syphagen TPHA AUTO

READ HIGHLIGHTED CHANGES
syphagen TPHA AUTO
Indirect hemagglutination test for the detection of specific antibodies to
Treponema pallidum in human serum or plasma using the OLYMPUS
R
R
PK7200 or the OLYMPUS PK7300 .
Principle
Stabilized chicken erythrocytes are sensitized with an antigenic extract of Treponema pallidum (Nichols strain). These cells will
agglutinate with specific antibodies present in the serum or plasma of syphilitic patients.
The pattern of agglutination is identified and recorded by the OLYMPUS.
Non-pathogenic treponemal antibodies are absorbed by an extract of Reiter’s treponemes included in the diluent solution.
Components
REF 3000-5705.
a)
b)
c)
Antigen reagent: 5 x 41 ml.
Sensitized chicken erythrocytes.
Ready to use.
Diluent solution: 5 x 500 ml.
Phosphate buffered saline solution containing soluble components of T. Reiter and stabilizing agents.
Positive control: 1 x 15 ml.
Immune rabbit serum.
All reagents contain < 0.1% sodium azide.
Precautions
syphagen TPHA AUTO is intended for IN VITRO diagnostic use.
The reagents contain sodium azide as a preservative. Sodium azide may react with lead or copper pipes and plumbing creating
highly explosive metal azides. Flush drains with water thoroughly after disposing of the remains of reagents.
Do not interchange reagents from different lots.
The microplates must be cleaned before use following manufacturer instructions.
Because no test method can offer complete assurance of the absence of infectious agents, this product should be handled with
caution. Dispose all used materials in a suitable biohazardous waste container.
Hazard class
Not classified.
Hazard statements
None.
Precautionary statements
P280: Wear protective gloves/protective clothing/eye protection/face protection.
P305+351+338: IF IN EYES rinse cautiously with water for several minutes. Remove contact lenses, if present and
easy to do. Continue rinsing.
Storage
The reagents will remain stable until the expiration date shown on the label if stored between 2-8°C. Do not freeze.
Material required not provided
-
OLYMPUS «green» type microplates.
OLYMPUS PK7200 or PK7300 automated pretransfusion blood testing system.
Automatic pipettes.
Sample collection
BIOKIT, S.A. - www.biokit.com
Can Malé s/n - 08186 Lliçà d'Amunt - Barcelona - Spain
Plasma:
Although serum is the specimen of choice for all tests for syphilis, for screening purposes in blood banks, EDTA plasma
samples may be used. Other anticoagulants should be evaluated before use. Plasma can be stored at 2-8°C and tested within
72 hours of blood collection.
3800-1779
R01 04/15
16
Serum:
Use fresh serum. Serum can be stored at 2-8°C for 5 days. For longer periods serum samples should be frozen (-20°C).
1
PROCEDURE
Quality control:
Allow reagents to reach room temperature. Ensure that antigen reagent is thoroughly resuspended.
Include the positive control in each series of samples. The positive control should give a weak positive reaction.
If expected results are not obtained, do not use the kit.
Directions for use
The PK7200 and PK7300 analyzers are programmable instruments whose operations are controlled by the Test Parameter
Files defined and established by the user. Validated parameters may be incorporated with routine operating files or defined in a
separate file. For complete details on the set up and operations of the OLYMPUS PK7200 or PK7300, please refer to the
Operator’s Manual.
Olympus Application
PK7200
1st Reagent volume
Sample
Diluent
Dispensing condition
35 µl
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
Sample/Diluent ratio
97/1000 (35 µl / 360 µl)
11.3
Diluted sample volume
Plate well
10 µl
16 µm
10 µl
16 µm
60 minutes
60 minutes
Reaction time
Reaction temperature
P
Dynamic range set
Thresholds
PK7300
35 µl
Limit set
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
LIA selection
6
Threshold set
30°C
Low 1 - 99 High
Low 1
Low 0
Low 14
(+) Limit 25
(+) Limit 200
- 99 High
- 999 High
- 19 High
- 15 (-) Limit
- 100 (-) Limit
Middle
30°C
Low 1 - 99 High
P
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
Low 1 - 99 High
Low 0 - 999 High
Low 14 - 19 High
(+) Limit 25 - 15 (-) Limit
(+) Limit 200 - 100 (-) Limit
Middle
6
The most important parameter resulting from the image analysis system is SPC.
NOTE:
The application to the Olympus PK7100 analyzer is available on request.
Interpretation of the results
A positive result indicates the presence of antibodies to T. pallidum, resulting from a past or present infection. A negative result
indicates the absence of antibodies to T. pallidum (see limitations of the procedure).
A borderline result may correspond to a low level of antibodies in early stages of syphilis or to residual antibodies in treated syphilis.
In this case a further sample should be tested to demonstrate a possible rise in the antibody titer, or other tests should be used.
Limitations of the procedure
-
-
Although serum is the specimen of choice for all tests for syphilis, for screening purposes in blood banks, EDTA plasma
samples may be used. However, some incidence of false positive reactions has been reported. Therefore, serum must be
used for all repeat testing of initial positive or borderline results obtained from plasma samples and for any further
confirmatory testing.
Specific antibodies may persist for a long period of time, even after successful treatment of the disease. In order to assess
the response to treatment, the use of a reagin test (e.g. RPR reditest) is recommended.
The TPHA technique can give cross reactions with other forms of treponemal infections and false positive reactions with
samples from patients with infectious mononucleosis, leprosy, autoimmune diseases and drug addiction.
Occasionally, in early primary syphilis, the specific antibodies could not be detected by the TPHA technique.
Performance characteristics
Several evaluations have been performed with the syphagen TPHA AUTO kit on the Olympus PK7200 analyzer. In one
evaluation performed at the DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg, in Germany, the specificity found was 99.75% using
4,434 EDTA plasma samples.
Two additional evaluations have been performed in France, at the EFS Normandie and at the EFS Nord de France Blood
Banks, on the same analyzer. The specificities found were of 99.95% using 101,420 negative samples and of 99.97% using
205,240 negative samples respectively.
