) kan bero på en reduktion till
nitrogen (ibland signalerat av gasbubblor): tillsätt 2 till 3
mg Zn-reagens till GLU-brunnen. Om brunnen förblir gul
efter 5 minuter indikerar detta en positiv reaktion (N2),
som ska antecknas på rapportbladet. Om testet blir
orange-rött, visar detta en negativ reaktion: zinken har
reducerat de kvarvarande nitraterna i brunnen.
Detta är en användbar reaktion för att testa gramnegativa, oxidaspositiva stavar.
- Motilitet (MOB): Inokulera en ampull API M Medium
(se bipacksedeln).
- Tillväxt på MacConkey agarmedium (McC): Gör utstryk
på en MacConkey agarplatta (se bipacksedeln).
- Oxidation av glukos (OF-O): Inokulera en ampull API OF
Medium (se bipacksedeln).
- Jäsning av glukos (OF-F): Inokulera en ampull API OF
Medium (se bipacksedeln).
Dessa kompletterande tester, som anges i inledningen
(Profilkodning) till Analytical Profile Index, kan användas
för att skapa en 9-siffrig profil. Identifieringen erhålls
sedan med hjälp av identifieringsprogrammet.
OBS: Av samma skäl som för indoltestet (se
anmärkning i stycket “Avläsning av stripset”), måste
nitratreduktionstestet utföras sist.
Ytterligare tester kan föreslås vid dålig urskiljning. Använd
identifieringsprogrammet eller Analytical Profile Index.
KVALITETSKONTROLL
Medier, strips och reagenser är systematiskt kvalitetskontrollerade vid olika steg i tillverkningen.
För de användare som önskar utföra egna tester för kvalitetskontroll av stripset är användning av stammen
®
1. Escherichia coli ATCC 25922 eller en av följande stammar att föredra:
ATCC 51331
ATCC 13047
ATCC 35659
ONPG ADH LDC ODC
1.
2.
3.
4.
5.
+
+
+
–
+
–
–
+
–
–
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V
–
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+
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H2S URE TDA IND VP
–
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–
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–
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–
+
+
–
+
–
+
–
–
+
V
+
+
–
+
–
+
–
–
+
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
+
+
–
–
–
–
V
* N2 (+)-tillståndet kan observeras för stammen ATCC 13047 och för stammen ATCC 25922.
x Profil som erhålls efter 24-48 timmars inkubation för stammen ATCC 51331, där kolonierna odlats på Trypcase sojaagar + blod.
x Profiler som erhålls efter 18-24 timmars inkubation för övriga stammar, där kolonierna odlats på Trypcase sojaagar + blod.
x Bakteriesuspensioner som beretts i API NaCl 0,85 % Medium.
Det är användarens ansvar att utföra kvalitetskontroll i enlighet med de lokalt tillämpade bestämmelserna.
METODENS BEGRÄNSNINGAR
xAPI 20 E-systemet är uteslutande avsett för identifiering
av Enterobacteriaceae och de icke-krävande gramnegativa stavar som ingår i databasen (se
Identifieringstabellen sist i denna bipacksedel).
Systemet kan inte användas för att identifiera några
andra mikroorganismer eller för att utesluta deras
närvaro.
xAvvikelser i jämförelse med konventionella metoder kan
förekomma. De beror på de annorlunda reaktionstekniker som används i API-tekniken. Därtill kommer
substratvariationer som också kan förklara procentuella
skillnader.
xVid sällsynta tillfällen kan glukosreaktionerna skifta för
organismer som Klebsiella eller Proteus från positivt till
negativt, varvid en blågrön färg kan iakttas. Denna
reaktion antecknas som negativ. Sådana tillfällen
återspeglas
i
de
procenttal
som
anges
i
Identifieringstabellen.
xOm Salmonella eller Shigella identifieras, ska serologisk
identifiering
utföras
för
att
bekräfta
bakterieidentifieringen.
xIcke-fermenterande, gramnegativa stavar, isolerade från
patienter med cystisk fibros kan genera atypiska
biokemiska profiler som kan påverka identifieringen.
bioMérieux® SA
xEndast rena kulturer av en enda organism bör
användas.
FÖRVÄNTADE RESULTAT
De förväntade resultaten för de olika biokemiska
reaktionerna framgår av Identifieringstabellen i slutet av
denna bipacksedel.
PRESTANDA
xEnterobacteriaceae:
5514 stammar från insamling och stammar av olika
ursprung, tillhörande arter inkluderade i databasen,
testades:
- 92,80% av stammarna identifierades korrekt (med
eller utan kompletterande tester).
- 4,61% av stammarna identifierades inte.
- 2,59% av stammarna blev felidentifierade.
xAndra icke-krävande gramnegativa stavar:
2386 stammar från insamling och stammar av olika
ursprung, tillhörande arter inkluderade i databasen,
testades:
- 90,32% av stammarna identifierades korrekt (med
eller utan kompletterande tester).
- 6,16% av stammarna identifierades inte.
- 3,52% av stammarna blev felidentifierade.
Svenska - 3
api® 20 E
07584G - sv - 2007/06
AVFALLSHANTERING
Avfallshantering av alla använda eller oanvända
reagenser,
liksom
av
andra
kontaminerade
engångsmaterial, ska ske i enlighet med procedurer för
infektiösa eller potentiellt infektiösa produkter.
Det är varje laboratoriums ansvar att handha avfalls- och
avloppsprodukter efter typ och farlighetsgrad och
behandla och avlägsna dem (eller få dem behandlade och
avlägsnade) i enlighet med alla tillämpliga föreskrifter.
AVLÄSNINGSTABELL
TESTER
AKTIVA
INGREDIENSER
MÄNGD
(mg/kup.)
REAKTIONER/ENZYMER
RESULTAT
NEGATIVT
POSITIVT
färglös
gul (1)
ß-galaktosidas
(orto-nitrofenyl-ßDgalaktopyranosidas)
ONPG
2-nitrofenyl-ßDgalaktopyranosid
0,223
ADH
L-arginin
1,9
Arginin dihydrolas
gul
röd / orange (2)
LDC
L-lysin
1,9
Lysindekarboxylas
gul
röd / orange (2)
ODC
L-ornitin
1,9
Ornitin-dekarboxylas
gul
röd / orange (2)
CIT
trinatriumcitrat
0,756
CITratanvändning
ljusgrön / gul
blågrön / blå (3)
H2S
natriumtiosulfat
0,075
H2S-bildning
färglös / gråaktig
svart avlagring / tunn linje
URE
urinämne
0,76
UREas
gul
röd / orange (2)
TDA
L-tryptofan
0,38
Tryptofan-deaminas
gul
TDA / omedelbar
IND
L-tryptofan
rödbrun
JAMES / omedelbar
färglös
0,19
INDol-bildning
färglös / ljusrosa
rosa / röd (5)
ingen spridning
spridning av svart
pigment
ljusgrön / gul
rosa
VP 1 + VP 2 / 10 min
VP
natriumpyruvat
1,9
acetoinbildning
(Voges Proskauer)
GEL
Gelatin
(av nöt)
0,6
GELatinas
GLU
D-glukos
1,9
jäsning / oxidation (GLUkos) (4)
blå / blågrön
gul / grågul
MAN
D-mannitol
1,9
jäsning / oxidation (MANnitol) (4)
blå / blågrön
gul
INO
inositol
1,9
jäsning / oxidation (INOsitol) (4)
blå / blågrön
gul
SOR
D-sorbitol
1,9
jäsning / oxidation (SORbitol) (4)
blå / blågrön
gul
RHA
L-ramnos
1,9
jäsning / oxidation (RHAmnos) (4)
blå / blågrön
gul
SAC
D-sukros
1,9
jäsning / oxidation (SACkaros) (4)
blå / blågrön
gul
MEL
D-melibios
1,9
jäsning / oxidation (MELibios) (4)
blå / blågrön
gul
AMY
amygdalin
0,57
jäsning / oxidation (AMYgdalin) (4)
blå / blågrön
gul
ARA
L-arabinos
1,9
jäsning / oxidation (ARAbinos) (4)
blå / blågrön
gul
OX
(se bipacksedel för oxidastest)
cytokrom-Oxidas
(se bipacksedel för oxidastest)
(1) En mycket ljust gul färgning ska också anses som positiv.
