Dosage de la vitamine D

Dosage sérique de la 25 OH vitamine D
Techniques
Limites
Interprétation
25 OH D: vitamine D dosée
• Principale forme circulante de vitamine D
• Les concentrations sériques de 1,25 (OH)2 D sont 1000
fois moins importantes que celles de 25 OH D
• 2 formes à doser chimiquement proches :
25 OH D2
Forme d’origine végétale donc
exclusivement thérapeutique
25 OH D3
Forme d’origine animale donc endogène
et /ou thérapeutique
Processus et sources d’erreur
Comparaison par rapport à une
valeur antérieure mesurée par une
autre méthode
Conservation
Interférence avec
le contenant
Prélèvement
Seuils décisionnels
Analyse
Résultats
Robustesse de la méthode
Biais
Incertitude de mesure
Interprétation
Stabilité de la 25 OH D en tube
• Étude :Wielders JP,
Wijnberg FA, Clinical
Chemistry, 2009
• Bonne conservation
en sang total et en
sérum réfrigéré
• Réserve sur les tubes
avec gel séparateur:
à éviter.
Techniques existantes
• Chimiques:
– HPLC
– LC/ / MS²
• RIA: Diasorin, IDS
• ELISA: IDS
• Immunochimiluminescence CLIA
– Diasorin
– IDS
– Roche Diagnostics
– Abbott
Techniques chimiques
• Chromatographie
– Avantage : très grande précision de mesure. Séparation des 25 OH
D2 et 25 OH D3
– Inconvénient : méthode complexe avec une étape d’extraction de la
vitamine D du sérum
• Spectrométrie de masse:
– Identification biochimique fiable et très précise
– Appareil installé dans les laboratoires de recherche ou de
références.
• Pas de fournisseur fournissant une technique de dosage. La méthode
doit être mise au point et validée.
• Technique absente des LABM
Techniques RIA
• RIA : Radio immunologic assay.
• Techniques dites « chaudes », utilisant un anticorps antivitamine D.
• Technique précise
• Les seuils de décision clinique ont été établis sur la
méthode RIA de Diasorin: test de référence actuel
• Réglementation encadrant les techniques et les locaux de
réalisation de la RIA sont strictes pour la protection des
manipulateurs.
Techniques CLIA et ELISA
• Techniques immunologiques « froides »
• Techniques automatisées utilisées pour d’autres paramètres
dosables
• Grande diffusion dans les LABM
• Techniques très répandues mais différentes de la technique
de référence….
• Quelle est la corrélation de ces méthodes par rapport à la
RIA?
Corrélation entre les méthodes
• Étude; suédoise: Snellman et
all., 2010
• HPLC vs RIA (IDS) vs CLIA
(Diasorin)
• 204 patients
• Conclusion : pas de taux
comparables entre les 3
méthodes utilisées
• Impact clinique significatif
Corrélation entre les méthodes
• Impact de ces 3 méthodes par rapport à un seuil décisionnel
de 50 nmol/L
Contrôle externe
• Une autre approche à mis en lumière ce problème: l’EEQ
• DEQAS (vitamin D External Quality Assessment Scheme)
• Montre des CV importants (> 10%)
• Confirme des différences de résultats inter-méthodes
Résultat CQE inter-méthodes
Spécificité des tests immunologiques
(RIA, CLIA, ELISA) D2 / D3
Test
25(OH)D2
25(OH)D3
RIA Diasorin
100%
100%
CLIA Diasorin
Liaison
104%
100%
IDS RIA
75%
100%
IDS EIA
75%
100%
Roche CLIA (arrêté
depuis 09/2010)
< 10 %
100%
Source afsspas : Recommandations à destination des biologistes concernant la spécificité
des dosages de vitamine D
Diasorin dispose de la meilleure spécificité
Vers une nouvelle méthode de référence
• Passer à une méthode de référence internationale chimique
: LC/ MS²
• Mettre au point des étalons auxquels les fournisseurs
pourront calibrer leur méthode et la rattacher à la méthode
de référence.
• Travail similaire aux HbA1c
• Enfin, vérifier et/ou faire évoluer les valeurs de références
une fois les techniques standardisées.
Requirements for 25(OH)D assays
• Choose an assay that measures both 25(OH)D2 and 25(OH)D3
• If using an assay that separates 25(OH)D2 and 25(OH)D3 (i.e.
HPLC or LC/MS-MS) indicate the sum of the 2 compounds
(25(OH)D2+25(OH)D3) as the main results in your results sheet
• Participate to an external quality control scheme that provides
materials with adocumented commutability with human sera
(e.g. the UK based DEQAS)
• An internal quality control program has to be carried out in every
laboratory by using different levels samples and valuable criteria
for rejecting or accepting “the analytical run”
• Do not use population-based reference values (i.e. the
concentrations of an apparently healthy population) in addition
to a recommended range for 25(OH)D. This is highly confusing
for the clinician
• We recommend serum as the sample of choice. Try to avoid gel
tubes until more data are available
• Express results in ng/mL
Serum 25(OH)D range (ng/mL)
according to the authors.
Proposed 25(OH)D
range
Number of experts
30–100
20
30–150
1
30–80
1
30-50
2
40-100
1
Attention aux changements de méthodes
de dosage
• Le changement de technique dans le dosage de 25 OH D
entre 2 dosages pour un même patient rend difficile
l’interprétation des résultats
• Rester prudent sur l’interprétation en tenant compte du CV
> 10%.
• Test en voie de standardisation internationale
• Attention nouveaux tests Abbott et Roche , pas de données
sur ces 2 tests qui risque d’être très largement utilisés étant
donné le nombre de LABM équipés d’appareils adaptés à
ces techniques
Conclusion
• Vitamine D : 25 OH D un paramètre en plein essor avec
des implications cliniques de plus en plus nombreuses
• Des techniques hétérogènes
• Suivre un patient par une même technique spécifique des 2
formes de vitamine D