In one evaluation performed at the Manchester National Blood Service (England) using the Olympus PK7300 analyzer, the
specificity found was 99.85% using 5,482 EDTA plasma samples.
2
LEER CAMBIOS SOMBREADOS
syphagen TPHA AUTO
Test de hemaglutinación pasiva para la detección de anticuerpos
específicos anti-Treponema pallidum en suero o plasma humano utilizando
R
R
el OLYMPUS PK7200 o el OLYMPUS PK7300 .
Principio
Los hematíes de pollo estabilizados se sensibilizan con un extracto antigénico de Treponema pallidum (cepa Nichols). Estos
hematíes aglutinarán con los anticuerpos específicos presentes en el suero o plasma de pacientes afectos de sífilis.
El OLYMPUS identifica y registra el modelo de aglutinación.
Los anticuerpos del grupo Treponema no específicos de la sífilis se absorben con un extracto de treponema Reiter incluido en
la solución diluyente.
Componentes
REF 3000-5705.
a)
b)
c)
Reactivo antígeno: 5 x 41 ml.
Hematíes de pollo sensibilizados.
Listos para su uso.
Solución diluyente: 5 x 500 ml.
Tampón fosfato salino que contiene componentes solubles de T. Reiter y agentes estabilizadores.
Control positivo: 1 x 15 ml.
Suero de conejo inmune.
Todos los reactivos contienen < 0,1% de azida sódica.
Precauciones
syphagen TPHA AUTO es sólo para el diagnóstico IN VITRO.
Los reactivos contienen azida sódica como conservante. La azida sódica puede reaccionar con tuberías y desagües de plomo
o cobre dando lugar a azidas metálicas altamente explosivas. Al desechar los restos de reactivos, deje correr agua abundante.
No intercambiar reactivos de lotes diferentes.
Limpiar las microplacas antes de usarlas siguiendo las instrucciones del fabricante.
Ya que ningún método puede ofrecer la total seguridad de la ausencia de agentes infecciosos, este producto debe manejarse
con precaución. Depositar todos los materiales usados en recipientes adecuados para material biocontaminante.
Clase de peligro
No clasificado.
Indicaciones de peligro
Ninguna.
Consejos de prudencia
P280: Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección.
P305+351+338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Aclarar cuidadosamente con agua durante varios
minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando.
Conservación
Los reactivos permanecerán inalterados hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, si se conservan entre 2- 8°C. No
congelar.
Material necesario no incluido
-
Microplacas OLYMPUS de tipo «verde».
Sistema automatizado de análisis pre-transfusión de sangre OLYMPUS PK7200 o PK7300.
Pipetas automáticas.
Recolección de la muestra
Plasma:
Aunque el suero es la muestra de elección para todos los tests de sífilis, pueden utilizarse muestras de plasma EDTA para
screening en bancos de sangre. Otros anticoagulantes deben ser comprobados antes de utilizarse. El plasma puede ser
conservado entre 2-8°C y debe realizarse el test antes de transcurridas 72 horas de la extracción.
Suero:
Usar suero fresco. Los sueros pueden ser conservados durante 5 días entre 2-8°C. Si es por un período de tiempo más largo
los sueros deben ser congelados (-20°C).
3
PROCEDIMIENTO
References
Control de calidad:
Dejar que los reactivos alcancen la temperatura ambiente. Asegurarse de que el reactivo antígeno esté bien resuspendido.
Incluir el control positivo en cada serie de muestras. El control positivo debe dar una reacción positiva débil.
Si no se obtienen los resultados esperados, no utilizar el kit.
1.
Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. CDC/NIH manual, 5th edition, 2007.
2.
Garner MF, Backhouse JL, Daskalopoulos G, Walsh JL. The Treponema pallidum Haemagglutination (TPHA) in
Biological False Positive and Leprosy Sera. J Clin Path 26: 258-260, 1973.
3.
Hagedorn HJ, Naumann P. Moderne Serodiagnostik der Syphilis. Dtsch med Wschr 104: 209-214, 1979.
4.
Larsen SA, Hambie EA, Pettit DE, Perryman MW, Kraus SJ. Specificity, Sensitivity, and Reproducibility Among the
Fluorescent Treponemal Antibody-Absorption Test, the Microhemagglutination Assay for Treponema pallidum Antibodies,
and the Hemagglutination Treponemal Test for Syphilis. J Clin Microbiol 14: 441-445, 1981.
5.
Mathieu-Nafissi S, Kacenelen R, Aymard J-P, Muller M-C, Krebs G, Specht D. Choix d’un Réactif TPHA pour usage sur
PK 7300 d’Olympus. La Gazette de la Transfusion 133: 67-69, 1997.
6.
Rathlev T. Haemagglutination Test Utilizing Pathogenic Treponema pallidum for the Sero-diagnosis of Syphilis. Brit J
Vener Dis 43: 181-185, 1967.
7.
Sequeira PJL, Eldridge AE. Treponemal Haemagglutination Test. Brit J Vener Dis 49: 242-248, 1973.
8.
Tomizawa T. Hemagglutination Tests for Diagnosis of Syphilis. A preliminary report. Jap J Med Sci Biol 19: 305-308, 1966.
9.
Tomizawa T, Kasamatsu S, Yamaya S. Usefulness of the Hemagglutination Test Using Treponema pallidum Antigen
(TPHA) for the Serodiagnosis of Syphilis. Jap J Med Sci Biol 22: 341-350, 1969.
Indicaciones de uso
Los analizadores PK7200 y PK7300 son instrumentos programables cuyas operaciones están controladas por los ficheros de
parámetros del test que el usuario ha definido y establecido anteriormente. Los parámetros validados pueden incorporarse a
los ficheros de operaciones de rutina o definirse en un fichero independiente. Para más información sobre la configuración y el
funcionamiento del OLYMPUS PK7200 o PK7300, remitirse al manual del fabricante.