(2) En orange färg efter 36-48 timmars inkubation ska anses negativ.
(3) Avläsning utförd i kupolen (aerob).
(4) Jäsning börjar i brunnens nedre delar, oxidation börjar i kupolen.
(5) En svagt rosa färg efter 10 minuter ska anses negativ.
xDen angivna mängden kan justeras beroende på titern av de använda råmaterialen.
xVissa kupoler innehåller produkter av animaliskt ursprung, i synnerhet peptoner.
bioMérieux® SA
Svenska - 4
api® 20 E
07584G - sv - 2007/06
KOMPLETTERANDE TESTER
RESULTAT
TESTER
Nitratreduktion
GLUbrunn
AKTIVA
INGREDIENSER
MÄNGD
(mg/kup.)
0,076
kaliumnitrat
REAKTIONER/ENZYMER
NEGATIVT
POSITIVT
NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min
gul
röd
NO2-bildning
Zn / 5 min
reduktion till N2 gas
orange-röd
gul
MOB
API M Medium eller
mikroskop
-
motilitet
icke-motil
motil
McC
MacConkey medium
-
tillväxt
frånvaro
närvaro
-
jäsning : under mineralolja
grön
gul
-
oxidation : exponerad för luft
grön
gul
OF-F
OF-O
glukos (API OF Medium)
METOD
IDENTIFIERINGSTABELL
REFERENSLITTERATUR
SYMBOLER
s. I
s. II
s. IV
s. V
CLSI är ett använt, patentsökt och/eller registrerat varumärke som tillhör Clinical Laboratory and Standards Institute, Inc.
ATCC är ett använt, patentsökt och/eller registrerat varumärke som tillhör American Type Culture Collection.
bioMérieux® SA
673 620 399 RCS LYON
Tel. 33 (0)4 78 87 20 00
Fax 33 (0)4 78 87 20 90
bioMérieux, Inc
Box 15969,
Tel. (1) 919 620 20 00
Fax (1) 919 620 22 11
Tryckt i Frankrike
bioMérieux, den blå logotypen, API, API 20 E och apiweb är patentsökta och/eller registrerade varumärken som tillhör
och används av bioMérieux SA eller något av dess dotterbolag.
20 100 / 20 160
®
07584G - da - 2007/06
20 E
IVD
Identifikationssystem for Enterobacteriaceae og andre ikke-kræsne Gram-negative stave
RESUMÉ OG FORKLARING
API 20 E er et standardiseret identifikationssystem til
Enterobacteriaceae og andre ikke-kræsne Gram-negative
stave, som anvender 21 minimerede biokemiske tests
samt en database. Den komplette liste over de
organismer, som det er muligt at identificere med dette
system, er angivet i Identifikationstabellen i slutningen af
denne indlægsseddel.
PRINCIP
API 20 E strip består af 20 mikrorør indeholdende
dehydrerede substrater. Disse tests inokuleres med en
bakteriesuspension, der rekonstituerer mediet. Under
inkubationen fremkalder metabolismen farveændringer,
som enten sker spontant eller afsløres ved tilsætning af
reagenser.
Reaktionerne aflæses i henhold til aflæsningstabellen, og
identifikationen opnås ved opslag i det analytiske
profilindeks eller ved anvendelse af identifikationssoftwaren.
KITTETS INDHOLD
Kit til 25 tests (ref. 20 100)
- 25 inkubationsæsker
- 25 resultatark
- 1 poseforsegler
- 1 indlægsseddel
Kit til 100 tests (ref. 20 160)
- 100 inkubationsæsker
- 100 resultatark
1 klemtætning
1 indlægsseddel
SAMMENSÆTNING AF STRIP'EN
Sammensætningen af API 20 E strip’en er angivet i
aflæsningstabellen på denne indlægsseddel.
NØDVENDIGE MEN IKKE MEDFØLGENDE
REAGENSER OG MATERIALER
Reagenser
- API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (Ref. 20 230) eller
API Suspensionsmedium, 5 ml (Ref. 20 150)
- API 20 E reagenskit (Ref. 20 120) eller
individuelle reagenser : TDA (Ref. 70 402)
JAMES (Ref. 70 542)
VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422)
NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)
- Zn reagens (Ref. 70 380)
* reference, sælges ikke i visse lande: anvend et
tilsvarende reagens.
- Mineralsk olie (Ref. 70 100)
- API 20 E Analytisk Profilindeks (Ref. 20 190) eller
apiweb™ identifikationssoftware (Ref. 40 011) (spørg
bioMérieux)
bioMérieux® SA
Materiale
- Pipetter eller PSIpetter
- Ampulbeskytter
- Ampulstativ
- Almindeligt laboratorieustyr til mikrobiologi
EVENTUELLE SUPPLERENDE REAGENSER
Test til bestemmelse af fermentativ eller oxidativ
metabolisme.
Test for fakultativt anaerobe bakteriers motilitet.
ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER
xTil in-vitro diagnostisk brug og mikrobiologisk
kontrol.
x Kun til professionel brug.
xDette kit indeholder produkter af animalsk oprindelse.
Certificeret kendskab til dyrenes oprindelse og/eller
sundhedstilstand er ikke nogen fuldgyldig garanti for, at
der ikke er indeholdt nogen patogene stoffer. Det
anbefales derfor, at disse produkter behandles som
potentielt smittefarlige og håndteres under iagttagelse af
de normale sikkerhedsforanstaltninger (må ikke
indtages eller indåndes).
xAlle prøver, bakteriekulturer og inokulerede produkter
skal betragtes som smittefarlige og håndteres i
overensstemmelse hermed. Der skal anvendes aseptisk
teknik og sædvanlige forholdsregler for håndtering af
den undersøgte bakteriekultur gennem hele denne
procedure. Se venligst "CLSI® M29-A, Protection of
Laboratory Workers from Occupationally Acquired
Infections; Approved Guideline - Gældende revision".
For
yderligere
forsigtighedsforanstaltninger
ved
håndtering henvises til "Biosafety in Microbiological and
Biomedical Laboratories – CDC/NIH – Seneste
udgivelse", eller de bestemmelser, der aktuelt anvendes
i det enkelte land.
xReagenserne må ikke anvendes efter udløbsdatoen.
xCheck inden brug, at de forskellige komponenters
pakninger er intakte.
xBrug ikke strips, der er beskadiget: deformerede
brønde, åbne poser med tørremiddel, osv.
xDe fremlagte præstationsdata blev fundet ved
anvendelse af den procedure, der er angivet på denne
indlægsseddel. Enhver ændring eller modifikation af
denne procedure kan påvirke resultaterne.
xVed fortolkning af testresultaterne skal der tages højde
for patientens sygehistorie, prøvens kilde, koloniens og
mikroskopiens morfologi for stammen samt om
nødvendigt resultaterne af eventuelle andre udførte
prøver, specielt de antibakterielle følsomhedsmønstre.
Dansk - 1
api® 20 E
07584G - da - 2007/06
OPBEVARINGSFORHOLD
Strips leveres i en aluminiumpose med tørremiddel.
Når posen er åbnet (*), skal den forsegles igen med
poseforsegleren (medfølger i kittet) for at bevare de
resterende strips med poserne med tørremiddel: Anbring
den åbne ende af posen langs forsegleren og klem
omhyggeligt klemmen sammen mellem de to dele. Hver
strip
kan
derefter
opbevares
i
op
til
10 måneder efter, at posen er åbnet, ved 2-8°C (eller
indtil den udløbsdato, der er angivet på pakningen, hvis
dette sker inden).
(*) Anbefalet metode til åbning af poserne : Klip posen op
lige under forseglingen, mens posen holdes opret for at
undgå at beskadige poserne med tørremiddel.
Inokulation af strip'en
xMed samme pipette fordeles den bakterielle suspension
i rørene på strippen (for at undgå dannelse af bobler i
bunden af rørene, vippes strippen let fremad, og
spidsen af pipetten eller PSIpette placeres op mod siden
af brønden):
- For testene CIT , VP and GEL fyldes både rør og
brønd,
- For andre tests fyldes kun rørene (og ikke brøndene),
- For testene ADH, LDC, ODC, H2S and URE, skabes
anaerobe forhold ved at dække rørene med mineralsk
olie.
xLuk inkubationsæsken.
xInkubér ved 36°C ± 2°C i 18-24 timer.
