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Biomaghreb PRESENTATION Ré.f 20041(50 Tests Rèf. 20039 (200 Tests TGO) TGO + 50 Tests TGP) R1: 2 x 100 ml R1 : 1 x 50ml R3: 2 x 100 ml R2 : 1 x 50 ml R3 : 1 x 100 ml R4: 1 x 14 ml R4: 1 x 9ml Réf. 20048 (100 Tests TGP) R2: 2 x 50ml R3: 2 x 50 ml R4: 1 x 9ml TRANSAMINASES Rèf. 20049 (100 Tests TGO) R1: 2 x 50ml R3: 2 x 50ml R4: 1 x 9ml Méthode colorimétrique Etablissement de la courbe d’étalonnage sur papier millimétré: - en abscisse: nombre d’unités/ml - en ordonnée: densités optiques PRINCIPE Détermination colorimétrique de l’activité TGO ou TGP selon les réactions suivantes : 2- Dosage Pour chaque sérum, préparer les tubes suivants: TGO: Aspartate + α cétoglutarate TGO oxaloacetate+ glutamate TGP: Alanine + α cétoglutarate TGP pyruvate + glutamate Le pyruvate ou l’oxaloacétate formés sont dosés sous forme de leurs dérivés 2,4 dinitrophénylhydrazones. Réactif 1 Réactif 2 REACTIFS TGO 1 ml - TGP 1 ml 0,2 ml 0,2 ml Incuber 5 min à 37°C Réactif 1 Substrat TGO Tampon phosphate pH 7,5 aspartate α cétoglutarate 85 mmol/l 200 mmol/l 2 mmol/l tampon phosphate pH 7,5 alanine. α cétoglutarate. 95 mmol/l 200 mmol/l 2 mmol/I Réactif 3 Réactif de coloration 2,4 dinitrophénylhydrazine 1 mmol/l Réactif 2 Substrat TGP Réactif 4 Sérum Mélanger et mettre à 37°C exactement 1 heure Réactif 3 1 ml exactement 30 min 1 ml Mélanger. Laisser 20 min à température ambiante. Soude 0,4 N 10 ml 10 ml Mélanger. Attendre 5 min. Photométrer dans les mêmes conditions que la courbe d’étalonnage. étalon pyruvate STABILITE 3- Stabilité de la coloration :...................1 heure Les réactifs sont stables plusieurs années à 2-8°C. Le réactif 3 est à conserver à l’abri de la lumière Réactif auxiliaire : Soude 0,4 N ECHANTILLONS 4- RÉSULTATS Déterminer à partir de la courbe d’étalonnage le nombre d’unités TGO et TGP par ml de sérum. Sérum Hémolyse génante LINEARITE Pour une activité TGO > 150 unités/ml, et TGP > 125 unités/ml, refaire la détermination en diluant l’échantillon au 1/10ème dans une solution de chlorure de sodium à 9 g/l. Multiplier alors le chiffre lu sur la courbe par 10. MODE OPERATOIRE Longueur d’onde : 505 nm (490 à 520 nm) Zéro de l’appareil : eau distillée 1- Courbe d’étalonnage Dans des tubes à essai répartir (en ml) : N° des tubes Eau distillée Réactif 1 Réactif 4 Réactif 3 1 0,2 1 1 2 0,2 0,9 0,1 1 3 0,2 0,8 0,2 1 4 0,2 0,7 0,3 1 VALEURS USUELLES TGO : < 40 unités/ml TGP : < 45 unités/ml 5 0,2 0,6 0,4 1 BIBLIOGRAPHIE REiTMANS; FRANKELS. Am. d. Clin. Path. 28,56 (1957). Mélanger. Laisser 20 min à température ambiante. Soude 0,4 N 10 10 10 10 10 Mélanger. Attendre 5 min. Photométrer UnitésTGO/ml Unités TGP/ml 0 0 22 25 55 50 95 150 83 126 23 FT Fr 15 Déc 2007
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