Dr Cozon Principaux Elements Bilan Immunite humorale

Principaux éléments d’un bilan
de l’immunité humorale et
cellulaire
G. Cozon Octobre 2011
Faculté de Médecine et de Maïeutique
Lyon Sud Charles Mérieux
Indication d’un bilan
immunologique
• Suspicion de déficit immunitaire
– Bilan d’infections à répétition
– Bilan d’infections graves
• Suspicion d’hyperréactivité
– Hypersensibilité immédiate
– Hypersensibilité retardée
• Suspicion de maladies inflammatoires
• Suspicion de maladies auto-immunes
Bilan biologique d’un déficit
immunitaire
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•
•
•
NFS, VS, CRP
Exploration de l’immunité humorale
Exploration de l’immunité cellulaire
Exploration de l’immunité innée
NFS, VS, Protéine C réactive
• GR Anémie inflammatoire :
– deux phases évolutives :
• L'anémie est initialement normochrome normocytaire arégénérative.
• L'inflammation persistant, l'anémie peut devenir microcytaire et
hypochrome
• Fer sérique abaissé et capacité totale de fixation (CTF) de la
transferrine normale ou abaissée (donc coefficient de saturation
(CS) normal ou pas aussi diminué que dans une carence en fer) ;
ferritinémie souvent élevée.
• Thrombocytose et hyperleucocytose à polynucléaires
fréquentes.
• Vitesse de sédimentation augmentée, fibrinogénémie
augmentée, hypergamma et hyper -alpha-2globulinémie, haptoglobinémie élevée, CRP (C
Anémie de la grossesse
• microcytaire (VGM < 80 µ3), mais parfois
normocytaire (80 < VGM < 100 µ3) si anémie
récente
• arégénérative (réticulocytes non augmentés,
généralement < à 50000/mm3)
• carence martiale (ferritinémie inférieure à 12
mg/L)
Protéines de l’inflammation
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•
•
•
CRP (Protéine Créactive)
Procalcitonine plus précoce que la CRP
Fibrinogène  VS accélérée
Oromucoïde, haptoglobuline, sérum
amyloïde A
• Électrophorèse de Pr sérique
– hypergamma et hyper-alpha-2-globulinémie
Cinétique des protéines de l’inflammation
Phase
aigue
CRP
Plasma concentration
(% variation)
SAA
AAG
1 PI
C3
Haptoglobine
Céruloplasmine
Fibrinogène
Albumine
Transferrine
TTR
Jours
Adapted from Hachulla
Immunité humorale spécifique
• Électrophorèse des Pr :
hypogammaglobulinémie
• Dosage pondérale des IgG, IgA et IgM
• Dosage des sous-classes d’IgG
• Dosage des IgE totales
• Sérologie des antigènes vaccinaux
Recherche d’auto-anticorps
•
•
•
•
•
Anti-ADN natif test de Farr
Méthode en IF : Ac antinucléaires
Techniques ELISA ou Luminex
Facteur rhumatoïde, Ac Pep Citru
Ac Anti phopholipides
anticoagulant circulant dans le
syndrome des anti-phospholipides
Recherche d’IgE dans l’allergie
• Après des tests cutanés
• RAST IgE spécifiques
• CLA trophallergènes ou pneumallergènes
Immunité humorale innée
• CH50, C3 et C4 et autres composants du
complément en cas d’anomalie du CH50.
– Élévation pdt la grossesse, Kc, Hodgkin
– Diminution lors de déficit, de poussées de
MAI
• Alpha-1-antitrypsine et alpha-1
antichymotrypsine inhibiteur enzymatique
dont le déficit peut donner des
emphysème
Immunité cellulaire spécifique
•
•
•
•
Phénotypage T, B et NK
Autres marqueurs
Réponse aux mitogènes : TTL
Réponse aux antigènes spécifiques : TTL,
TAL
• Quantiféron et Elispot
Phénotypage T, B et NK
• Principe : incubation des GB avec des
anticorps monoclonaux spécifiques
couplés avec des fluorochromes,
• Lecture après élimination des anticorps
non fixés au microscope à fluorescence et
surtout au cytomètre en flux.
Cytomètre en flux
Exemple
Marqueurs de sous populations
• Lymphocytes T : CD3
– Ly CD3+ CD4+ (CD8-)
– Ly CD3+ CD8+ (CD4-)
• Lymphocytes B : CD19, CD20, CD21
• Lymphocytes NK : CD16+ CD56+
Autres marqueurs
• Très nbreux surtout pour la recherche
• Marqueurs d’activation : HLADR, CD69,
CD25
• Marqueur de T régulateurs : CD4+CD25+,
Foxp3
Réponse aux mitogènes ou Ags
• Test de transformation lymphoblastique
(TTL).
– Culture de cellules mononucléées + mitogène
– Incorporation de thymidine tritiée
• Test d’activation lymphocytaire
– Culture de cellules mononucléées + mitogène
– Marqueurs d’activation CD69, CD25, etc…
Quantiféron
• Culture en sang complet 16h avec des
antigènes de Mycobacterium tuberculosis
• Dosage d’interféron dans le surnageant de
centrifugation par technique ELISA
• La présence d’interféron traduit l’activation
récente et donc le contact avec le BK
TB spot
• Culture de PBMC en présence d’antigène
de BK
• Plaque ELISPOT :
– Coating anti-IFNg
– Incubation des cellules 24 heures
– 2eme anticorps pour localiser les cellules
sécrétrices
– Marquage avec un sustrat précipitant
ELISPOT
Immunité cellulaire non
spécifique
• Numération de polynucléaires
• Test d’activation des Pn
– Technique NBT
– Technique cytométrie
• Test d’activation des basophiles
– Technique cytométrie