Olympus Application
PK7200
PK7300
35 µl
35 µl
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
Sample/Diluent ratio
97/1000 (35 µl / 360 µl)
11.3
Diluted sample volume
Plate well
10 µl
16 µm
10 µl
16 µm
60 minutes
60 minutes
1st Reagent volume
Sample
Diluent
Dispensing condition
Reaction time
Reaction temperature
P
Dynamic range set
Thresholds
Limit set
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
LIA selection
6
Threshold set
30°C
Low 1 - 99 High
Low 1
Low 0
Low 14
(+) Limit 25
(+) Limit 200
- 99 High
- 999 High
- 19 High
- 15 (-) Limit
- 100 (-) Limit
Middle
P
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
R
R
R
OLYMPUS PK7100 , OLYMPUS PK7200 and OLYMPUS PK7300 are trademarks of the Olympus Corporation.
30°C
Low 1 - 99 High
Low 1 - 99 High
Low 0 - 999 High
Low 14 - 19 High
(+) Limit 25 - 15 (-) Limit
(+) Limit 200 - 100 (-) Limit
Middle
6
El SPC es el parámetro más importante que surge del sistema de análisis de imágenes.
NOTA:
La aplicación del analizador Olympus PK7100 está disponible previa petición.
Interpretación de los resultados
Un resultado positivo indica la presencia de anticuerpos anti-T. pallidum, que resultan de una infección pasada o presente. Un
resultado negativo indica la ausencia de anticuerpos anti-T. pallidum (ver limitaciones del procedimiento).
Un resultado dudoso puede corresponder a un bajo nivel de anticuerpos en estados iniciales de sífilis o anticuerpos residuales de
una sífilis ya tratada. En este caso se debe probar una nueva muestra para demostrar un posible aumento en el título de
anticuerpos, o debería utilizarse otro tipo de test.
Limitaciones del procedimiento
-
-
Aunque el suero es la muestra de elección para todos los tests de sífilis, pueden utilizarse muestras de plasma EDTA
para screening en bancos de sangre. Sin embargo, y puesto que se ha descrito una relativa incidencia de reacciones
falsamente positivas, deberá repetirse el test de aquellas muestras inicialmente positivas o dudosas utilizando el suero
del paciente, así como para cualquier prueba confimatoria posterior.
Los anticuerpos específicos pueden persistir durante un largo período de tiempo, incluso después de haberse tratado la
enfermedad. Para evaluar la respuesta al tratamiento, se recomienda hacer uso de los tests reagínicos (RPR reditest).
La técnica TPHA puede dar lugar a reacciones cruzadas con otras formas de infecciones treponémicas y a reacciones
falsamente positivas con muestras de pacientes afectos de mononucleosis, lepra, drogadictos o enfermedades autoinmunes.
Ocasionalmente, en estados iniciales de sífilis, los anticuerpos específicos no pueden ser detectados por la técnica de TPHA.
Características funcionales
Se han realizado varias evaluaciones con el kit syphagen TPHA AUTO con el analizador Olympus PK7200. En una
evaluación realizada en el DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg, en Alemania, se obtuvo una especificidad de un
99,75% al analizar 4.434 muestras de plasma EDTA.
Otras dos evaluaciones han sido realizadas en Francia, en los Bancos de Sangre EFS de Normandía y EFS del Norte de
Francia, utilizando el mismo analizador. Se obtuvo una especificidad del 99,95% y del 99,97% al analizar 101.420 y 205.240
muestras negativas, respectivamente.
En una evaluación realizada en el National Blood Service de Manchester (Inglaterra), se obtuvo una especificidad de un
99,85% al analizar 5.482 muestras de plasma EDTA con el analizador Olympus PK7300.
4
13
HERVORGEHOBENE ÄNDERUNGEN LESEN
PROCEDIMENTO
syphagen TPHA AUTO
Controle de qualidade:
Deixar que os reativos alcancem a temperatura ambiente. Comprovar que o reativo antígeno esteja bem ressuspendido.
Incluir o controle positivo em cada uma das séries de amostras. O controle positivo deveria dar uma reação positiva débil.
Se os resultados esperados não são obtidos, não utilizar o kit.
Indirekter Hämagglutinationstest zum Nachweis spezifischer Antikörper
gegen Treponema pallidum in Humanserum und –plasma zum
R
R
automatisierten Einsatz auf den OLYMPUS-Systemen PK7200 und PK7300 .
Indicações de uso
Os analisadores PK7200 e PK7300 são instrumentos programáveis cujas operações são controladas pelos ficheiros de
parâmetros de teste que o usuário definiu e estabeleceu anteriormente. Os parâmetros validados podem se incorporar aos
ficheiros de operações rotineiras ou definirem-se num ficheiro independente. Se deseja mais informação sobre a configuração
e o funcionamento do OLYMPUS PK7200 ou do PK7300, consulte o manual do fabricante.
Olympus Application
PK7200
1st Reagent volume
35 µl
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
Sample/Diluent ratio
97/1000 (35 µl / 360 µl)
11.3
Diluted sample volume
Plate well
10 µl
16 µm
10 µl
16 µm
60 minutes
60 minutes
Sample
Diluent
Dispensing condition
Reaction time
Reaction temperature
P
Dynamic range set
Thresholds
PK7300
35 µl
Limit set
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
LIA selection
6
Threshold set
30°C
Low 1 - 99 High
Low 1
Low 0
Low 14
(+) Limit 25
(+) Limit 200
- 99 High
- 999 High
- 19 High
- 15 (-) Limit
- 100 (-) Limit
Middle
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
REF 3000-5705.
a)
b)
c)
Low 1 - 99 High
Low 0 - 999 High
Low 14 - 19 High
(+) Limit 25 - 15 (-) Limit
(+) Limit 200 - 100 (-) Limit
Middle
6
O SPC é o parâmetro mais importante que surge do sistema de análise de imagens.