PRØVER (OPSAMLING OG PRÆPARERING)
API 20 E må ikke bruges direkte sammen med kliniske
eller andre prøver.
De mikroorganismer, der skal identificeres, skal først
isoleres på et dyrkningsmedium, der er tilpasset dyrkning
af Enterobacteriaceae og/eller ikke-kræsne Gramnegative stave i henhold til mikrobiologiske standard
teknikker.
Præparering af strip'en
xPræparer en inkubationsæske (bakke og låg) og fordel
cirka 5 ml destilleret eller demineraliseret vand [eller
eventuelt vand uden tilsætningsstoffer eller kemikalier,
der kan frigive gasser (f.eks. Cl2, CO2, etc.)] i bakkens
fordybninger for at skabe en fugtig atmosfære.
xNotér stammereferencen på bakkens forlængede klap.
(Notér ikke referencen på låget, da det kan blive flyttet
under proceduren).
xFjern strip'en fra pakningen.
xAnbring strip'en i inkubationsæsken.
BEMÆRK: API 20 E bør kun anvendes sammen med
Enterobacteriaceae og/eller ikke-kræsne Gram-negative
stave. Kræsne organismer med krævende ernæringskrav,
og som kræver særlige håndteringsforanstaltninger (dvs.
Brucella og Francisella) er ikke medtaget i API 20 E
databasen. Der må ikke anvendes alternative procedurer
for at udelukke eller bekræfte deres tilstedeværelse.
AFLÆSNING OG FORTOLKNING
Aflæsning af strip'en
xEfter inkubationsperioden aflæses strip'en ved at
referere til Aflæsningstabellen.
xHvis 3 eller flere tests (GLU test + eller -) er positive,
noteres alle de spontane reaktioner på resultatarket, og
derefter afsløres de tests, der kræver tilsætning af
reagenser :
- TDA-Test : Tilsæt en dråbe TDA-reagens. En rødbrun
farve er tegn på en positiv reaktion at notere på
resultatarket.
- IND-Test : Tilsæt en dråbe JAMES-reagens. Hvis der
udvikles en lyserød farve i hele brønden, er det tegn
på en positiv reaktion at notere på resultatarket.
- VP-Test : Tilsæt 1 dråbe af hvert af reagenserne VP 1
og VP 2. Vent mindst 10 minutter. En lyserød eller
rød farve angiver, at en positiv reaktion skal noteres
på resultatarket. Hvis der viser sig en let lyserød farve
efter 10 minutter, bør reaktionen betragtes som
negativ.
BEMÆRK: Indolproduktionstesten skal udføres sidst,
da denne reaktion frigør gasprodukter, som påvirker
fortolkningen
af
andre
tests
på
strip'en.
Plastinkubationslåget må ikke sættes på igen, når
reagenset er tilsat.
xHvis antallet af positive tests (inklusive GLU-test) før
tilsætning af reagenserne er under 3 :
- Reinkuberes strip'en i yderligere 24 timer (± 2 timer)
uden at tilsætte nogen reagenser.
- Afslør de tests, der kræver tilsætning af reagenser (se
foregående afsnit).
- For at afslutte identifikationen kan det være
nødvendigt at udføre supplerende tests (se
Identifikations-afsnittet).
Præparering af inokulum
xÅbn en ampul med API NaCl 0,85 % Medium (5 ml) eller
en ampul med API Suspensionsmedium (5 ml) som
angivet i afsnittet "Advarsler og forholdsregler" på
indlægssedlen til disse produkter, eller anvend et rør,
der indeholder 5 ml sterilt saltvand eller sterilt destilleret
vand uden tilsætningsstoffer.
xFjern en enkelt brøndisoleret koloni fra en
isolationsplade med en pipette eller PSIpette. Det
anbefales at anvende unge kulturer (18-24 timer gamle).
xEmulgér omhyggeligt for at opnå en homogen
bakteriesuspension.
Denne suspension skal anvendes umiddelbart efter
præpareringen.
BEMÆRK: De fleste Vibrio species er halofile. Hvis der
er mistanke om en Vibrio, opslemmes bakterien i
API NaCl 0,85 % Medium.
Fortolkning
Identifikation sker med den numeriske profil.
xBestemmelse af den numeriske profil:
På resultatarket er testene opdelt i grupper på 3, og en
værdi, 1,2 eller 4, er angivet for hver. Ved at addere de
værdier, der svarer til positive reaktioner inden for hver
gruppe opnår man et 7-cifret profilnummer for de 20
tests i API 20 E-strip'en. Oxidasereaktionen udgør den
21. test og har en værdi på 4, hvis den er positiv.
xIdentifikation :
Denne udføres ved hjælp af databasen (V4.1)
* med Analytisk Profilindeks :
- Slå den numeriske profil op i fortegnelsen over
profiler.
* med apiweb™ identifikationssoftwaren:
- Indtast den 7-cifrede numeriske profil manuelt via
tastaturet.
BRUGSANVISNING
Oxidasetest
Oxidasetesten skal gennemføres i overensstemmelse
med producentens brugervejledning. Resultatet bør
indføres på resultatarket, da det er en integreret del af
den endelige profil (21. identifikationstest).
bioMérieux® SA
Dansk - 2
api® 20 E
07584G - da - 2007/06
I visse tilfælde er den 7-cifrede profil ikke tilstrækkeligt
diskriminerende, og det er nødvendigt at udføre følgende
supplerende tests.
- Reduktion af nitrater til nitriter (NO2) og N2 gas (N2) :
Tilsæt en dråbe NIT 1 og en dråbe NIT 2 reagens til
GLU-røret. Vent 2 til 5 minutter. En rød farve er tegn på
en positiv reaktion (NO2). En negativ reaktion (gul) kan
skyldes reduktionen til nitrogen (hvilket sommetider
viser sig i form af luftbobler) : Tilsæt 2 til 3 mg Znreagens til GLU-røret. Hvis røret efter 5 minutter stadig
er gult, er det tegn på en positiv reaktion (N2) at notere
på resultatarket. Hvis testen bliver orange-rød, er dette
en negativ reaktion. De nitrater, der stadig er i røret, er
blevet reduceret af zinken.
Denne reaktion er nyttig ved testning af Gram-negative
oxidasepositive stave.
BEMÆRK: Af samme årsag som indol-testen (se
bemærkning i afsnittet "Aflæsning af strip") skal
nitratreduktionstesten udføres sidst.
- Motilitet (MOB) : Inokulér en ampul med API M Medium
(se indlægsseddel).
- Dyrkning på MacConkey-agarmedium (McC) : Udstryg
en MacConkey agarplade (se indlægsseddel).
- Oxidation af glukose (OF-O) : Inokulér en ampul med
API OF Medium (se indlægsseddel).
- Fermentation af glukose (OF-F) : Inokulér en ampul med
API OF Medium (se indlægsseddel).
Disse supplerende tests, der er angivet i det indledende
afsnit (Profilkodning) af det Analytiske Profilindeks, kan
anvendes til at skabe en 9-cifret profil. Identifikation opnås
da ved hjælp af Identifikationssoftwaren.
Der kan foreslås flere tests i tilfælde af lav diskrimination.
Der henvises til identifikations-softwaren eller Analytisk
Profilindeks.
KVALITETSKONTROL
Medier, strips og reagenser kvalitetskontrolleres systematisk på forskellige trin under fremstillingen.
For de brugere, der ønsker at udføre deres egne kvalitetskontroltests med strip'en er det bedst at anvende stammen
1. Escherichia coli ATCC® 25922 eller en af følgende stammer:
ATCC 51331
ATCC 13047
ATCC 35659
ONPG ADH LDC ODC
1.
2.
3.
4.
5.