NOTA:
Kükenerythrozyten wurden mit Extrakten von Treponema pallidum (Stamm Nichols) sensibilisiert. Bei Anwesenheit von
spezifischen Antikörpern im Serum oder Plasma von Syphilispatienten agglutinieren die Antikörper mit den Erythrozyten.
Das entstehende Agglutinationsmuster wird von den OLYMPUS PK-Systemen detektiert und ausgewertet.
Nichtpathogene Treponemen-Antikörper werden durch einen im Probendiluent enthaltenen Extrakt aus Reiter-Treponemen absorbiert.
Bestandteile
30°C
Low 1 - 99 High
P
Prinzip
A aplicação do analisador Olympus PK7100 está disponível sob encomenda.
Antigenreagenz: 5 x 41 ml.
Mit T. pallidum-Extrakten sensibilisierte Hühnererythrocyten.
Gebrauchsfertig.
Diluent: 5 x 500 ml.
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung mit löslichen Komponenten von T. Reiter und Stabilisatoren.
Positive Kontrolle: 1 x 15 ml.
Immunreaktives Kaninchenserum.
Alle Reagenzien enthalten < 0,1% Natriumazid.
Vorsichtsmassnahmen
syphagen TPHA AUTO ist ausschliesslich für die IN VITRO-Diagnostik bestimmt.
Die Reagenzien enthalten Natriumazid als Konservierungsmittel. Natriumazid kann auf Blei- oder Kupfer-Rohrleitungen und
-Abflüsse reagieren und zu hochexplosiven Metallaziden führen. Beim Entfernen der Reagenzreste muss mit genügend Wasser
nachgespült werden.
Komponenten verschiedener Chargennummern nicht zusammen verwenden.
Die Mikrotiterplatten müssen vor der Verwendung sorgfältig gereinigt werden.
Da kein Nachweisverfahren die Abwesenheit von infektiösen Agenzien garantieren kann, ist dieses Produkt mit entsprechenden
Vorsichtsmassnahmen zu handhaben. Alle benutzten Materialien sind separat in Behältern für biologische Abfälle zu entsorgen.
Um resultado positivo indica a presença de anticorpos anti-T. pallidum, que resultam de uma infecção passada ou presente. Um
resultado negativo indica a ausência de anticorpos anti-T. pallidum (ver as limitações do procedimento).
Um resultado duvidoso pode corresponder a um baixo nível de anticorpos próprio dos estados iniciais da sífilis ou a anticorpos
residuais de uma sífilis já tratada. Neste caso, deve-se testar uma amostra posterior para demonstrar um possível aumento no título
de anticorpos, ou deveria ser utilizado outro tipo de teste.
Gefahrenklasse
Nicht eingestuft.
Gefahrenhinweise
Keine.
Sicherheitshinweise
P280: Schutzhandschuhe / Schutzkleidung / Augenschutz / Gesichtsschutz tragen.
P305+351+338: BEI KONTAKT MIT DEN AUGEN: Einige Minuten lang behutsam mit Wasser spülen. Vorhandene
Kontaktlinsen nach Möglichkeit entfernen. Weiter spülen.
Limitações do procedimento
Lagerung
-
Bei einer Lagerungstemperatur von 2-8°C bleiben die Reagenzien bis zum auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum haltbar.
Nicht einfrieren.
Interpretação dos resultados
-
Se bem que o soro é a amostra geralmente escolhida para todos os testes de sífilis, também podem ser utilizadas
amostras de plasma EDTA para screening em bancos de sangue. Não obstante e, dado que se observa uma relativa
incidência de reações falsamente positivas, deve-se repetir o teste daquelas amostras que, inicialmente, derem resultado
positivo ou duvidoso, utilizando, neste caso, o soro do paciente, assim como para qualquer prova confirmatória posterior.
Os anticorpos específicos podem persistir durante um longo período de tempo, inclusive após o tratamento da doença.
Para avaliar a resposta ao tratamento, recomenda-se utilizar testes reagínicos (RPR reditest).
A técnica TPHA pode apresentar reações cruzadas com outras formas de infecções treponêmicas e apresentar reações
falsamente positivas com amostras de pacientes afetados por mononucleose, lepra e doenças auto-imunes, além de
indivíduos adictos às drogas.
Ocasionalmente, nos estados iniciais da sífilis, os anticorpos específicos não podem ser detectados pela técnica de TPHA.
Erforderliches, nicht mitgeliefertes Material
-
OLYMPUS Mikrotiterplatten («Grüne Markierung»).
OLYMPUS PK7200 oder PK7300 automatische Bluttestsysteme.
Hubkolbenpipetten.
Probenmaterial
Características funcionais
Plasma:
Realizaram-se várias avaliações com o kit syphagen TPHA AUTO com o analisador Olympus PK7200. Numa avaliação
realizada no DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg, na Alemanha, obteve-se uma especificidade de 99,75% ao analisar
4.434 amostras de plasma EDTA.
Outras duas avaliações foram realizadas na França, nos Bancos de Sangre EFS da Normandia e Norte da França, utilizando o
mesmo analisador. Foram obtidas umas especificidades de 99,95% e 99,97% ao analisar 101.420 e 205.240 amostras
negativas, respectivamente.
Numa avaliação realizada no National Blood Service de Manchester (Inglaterra), obteve-se uma especificidade de 99,85% ao
analisar 5.482 amostras de plasma EDTA com o analisador Olympus PK7300.
Obgleich Serum das Probenmaterial der Wahl für alle Syphilistestungen ist, kann zu Screening-Zwecken in Blutbanken
EDTA-Plasma verwendet werden. Andere Antikoagulantien müssen zuvor evaluiert werden. Die Proben sollten zwischen 2-8°C
gelagert und innerhalb von 72 Stunden nach der Blutentnahme analysiert werden.
12
5
Serum:
Frisches Serum benutzen. Bei Lagerung zwischen 2-8°C können die Seren 5 Tage verwendet werden. Bei längerer Lagerung
sollten die Proben eingefroren werden (-20°C).
LER ALTERAÇÕES DESTACADAS
DURCHFÜHRUNG
Qualitätskontrolle:
Vor Gebrauch sind die Reagenzien auf Raumtemperatur zu bringen und das Antigenreagenz muss gründlich resuspendiert werden.
Vor der Probenanalyse ist die Qualität der Reagenzien mit den beiden, in der Packung enthaltenen Kontrollen zu überprüfen.
Die Vorgehensweise ist im entsprechenden Abschnitt beschrieben.
Sollten die erwarteten Werte nicht erreicht werden, ist die Packung nicht zu verwenden.
Testdurchführung
Die Testparameter der OLYMPUS PK7200- und PK7300-Systeme sind folgendermaßen zu programmieren. Zur genauen
Vorgehensweise der Geräteprogrammierung sei auf das jeweilige Bedienerhandbuch verwiesen.
Olympus Application
Dispensing condition
PK7200
PK7300
1st Reagent volume
Sample
35 µl
1 (Plasma)
35 µl
1 (Plasma)
Diluent
Sample/Diluent ratio
TPHA Dil. Sol.
97/1000 (35 µl / 360 µl)
TPHA Dil. Sol.
11.3
Diluted sample volume
10 µl
10 µl
Plate well
Reaction time
Reaction temperature
Dynamic range set
Thresholds
P
C
Limit set
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
LIA selection
6
Threshold set
16 µm
16 µm
60 minutes
30°C
60 minutes
30°C
b)
Low 1 - 99 High
Low 1 - 99 High
Low 0
Low 14
(+) Limit 25
(+) Limit 200
- 999 High
- 19 High
- 15 (-) Limit
- 100 (-) Limit
Middle
P
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
Low 1 - 99 High
Low 1 - 99 High
c)
Low 0 - 999 High
Low 14 - 19 High
(+) Limit 25 - 15 (-) Limit
(+) Limit 200 - 100 (-) Limit
Middle
-
Reativo antígeno: 5 x 41 ml.
Hemácias de frango sensibilizadas.
Pronto para usar.
Solução diluente: 5 x 500 ml.
Tampão fosfato salino que contém componentes solúveis de T. Reiter e agentes estabilizadores.
Controle positivo: 1 x 15 ml.
Soro imune de coelho.
Todos os reativos contêm < 0,1% de azida sódica.
Precauções
syphagen TPHA AUTO é para o diagnóstico IN VITRO.
Os reativos deste kit contêm azida sódica como conservante. A azida sódica pode reagir com os encanamentos e ralos de
chumbo ou cobre, originando azidas metálicas altamente explosivas. Ao descartar os restos de reativos, fazê-lo em abundante
volume de água.
Não intercambiar reativos de lotes diferentes.
Limpar as microplacas antes de usá-las seguindo as instruções do fabricante.
Dado que nenhum método pode oferecer a total segurança da ausência de agentes infecciosos, este produto deve ser
manipulado com precaução. Descartar todos os materiais usados em recipientes adequados para material bio-contaminante.
6
Die Anwendung für den Olympus PK7100 Analyzer ist auf Anfrage erhältlich.
Begrenzung der Methode
-
Hemácias de frango estabilizadas são sensibilizadas com um extrato antigênico de Treponema pallidum (cepa Nichols). Estas
hemácias se aglutinarão com os anticorpos específicos presentes no soro ou plasma daqueles pacientes afetados pela sífilis.
O OLYMPUS identifica e registra o modelo de aglutinação.
Os anticorpos do grupo Treponema não específicos da sífilis são absorvidos com um extrato de treponema Reiter incluído na
solução diluente.
REF 3000-5705.
Ein positives Testergebnis zeigt die Anwesenheit von Antikörpern gegen T. pallidum an, was auf eine akute oder zurückliegende
Infektion zurückzuführen ist. Ein negatives Ergebnis schliesst die Anwesenheit entsprechender Antikörper im Blut aus.
Grenzwertige Ergebnisse zeigen eine geringe Antikörperkonzentration in der Frühphase einer Treponemen-Infektion oder
verbliebene Antikörper nach einer ausgeheilten Syphilis an. In diesem Fall sollten weitere Proben zum Verlauf des
Antikörpertiters überprüft oder weiterführende Syphilis-Tests angeschlossen werden.
-
Princípio
a)
Auswertung der Ergebnisse
-
Teste de hemaglutinação passiva para a detecção de anticorpos específicos
anti-Treponema pallidum no soro ou plasma humano utilizando o OLYMPUS
R
R
PK7200 ou o OLYMPUS PK7300 .
Componentes
SPC ist der wichtigste Parameter, der sich aus dem System der Bildanalyse ergibt.
BEMERKUNG:
syphagen TPHA AUTO
Obgleich Serum das Probenmaterial der Wahl für alle Syphilis-Testungen ist, kann zu Screening-Zwecken in Blutbanken
EDTA-Plasma verwendet werden. In wenigen Fällen wurden falsch positive Ergebnisse gefunden. Daher muss Serum für
alle Bestätigungsuntersuchungen, schwach positive und grenzwertige Ergebnisse aus Plasmaproben verwendet werden,
ebenso bei allen ggf. nachfolgenden Bestätigungsuntersuchungen.
Spezifische Antikörper können auch nach erfolgreich behandelter Infektion lange Zeit im Blut persistieren. Zur Kontrolle
des Behandlungserfolgs empfiehlt sich die Durchführung eines Cardiolipin-Tests (RPR reditest).
Bei der TPHA-Methode kann es zu Kreuzreaktivitäten bei anderen Treponemen-Infektionen und zu falsch positiven
Ergebnissen bei Patienten mit infektiöser Mononukleose, Lepra, Autoimmunerkrankungen und Drogenabhängigkeit kommen.
Im Frühstadium einer Syphilis-Infektion kann es vorkommen, dass die spezifischen Antikörper mit der TPHA-Technik nicht
detektiert werden.
Classe de perigo
Não classificado.
Advertências de perigo
Nenhuma.