+
+
+
–
+
–
–
+
–
–
+
V
–
–
+
+
–
V
+
–
CIT
–
V
+
V
+
H2S URE TDA IND VP
–
–
–
+
–
–
–
–
+
V
–
–
–
+
–
+
–
–
–
–
–
–
+
–
V
GEL
–
+
–
V
–
+
–
+
+
+
+
–
+
–
+
–
–
V
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
–
+
–
–
+
V
+
+
–
+
–
+
–
–
+
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
+
+
–
–
–
–
V
* N2 (+) tilstand kan observeres for stammen ATCC 13047 og stammen ATCC 25922.
x Profil opnået efter 24-48 timers inkubation for stammen ATCC 51331 ved brug af kolonier dyrket på Trypticasesojaagar + blod.
x Profiler opnået efter 18–24 timers inkubation for de øvrige stammer ved brug af kolonier dyrket på Trypticasesojaagar + blod.
x Bacterieopslemninger præpareret i API NaCl 0,85 % Medium.
Det er brugerens ansvar at foretage kvalitetskontrol i overensstemmelse med lokale gældende bestemmelser.
METODENS BEGRÆNSNINGER
xAPI 20 E-systemet er udelukkende beregnet til
identifikation af Enterobacteriaceae og de ikke-kræsne
Gram-negative stave, der er indeholdt i databasen (se
Identifikationstabellen
i
slutningen
af
denne
indlægsseddel). Det kan ikke benyttes til at identificere
nogen andre mikroorganismer eller til at udelukke, at de
er til stede.
xAfvigelser i forhold til konventionelle metoder kan
observeres.
De
skyldes
de
forskellige
reaktionsprincipper, der anvendes i API-teknikken.
Desuden findes der substratvariationer, som også tager
højde for procentuelle forskelle.
xI sjældne tilfælde kan glukosereaktioner for organismer
som Klebsiella eller Proteus reversere fra positiv til
negativ; i sådanne tilfælde ses en blågrøn farve. Denne
reaktion noteres som en negativ reaktion. Sådanne
forekomster afspejles i de procentdele, der er angivet i
Identifikationstabellen.
xHvis der identificeres Salmonella eller Shigella, skal der
udføres serologisk identifikation for at bekræfte den
bakterielle identifikation.
xNon-fermentative Gram-negative stave, isoleret fra
patienter med cystisk fibrose, kan resultere i atypiske
biokemiske profiler, hvilket kan påvirke identifikationen.
xDer bør kun anvendes rene kulturer af en enkelt
organisme.
bioMérieux® SA
FORVENTEDE RESULTATER
Se Identifikationsoversigten i slutningen af denne
indlægsseddel for forventede resultater for de forskellige
biokemiske reaktioner.
PRÆSTATION
5514 kollektions-stammer og stammer af forskellig
oprindelse, som hører til species, der er inkluderet i
databasen, blev testet:
- 92,80 % af stammerne blev korrekt identificeret
(med eller uden supplerende tests).
- 4,61 % af stammerne blev ikke identificeret.
- 2,59 % af stammerne blev fejlidentificeret.
xAndre ikke-kræsne Gram-negative stave:
2386 kollektionsstammer og stammer af forskellig
oprindelse, som hører til species, der er inkluderet i
databasen, blev testet:
- 90,32 % af stammerne blev korrekt identificeret
(med eller uden supplerende tests).
- 6,16 % af stammerne blev ikke identificeret.
- 3,52 % af stammerne blev fejlidentificeret.
Dansk - 3
api® 20 E
07584G - da - 2007/06
BORTSKAFFELSE AF AFFALD
Bortskaf alle brugte eller ubrugte komponenter samt
eventuelle andre kontaminerede materialer efter
procedurer for infektiøse eller potentielt infektiøse
produkter.
Det er ethvert laboratoriums ansvar at håndtere det affald
og spildevand, der opstår, i overensstemmelse med dets
type og grad af farlighed, og at behandle og bortskaffe det
(eller få det behandlet og bortskaffet) i henhold til
gældende forskrifter.
AFLÆSNINGSTABEL
TESTS
AKTIVE
INDHOLDSSTOFFER
MÆNGDE
(mg/brønd)
ONPG
2-nitrofenyl-ßDgalaktopyranosid
0.223
ADH
L-arginin
1.9
LDC
L-lysin
ODC
REAKTIONER/ENZYMER
RESULTATER
NEGATIVE
POSITIVE
farveløs
gul (1)
Arginin DiHydrolase
gul
rød / orange (2)
1.9
Lysin DeCarboxylase
gul
rød / orange (2)
L-ornitin
1.9
Ornitin DeCarboxylase
gul
rød / orange (2)
CIT
trinatriumcitrat
0.756
CITratudnyttelse
lysegrøn / gul
blågrøn / blå (3)
H2S
natriumthiosulfat
0.075
H2S produktion
farveløs / grålig
sort aflejring / tynd stribe
URE
urea
0.76
UREase
gul
rød / orange (2)
TDA
L-tryptofan
0.38
Tryptofan DeAminase
gul
IND
L-tryptofan
0.19
INDol produktion
ß-galaktosidase
(Ortho-NitroFenyl-ßDGalaktopyranosidase)
TDA / umiddelbar
rødbrun
JAMES / umiddelbar
farveløs lysegrøn / gul
lyserød
VP 1 + VP 2 / 10 min
VP
natriumpyruvat
1.9
acetoindannelse
(Voges-Proskauer)
GEL
Gelatine
(okse-oprindelse)
0.6
GELatinase
GLU
D-glukose
1.9
MAN
D-mannitol
INO
farveløs / bleg lyserød
lyserød / rød (5)
ingen diffusion
diffusion af sort pigment
(GLUkose) (4)
blå / blågrøn
gul / grågul
1.9
(MANnitol) (4)
blå / blågrøn
gul
inositol
1.9
(INOsitol) (4)
blå / blågrøn
gul
SOR
D-sorbitol
1.9
(SORbitol) (4)
blå / blågrøn
gul
RHA
L-rhamnose
1.9
(RHAmnose) (4)
blå / blågrøn
gul
SAC
D-sucrose
1.9
(SACcharose) (4)
blå / blågrøn
gul
MEL
D-melibiose
1.9
(MELibiose) (4)
blå / blågrøn
gul
AMY
amygdalin
0.57
(AMYgdalin) (4)
blå / blågrøn
gul
ARA
L-arabinose
1.9
(ARAbinose) (4)
blå / blågrøn
gul
OX
(se indlægsseddel for oxidase-test)
cytochrom-OXidase
(se indlægsseddel for oxidase-test)
(1) En meget lys gul skal også betragtes som positiv.
(2) En orange farve efter 36-48 timers inkubation skal betragtes som negativ.
(3) Aflæsning foretaget i brønden (aerob).
(4) Fermentation starter i den nederste del af rørene, oxidation starter i brønden.
(5) En let lyserød farve efter 10 minutter skal betragtes som negativ.
xDe angivne mængder kan justeres, afhængigt af titeren for de anvendte råmaterialer.
xVisse brønde indeholder produkter af animalsk oprindelse, specielt peptoner.
bioMérieux® SA
Dansk - 4
api® 20 E
07584G - da - 2007/06
SUPPLERENDE TESTS
RESULTATER
TESTS
Nitratreduktion
GLU-rør
AKTIVE
INDHOLDSSTOFFER
MÆNGDE
(mg/brønd)
0.076
kaliumnitrat
REAKTIONER/ENZYMER
NEGATIVE
POSITIVE
NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min.
gul
rød
NO2 produktion
Zn / 5 min
reduktion til N2 gas
orange-rød
gul
MOB
API M Medium eller
mikroskop
-
motilitet
ikke-motil
motil
McC
MacConkey medium
-
vækst
findes ikke
findes
-
fermentation : under mineralsk
olie
grøn
gul
-
oxidation : udsat for luft
grøn
gul
OF-F
OF-O
glukose (API OF Medium)
PROCEDURE
IDENTIFIKATIONSTABEL
BIBLIOGRAFI
SYMBOLFORTEGNELSE
p. I
p. II
p. IV
p. V
CLSI er et anvendt, under registrering og/eller registreret varemærke tilhørende Clinical Laboratory and Standards Institute, Inc.
ATCC er et anvendt, under registrering og/eller registreret varemærke tilhørende American Type Culture Collection.
bioMérieux® SA
673 620 399 RCS LYON
Tel. 33 (0)4 78 87 20 00
Fax 33 (0)4 78 87 20 90
bioMérieux, Inc
Box 15969,
Tel. (1) 919 620 20 00
Fax (1) 919 620 22 11
Trykt i Frankrig
bioMérieux,det blå logo, API, API 20 E og apiweb er anvendte, under registrering og/eller indregistrerede varemærker
tilhørende bioMérieux SA eller et af dettes datterselskaber.