Recomendações de prudência
P280: Usar luvas de proteção/vestuário de proteção/proteção ocular/proteção facial.
P305+351+338: SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com água durante vários
minutos. Se usar lentes de contato, retire-as, se tal lhe for possível. Continuar a enxaguar.
Conservação
Os reativos permanecem estáveis até a data de validade indicada na etiqueta, se forem conservados entre 2-8°C. Não
congelar.
Material necessário não incluído
-
Microplacas OLYMPUS de tipo «verde».
Sistema automatizado de análise de sangue pré-transfusão OLYMPUS PK7200 ou PK7300.
Pipetas automáticas.
Charakteristika des Tests
Coleta da amostra
Mit dem Kit syphagen TPHA AUTO wurden im Analysegerät Olympus PK7200 mehrere Beurteilungen durchgeführt. Bei einer
Beurteilung durch den DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg, Deutschland, wurde eine Spezifizität von 99,75% bei einem
Analysevolumen von 4.434 Proben mit EDTA-Plasma erzielt.
Bei zwei anderen Beurteilungen durch die EFS Blutbank in der Normandie und in der Nord de France, Frankreich, wurde unter
Verwendung des gleichen Analysegerätes eine Spezifizität von jeweils 99,95% und 99,97% bei einem Analysevolumen von
101.420 und 205.240 negativen Proben erzielt.
Bei einer Beurteilung durch den National Blood Service von Manchester (England) unter Einsatz des Olympus PK7300
Analyzers wurde eine Spezifität von 99,85% bei einem Analysevolumen von 5.482 EDTA-Plasmaproben erzielt.
Plasma:
6
Se bem que o soro é a amostra geralmente escolhida para todos os testes de sífilis, também podem ser utilizadas amostras
de plasma EDTA para screening em bancos de sangue. Outros tipos de anticoagulantes devem ser testados antes de serem
usados. O plasma pode ser conservado entre 2-8°C e deveria realizar-se o teste antes de passadas 72 horas da extração.
Soro:
Utilizar soro fresco. Os soros podem ser conservados por 5 dias entre 2-8°C. Para guardar por um período mais longo os
soros devem ser congelados (-20°C).
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LIRE LES CHANGEMENTS SURLIGNÉS
PROCEDURA
syphagen TPHA AUTO
Controllo di qualità:
Portare tutti i reattivi a temperatura ambiente. Assicurarsi che il reattivo antigene sia opportunamente risospeso.
Includere il controllo positivo in ogni serie di campione. Il controllo positivo deve dare una reazione positiva debole.
Se non si ottengono i risultati sperati, scartare il kit.
Test d’hémagglutination indirecte pour la détection des anticorps
spécifiques anti-Treponema pallidum dans le sérum ou le plasma humain
R
R
utilisant l’OLYMPUS PK7200 ou l'OLYMPUS PK7300 .
Indicazioni per l'uso
Gli analizzatori PK7200 e PK7300 sono strumenti programmabili le cui operazioni sono controllate dai file dei parametri dei
test definiti e stabiliti precedentemente dall'utente. I parametri convalidati possono essere incorporati ai file di operazioni di
routine o essere definiti in un file indipendente. Per ulteriori informazioni sulla configurazione e sul funzionamento
dell'OLYMPUS PK7200 o PK7300, vedere il manuale del costruttore.
Olympus Application
PK7200
1st Reagent volume
35 µl
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
Sample/Diluent ratio
97/1000 (35 µl / 360 µl)
11.3
Diluted sample volume
Plate well
10 µl
16 µm
10 µl
16 µm
60 minutes
60 minutes
Sample
Diluent
Dispensing condition
Reaction time
Reaction temperature
P
Dynamic range set
Thresholds
PK7300
35 µl
Limit set
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
LIA selection
6
Threshold set
30°C
Low 1 - 99 High
Low 1
Low 0
Low 14
(+) Limit 25
(+) Limit 200
- 99 High
- 999 High
- 19 High
- 15 (-) Limit
- 100 (-) Limit
Middle
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
REF 3000-5705.
a)
b)
c)
Low 1 - 99 High
Low 0 - 999 High
Low 14 - 19 High
(+) Limit 25 - 15 (-) Limit
(+) Limit 200 - 100 (-) Limit
Middle
6
Il parametro SPC è il più importante che emerge dal sistema di analisi per immagini.
NOTA:
Des érythrocytes stabilisés de poulet sont sensibilisés avec un extrait antigénique de Treponema pallidum (souche Nichols).
Ces cellules agglutineront avec les anticorps spécifiques présents dans le sérum ou le plasma des patients syphilitiques.
L’image d’agglutination est identifiée et enregistrée par l’OLYMPUS.
Les anticorps de tréponèmes non pathogènes sont absorbés par un extrait de tréponèmes de Reiter inclus dans le diluant.
Composants
30°C
Low 1 - 99 High
P
Principe
L’applicazione dell’analizzatore Olympus PK7100 è disponibile a richiesta.
Réactif antigène: 5 x 41 ml.
Hématies de poulet sensibilisées.
Prêt a l’emploi.
Solution diluant: 5 x 500 ml.
Solution tampon phosphate contenant des composants solubles de T. Reiter et des agents stabilisateurs.
Contrôle positif: 1 x 15 ml.
Sérum de lapin immunisé.
Tous les réactifs contiennent < 0,1% d’azide de sodium.
Précautions
syphagen TPHA AUTO est destiné à un usage diagnostique IN VITRO.
Les réactifs contiennent de l’azide sodique comme conservateur. L’azide sodique peut réagir au contact de tuyauteries et de
bouches d’écoulement des eaux en plomb ou en cuivre. Cette réaction donne lieu à des azides métalliques hautement
explosives. Lorsque vous jetez les restes de réactifs, veuillez laisser couler l’eau abondamment.
Ne pas interchanger des réactifs de lots différents.
Les microplaques doivent être nettoyées avant utilisation suivant le protocole du fabricant.
Compte tenu du fait qu’aucune méthode n’est capable d’offrir une garantie absolue de l’absence d’agents infectieux, ce produit
doit être manipulé avec précaution. Déposer tout le matériel utilisé dans des récipients conçus pour le matériel bio-contaminant.
Un risultato positivo indica la presenza di anticorpi anti-T. pallidum, dovuti ad una passata o presente infezione. Un risultato negativo
indica l’assenza di anticorpi anti-T. pallidum (leggere le limitazioni della procedura).
Un risultato borderline può corrispondere ad uno stato iniziale della sifilide o ad una concentrazione di anticorpi residui presenti nel
siero per una vecchia patologia sifilitica. In questo caso dovrà essere testato un nuovo campione del paziente, per dimostrare un
eventuale aumento del titolo anticorpale, oppure potranno essere effettuati test di altra natura.
Classe de danger
Non classifié.
Mentions de danger
Aucune.
Conseils de prudence
P280 : Porter des gants de protection/des vêtements de protection/un équipement de protection des yeux/ du visage.
P305+351+338 : EN CAS DE CONTACT AVEC LES YEUX : rincer avec précaution à l’eau pendant plusieurs minutes. Enlever
les lentilles de contact si la victime en porte et si elles peuvent être facilement enlevées. Continuer à rincer.
Limitazioni della procedura
Conservation
-
Les réactifs resteront stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette, à condition d’être conservés à 2-8°C. Ne
pas congeler.
Interpretazione dei risultati
-
Il siero è il materiale preferito per tutti i test della sifilide, ma può anche essere usato plasma con EDTA per lo screening
nelle emoteche. Nonostante ciò, sono state riscontrate alcune reazioni falsamente positive. I test risultati positivi o
borderline effettuati su plasma devono essere ripetuti su siero, e così pure ogni altra prova di conferma successiva.
Anticorpi specifici possono persistere per un lungo periodo di tempo, anche dopo un efficace trattamento farmacologico
contro tale patologia. Per valutare la risposta al trattamento, è raccomandato l’uso di un test reaginico (RPR reditest).
La tecnica TPHA può dare origine a reazioni crociate con altre forme di infezione da Treponema, e reazioni falsamente
positive con campioni provenienti da pazienti affetti da mononucleosi, lebbra, malattie autoimmuni e tossicomani.
Occasionalmente, nello stadio iniziale della patologia, gli anticorpi specifici possono non essere individuati con la tecnica
TPHA.
Matériel nécessaire non fourni
-
Microplaques type «verte» OLYMPUS.
OLYMPUS PK7200 ou PK7300 système automatisé pour l’analyse prétransfusionnelle du sang.
Pipettes automatiques.
Prélèvement de l’échantillon
Caratteristiche di funzionalità
Sono state eseguite diverse valutazioni con il kit syphagen TPHA AUTO per mezzo dell'analizzatore Olympus PK7200. In una
valutazione eseguita presso il DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg, in Germania, è stata ottenuta una specificità del
99,75% con l'analisi di 4.434 campioni di plasma EDTA.
Due altre valutazioni sono state effettuate in Francia, presso le Banche di Sangue dell'EFS di Normandia e Nord di Francia,
utilizzando lo stesso analizzatore. Sono stati ottenuti specificitàs del 99,95% e 99,97% con l'analisi di 101.420 e
205.240 campioni negativi, rispettivamente.
In un saggio realizzato presso il National Blood Service di Manchester (Regno Unito), con l’analisi di 5.482 campioni di
plasma-EDTA con l’analizzatore Olympus PK7300, si è ottenuta una specificità del 99,85%.
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Plasma:
Bien que le sérum soit l’échantillon type pour tous les tests de syphilis, des échantillons de plasma EDTA peuvent être utilisés
pour screening dans les banques de sang. Autres anticoagulants doivent être évalués avant leur utilisation. Le plasma peut
être conservé à 2-8°C et testé dans les 72 heures qui suivent la collecte du sang.
Sérum:
Utiliser du sérum frais. Le sérum peut être conservé à 2-8°C pendant 5 jours. Pour des périodes plus longues, les sérums
doivent être congelés (-20°C).
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VEDI CAMBI RISALTATI
PROCÉDURE
syphagen TPHA AUTO
Contrôle de qualité:
Laisser les réactifs revenir à température ambiante. S’assurer que le réactif antigène soit bien en suspension.
Inclure le contrôle positif dans chaque série d’échantillons. Le contrôle positif doit donner une faible réaction positive.
Si les résultats attendus ne sont pas obtenus, ne pas utiliser le coffret.
Test di emoagglutinazione indiretta per la determinazione di anticorpi
specifici anti-Treponema pallidum, nel siero o plasma umano utilizzando
R
R
l'OLYMPUS PK7200 o l'OLYMPUS PK7300 .
Méthode
Les analyseurs PK7200 et PK7300 sont instruments programmables dont les opérations sont contrôlées par la table des paramètres
définie et établie par l’utilisateur. Les paramètres validés doivent être introduits avec les dossiers de routine ou définis dans un
dossier séparé. Pour des informations complètes sur l’OLYMPUS PK7200 ou PK7300, se référer au manuel d’utilisation.
Olympus Application
Dispensing condition
PK7200
PK7300
1st Reagent volume
Sample
35 µl
1 (Plasma)
35 µl
1 (Plasma)
Diluent
Sample/Diluent ratio
TPHA Dil. Sol.
97/1000 (35 µl / 360 µl)
TPHA Dil. Sol.
11.3
Diluted sample volume
10 µl
10 µl
Plate well
Reaction time
Reaction temperature
Dynamic range set
Thresholds
P
C
Limit set
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
LIA selection
6
Threshold set
16 µm
16 µm
60 minutes
30°C
60 minutes
30°C
Low 1 - 99 High
Low 1 - 99 High
Low 0
Low 14
(+) Limit 25
(+) Limit 200
- 999 High
- 19 High
- 15 (-) Limit
- 100 (-) Limit
Middle
P
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
REF 3000-5705.
a)
Low 1 - 99 High
Low 1 - 99 High
b)
c)
Low 0 - 999 High
Low 14 - 19 High
(+) Limit 25 - 15 (-) Limit
(+) Limit 200 - 100 (-) Limit
Middle
Precauzioni
syphagen TPHA AUTO è per uso diagnostico IN VITRO.