20 100 / 20 160
®
07584G - pl - 2007/06
20 E
IVD
Zestaw do identyfikacji Enterobacteriaceae i innych paáeczek Gram-ujemnych o niewysokich wymaganiach odĪywczych
WPROWADZENIE
API 20 E jest wystandaryzowanym zestawem do
identyfikacji
Enterobacteriaceae
i
innych
maáo
wymagających paáeczek Gram-ujemnych, który stanowią
21 zminiaturyzowane testy biochemiczne i baza danych.
Peána lista organizmów, które moĪna zidentyfikowaü przy
uĪyciu tego systemu jest podana na koĔcu niniejszej
instrukcji w Tabeli Identyfikacyjnej.
ZASADA DZIAàANIA
Paski API 20 E skáadają siĊ z 20 mikroprobówek
zawierających odwodnione substraty. Testy te są
napeániane zawiesinami bakteryjnymi, co odtwarza
podáoĪa. Procesy metaboliczne zachodzące podczas
inkubacji powodują zmiany koloru, które są albo
spontaniczne, lub wywoáane przez dodanie odczynników.
Po odczytaniu reakcji wedáug Tabeli Odczytów, otrzymuje
siĊ identyfikacjĊ przez porównanie z KsiąĪką Kodów lub
stosując program komputerowy.
ZAWARTOĝû ZESTAWU
Zestaw na 25 testów (ref. 20 100)
- 25 pasków API 20 E
- 25 komór inkubacyjnych
- 25 kart wyników
- 1 zacisk zamykający
- 1 instrukcja
Zestaw na 100 testów (ref. 20 160)
- 100 pasków API 20 E (4x25 pasków)
- 100 komór inkubacyjnych
- 100 kart wyników
1 zacisk zamykający
1 instrukcja
SKàAD PASKA
Skáad paska API 20 E podano w tej instrukcji w Tabeli
Odczytów.
WYPOSAĩENIE WYMAGANE NIE NALEĩĄCE DO
ZESTAWU
Odczynniki
- API NaCl 0.85 % Medium, 5 ml (Ref. 20 230) lub
- API 20 E reagent kit (Ref. 20 120) lub
pojedyncze odczynniki : TDA (Ref. 70 402)
JAMES (Ref. 70 542)
VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422)
NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)
- Odczynnik Zn (Ref. 70 380)
- Oksydaza (Ref. 55 635*)
* produkt nie sprzedawany w niektórych krajach:
uĪywaü równowaĪnego odczynnika.
- Olej mineralny (Ref. 70 100)
- KsiąĪka Kodów dla API 20 E (Ref. 20 190) lub
oprogramowanie komputerowe do identifikacji
apiweb TM (Ref. 40 011) (skontaktuj siĊ z bioMérieux)
bioMérieux® SA
Materiaáy
-
Pipety lub PSIpety
Osáona na ampuákĊ
Statyw do ampuáek
WyposaĪenie zazwyczaj stosowane w laboratorium
mikrobiologicznym
EWENTUALNE DODATKOWE ODCZYNNIKI
Test do okreĞlania metabolizmu fermentacyjnego lub
oksydacyjnego.
Test do oznaczania ruchu bakterii wzglĊdnie
beztlenowych.
ĝRODKI OSTROĩNOĝCI
xDo diagnostyki in vitro i kontroli mikrobiologicznej.
xDo wykorzystania wyáącznie przez profesjonalistów.
xProdukt zawiera materiaáy pochodzenia zwierzĊcego.
ĝwiadectwo pochodzenia i/lub stanu sanitarnego
zwierząt nie gwarantuje w peáni nieobecnoĞci czynników
chorobotwórczych. Dlatego naleĪy obchodziü siĊ z nim
zgodnie z zasadami postĊpowania z materiaáem
potencjalnie zakaĨnym (nie spoĪywaü i nie wdychaü).
xWszystkie próbki pobrane od pacjentów, hodowle
bakteryjne i wykorzystane produkty są potencjalnie
zakaĨne i powinny byü traktowane zgodnie z zalecanymi
Ğrodkami ostroĪnoĞci. NaleĪy stosowaü techniki
aseptyczne i zwykáe procedury obowiązujące przy pracy
®
ze szczepami bakteryjnymi zgodnie z "CLSI M29-A,
Protection of Laboratory Workers from Occupationally
Acquired Infections; Approved Guideline – BieĪąca
wersja". Dodatkowe Ğrodki ostroĪnoĞci zawarte są
w "Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories – CDC/NIH – Ostatnie wydanie", lub
regulowane przepisami wáaĞciwymi dla poszczególnych
paĔstw.
xNie uĪywaü odczynników przeterminowanych.
xPrzed
uĪyciem
sprawdziü,
czy
opakowania
poszczególnych skáadników są nienaruszone.
xNie uĪywaü pasków uszkodzonych : odksztaácone
studzienki, otwarty Ğrodek odwadniający, itd.
xW celu osiągniĊcia odpowiednich wyników naleĪy
stosowaü procedurĊ zawartą w opakowaniu. KaĪda
modyfikacja procedury moĪe wpáywaü na wyniki.
xW interpretacji wyników testu naleĪy wziąü pod uwagĊ
historiĊ choroby pacjenta, miejsce pobrania materiaáu,
makro- i mikroskopową morfologiĊ oraz jeĞli bĊdzie
konieczne, wyniki innych przeprowadzonych testów,
szczególnie lekowraĪliwoĞci.
Polski - 1
api® 20 E
07584G - pl - 2007/06
PRZECHOWYWANIE
Paski są dostarczane w aluminiowych opakowaniach
ze Ğrodkiem odwadniającym.
Raz otwarte (*) opakowanie powinno byü zamykane przy
uĪyciu zacisku (zawartego w zestawie), aby zabezpieczyü
pozostaáe paski wraz ze Ğrodkiem odwadniającym:
umieĞciü otwarte koĔce opakowania wzdáuĪ zacisku
i dokáadnie zamknąü miĊdzy jego dwiema czĊĞciami. Po
otwarciu
opakowania
paski
mogą
byü
przechowywane do 10 miesiĊcy, w 2-8°C (lub do
upáyniĊcia daty waĪnoĞci oznaczonej na opakowaniu, jeĞli
przypada ona wczeĞniej).
(*) Zalecany sposób otwierania opakowaĔ : obciąü
opakowanie tuĪ poniĪej miejsca zamkniĊcia trzymając je
pionowo,
aby
uniknąü
uszkodzenia
Ğrodka
odwadniającego.
MATERIAà DO BADAē (POBIERANIE I OPRACOWANIE)
Paski API 20 E nie są przeznaczone do bezpoĞrednich
badaĔ materiaáu klinicznego lub innych próbek.
Identyfikowany mikroorganizm musi byü najpierw
wyizolowany na podáoĪach hodowlanych dostosowanych
dla Enterobacteriaceae i/lub niewymagających Gramujemnych
paáeczek,
zgodnie
ze
standardowymi
technikami mikrobiologicznymi.
SPOSÓB WYKONANIA
Test na oksydazĊ:
Test na oksydazĊ naleĪy wykonaü zgodnie z instrukcją
w nim zawartą. Wynik naleĪy zanotowaü na karcie
wyników, poniewaĪ stanowi on integralną czĊĞü
ostatecznego profilu (21 test identyfikacyjny).
Przygotowanie paska
xPrzygotowaü
komorĊ
inkubacyjną
(podstawkĊ
i pokrywkĊ) i nanieĞü okoáo 5 ml destylowanej lub
demineralizowanej wody [lub jakiejkolwiek wody bez
dodatków lub związków chemicznych, z których mogą
wydzielaü siĊ gazy (np. Cl2, CO2, itd.)] na podstawkĊ
w ksztaácie plastra miodu, w celu wytworzenia komory
wilgotnej.
xZanotowaü numer szczepu na wydáuĪonej czĊĞci
podstawki. (Nie notowaü numeru na pokrywce,
poniewaĪ moĪe ona ulec zamianie w trakcie badaĔ)
xWyjąü pasek z opakowania.
xUmieĞciü pasek w komorze inkubacyjnej.
UWAGA:
API 20 E naleĪy stosowaü tylko dla
Enterobacteriaceae i/lub niewybrednych paáeczek Gramujemnych. Organizmy o duĪych potrzebach odĪywczych
i wymagające odpowiednich Ğrodków ostroĪnoĞci w
postĊpowaniu z nimi (np. Brucella oraz Francisella), nie
są wáączone do bazy danych API 20 E. W celu
potwierdzenia lub wykluczenia ich obecnoĞci muszą
zostaü zastosowane alternatywne metody.
Przygotowanie inokulum
xOtworzyü ampuákĊ API NaCl 0.85 % Medium (5 ml) lub
ampuákĊ API Suspension Medium (5 ml) w sposób
opisany w paragrafie "ĝrodki ostroĪnoĞci" w instrukcji
dla tego produktu, lub uĪyü jakąkolwiek probówkĊ
zawierającą 5 ml jaáowej soli fizjologicznej lub jaáowej
wody destylowanej, bez dodatków.
xUĪywając pipety lub PSIpety pobraü pojedynczą, dobrze
wyizolowaną koloniĊ z páytki. Zaleca siĊ uĪywanie
máodych hodowli (18-24 godzinnych).
xOstroĪnie rozetrzeü w celu osiągniĊcia jednorodnej
zawiesiny.
ZawiesinĊ tĊ uĪyü natychmiast po sporządzeniu.
UWAGA: wiĊkszoĞü gatunków Vibrio jest halofilnych.
JeĞli zachodzi podejrzenie otrzymania Vibrio naleĪy
sporządziü zawiesinĊ w API NaCl 0.85 % Medium.
bioMérieux® SA
Napeánianie paska
xUĪywając tej samej pipety, napeániü zawiesiną
bakteryjną probówki na pasku (unikając tworzenia siĊ
pĊcherzyków przy podstawie probówki, przechylając
nieco pasek i umieszczając koĔcówkĊ pipetki lub
PSIpipetki naprzeciw zagáĊbienia):
- Dla testów CIT , VP i GEL napeániü zarówno
probówkĊ jak i wgáĊbienie mikroprobówki,
- Dla innych testów, napeániü jedynie probówkĊ (bez
wgáĊbieĔ),
- Dla testów ADH, LDC, ODC, H2S i URE wytworzyü
warunki beztlenowe poprzez naniesienie oleju
mineralnego.
xZamknąü komorĊ inkubacyjną.
xInkubowaü w 36°C ± 2°C przez 18-24 godziny.
ODCZYT I INTERPRETACJA
Odczyt paska
xPo inkubacji odczytaü pasek korzystając z Tabeli
Odczytu.
xJeĞli 3 lub wiĊcej testów (test GLU + lub –) jest
pozytywnych, zanotowaü wyniki wszystkich reakcji
spontanicznych na karcie wyników, nastĊpnie odczytaü
testy wymagające dodania odczynników:
- Test TDA : dodaü 1 kroplĊ odczynnika TDA.
Czerwono-brązowy kolor wskazuje na reakcjĊ
pozytywną, co naleĪy wpisaü do karty wyników.
- Test IND : dodaü 1 kroplĊ odczynnika JAMES. RóĪowy
kolor powstający w caáej probówce wskazuje na reakcjĊ
pozytywną, co naleĪy wpisaü do karty wyników.
- Test VP: dodaü po 1 kropli z kaĪdego odczynnika
VP 1 i VP 2. Odczekaü przynajmniej 10 minut.
RóĪowy lub czerwony kolor wskazuje na reakcjĊ
pozytywną, JeĞli po 10 minutach pojawi siĊ blado
róĪowy kolor, reakcjĊ naleĪy uznaü za negatywną.
UWAGA : Test na indol naleĪy wykonaü na koĔcu,
poniewaĪ w jego trakcie dochodzi do wytworzenia
produktów gazowych, które wpáywają na interpretacjĊ
innych testów na pasku. Plastikowa pokrywka inkubacyjna
nie powinna byü podnoszona po dodaniu odczynnika.
xJeĪeli liczba pozytywnych testów przed dodaniem
odczynników (wáączając w to test GLU) jest mniejsza
niĪ 3:
- PrzedáuĪyü inkubacjĊ paska o dalsze 24 godziny
(± 2 godziny) bez dodania odczynników.
- Odczytaü testy wymagające dodania odczynników
(patrz poprzedni paragraf).
- W celu uzupeánienia identyfikacji, moĪe byü konieczne
przeprowadzenie dodatkowych testów (zgodnie
z paragrafem identyfikacji).
Interpretacja
IdentyfikacjĊ otrzymuje siĊ z profilu numerycznego.
xOkreĞlanie profilu numerycznego:
Na karcie wyników testy podzielone są na grupy po 3,
kaĪdy odpowiednio o wartoĞci 1, 2 lub 4. Przez dodanie
do siebie wartoĞci odpowiadających pozytywnym
reakcjom w obrĊbie kaĪdej grupy otrzymuje siĊ 7
cyfrowy profil numeryczny dla 20 testów wystĊpujących
na pasku API 20 E. Reakcja oksydazy stanowi 21 test
i ma wartoĞü 4, jeĞli jest pozytywna.
xIdentyfikacja:
Uzyskuje siĊ ją uĪywając bazy danych (V4.1)
* z KsiąĪki Kodowej:
- Odszukaü wáaĞciwy profil numeryczny na liĞcie
profili.
* z oprogramowania komputerowego apiweb TM:
- Wprowadziü 7 cyfrowy profil numeryczny manualnie
przy uĪyciu klawiatury.
Polski - 2
api® 20 E
07584G - pl - 2007/06
W niektórych przypadkach 7 cyfrowy profil nie jest
wystarczająco charakterystyczny i naleĪy przeprowadziü
nastĊpujące testy uzupeániające:
- Redukcja azotanów do azotynów (NO2) i gazowego N2 (N2):
dodaü po 1 kropli z kaĪdego odczynnika NIT 1 i NIT 2
do probówki GLU. Odczekaü 2 do 5 minut. Czerwony
kolor wskazuje na reakcjĊ pozytywną (NO2). Reakcja
negatywna (Īóáty) moĪe byü spowodowana redukcją do
azotu (co czasami jest uwidocznione przez pĊcherzyki
gazu): dodaü 2 do 3 mg odczynnika Zn do probówki
GLU. Po 5 minutach, jeĞli probówka pozostaje Īóáta
wskazuje to na reakcjĊ pozytywną (N2), co naleĪy
zanotowaü w karcie wyników. JeĪeli pojawia siĊ kolor
pomaraĔczowo-czerwony jest to wynik negatywny:
azotany nadal wystĊpujące w probówce zostaáy
zredukowane przez cynk.
Reakcja jest uĪyteczna w badaniu Gram-ujemnych,
oksydazododatnich paáeczek.
UWAGA : Dla takich samych powodów jak test na indol
(patrz uwaga w paragrafie "Odczyt paska"), test redukcji
azotanów musi byü przeprowadzony jako ostatni.
- RuchliwoĞü (MOB) : Posiaü ampuákĊ API M Medium
(zapoznaü siĊ z instrukcją).
- Wzrost na podáoĪu agar MacConkey’a (McC): Posiaü
páytkĊ z agarem MacConkey’a (zapoznaü siĊ
z instrukcją).
- Utlenianie glukozy (OF-O): Posiaü ampuákĊ API OF
Medium (zapoznaü siĊ z instrukcją).
- Fermentacja glukozy (OF-F): Posiaü ampuákĊ API OF
Medium (zapoznaü siĊ z instrukcją).
Te uzupeániające testy wskazane w sekcji KsiąĪki Kodów,
mogą byü uĪyte do utworzenia 9 cyfrowego profilu.
IdentyfikacjĊ moĪna wtedy otrzymaü stosując wyáącznie
oprogramowanie komputerowe.
Dalsze testy mogą byü proponowane w przypadku
sáabego rozróĪnienia zgodnie z oprogramowaniem
komputerowym lub KsiąĪką Kodów.
KONTROLA JAKOĝCI
PodáoĪa, paski i odczynniki są systematycznie poddawane kontroli jakoĞci na róĪnym poziomie procesu produkcji.