I reagenti di questo kit contengono sodio azide come conservante. La sodio azide può reagire a contatto con tubature e
scarichi in piombo o in rame, formando azidi metalliche altamente esplosive. Far scorrere acqua in abbondanza quando si
gettano i residui dei reagenti.
Non mischiare reattivi di partite diverse.
Pulire le micropiastre prima di usarle, seguendo le istruzioni della fabbrica.
Poiché nessun metodo può offrire la totale sicurezza dell’assenza di agenti infettivi, questo prodotto deve essere manipolato
con precauzione. Depositare tutti i materiali utilizzati in recipienti idonei per materiale biocontaminante.
6
L’application de l’analyseur Olympus PK7100 est disponible sur demande.
Un résultat positif indique la présence d’anticorps anti-T. pallidum résultant d’une infection passée ou présente. Un résultat
négatif indique l’absence d’anticorps anti-T. pallidum (voir limites de la méthode).
Un résultat douteux dans le test qualitatif peut correspondre à un taux bas d’anticorps dans les stades précoces de syphilis ou
à un taux résiduel d’anticorps dans les syphilis traitées. Dans ce cas, un échantillon supplémentaire pourra être testé pour
démontrer une possible augmentation du titre des anticorps ou un autre test devra être utilisé.
Limites de la procédure
-
Reattivo antigene: 5 x 41 ml.
Emazie di pollo sensibilizzate.
Pronto all’uso.
Soluzione diluente: 5 x 500 ml.
Tampone fosfato salino, contenente componente solubili di T. Reiter ed agente stabilizzanti.
Controllo positivo: 1 x 15 ml.
Siero di coniglio immune.
Tutti i reagenti contengono < 0,1% di sodio azide.
Interprétation des résultats
-
Le emazie di pollo stabilizzate vengono sensibilizzate con un estratto antigenico di Treponema pallidum (ceppo di Nichols).
Queste emazie agglutineranno a contatto con gli anticorpi specifici, presenti nel siero o plasma di pazienti affetti da sifilide.
Le eventuali reazioni aspecifiche vengono messe in evidenza tramite l’utilizzo di un reattivo controllo costituito da emazie di
pollo non sensibilizzate.
L'OLYMPUS identifica e registra il modello di agglutinazione.
Gli anticorpi volti verso ceppi non patogeni di treponema, vengono adsorbiti tramite un estratto di treponema di Reiter,
presente nella soluzione diluente.
Componenti
Le paramètre fondamental du système d’analyse d’images est SPC.
NOTE:
Principio
Bien que le sérum soit l’échantillon type pour tous les tests de syphilis, des échantillons de plasma EDTA peuvent être utilisés
pour screening dans les banques de sang. Cependant, certaines réactions peuvent s’avérer faussement positives. Dans ce
cas, on devra renouveler l’expérience avec du sérum sur tous les tests initialement positifs ou douteux et pour tous les tests de
confirmation.
Les anticorps spécifiques peuvent persister pendant une longue période, même après un traitement réussi de la maladie.
Afin d’estimer la réponse au traitement, l’emploi d’un test réagine (RPR reditest) est recommandé.
La technique TPHA peut donner des réactions croisées avec d’autres formes d’infections à tréponèmes et des réactions
faussement positives avec des échantillons de patients atteints de la mononucléose infectieuse, de la lèpre, toxicomanes ou de
maladies auto-immunes.
Occasionnellement, dans certains cas de syphilis primaires précoces, les anticorps spécifiques ne pourront pas être détectés
par la technique TPHA.
Classe di pericolo
Non classificato.
Indicazioni di pericolo
Nessuna.
Consigli di prudenza
P280: Indossare guanti/indumenti protettivi/Proteggere gli occhi/il viso.
P305+351+338: IN CASO DI CONTATTO CON GLI OCCHI: sciacquare accuratamente per parecchi minuti. Togliere
le eventuali lenti a contatto se è agevole farlo. Continuare a sciacquare.
Conservazione
I reagenti sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta, se conservati a 2-8°C. Non congelare.
Materiale necessario non incluso
-
Micropiastre OLYMPUS tipo «verde».
Sistema automatizzato di analisi del sangue prima della trasfusione OLYMPUS PK7200 o PK7300.
Pipette automatiche.
Caractéristiques fonctionnelles
Raccolta dei campioni
Différentes évaluations ont été réalisées avec le coffret syphagen TPHA AUTO et l’analyseur Olympus PK7200. Dans le cadre
d’une évaluation réalisée dans le DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg, en Allemagne, une spécificité de 99,75% a été
obtenue à partir de l’analyse de 4 434 échantillons de plasma EDTA.
Autres deux évaluations ont été réalisées aux Banques du Sang EFS de Normandie et Nord de France, en utilisant le même
analyseur. Des spécificités de 99,95% et 99,97% ont été obtenues à partir de l’analyse de 101 420 et 205 240 échantillons
négatifs, respectivement.
Lors d’une évaluation réalisée dans le National Blood Service de Manchester (Angleterre), une spécificité de 99,85% a été
obtenue en analysant 5 482 échantillons de plasma EDTA avec l’analyseur Olympus PK7300.
Plasma:
8
Il siero è la matrice preferita per tutti i test della sifilide, ma può essere anche usato plasma con EDTA per lo screening nelle
emoteche. Altri anticoagulanti dovranno essere valutati prima dell’uso. Il plasma può essere conservato a 2-8°C e il test deve
essere eseguito entro 72 ore dal prelievo.
Siero:
Usare siero fresco. Il siero può essere conservato a 2-8°C per non più di 5 giorni; per tempi più lunghi deve essere congelato (-20°C).
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