Dla tych uĪytkowników, którzy chcą prowadziü swoją wáasną kontrolĊ pasków zaleca siĊ szczep wzorcowy
®
1. Escherichia coli ATCC 25922 lub jeden z nastĊpujących szczepów:
ATCC 51331
ATCC 13047
ATCC 35659
ONPG ADH LDC ODC
1.
2.
3.
4.
5.
+
+
+
–
+
–
–
+
–
–
+
V
–
–
+
+
–
V
+
–
CIT
–
V
+
V
+
H2S URE TDA IND VP
–
–
–
+
–
–
–
–
+
V
–
–
–
+
–
+
–
–
–
–
–
–
+
–
V
GEL
–
+
–
V
–
+
–
+
+
+
+
–
+
–
+
–
–
V
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
–
+
–
–
+
V
+
+
–
+
–
+
–
–
+
–
+
+
–
+
–
+
+
–
+
+
+
–
–
–
–
V
* Wynik N2 (+) moĪna zaobserwowaü dla szczepów ATCC 13047 i ATCC 25922.
x Profil otrzymywany po 24-48 godzinach inkubacji dla szczepu ATCC 51331, uĪywając kolonii wyrosáych na agarze tryptozowosojowym z krwią.
x Profil otrzymywany po 18-24 godzinach inkubacji dla pozostaáych szczepów, uĪywając kolonii wyrosáych na agarze tryptozowosojowym z krwią.
x Zawiesina bakteryjna przygotowywana w API NaCl 0.85 % Medium.
UĪytkownik jest zobowiązany do prowadzenia kontroli jakoĞci zgodnie z lokalnymi przepisami.
OGRANICZENIA METODY
xSystem API 20 E sáuĪy jedynie do identyfikacji
Enterobacteriaceae i tych niewymagających paáeczek,
Gram-ujemnych, które znajdują siĊ w bazie danych
(patrz Tabela Identyfikacyjna na koĔcu instrukcji). Nie
moĪe
byü
uĪywany
do
identyfikacji
innych
mikroorganizmów lub wykluczania ich obecnoĞci.
xMogą byü obserwowane rozbieĪnoĞci w odniesieniu do
metod konwencjonalnych, spowodowane róĪnicami
w przebiegu reakcji zastosowanych w technice API.
W dodatku, substraty mogą róĪniü siĊ procentową
zawartoĞcią.
xReakcje z glukozą dla takich organizmów jak Klebsiella
lub
Proteus
mogą
rzadko
ulec
odwróceniu
z pozytywnej do negatywnej, co uwidacznia siĊ jako
niebieskawo-zielony kolor. Taka reakcja moĪe byü
zapisana jako negatywna. W tym wypadku naleĪy
zastanowiü siĊ nad procentowym wskaĨnikiem w Tabeli
Identyfikacyjnej.
xIdentyfikacja Salmonella lub Shigella musi byü
potwierdzona testami serologicznymi.
xNiefermentujące paáeczki gram-ujemne, wyizolowane od
pacjentów z mukowiscydozą, mogą dawaü atypowe
profile biochemiczne, co ma wpáyw na identyfikacjĊ.
bioMérieux® SA
xNaleĪy uĪywaü tylko czysto wyizolowanych bakterii.
ZAKRES SPODZIEWANYCH WYNIKÓW
W Tabeli Identyfikacyjnej na koĔcu instrukcji sprawdziü
zakres spodziewanych wyników dla róĪnych testów
biochemicznych.
OCENA TESTU
Przebadano 5514 szczepów, z kolekcji i róĪnych Ĩródeá,
naleĪących do gatunków zawartych w bazie danych:
- 92,80 % szczepów prawidáowo zidentyfikowano
(z lub bez testów uzupeániających).
- 4,61 % szczepów nie zidentyfikowano.
- 2,59 % zostaáo nieprawidáowo zidentyfikowanych.
xInne niewymagające Gram-ujemne paáeczki:
Przebadano 2386 szczepów, z kolekcji i róĪnych Ĩródeá,
naleĪących do gatunków zawartych w bazie danych:
- 90.32 % szczepów zidentyfikowano prawidáowo
(z lub bez testów uzupeániających).
- 6.16 % szczepów nie zidentyfikowano.
- 3.52 % szczepów zidentyfikowano nieprawidáowo.
Polski - 3
api® 20 E
07584G - pl - 2007/06
POSTĉPOWANIE ZE ZUĩYTYMI TESTAMI
ZuĪytych i niezuĪytych odczynników, jak równieĪ
zanieczyszczonych sprzĊtów jednorazowych, naleĪy
pozbywaü siĊ zgodnie z procedurami dla materiaáów
zakaĨnych lub potencjalnie zakaĨnych.
Obowiązkiem kaĪdego laboratorium jest pozbywanie siĊ
zuĪytych testów i wytworzonych Ğcieków w zaleĪnoĞci od
typu i stopnia zabezpieczenia laboratorium oraz
dezynfekowaü je i usuwaü (zleciü dezynfekcjĊ i usuwanie)
zgodnie z zatwierdzonymi procedurami.
TABELA ODCZYTÓW
TEST
AKTYWNE
SKàADNIKI
STĉĩENIE
(mg/probówka)
ONPG
2-nitrofenylo-ßDgalaktopiranozyd
0.223
ADH
L-arginina
WYNIKI
REAKCJE/ENZYMY
NEGATYWNY
POZYTYWNY
ß-galaktozydaza
(orto nitrofenylo-ßDgalaktopiranozyd)
bezbarwny
Īóáty (1)
1.9
dihydrolaza argininy
Īóáty
czerwony / pomaraĔczowy (2)
LDC
L-lizyna
1.9
dekarbosylaza lizyny
Īóáty
ODC
L-ornityna
1.9
dekarbosylaza ornityny
Īóáty
CIT
cytrynian trisodowy
0.756
wykorzystanie cytrynianu
jasno szary / Īóáty
niebiesko-zielony / niebieski (3)
H2S
tiosiarczan sodowy
0.075
wytwarzanie H2S
bezbarwny / szarawy
czarny osad / rozpáyniĊta linia
URE
mocznik
0.76
ureaza
Īóáty
TDA / natychmiast
TDA
L-tryptofan
0.38
dezaminaza tryptofanu
czerwono-brązowy
Īóáty
JAMES / natychmiast
IND
L-tryptofan
0.19
wytwarzanie indolu
bezbarwny
jasno zielony / Īóáty
Bezbarwny / blado
róĪowy
róĪowy / czerwony (5)
brak dyfuzji
dyfuzja czarnego
pigmentu
róĪowy
VP 1 + VP 2 / 10 min
VP
pirogronian sodu
1.9
wytwarzanie acetoiny
(Voges Proskauer)
GEL
Īelatyna
(woáowa)
0.6
Īelatynaza
GLU
D-glukoza
1.9
fermentacja / utlenianie (glukoza) (4)
niebieski / niebiesko-zielony
Īóáty / szaro-Īóáty
MAN
D-mannitol
1.9
fermentacja / utlenianie (mannitol) (4)
Īóáty
INO
inozytol
1.9
fermentacja / utlenianie (inozytol) (4)
Īóáty
SOR
D-sorbitol
1.9
fermentacja / utlenianie (sorbitol) (4)
Īóáty
RHA
L-ramnoza
1.9
fermentacja / utlenianie (ramnoza) (4)
Īóáty
SAC
D-sacharoza
1.9
fermentacja / utlenianie (sacharoza)
(4)
Īóáty
MEL
D-melibioza
1.9
fermentacja / utlenianie (melibioza) (4)
Īóáty
Īóáty
Īóáty
AMY
amigdalina
0.57
fermentacja / utlenianie (amigdalina)
(4)
ARA
L-arabinoza
1.9
fermentacja / utlenianie (arabinoza) (4)
OX
(przeczytaü instrukcjĊ do testu
oksydazy)
oksydaza cytochromowa
(przeczytaü instrukcjĊ do testu oksydazy)
(1) Nawet bardzo blady Īóáty kolor naleĪy rozpatrywaü jako pozytywny.
(2) PomaraĔczowy kolor po 36-48 godzinach inkubacji naleĪy uwaĪaü za negatywny.
(3) Odczytu dokonaü we wgáĊbieniu (warunki tlenowe).
(4) Fermentacja zachodzi w najniĪszej czĊĞci probówki, utlenianie we wgáĊbieniu.
(5) Sáabo róĪowy kolor po 10 minutach naleĪy uwaĪaü za negatywny.
xWskazane stĊĪenia mogą byü regulowane w zaleĪnoĞci od miana uĪytego surowego materiaáu.
xNiektóre mikroprobówki zawierają produkty pochodzenia zwierzĊcego,zwáaszcza peptony.
bioMérieux® SA
Polski - 4
api® 20 E
07584G - pl - 2007/06
TESTY UZUPEàNIAJĄCE
WYNIK
TEST
AKTYWNY SKàADNIK
STĉĩENIE
(mg/probówka)
REAKCJE/ENZYMY
NEGATYWNY
POZYTYWNY
NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min
Redukcja
azotanów
probówka azotan potasu
GLU
0.076
wytwarzanie NO2
czerwony
Īóáty
Zn / 5 min
redukcja do gazowego N2
pomaraĔczowo-czerwony
Īóáty
brak ruchu
ruch
brak
obecnoĞü
MOB
API M Medium lub
badanie mikroskopowe
-
ruchliwoĞü
McC
podáoĪe MacConkey
-
wzrost
-
fermentacja : pod olejem
mineralnym
zielony
Īóáty
-
utlenianie : ekspozycja na
powietrze
zielony
Īóáty
OF-F
OF-O
Glukoza
(API OF Medium)
METODYKA
TABELA IDENTYFIKACYJNA
PIĝMIENNICTWO
TABELA SYMBOLI
str. I
str. II
str.IV
str. V
CLSI jest znakiem towarowym uĪywanym, w trakcie rejestracji lub zastrzeĪonym, naleĪącym do Clinical Laboratory and Standards Institute, Inc.
ATCC jest znakiem towarowym uĪywanym, w trakcie rejestracji lub zastrzeĪonym, naleĪącym do American Type Culture Collection.
bioMérieux® SA
673 620 399 RCS LYON
Tel. 33 (0)4 78 87 20 00
Fax 33 (0)4 78 87 20 90
bioMérieux, Inc
Box 15969,
Tel. (1) 919 620 20 00
Fax (1) 919 620 22 11
Wydrukowano we Francji
bioMérieux i jego niebieskie logo, API, API 20 E i apiweb są znakami towarowymi uĪywanymi, w trakcie rejestracji i/lub
zastrzeĪonymi, naleĪącym do bioMérieux SA lub jednego z przedstawicielstw.
api® 20 E
07584G - xl - 2007/06
METHODOLOGIE / PROCEDURE / METHODIK / TECNICA / PROCEDIMENTO /
ǻǿǹǻǿȀǹȈǿǹ / METOD / METODYKA
OX
API NaCl 0.85 % Medium 5 ml /
API Suspension Medium 5 ml
1 colonie / 1 colony / 1 Kolonie /
1 colonia / 1 colónia / 1 ĮʌȠȚțȓĮ /
1 koloni / 1 kolonia
- | CIT |
- | VP |
- | GEL |
API 20 E
ADH
ODC
H2S - URE
36°C
±
2°C
18:00-24:00 / 48:00
Tests < 3
(y compris / including /
einschließlich / incluído /
compreso / incluindo /
ıȣµʌİȡȚȜĮµȕȐȞİĲĮȚ / inklusive /
inklusiv / wáączając test GLU)
API 20 E
TDA
IND
VP
: TDA
: JAMES
: VP 1 + VP 2
GLU (NO2) : NIT 1 + NIT 2 (+Zn)
API 20 E
+ - + - + -
bioMérieux® SA
I
07584G
- xl - 2007/06
API 20 E
V4.1
Buttiauxella agrestis
Cedecea davisae
Cedecea lapagei
Citrobacter braakii
Citrobacter freundii
Citrobacter koseri/amalonaticus
Citrobacter koseri/farmeri
Citrobacter youngae
Edwardsiella hoshinae
Edwardsiella tarda
Enterobacter aerogenes
Enterobacter amnigenus 1
Enterobacter amnigenus 2
Enterobacter asburiae
Enterobacter cancerogenus
Enterobacter cloacae
Enterobacter gergoviae
Enterobacter intermedius
Enterobacter sakazakii
Escherichia coli 1
Escherichia coli 2
Escherichia fergusonii
Escherichia hermannii
Escherichia vulneris
Ewingella americana
Hafnia alvei 1
Hafnia alvei 2
Klebsiella oxytoca
Klebsiella pneumoniae ssp ozaenae
Klebsiella pneumoniae ssp pneumoniae
Klebsiella pneumoniae ssp rhinoscleromatis
Kluyvera spp
Leclercia adecarboxylata
Moellerella wisconsensis
Morganella morganii
Pantoea spp 1
Pantoea spp 2
Pantoea spp 3
Pantoea spp 4
Proteus mirabilis
Proteus penneri
Proteus vulgaris group
Providencia alcalifaciens/rustigianii
Providencia rettgeri
Providencia stuartii
Rahnella aquatilis
Raoultella ornithinolytica
Raoultella terrigena
Salmonella choleraesuis ssp arizonae
Salmonella choleraesuis ssp choleraesuis
Salmonella ser.Gallinarum
ONPG
100
99
99
50
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99
99
100
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0
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100
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ADH
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ODC
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100
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99
1
CIT
25
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75
75
75
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II
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87
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0
0
0
0
94
100
0
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85
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0
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McC
100
100
100
100
100
100
100
100
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100
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100
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100
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100
100
100
100
100
% de réactions positives après 18-24 / 48 h à 36°C ± 2°C / % of positive reactions after 18-24 / 48 hrs. at 36°C ± 2°C / % der positiven Reaktionen nach 18-24 / 48 h bei 36°C ± 2°C /
% de las reacciones positivas después de 18-24 / 48 H a 36°C ± 2°C / % di reazioni positive dopo 18-24 / 48 ore a 36°C ± 2°C / % de reacções positivas após 18-24 / 48 h a 36º C ± 2º C /
% șİĲȚțȫȞ ĮȞĲȚįȡȐıİȦȞ µİĲȐ Įʌȩ 18-24 / 48 ȫȡİȢ ıĲȠȣȢ 36°C ± 2°C / % positiva reaktioner efter 18-24 / 48 timmar vid 36°C ± 2°C / % af positive reaktioner efter 18-24 / 48 timer ved 36°C ± 2°C /
% pozytywnych reakcji po 18-24 / 48 godzinach w 36°C ± 2°C
OF/F
100
100
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100
100
100
100
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100
100
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100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
TABLEAU D'IDENTIFICATION / IDENTIFICATION TABLE / PROZENTTABELLE / TABLA DE IDENTIFICACION / TABELLA DI IDENTIFICAZIONE / QUADRO DE IDENTIFICAÇÃO
ȆǿȃǹȀǹȈ ȉǹȊȉȅȆȅǿǾȈǾȈ / IDENTIFIKATIONSTABEL / IDENTIFIERINGSTABELL / TABELA IDENTYFIKACYJNA
api® 20 E
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ONPG
API 20 E
V4.1
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0
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95
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94
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95
Serratia odorifera 2
95
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99
Serratia rubidaea
99
Shigella spp
1
Shigella sonnei
96
Yersinia enterocolitica
80
Yersinia frederiksenii/intermedia
99
Yersinia kristensenii
80
Yersinia pestis
68
Yersinia pseudotuberculosis
98
Aeromonas hydrophila gr. 1
98
Aeromonas hydrophila gr. 2
99
Aeromonas salmonicida ssp salmonicida
1
Grimontia hollisae
1
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1
Plesiomonas shigelloides
95
Vibrio alginolyticus
0
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95
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99
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0
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99
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99
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4
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0
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0
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50
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0
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5
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0
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0
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III
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BIBLIOGRAPHIE / LITERATURE REFERENCES / LITERATUR / BIBLIOGRAFIA /
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TABLE DES SYMBOLES / INDEX OF SYMBOLS / SYMBOLE /
CUADRO DE SIMBOLOS / TABELLA DEI SIMBOLI / QUADRO DOS SÍMBOLOS /
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Temperaturbegrænsning
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